学术投稿

三种原代大鼠肝细胞分离方法的比较

张丽芳;王萍;胡晓

关键词:原代大鼠肝细胞分离, 组织块法, 胶原酶原位灌流法, 改良二步胶原酶灌流法, 动物, 实验, 大鼠
摘要:目的 寻求一种高效、价廉的原代大鼠肝细胞分离方法.方法 采用组织块法、胶原酶原位灌流法、改良二步胶原酶灌流法对大鼠原代肝细胞进行分离.比较3种方法所获得的肝细胞的产率、存活率、纯度及胶原酶的用量.结果 组织块法、胶原酶原位灌流法、改良二步胶原酶灌流法所获得大鼠原代肝细胞的产量分别(0.21±0.11)、(1.87±0.51)、(1.94±0.55)×108/只大鼠;存活率分别为(54.34±8.21)%、(85.18±4.90)%、(90.34±4.46)%;肝细胞纯度分别为(68.80±10.30)%、(85.12±2.87)%、(91.84±30.3)%;胶原酶用量分别为(17.38±2.13)、(78.75±20.83)、(31.2±12.46)mg/只大鼠.结论 相比于组织块法和胶原酶原位灌流法,胶原酶二步灌流法为一种经济、高效的原代大鼠肝细胞分离方法.
南昌大学学报(医学版)杂志相关文献
  • 深圳龙岗地区手外伤流行病学特征及预防对策

    目的 分析近2年深圳市龙岗地区急诊手外伤的流行病学特征,探讨预防措施,大限度降低手外伤的发生和致残率.方法 对2 358例工业性手外伤住院病历进行回顾性统计和分析.结果 (1)本地区手外伤发生的高危人群是12~45岁的青壮年,男性为主;(2)每年3月份及12月份为事故高发期,而每天11~18时为事故好发时间;(3)设备条件差,缺少防护装置和违反操作规程是致伤的主因;(4)乡镇和个体私营企业是事故高发单位;(5)切割伤和压砸伤是主要损伤类型,拇、示及中指较易受伤;(6)手外伤发生病例比往年明显下降(P<0.01).结论 手外伤发生有一定规律可循,针对其发病特征,制定预防措施,可降低发病率.

    作者:谌丰;黄小红 刊期: 2009年第05期

  • 缝隙连接在前列腺素F2a诱导离体脑血管收缩中作用的研究

    目的 探讨缝隙连接在前列腺素F2a诱导离体脑血管收缩中的作用及其变化.方法 提取新西兰大白兔基底动脉后,用血管环张力实验检测各缝隙连接对基底动脉张力变化的作用;用血管条孵育实验检测基底动脉舒缩与缝隙连接蛋白表达变化之间的相互关系.结果 PGF2a呈浓度依赖性地诱导离体基底动脉收缩,缝隙连接阻断剂可呈浓度依赖性地抑制PGF2a诱导的基底动脉收缩;PGF2a可后使基底动脉平滑肌细胞中Cx43蛋白表达上调,缝隙连接阻断剂可有效地抑制PGF2a诱导的Cx43蛋白表达上调.结论 缝隙连接参与PGF2a诱导离体兔脑基底动脉的变化;缝隙连接蛋白的表达与离体兔基底动脉收缩的变化有密切关系.

    作者:洪德全;洪涛;裘伟光 刊期: 2009年第05期

  • 烫伤感染阿伯丁沙门菌一例

    本科于2008年3月从1位烫伤患者的伤口感染分泌物中分离出1株阿伯丁沙门菌,报告如下.1 病例介绍患者,男,34岁,工人,主因右脚铁水烫伤3周.曾在当地医院外用药物治疗,就诊前两天出现局部红肿、疼痛而来本院.

    作者:李梅芳;张凤杰;王建国 刊期: 2009年第05期

  • 早产儿喂养不耐受的临床分析

    目的 研究早产儿胃肠喂养的临床特点,分析喂养不耐受的相关因素,探讨有利于早产儿喂养成熟的策略.方法 选择东莞市横沥医院2007年1月-2008年12月住院的喂养不耐受早产儿26例作为研究组,随机选择同期非喂养不耐受早产儿28例作为对照组,比较喂养不耐受的相关因素.再按早开始(<3 d)和晚开始(≥3 d)胃肠喂养分成2组,比较有关临床因素.结果 喂养耐受和不耐受2组的胎龄、出生体质量、开奶日龄、达80 kcal/(kg·d)日龄、体质量开始增长日龄、恢复出生体质量日龄及住院天数差异有显著性(P<0.05).早喂养组和晚喂养组两组患儿黄疸持续时间、达80 kcal/(kg·d)日龄、经胃肠达80 kcal/(kg·d)日龄、达足量喂养日龄、体重开始增长日龄、恢复出生体重日龄和住院天数差异均有显著性意义(P<0.05).结论 如果早产儿生命体征平稳,在出生3 d内应尽可能早地开始胃肠道喂养,早期微量喂养、缓慢加奶、谨慎禁食、有利于促进喂养耐受性.

    作者:杨嘉琛;朱绪亮;张俊;郑亚文;程卡米;李雪莲 刊期: 2009年第05期

  • PEDF 和C-FLIP在大肠癌组织中的表达及其临床意义

    目的 探讨大肠癌组织中pigment epithelium-derived factor(PEDF)和celluar FLICE-inhibitory protein(C-FLIP)的表达及其与大肠癌临床病理因素之间的关系以及其临床意义.方法 应用免疫组化SP法检测45例大肠癌及15例癌旁组织内PEDF和C-FLIP的表达情况.结果 45例大肠癌中的PEDF和C-FLIP的表达率分别是:42%(19/45)和71%(32/45),15例癌旁正常组织中PEDF和C-FLIP的表达率分别为100%(15/15)和6.7%(1/15).PEDF的表达与肿瘤的浸润深度、分化程度、淋巴结转移、远处转移及临床分期呈负相关.C-FLIP的表达与肿瘤的浸润深度,淋巴结转移,临床分期呈正相关.PEDF与C-FLIP表达呈负相关(P<0.05).结论 PEDF可抑制大肠癌的进展,C-FLIP在大肠癌的发生发展中起促进作用.联合检测PEDF和C-FLIP的表达水平,有助于判断病情,对患者的治疗及预后评估具有一定的临床价值.

    作者:彭志洋;曾飞 刊期: 2009年第05期

  • CO2气腹对重症腹腔炎症大鼠TNF-α和IL-6的影响

    目的 本实验通过对比CO2气腹和开腹手术对重症腹腔炎症大鼠术后TNF-α和IL-6的影响,来探讨CO2气腹的免疫保护作用.方法 雄性SD大鼠30只,随机分成3组,每组10只.Ⅰ组:开腹组;Ⅱ组:气腹组;Ⅲ组:重症腹腔炎症组.按Wichterman的盲肠结扎穿刺法制作大鼠重症腹腔炎症模型,进行开腹及气腹处理.分别于术前,术后8、24、48、72 h抽外周血测定血清中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素-6(IL-6).结果 Ⅰ组、Ⅱ组、Ⅲ组术前TNF-α、IL-6水平无差异.与Ⅰ组相比, Ⅱ组,Ⅲ组术后4个时间点TNF-α、IL-6显著降低(P<0.01).与Ⅲ组相比,Ⅰ组术后4个时间点TNF-α、IL-6均显著升高(P<0.01);Ⅱ组术后4个时间点也升高,但差异无统计学意义(P>0.05).结论 在重症腹腔炎症状态下,CO2气腹减缓术后促炎性因子TNF-α和IL-6的升高,较开腹手术更好地保护了免疫功能.

    作者:张小斌;王恺;李冬盛;邹书兵 刊期: 2009年第05期

  • 正畸治疗与牙龈炎相关性的临床研究进展

    在正畸治疗中,固定矫治器因其能够有效控制牙齿移动,故获得良好的矫治效果,在临床中得到广泛应用.但是因其粘固于牙齿表面,妨碍了刷牙及唾液流动等洁牙作用,致使附着在牙面及矫治器上的菌斑及食物残渣滞留,并形成菌斑盲区,不易清洁,从而改变了口腔内微生态环境,影响了牙龈健康.

    作者:张琛玮;邵益森 刊期: 2009年第05期

  • 自体骨髓干细胞移植治疗下肢动脉闭塞症的围手术期护理

    目的 探讨自体骨髓干细胞(BMSC)移植治疗下肢动脉闭塞症的围手术期护理.方法 术中严格无菌操作进行围手术期的心理护理和患肢护理.结果 移植后患者症状均有不同程度改善,小腿疼痛缓解率为100%.缓解患者的冷冻感觉方面有效率为100%,间歇性跛行距离延长率为100%,保肢率为100%.结论 做好围手术期护理、完善术前护理:心理护理、饮食护理、疼痛护理、完善各项评估检查,用药护理和术后护理.严密观察生命体征变化、给氧、患肢护理、预防感染、抗凝扩管、药物治疗、健康教育和患肢功能锻炼是治疗成功的关键因素.

    作者:杨玉金;颜兴伟;郑春艳;余娇 刊期: 2009年第05期

  • 经瞳孔温热疗法联合玻璃体腔注射曲安奈德治疗兔脉络膜新生血管的实验研究

    目的 观察经瞳孔温热疗法(transpupillary thermatherapy,TTT)联合玻璃体腔注射曲安奈德治疗兔脉络膜新生血管的有效性、安全性.方法 用倍频532 nm激光建立兔脉络膜新生血管模型,然后对造模成功的8眼脉络膜新生血管的兔采用经瞳孔温热疗法联合玻璃体腔注射曲安奈德进行治疗,定期观察眼压与眼底情况.结果 联合治疗后3个月,眼压有2眼轻度升高,吲哚青绿造影示6眼渗漏完全消失.结论 经瞳孔温热疗法联合玻璃体腔注射曲安奈德可以有效、安全地治疗脉络膜新生血管.

    作者:王永波;石浔;石安娜;钱筱英;金昱;刘维锋;廖晓睫 刊期: 2009年第05期

  • 应用组织芯片研究sialyl Lewisx和CD44v6在结肠癌中的表达及意义

    目的 应用组织芯片研究sialyl Lewisx和CD44v6在结肠癌中的表达及意义.方法 应用组织芯片技术和免疫组化技术,检测103例结肠癌组织中sialyl Lewisx和CD44v6的表达,并结合肿瘤的病理学指标和临床随访资料进行分析.结果 结肠癌中sialyl Lewisx和CD44v6阳性表达率分别为83.5%和82.5%,且晚期结肠癌明显高于早、中期结肠癌(P<0.05);sialyl Lewisx和CD44v6表达具有一致性,且与结肠癌的临床分期、浸润程度、淋巴结及远处转移和预后有关(P<0.05) .结论 sialyl Lewisx和CD44v6的表达与结肠癌转移和患者生存期密切相关,联合检测sialyl Lewisx和CD44v6在结肠癌中的表达对于判断其恶性程度、预测生物学行为和评估患者预后具有重要意义.

    作者:孙守毅;胡小云;张文昌;李里香;雷英;李从于 刊期: 2009年第05期

  • 多原发癌13例临床分析

    目的 观察多原发癌的诊断、发病病因、治疗和预后.方法 回顾性分析1998年6月-2006年6月收治的13例多原发癌临床资料,并结合文献进行分析.结果 所有病例均有病理诊断,其中同时性多原发癌1例,异时性多原发癌12例,第1癌均按治疗原则接受手术治疗、放疗及化疗.第1癌治疗结果12例均完全缓解.发生第2癌与第一癌间隔时间:8~181个月,平均51.4个月.第2癌治疗原则同第1癌,随访的12例中生存时间11~49个月.结论 提高对多原发癌的认识,及时发现并注意与转移癌的鉴别,积极治疗,是提高多原发癌病人生存率的关键.

    作者:冯龙;甘克刚;郭武华 刊期: 2009年第05期

  • 囊性听神经瘤的诊断和治疗

    目的 探讨囊性听神经瘤的诊断与治疗.方法 回顾性分析2004年12月-2007年12月南昌大学第一附属医院神经外科收治的35例囊性听神经瘤的临床资料.结果 肿瘤全切除31例,次全切除4例.术后听力保留2例,面神经解剖保留30例,功能保留22例.无手术引起的死亡.结论 熟悉面听神经与肿瘤的病理解剖关系,熟练掌握显微手术技巧,囊性听神经瘤手术可以较好的保留面神经.

    作者:李洛;李东海;汪阳;曾而明 刊期: 2009年第05期

  • 血管生成抑制剂YH-16联合化疗栓塞抑制大鼠移植型肝癌的研究

    目的 观察经动脉插管注入血管生成抑制剂YH-16和化疗栓塞联合应用对大鼠移植型肝癌的抑制作用.方法 取大鼠乳腺癌细胞株(Walker 256)转染至肝脏的荷瘤大鼠动物模型,随机分成4组,每组12只.各组具体治疗方案如下:A组:经肝动脉缓慢灌注生理盐水;B组:经肝动脉缓慢灌注超液化碘油;C组:经肝动脉缓慢灌注丝裂霉素+超液化碘油;D组:经肝动脉灌注丝裂霉素+超液化碘油+YH-16,术后10 d观察各组大鼠原发肿块大小并采用免疫组化方法检测肝肿瘤血管内皮生长因子(VEGF)的表达和肿瘤微血管密度(MVD).结果 B、C、D 3组肝肿瘤的体积均小于A组(均P<0.05),而D组又小于B、C组(均P<0.05).B组VEGF的表达以及MVD计数明显大于A组(P<0.05),A、C2组组间比较差异无统计学意义(P>0.05).D组VEGF的表达及MVD计数均明显小于A、C2组(均P<0.05).结论 经肝动脉灌注血管生成抑制剂YH-16联合经动脉化疗栓塞能抑制移植型肝癌的生长,并对肿瘤组织的微血管数目和VEGF的表达具有显著的抑制作用.

    作者:陈彬;王顺金;艾春红;吴建兵 刊期: 2009年第05期

  • 多层螺旋CT在肺动脉栓塞诊断中的应用及临床价值

    目的 利用多层螺旋CT(MDCT)探讨肺动脉栓塞(PE)的影像表现及其临床应用价值.方法 对53例可疑PE患者,使用MDCT肺动脉血管造影(MDCTPA)检查,进行多平面重建(MPR)、大密度投影(MIP)和容积再现(VR)后处理成像后综合分析.结果 确诊38例PE患者,均见肺动脉腔内充盈缺损;18例见肺梗死;20例胸腔的积液;3例见支气管动脉扩张;1例见右心室肥大.VR、MIP及MPR能多方位、形象直观的显示栓塞血管.结论 MDCT用于PE诊断,能够提供更多有用可靠地信息,指导临床及时、正确选择治疗方案.

    作者:左敏静;李晓;黄小宁;孟新萍;蔡炳宗 刊期: 2009年第05期

  • 骨髓间充质干细胞在博莱霉素致小鼠肺损伤的疗效观察

    目的 观察骨髓间充质干细胞(BMSCs)对博来霉素致小鼠肺损伤动物模型的疗效.方法 体外分离、培养雄性6周C57BL/6J小鼠间充质干细胞.15只雌性8周C57BL/6J小鼠随机分为3组:阴性对照组(P组),阳性对照组(B组),BMSCs治疗组(B+M组,每组5只).P组于气管内注入PBS 50 μL,B组及B+M组按5 μg/g剂量气管内注入博莱霉素50 μL制备肺纤维化模型,B+M组于造模后6 h经尾静脉注射BMSCs 1×107/mL,200 μL.实验第28天统一处死小鼠,留取肺组织行病理HE染色、羟脯氨酸(hydroxyproline,HYP)含量测定,提取肺组织的DNA,通过聚合酶链反应( PCR)-琼脂糖电泳法检测雄鼠的性别决定基因(sry基因),以判断外源给予的BMSCs是否在雌性小鼠肺组织中存在.结果 ①肺组织病理:B+M组的肺泡炎及肺纤维化程度均较B组减轻.②HYP含量:B组的HYP含量明显高于P组及B+M组,B+M组的HYP含量与P组无明显差异.③B+M组有雄性小鼠的sry基因存在.结论 ①外源性BMSCs经尾静脉注射可以到达肺损伤部位;②外源性BMSCs可以减轻肺泡炎、肺纤维化的程度.

    作者:康秀华;张伟;曾省都 刊期: 2009年第05期

  • DR双能量减影技术在胸部疾病的临床应用

    目的 探讨DR双能量减影技术在胸部病变的临床应用价值.方法 选取37例胸部疾患进行DR双能量X线摄影,分析DR双能量减影技术对病变图像质量、诊断和鉴别诊断的应用价值.结果 本组37例患者所摄取的数字化双能量减影图像均能满足临床诊断需要.软组织像对肺内病变、肺外非骨骼病变显示清晰率可达100%,均显著高于普通X线像(P<0.01,P<0.05).结论 DR双能量减影技术较普通X线像能更清楚显示病灶的影像特征,对胸部病变的诊断和鉴别诊断有重要价值.

    作者:曹敏;张勤;郭庆禄;洪庆山;刘永熙 刊期: 2009年第05期

  • 5-Aza-CdR体外诱导人肺癌细胞株p16基因去甲基化

    目的 观察人肺癌细胞株H719p16基因启动子区甲基化状态,并探讨去甲基化制剂5-氮杂-2′-脱氧胞苷(5-Aza-CdR) 诱导H719细胞株高甲基化失活的pl6基因重新表达的可能性.方法 MSP法检测体外培养的人肺癌细胞株p16基因启动子区甲基化状态,并应用不同浓度的5-Aza-CdR处理人肺癌细胞株H719,MSP法检测用药后细胞中p16基因的甲基化状态,并用RT-PCR方法及Western Blot方法检测用药前后细胞中p16基因mRNA和蛋白水平变化.结果 p16基因在人肺癌细胞株H719中启动子区呈甲基化状态,经过5-Aza-CdR处理后, p16基因启动子区呈去甲基化状态,并且其mRNA及蛋白恢复表达.结论 启动子区异常甲基化是人肺癌细胞株p16基因失活的可能原因, 5-Aza-CdR能逆转p16基因甲基化状态.

    作者:王群;刘季春;曾尚干;曾梁 刊期: 2009年第05期

  • 二氧化硒和顺铂联合作用对于人卵巢癌裸鼠皮下移植瘤的影响

    目的 探讨二氧化硒和顺铂联合作用对人卵巢癌细胞株裸鼠皮下移植瘤生长的影响.方法 将4×106 个卵巢癌细胞(来源于临床标本)接种于裸鼠皮下,然后待瘤株长至一定的体积后,腹腔注射顺铂,使得肿瘤对顺铂的反应逐渐下降,反复注射6次后取瘤株接种至下一代,反复传至三代后,取瘤株细胞注射至20只雌性裸鼠左侧腋下,待瘤长成约为5 mm×5 mm×5 mm时,随机分成对照组和实验组.实验组包括顺铂组、二氧化硒组,二氧化硒+顺铂组,每组5只裸鼠,对照组给予生理盐水0.4 mL/只,顺铂组腹腔内注射DDP 3 mg/kg 0.2 mL+生理盐水0.2 mL;二氧化硒组腹腔内注射二氧化硒30 μg/mL 0.2 mL+生理盐水0.2 mL;顺铂联合二氧化硒组,腹腔内注射顺铂3 mg/kg 0.2 mL+二氧化硒30 μg/mL 0.2 mL.3 d给药1次,共4次.给予后计算移植瘤的体积、瘤重、抑瘤率;瘤组织标本分别进行HE染色病理检查,和检测P-gp的表达.结果 顺铂组,二氧化硒联合顺铂组对移植瘤的生长有明显抑制作用;病理检测瘤组织标本均提示经顺铂治疗后的肿瘤细胞发生了凋亡.结论 二氧化硒可以增强顺铂对人卵巢癌移植瘤的生长抑制作用,并可以减轻顺铂的不良作用.

    作者:杨茗钫;刘丝荪;胡嘉 刊期: 2009年第05期

  • 粉尘螨-壳聚糖疫苗治疗过敏性哮喘小鼠肝脏Bcl-2的表达

    目的 探讨粉尘螨-壳聚糖疫苗经鼻粘膜免疫治疗过敏性哮喘小鼠肝脏疗效及Bcl-2在肝脏所起的作用.方法 用粉尘螨(Dermatophagoides farinae,Der f)提取液致敏、激发BALB/c小鼠,建立哮喘模型.24只BALB/c小鼠随机分为正常对照组(A组)、哮喘模型组(B组)、粉尘螨治疗组(C组)、粉尘螨-壳聚糖疫苗治疗组(D组).通过HE染色观察小鼠肝脏炎症变化;用免疫组化检测肝脏巨噬细胞Bcl-2的表达.结果 粉尘螨和粉尘螨-壳聚糖疫苗治疗组肝脏炎症病理变化较哮喘模型组明显减轻;哮喘模型组肝脏出现大量巨噬细胞Bcl-2阳性细胞,而两治疗组肝脏阳性细胞较哮喘模型组明显减少.结论 粉尘螨-壳聚糖疫苗对过敏性哮喘小鼠的肝脏炎症有治疗作用,效果较粉尘螨免疫治疗组更好,炎症细胞的凋亡在其过程中起到重要作用.

    作者:沈小英;朱清仙;曾慧红 刊期: 2009年第05期

  • 高效液相色谱法测定环孢素A血药浓度

    目的 建立一种简便可行的HPLC方法测定环孢素A的血浆药物浓度.方法 血样经多步处理后用BaiAn-C18柱(5 μm×250 mm×4.6 mm)分离;流动相为甲醇-已腈-水-异丙醇(25∶18∶57∶1.5,v/v);流速为1.0 mL/min;柱温为70 ℃;检测波长为λ=208 nm.结果 环胞素A(CsA)血药浓度在50~2 000 ng/mL范围内,标准曲线线性关系良好(r=0.998 0);环胞素A低检测浓度为50 ng/mL,方法绝对回收率为92.1%~95.7%,相对回收率为94.3%~99.8%,样品稳定性良好.结论 本法简便、快速、可行,对于移植术后环孢素A血药浓度检测,效果较好.

    作者:廖芸;沈友轩 刊期: 2009年第05期

南昌大学学报(医学版)杂志

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主管:南昌大学

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