学术投稿

Silica-KI快速提取外周血基因组DNA的实验研究

王龙武;徐克前;罗识奇;陈明;彭爱红;张志;孙建中;陈纪斌

关键词:基因组脱氧核糖核酸, 提取, 外周血, 碘化钾, 硅胶
摘要:目的建立一种快速的外周血基因组DNA提取方法.方法用硅胶-碘化钾(Silica-KI)吸附法直接从外周血提取基因组DNA.结果提取的基因组DNA相对分子质量大,纯度较高,A260/280 nm为1.75~1.93.每毫升外周血可获得25~35 μg DNA,体外扩增和限制性内切酶酶切结果满意.结论 Silica-KI吸附法是一种简单、高效、快速、安全、适用于大量临床标本处理DNA的提取方法.
检验医学杂志相关文献
  • 23S rRNA基因在临床常见致病菌检测中的应用

    目的根据临床常见致病菌23S rRNA基因序列的差异,建立可初步鉴别革兰阴性菌和革兰阳性菌的分子生物学方法.方法分析常见细菌的23S rRNA基因序列,设计相应引物.采用多重PCR扩增标准菌株及临床分离株23S rRNA基因,并根据电泳结果作出初步分类.结果革兰阴性菌株均出现1条DNA电泳条带(约为350 bp),而革兰阳性菌株则出现2条电泳条带(约为250和400 bp).60株临床分离菌经PCR扩增、电泳后,电泳分析结果与常规鉴定结果符合率达100%.结论 23S rRNA基因检测用于细菌初步分类鉴定,具有快速、灵敏、准确的特点,可为细菌感染的实验室诊断提供客观依据.

    作者:徐晓刚;林东昉;朱德妹;张婴元;汪复 刊期: 2004年第02期

  • 溶血葡萄球菌对抗菌药物的敏感性和mecA基因的检测

    目的了解溶血葡萄球菌的耐药情况,以指导临床合理用药.方法对133株临床分离的溶血葡萄球菌采用微量肉汤稀释法测定16种抗菌药物的低抑菌浓度(MIC),多聚酶链反应(PCR)法检测mecA基因,并与普通药敏试验比较,对不相符的菌株进行抑制、诱导试验.结果 133株溶血葡萄球菌对利奈唑胺、万古霉素、去甲万古霉素无耐药,对替考拉宁的耐药率为6.0%;对阿米卡星、异帕米星、米诺环素、利福平、氟氧头孢的耐药性较低,耐药率<20%;对青霉素、苯唑西林的耐药率>90%.除米诺环素、青霉素外,住院患者分离菌株的耐药率高于门诊患者分离的菌株.mecA基因阳性率为90.23%,且PCR产物经克隆测序证实为mecA特异性产物.对2株mecA基因阳性而苯唑西林MIC≤0.25 μg/ml的菌株进行诱导试验后其MIC≥0.5 μg/ml;对3株mecA基因阴性而MIC≥0.5 μg/ml的菌株进行抑制试验后其MIC值下降8倍以上.结论溶血葡萄球菌对大多数抗菌药物均有较高的耐药性,对糖肽类抗生素的敏感性也在下降,需引起临床重视.

    作者:俞美红;陈亚岗;俞云松;周志慧;李兰娟 刊期: 2004年第02期

  • 幽门螺杆菌感染对血氨浓度的影响

    目的探讨消化系统疾病中幽门螺杆菌(HP)感染对患者血氨浓度变化的影响.方法分别用全自动生化仪及尿素酶依赖性试验对75例消化性溃疡患者的血氨浓度及HP感染情况进行动态观察.结果 HP阳性组入院时的血氨浓度明显高于HP阴性组和HP阳性组根除治疗后的血氨浓度(P<0.01);HP阴性组2次血氨测定结果差异无显著性(P>0.05).HP阳性组中HP根除治疗结束时有4例患者血氨浓度由入院时的正常范围转为增高,两者差异有显著性(P<0.01).3例合并肝硬化患者,经护肝与降血氨等治疗,血氨未下降;后经胃镜检查证实分别合并胃溃疡1例、十二指肠球部溃疡2例,检查HP均呈阳性,经应用PPI三联根除治疗,疗程1周,其血氨均下降至正常.结论 HP感染能导致血氨浓度增高,可能为肝性脑病的诱因之一.肝硬化伴有上消化道出血病,若同时有HP感染,在HP根除治疗前,如静脉持续应用PPI等强效制酸剂,可较长时间引起胃内pH值>6,从而使胃内氨向血中弥散,有诱发或加重肝性脑病的可能,应引起临床医师的重视.

    作者:洪俊 刊期: 2004年第02期

  • 白细胞分类计数方法学比较

    白细胞分类计数有着广泛的临床意义,是临床血液学检验中的常规项目.为了探讨五分类血细胞分析仪与人工显微镜检测白细胞分类计数的方法学差异,我们进行了仪器法与镜检法的白细胞分类结果比较.

    作者:李筱梅;杨玉宝;李承文;程志忠;付津;贡金英;付秋英 刊期: 2004年第02期

  • 体外循环时患者血中可溶性细胞粘附分子-1和E选择素的水平变化

    近年来国外发现体外循环(cardiopulmonary bypass,CPB)引起的全身炎症反应综合征(systemic inflammatory response syndrome,SIRS)与细胞因子有关.我们的研究旨在观察心脏瓣膜置换术患者在CPB中可溶性细胞粘附分子-1(sICAM-1)与可溶性E选择素(sE-selectin)的表达变化与炎症反应的关系.

    作者:江华;马军柏;曹红;程正江;孙伯良 刊期: 2004年第02期

  • 血清视黄醇结合蛋白在肾脏疾病中的应用

    目的探讨血清视黄醇结合蛋白(sRBP)在肾脏疾病中的应用价值.方法测定sRBP、尿RBP(uRBP)、尿素(Urea)、肌酐(Cr)、尿酸(UA)、尿IgG、转铁蛋白(Trf)、微量白蛋白(mAlb)、α1-微球蛋白(α1-MG)以及血β2-微球蛋白(sβ2-MG)和尿β2-微球蛋白(uβ2-MG),并进行相关的统计学分析.结果 (1) 81例肾病患者sRBP的结果为(87.83±32.74) mg/L,对照组为(56.17±14.34) mg/L,肾病组明显高于对照组(P<0.001);(2) 比较常规肾功能检测项目,肾病患者sRBP阳性率与Urea较接近,但明显高于Cr;(3) sRBP与sβ2-MG显著相关(P<0.01),慢性肾小球肾炎组sRBP与各项肾功能指标相关性好;(4) 与正常组比较,糖尿病无肾病组、慢性肾盂肾炎组uRBP(P<0.01~P<0.005)升高较sRBP(P<0.05)显著,糖尿病肾病组、慢性肾小球肾炎组sRBP(P<0.001)升高较uRBP(P<0.01~P<0.005)显著.结论 sRBP可以作为反映肾功能异常的较敏感指标.血、尿RBP同时检测较β2-MG更稳定,可作为评价肾病患者肾功能受损程度及部位的指标.

    作者:王蕾;庄亦晖;高锋 刊期: 2004年第02期

  • 血清1,5脱水葡萄糖醇的测定及临床意义

    目的评价1,5脱水葡萄糖醇(1,5-AG)作为一项新的指标在糖代谢监测中的临床意义.方法对61例糖尿病组和35名正常对照组分别测定空腹血糖(FBS)、果糖胺(GSP)、1,5-AG,比较两组间结果差异有无显著性.同时比较1,5-AG与FBS、1,5-AG与GSP间有无相关性.结果正常对照组1,5-AG[(91.74±29.25)μmol/L)]、FBS[(5.04±0.91) mmol/L]、GSP[(2.08±0.18) mmol/L]结果与糖尿病组1,5-AG[(33.8±23.52) μmol/L]、FBS[(8.71±2.64) mmol/L]、GSP[(2.77±0.89) mmol/L]结果比较,差异有显著性(P<0.05).1,5-AG与FBS、GSP分别呈负相关(r1=-0.41,r2=-0.30,P<0.05).结论由于1,5-AG反映高血糖状态,其值可以判断每天的血糖波动情况,可以反映糖尿病患者近期的血糖控制水平.因此, 1,5-AG可作为一种新的监测糖代谢的指标.

    作者:姜新华;吴忠华;赵燕飞 刊期: 2004年第02期

  • 高血压患者尿液γ-谷氨酰基转移酶和尿微量白蛋白检测的临床意义

    目的通过检测高血压患者尿液γ-谷氨酰基转移酶(GGT)、尿微量白蛋白(U-mAlb)水平,探讨尿GGT、U-mAlb在高血压并发肾损伤患者中的临床意义.方法用速率法及免疫比浊法对60例Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期高血压患者及40名健康体检者进行尿GGT、U-mAlb测定并作比较.结果有蛋白尿组与无蛋白尿组尿GGT、U-mAlb与对照组比较差异有显著性(P<0.01).Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ期高血压患者尿GGT、U-mAlb测定结果明显高于对照组,且两组间比较差异均有显著性(P<0.01).结论检测尿GGT、U-mAlb可对高血压早期肾损伤、损伤部位及程度分析提供依据.

    作者:高宗玲 刊期: 2004年第02期

  • 应用荧光偏振技术检测HBV DNA

    目的建立一种简便、灵敏、特异的DNA检测方法.方法用荧光偏振技术检测102例乙型肝炎患者血清中的HBV DNA,并与多聚酶链反应-酶联免疫吸附试验(PCR-ELISA)方法作比较.结果该方法可以检测出1×101拷贝的HBV DNA模板,CV为6.44%,对102例乙型肝炎患者的血清进行检测,HBsAg(+)、HBeAg(+)、抗HBc(+)血清HBV DNA阳性率为100%(40/40);HBsAg(+)、抗HBe(+)、抗HBc(+)血清HBV DNA阳性率为81.8%(27/33);HBsAg(+)、抗HBc(+)血清HBV DNA阳性率为72.4%(21/29),其余为阴性.30例非乙型肝炎患者血清中HBV DNA的检测结果均为阴性.结论该方法简单、灵敏、特异,适用于临床进行大样本核酸检测.

    作者:郭晏海;吕贯庭;白玉杰;赵锦荣;张菊;韩峰产;闫小君 刊期: 2004年第02期

  • 4种注射用抗生素对凝血试验的干扰

    目的探讨4种注射用抗生素(青霉素钠、头孢唑啉钠、磷霉素钠、克林霉素磷酸酯)在不同剂量下对凝血试验的影响.方法应用ACL-3000 plus及配套试剂分别测定含有不同剂量的4种抗生素血浆中凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶时间(TT)的值.结果血浆中青霉素钠浓度为3.0 mg/ml、头孢唑啉钠浓度为3.2 mg/ml、磷霉素钠浓度为1.6 mg/ml、克林霉素磷酸酯浓度为0.125 mg/ml时PT、APTT、TT出现变化(P<0.05).当血浆中青霉素钠浓度为12 mg/ml、头孢唑啉钠浓度为12.8 mg/ml、磷霉素钠浓度为3.2 mg/ml、克林霉素磷酸酯浓度为2.0 mg/ml时PT、APTT、TT出现显著变化(P<0.01).结论这4种抗生素大剂量使用时均可干扰凝血时间的测定,造成PT、APTT、TT值延长,但干扰的程度不同,磷霉素钠干扰为严重,青霉素钠次之,头孢唑啉钠影响小.为此在对凝血试验进行质量控制或临床医师分析结果时应考虑此因素.

    作者:钟丽辉;郑善銮;许风琴;丁振若 刊期: 2004年第02期

  • 金标法测HBsAg漏检原因分析

    我国是乙型肝炎(简称乙肝)的高发区,而乙肝又是经血传播性疾病,所以卫生部把乙肝表面抗原(HBsAg)检测作为无偿献血的检测项目之一.为了减少血液浪费,方便无偿献血者,我们从2000年起试用金标法试纸条筛查HBsAg,并与酶联免疫吸附试验(ELISA)做了比较.

    作者:李文新 刊期: 2004年第02期

  • 肠球菌耐药及临床对策

    肠球菌广泛分布于自然界和温血脊椎动物肠道中.临床多见于腹腔和盆腔感染的标本.肠球菌传统地被认为是对人类无害的共栖菌,但许多研究证明其具有致病力,是医院感染的第二大致病菌和医院菌血症的第三大致病菌[1,2].近年来,由于免疫抑制剂的广泛应用,侵入性治疗机会的增加,以及过度使用氟喹诺酮类和口服头孢菌素类药物等因素使肠球菌所致感染不断增加,肠球菌医院感染的流行病学越来越受到关注.

    作者:叶信予;吕元 刊期: 2004年第02期

  • 细胞因子水平与肝纤维化患者治疗和预后的相关研究

    目的探讨肝纤维化患者血清细胞因子白细胞介素6(IL-6)、白细胞介素(IL-8)、白细胞介素10(IL-10)水平与疾病预后之间的关系.方法采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法测定肝纤维化患者治疗前后的细胞因子水平.结果 60例肝功能减退的肝纤维化患者外周血清IL-6、IL-8水平较正常对照组显著升高,IL-10水平则较正常对照组显著降低.采用口服氧化苦参碱治疗3个月后肝功能减退组IL-6、IL-8水平较治疗前降低,IL-10水平升高,但差异无显著性;3个月后肝功能恢复组的IL-6、IL-8水平较治疗前显著降低,IL-10水平则显著升高.结论细胞因子水平与肝纤维化患者预后有关,其血清水平可作为判断肝纤维化患者预后的指标之一,氧化苦参碱可能具有一定的抗肝纤维化作用.

    作者:朱金水;余小虎;俞华芳;沈波;朱励;李沁;孙群 刊期: 2004年第02期

  • 添加样品和试剂后放置时间对酶免法检测HBsAg弱阳性标本结果的影响

    影响酶联免疫吸附试验(ELISA)检测乙型肝炎病毒标志物(HBV-M)的因素比较多[1],特别是药物治疗患者和献血员的低浓度HBV-M.本研究对加样时间和试剂平衡进行实验分析,以进一步探讨ELISA检测弱阳性HBsAg的影响因素.

    作者:彭赛蛟 刊期: 2004年第02期

  • 98例增生低下患者的骨髓涂片和切片的对比研究

    利用骨髓穿刺涂片进行细胞形态学检查,是血液病的主要诊断方法之一.但部分病例骨髓涂片显示的细胞增生低下与其临床诊断常不相符.为此,我们对98例骨髓涂片显示细胞增生低下患者的同期同部位骨髓活检组织切片进了对比观察,探讨导致骨髓涂片中细胞增生低下的原因,以提高诊断正确率.

    作者:王红戟;严丽萍 刊期: 2004年第02期

  • 应用比色法检查自动加样仪的计量

    为了提高实验结果的准确性和重复性、降低人为误差,越来越多的采供血单位在日常检测工作中使用自动加样仪.但是除了厂商提供的数据外,如何检查和确保自动加样仪加样的准确性始终是人们关注的焦点.有文献报道用比色法对酶标仪进行质控[1],是否可用此法对自动加样仪进行质控,我们对此作了初步的探讨.

    作者:刘李栋;谢云峥 刊期: 2004年第02期

  • 条形码化检验信息标签在临床实验室中的应用

    目的研制一种能适用于我国检验领域的条形码信息标签.方法依据检验过程中所涉及的检验标本种类以及专业分工,将条形码信息标签分为14种,每种标签独具一种颜色和一个固定2位数前缀的10位流水号码.结果此标签配合检验科信息管理系统不仅能适用于生化、免疫、血液分析仪,而且能涵盖所有的手工检验项目;不需要现场打印标签,甚至不需要配备条形码打印机;通过分辨颜色,工作人员可快速、准确地选择标本容器采集和传递标本;仪器通过条形码快速、准确、无误地进行检测.结论这是一套完全适合我国市场运作,操作时既方便、快捷、无差错,又不增加成本的条形码信息标签.

    作者:肖倩茹;万海英 刊期: 2004年第02期

  • 解脲脲原体感染与不孕症的关系

    解脲脲原体(Uu)是一类比细菌小比病毒大的小原核微生物,寄居于健康人体泌尿生殖道粘膜表面,寄居女性泌尿生殖道的机会高于男性,当人体免疫力下降或泌尿生殖道粘膜受损时,在一定条件下引起生殖道疾病[1].众所周知,生殖道炎症是育龄女性不孕的常见病因.为此,对我院127例不孕症妇女及86名正常妇女进行了调查和检测.

    作者:陶建敏;薛志忠 刊期: 2004年第02期

  • 临床感染深部真菌的分离鉴定和药敏结果分析

    目的对818株酵母样真菌进行鉴定和药敏试验,为临床提供参考.方法科玛嘉真菌显色培养基分离真菌,用ID 32C鉴定,ATB Fungus自动分析系统测定真菌对氟胞嘧啶两性霉素B、制霉菌素、咪康唑、益康唑以及酮康唑的药敏结果.纸片扩散法测定真菌对氟康唑的药敏结果.结果 818株酵母样真菌以念珠菌属为主,其中白色念珠菌的检出率居首位.157株酵母菌的药敏结果,以两性霉素B、制霉菌素、氟胞嘧啶的作用强,益康唑的作用差.95株酵母菌对氟康唑的药敏结果,以克柔念珠菌的耐药率高,达100%.结论广谱抗生素、免疫抑制剂和抗肿瘤药物的广泛应用,增加了酵母菌的感染机会,应加强真菌的检测和耐药性监测工作,以指导临床合理使用抗生素.

    作者:谢国艳;蔡志昌;周建华;倪语星 刊期: 2004年第02期

  • 全自动生化分析仪的精密度和交叉污染率评价

    目的对MERCK-MEGA全自动生化分析仪使用6年后的精密度和交叉污染率进行评价.方法采用Roche公司的胆固醇(Cho)、三酰甘油(TG)、葡萄糖(Glu)、肌酸激酶(CK)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)5种试剂盒在MERCK-MEGA生化仪上按NCCLS文件对其批内精密度(Swr)、总精密度(ST)及交叉污染率进行评价.结果该仪器的Swr为Cho 0.022 4 mmol/L、0.030 1 mmol/L,TG 0.014 4 mmol/L、0.023 1 mmol/L,CK 1.09 5 U/L、2.532 U/L,ALT 0.570 U/L、0.652 U/L, Glu 0.389 mmol/L、0.061 5 mmol/L,ST分别为Cho 0.063 3 mmol/L、0.088 4 mmol/L,TG 0.028 7 mmol/L、0.045 7 mmol/L, CK 2.764 U/L、6.080 8 U/L,ALT 1.053 9 U/L、1.041 5 U/L,Glu 0.081 6 mmol/L、0.156 mmol/L.平均交叉污染率为0.103%~0.208%.与试剂厂商提供的数据比较χ2<χ2(95%),两者差异无显著性(P>0.05).结论 MERCK-MEGA全自动生化分析仪使用6年后仍具有良好的分析精密度,能适应实验室的常规需要.

    作者:郭杰;蔡忠;张连祥;王兆成 刊期: 2004年第02期

检验医学杂志

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主管:上海市卫生局

主办:上海市临床检验中心