学术投稿

中麻黄基因组DNA不同提取方法的比较

朱田田;晋玲;杜弢;陈红剐;张延红;王惠珍;王艳

关键词:中麻黄, DNA提取, 十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法
摘要:目的:比较不同DNA提取方法,选择适于中麻黄基因组的方法.方法:采用改良CTAB,SDS法、试剂盒法提取中麻黄基因组DNA;用琼脂糖凝胶电泳法和紫外分光光度法检测所得总DNA的得率和纯度,并进行ISSR-PCR扩增检测.结果:3种方法均可从新鲜中麻黄中提取出产量较高的基因组DNA,但其中改良CTAB法提取的总DNA纯度高,质量好,扩增产物的电泳条带也较明显;SDS法和试剂盒法提取的总DNA质量差,不适用于下游分子生物学实验.结论:改良十六烷基三甲基溴化铵(CTAB)法为中麻黄基因组DNA提取的佳方法,该方法提取的基因组DNA适用于中麻黄基因组PCR扩增和其他分子生物学研究.
中国实验方剂学杂志相关文献
  • 土贝母总皂苷大孔树脂分离纯化工艺优选

    目的:优选大孔树脂分离纯化土贝母总皂苷的工艺条件.方法:以吸附量和解吸率为考察指标,通过静态和动态试验比较不同型号大孔树脂对土贝母总皂苷的分离纯化性能,选出佳树脂并对其纯化工艺进行优选.结果:HPD-750型树脂对土贝母总皂苷有较好的吸附分离性能,佳工艺条件为树脂径高比为1∶5,上样液质量浓度1.6 g·mL-1,大上样量为13 mL,1 BV水洗除杂,8 BV 95%乙醇洗脱,吸附和洗脱流速均为1 mL· min-1,收集洗脱液,回收乙醇至干,采用紫外分光光度法检测总皂苷质量分数为63.53%.结论:该优选工艺简单易行,能较好地分离纯化土贝母总皂苷.

    作者:王常灵;朱翔;傅延龄;胡凯文;安超;倪胜楼;韩立炜 刊期: 2012年第11期

  • 黄芩主要黄酮成分的抗抑郁活性筛选

    目的:对黄芩中4种主要黄酮成分进行抗抑郁活性筛选.方法:雄性ICR小鼠随机分为10组,分别为:空白对照组、阳性对照氟西汀组(20 mg·kg-1)、黄芩苷、黄芩素、汉黄芩苷和汉黄芩素治疗组.其中4种黄酮各自分为10 mg·kg-1和20 mg·kg-12个剂量组.连续ig给药7d.末次给药1h后,分别采用强迫游泳、悬尾和开场实验对小鼠进行行为学观察.结果:与空白对照组相比,20 mg· kg -1的黄芩苷、黄芩索、汉黄芩苷和汉黄芩素可分别将强迫游泳小鼠不动时间由(107.6±28.5)s缩短至(64.4±25.1),(73.2±30.B),(69.6±20.4),(79.7±32.6) s.并将悬尾不动时间由(85.2±27.3)s缩短至(43.1±16.4),(52.0±21.1),(48.3±25.9),(62.2±35.8)s,差异具有显著性意义,其中以黄芩苷和汉黄芩苷的作用尤为显著.另外,4种黄酮成分对小鼠的自发活动无明显影响.结论:4种黄酮成分均具有不同程度的抗抑郁活性,其中黄芩苷、汉黄芩苷的活性较强,这可能与这些药物在体内的代谢过程有关.

    作者:栗俞程;沈继朵;刘亚敏;易立涛 刊期: 2012年第11期

  • HPLC测定不同种蟾皮药材中不同部位蟾蜍噻咛的含量

    目的:对不同种蟾皮不同部位中蟾蜍噻咛的含量进行了比较研究.方法:采用高效液相色谱法测定了不同种蟾皮中不同部位蟾蜍噻咛的含量.样品中蟾蜍噻咛峰通过与对照品进行HPLC-DAD 3D及HPLC-MS-MS比对分析进行了确定.提取方法通过正交试验确定为50倍量50%甲醇超声60 min.样品分析选用了WondsiITM C18色谱柱(4.6 mm × 250 mm,5μm),以乙腈-水(6∶94)为流动相,检测波长226 nm.结果:该方法具有良好的线性(r=0.999 7)、精密度(RSD,0.59%)、稳定性(RSD.0.72%)和重复性(RSD,1.56%);平均加样回收率为98.57%,RSD为2.03%,表明该方法准确可靠.经测定,中华大蟾蜍与黑框蟾蜍不同部位均含有蟾蜍噻咛成分,含量为0.07% ~0.17%.结论:蟾蜍噻咛在不同种蟾皮药材中的不同部位含量差异不大.

    作者:王宏洁;赵海誉;司南;边宝林;杨立新 刊期: 2012年第11期

  • 抗癌扶正方对人肝癌细胞SMMC-7721PI3K/AKT信号通路的影响

    目的:研究抗癌扶正方(KFP)对肝癌抑制作用的分子机制.方法:体外培养人肝癌细胞5MMC-7721,分别予以9.72,19.44,38.88 g·L-1的3个质量浓度的KFP作用于细胞,采用MTT法检测KFP对人肝癌细胞SMMC-7721生长增殖的影响,并通过Western Blot法检测KFP对人肝癌细胞SMMC-7721 PI3K/AKT通路凋亡相关蛋白表达的影响.结果:KFP以浓度及时间依赖的方式抑制人肝癌细胞SMMC-7721的增殖;Western Blot显示KFP作用于人肝癌细胞SMMC-7721后,人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因(PTEN),caspase-9的活性增强,p-AKT的表达降低,且呈剂量依赖性.结论:KFP能增加入肝癌细胞SMMC-7721 PTEN的表达,进而抑制PI3K/AKT信号通路的激活,继之激活下游caspase-9促凋亡分子的表达,诱导人肝癌SMMC-7721发生凋亡.该研究表明PI3K/AKT信号通路在KFP诱导的人肝癌细胞SMMC-7721凋亡中起了重要作用.

    作者:赵冬耕;孙佳;王明艳;赵凤鸣;皮文霞;叶丽红 刊期: 2012年第11期

  • 藏药郎庆阿塔治疗肝纤维化的实验研究

    目的:研究藏药郎庆阿塔对复合因素所致大鼠肝纤维化的治疗作用.方法:清洁级Wistar大鼠90只采用复合因素(高脂低蛋白饲料喂养、含乙醇饮用水加皮下注射四氯化碳)制备大鼠肝纤维化模型,造模6周末随机处死12其造模大鼠,通过肝组织病理检查及血清肝功能指标来检查肝纤维化模型成功率.将模型大鼠随机分为模型对照组、阳性药复方鳖甲软肝片组(0.55 g·kg-1)、郎庆阿塔颗粒给药高、中、低剂量组(生药11.4,5.7,2.85 g·kg-1),另设正常对照组.各组大鼠于分组后即日(第7周)开始ig给药,每日1次,连续ig给药7周.治疗结束后,检测血清中生化指标和肝纤维化指标,并取肝脏组织,测定肝脏组织中羟脯氧酸含量、超氧化物歧化酶(SOD)活力及丙二醛(MDA)水平,另取肝脏组织标本进行病理组织学检查.结果:郎庆阿塔能明显降低肝纤维化大鼠增高的肝脏系数和肝组织中羟脯氨酸含量(P <0.05~p<0.01),显著降低肝纤维化大鼠血清中异常升高的天冬氨酸转氨酶(AST)、丙氨酸转氨酶(ALT)、碱性磷酸酶(ALP)、总胆红素(T-BIL)、透明质酸(HA)、层黏连蛋白(LN)、Ⅲ型前胶原氨端肽( PⅢ NP)及Ⅳ型胶原(CⅣ)(P<0.05~P<0.01),升高白蛋白(ALB)和A/G,比值,能明显升高肝组织中SOD活力(P<0.05~P<0.01)、降低异常升高的MDA水平(P <0.05~P<0.01),病理组织学检查结果表明郎庆阿塔高、中剂量对肝纤维化大鼠肝纤维组织增生、肝组织炎症活动度均有显著的改善作用(P <0.05~P<0.01),并能显著降低肝组织中胶原纤维面积(P<0.05~P<0.01).结论:藏药郎庆阿塔具有明显的治疗肝纤维化作用.

    作者:彭蕴茹;丁永芳;罗宇慧;黄一平 刊期: 2012年第11期

  • HPLC测定芩蒌颗粒中黄芩苷的含量

    目的:用HPLC测定芩萎颗粒中黄芩苷的含量.方法:采用HPLC,以甲醇~水-磷酸(47∶53∶0.2)为流动相,色谱柱Alltech C18(4.6 mm×250 mm,5μm),柱温25℃,流速1 mL· min-1,检测波长280 nm.结果:黄芩苷在0.061 ~0.673 μg线形关系良好,平均回收率为100.7%,RSD 1.7%.结论:该工艺方法准确、简便,可用于芩蒌颗粒中黄芩苷的含量测定.

    作者:汪文来;郜志宏;于智敏;赵红霞 刊期: 2012年第11期

  • 虫草胶囊联合依那普利治疗早期糖尿病肾病

    目的:观察虫草胶囊联合依那普利对早期糖尿病肾病患者尿蛋白排泄水平的影响.方法:68例2型早期糖尿病肾病患者,随机分为对照组34例(依那普利)和治疗组34例(依那普利联合虫草胶囊).疗程均为12周.观察UAER,24 h尿蛋白定量,尿α1-MG、尿β2-MG水平的变化.结果:对照组治疗后UAER、24h尿蛋白定量、尿α1-MG、尿β2-MG分别为( 167.4±19.2) mg·d-1,(89.1±15.0)mg,(19.1±8.1)mg·L-1,(331.5±36.5)μg·L-1,均较治疗前降低,差异有显著性(P<0.05),治疗组分别为(115.2±16.3) mg·d-1,(58.9±18.6) mg,(15.2±7.9)mg·L-1,(272.3±33.8) μg· L-1,也较治疗前降低,较对照组降低更明显,差异有显著性(P<0.05).两组治疗后HbAlc较治疗前略有下降,但差异无显著性.结论:虫草胶囊联合依那普利能明显降低早期糖尿病肾病患者尿蛋白水平,使肾脏损伤程度减低,较单用依那普利作用明显.

    作者:李海剑;刘慧;李玉东;陶雅非;任东升 刊期: 2012年第11期

  • 香莲软膏剂体外透皮试验

    目的:优选香莲软膏剂体外透应试验条件.方法:使用药物透皮试验仪进行试验,采用紫外分光光度法测定不同时间、接收液、取样量及鼠皮试验时总生物碱的含量,计算其累积透过率,优选香莲软膏剂的体外透皮试验条件.结果:优选的香莲软膏体外透皮试验条件为香莲取样量0.1g,以30%乙醇为接收液,有角质层的大鼠鼠皮为介质;采用UV测定总生物碱含量,波长345 nm.结论:该优选试验方法简便可行、稳定.

    作者:袁小红;袁雪妹;范瑞强 刊期: 2012年第11期

  • HPLC测定芪芍方有效部位中芒柄花素的含量

    目的:进一步表征芪芍方有效部位中异黄酮类化合物的含量,建立HPLC法测定芪芍方有效部位中芒柄花素含量的方法.方法:采用ODSHYPERSIL色谱柱(4.6 nm ×250 mm,5μm),乙腈-2‰磷酸水梯度洗脱,柱温35℃,流速1 mL·min -1,检测波长249 nm.结果:芒柄花素的线性回归方程为Y=6×106X - 16 320(r=0.999 8),表明芒柄花素在0.036 48~0.364 8 μg,线性关系良好.平均加样回收率为98.70%,RSD 0.77%.3批芪芍方有效部位中芒柄花素的平均含量分别为0.81,0.74,0.63 mg·g-1.结论:方法简便、准确、重复性好,可以用于芪芍方有效部位中芒柄花素的质量控制.为芪芍方有效部位中异黄酮类化合物质量控制方法的建立提供支撑,同时为有效控制芪芍方有效部位质量奠定基础.

    作者:代丽萍;刘孟奇;石任兵 刊期: 2012年第11期

  • 玉米须醇提物对肝纤维化大鼠药效学研究

    目的:观察玉米须(stigma maydis or com si]k)醇提取物对实验性肝纤维化大鼠的治疗效果,并探讨其作用机制.方法:用四氯化碳( CCl4)诱导大鼠肝纤维化模型(皮下注射为8周,腹腔注射为4周),将实验动物随机分为正常对照组(A)、模型组(B)、秋水仙碱组(C,0.2 mg·kg -1·d-1)、玉米须醇提取物组(D,5.4g·kg-1·d-1).除正常对照组外,其余3组均用四氯化碳(sc,每次3 mL·kg-1,2次/周)诱发肝纤维化.各组于造模第8周末处死动物,分别用放射免疫法检测血清层黏连蛋白(LN),m型前胶原( PCⅢ),透明质酸(HA)及Ⅳ型胶原(CⅣ);RT-PCR检测肝组织Smad3 mRNA的表达;作HE染色和胶原纤维特殊染色行肝组织病理形态学观察及电镜观察治疗前后大鼠肝脏的超微结构.结果:模型组与正常组比较,大鼠血清中LN(207.6±27.4)μg·L-1,PCⅢ(280.1±3.2) μg· L-1,HA(357.0±14.1) μg·L-1,CⅣ(180.0±7.0) μg·L-1,大鼠肝组织内Smad,mRNA(0.865±0.084)水平明显升高(P<0.01),经玉米须醇提取物治疗8周,大鼠血清中LN(162.4±2.2) μg·L-1,PCⅢ(193.2±1.8)μg·L-1,HA(219.4±3.7) μg· L-1,CⅣ( 138.0±2.5)μg·L-1水平明显降低(P<0.01);大鼠肝组织内Smad3 mRNA(0.410±0.026)表达明显下降(P<0.01);大鼠肝组织病理学检测改善显著.结论:玉米须能有效地抑制肝纤维化的发展,其机制可能是通过下调肝组织内Smad,mRNA表达,降低ECM的分泌而达到的.

    作者:陈艳军;高旭珍;关大勇;耿丹;张敬华 刊期: 2012年第11期

  • 3个品种黄精炮制前后小分子糖含量变化

    目的:研究多花黄精、黄精和滇黄精炮制前后小分子糖组成及含量变化.方法:3个品种黄精采用酒蒸制不同时间;HPLC-ELSD法检测小分子糖种类及含量,色谱柱为BIO-RAD Aminex HPX-87C(7.8 mm×300 mm,9 μm),流动相水,流速0.4 mL·min-1,柱温78℃,蒸发光散射检测器温度为105℃,载气流量2.5 mL·min-1.结果:3个品种黄精生品中检测到的小分子糖都为蔗糖和果糖,酒蒸8h或16 h后,分别又检测到葡萄糖;3种糖含量随炮制时间的延长丽增加,然后在不同时间点又呈降低趋势;2种还原糖葡萄糖和果糖之和、以及小分子精总量都在炮制16 h达到高,为生品的4~27倍.结论:3个品种黄精中小分子糖的组成和含量随炮制时间发生变化.

    作者:曾林燕;魏征;曹玉娜;张琳琳;宋志前;刘春生;刘振丽 刊期: 2012年第11期

  • 优化刺齿凤尾蕨抗癌二萜的超声提取工艺

    目的:优选刺齿凤尾蕨抗癌二萜的超声提取工艺.方法:采用L9(34)正交设计试验考察乙醇体积分数、提取时间、提取次数和料液比4个影响因素,以抗肿瘤活性二萜化合物Ent-11α-hydroxy- 15-oxo- kaur-16 -en-19 -oic -acid(5F)的含量为评价指标,采用HPLC进行含量测定.结果:超声提取佳工艺为A2B2C3D3,即加12倍量75%乙醇超声提取3次,每次65 min.结论:优选得到的工艺稳定可行.

    作者:范世锦;郑雅元;吕应年;苟占平 刊期: 2012年第11期

  • 清肺消积汤联合化疗对晚期肺鳞癌患者生活质量和CYFRA21-1的影响

    目的:探讨清肺消积汤联合化疗对晚期肺鳞癌的生活质量( Karnofsky)评分和CYFRA21-1的影响.方法:将120例晚期肺鳞癌患者随机分为治疗组(清肺消积汤+化疗组)和对照组(化疗组).对照组应用紫杉醇/吉西他滨+顺铂联合化疗,21 d为1个周期,2个周期为1个疗程.治疗组同时加用清肺消积汤,每日l剂,42 d为1个疗程.结果:Karnofsky评分治疗组改善率为57.4%( 39/68),对照组改善率为38.5% (20/52),两组在统计学上有显著差异性(P<0.05).治疗组治疗前后CYFRA2-11的数值为(16.23±13.55),(3.45±3.32)μg·L-1,前后对比差异有显著性(P<0.01).对照组治疗前后CYFRA2-11的数值为(16.98±12.35),(13.11±10.45)μg·L-1,前后对比差异无显著性.结论:清肺消积汤联合化疗对晚期肺鳞癌能改善生活质量.降低CYFRA21-1水平.

    作者:洪永贵;王怡冰;王俊生 刊期: 2012年第11期

  • 芪泽汤对慢性肾功能衰竭大鼠内质网应激相关凋亡分子表达的影响

    目的:探讨芪泽汤对慢性肾功能衰竭(CRF)大鼠内质网应激(ERS)相关凋亡分子表达的影响.方法:2.5%腺嘌呤ig24 d建立SD大鼠肾衰模型.分为5组:正常组、模型组、尿毒清组(2.5 g·kg-1·d-1)、芪泽汤高、低剂量组(50.4,12.6g·kg-1·d-1),每组10只.造模同时各治疗组ig给药,干预24 d后,观察体重变化,全自动生化分析仪检测大鼠血尿素氮(BUN)、血肌酐(SCr),应用TUNEL法检测肾组织细胞凋亡,Western blot检测CHOP( C/EBP-homologous protein)和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶12( Caspase-12)肾内表达水平.结果:模型组BUN(17.21±4.63) mmol·L-1,SCr( 67.00±25.62) μmol·L-1较对照组BUN(4.19±0.77) mmol· L-1,SCr( 15.89±2.62)μmol·L-1明显升高(P <0.01);TUNEL结果显示空白组肾小管上皮细胞有少量凋亡,而模型组细胞凋亡数明显增多(P<0.01);模型组CHOP,Caspase-12表达显著增强(P<0.01).芪泽汤低剂量和尿毒清能抑制慢性肾功能衰竭大鼠肾小管上皮细胞凋亡和CHOP,Caspase-12表达(与模型组相比较P<0.05).结论:芪泽汤低剂量能保护腺嘌呤导致的大鼠肾损害,可能与其抑制ERS相关凋亡分子CHOP,Caspase-12高表达有关.

    作者:王盛飞;陈利国;屈援;颜亮;唐海兰;陈明义;王华强 刊期: 2012年第11期

  • 老年气虚血瘀型胸痹患者红细胞膜蛋白组成研究

    目的:利用SDS-PAGE法研究老年气虚血瘀型胸痹患者红细胞膜蛋白组成的变化.方法:18例老年气虚血瘀型冠心病(胸痹)患者,以健康老年人(13例)和健康青年人(10例)为对照,分析红细胞膜蛋白组成变化.结果:与青年人比较,冠心病组带1蛋白、带3蛋白、带4.1蛋白、带4.2蛋白、带5蛋白、原肌球调节蛋白和带6蛋白百分含量均显著降低;且带1、带3、带4.1、原肌球调节蛋白百分含量均显著低于健康老人组.结论:气虚血瘀型冠心病心绞痛患者的膜蛋白组成发生变化,可能是导致抗氧化能力低下,膜流动性降低的原因之一.

    作者:李丽琦;牛雯颖;袁良杰;李凤金;张玉昆;刘莉;肖洪彬 刊期: 2012年第11期

  • 钩藤方提取物对自发性高血压大鼠降压作用的研究

    目的:探讨钩藤方60%乙醇提取物对自发性高血压大鼠(SHR)的降压作用以及对其血清中一氧化氮(NO)、内皮素(ET)、血管紧张素( AngⅡ)含量的影响.方法:将SHR大鼠随机分为5组,空白对照组、钩藤方提取物高、中、低剂量组(1.5,0.8,0.5 g·kg-1).每周测大鼠尾动脉压,给药6周后处死大鼠,测定血清中NO,ET和AngⅡ的含量.结果:钩藤方提取物明显降低SHR大鼠的血压,同时能显著增加大鼠血清NO含量,降低大鼠血清ET的含量,但是对AngⅡ含量未见明显影响.结论:钩藤方提取物可能通过降低血清中ET含量和升高NO含量来发挥对SHR大鼠的降压效应.

    作者:宋雪云 刊期: 2012年第11期

  • 肝尔舒微丸的流化床制备工艺优选

    目的:优选肝尔舒微丸的成型工艺.方法:以微丸得率、圆整度、堆密度、脆碎度等为指标,采用流化床侧喷制丸法,考察影响肝尔舒微丸成型过程中的处方、工艺因素.结果:优选的微丸成型处方及工艺参数为药液相对密度1.12 ~1.167g·mL-1,6%滑石粉为抗黏剂,泵速4 r·min-1,雾化压力300 kPa,转盘高度5 mm,转盘速度300 r·min-1,进风温度75℃,风机频率25~35 Hz.采用流化床侧喷制备的肝尔舒微丸外观光滑,圆整度高;粒径在600 ~ 900μm的微丸得率为86.7%.结论:优选的微丸成型工艺合理、稳定.

    作者:蒋志涛;严国俊;潘金火 刊期: 2012年第11期

  • RP-HPLC同时测定茅莓中齐墩果酸和熊果酸

    目的:建立茅莓中齐墩果酸和熊果酸的反相高效液相色谱分析方法.方法:Kromasil C18色谱柱(4.6 mm ×250mm,5μm),流动相甲醇-1.0%磷酸溶液(90∶10),流速1.0 mL· min-1,检测波长210 nm,柱温30℃.结果:齐墩果酸、熊果酸分别在0.136 8~1.368 0,0.212 8~2.218 0 μg线性关系良好,平均回收率(n=6)分别为97.5%( RSD 1.6%)和96.9% (RSD1.4%).结论:方法准确,操作简便,数据可靠,可用于茅莓中齐墩果酸和熊果酸的含量测定.

    作者:邹盛勤;黄浩 刊期: 2012年第11期

  • 毛冬青茎化学成分研究

    目的:研究冬青科植物毛冬青茎的化学成分.方法:通过硅胶柱色谱、SephadexLH -20柱色谱及反复重结晶等方法分离纯化化合物,利用核磁共振等现代波谱技术解析确定化合物结构.结果:从毛冬青茎的石油醚和乙酸乙酯部位中分离并鉴定了5个化合物,分别为ilexgein A(1),ilexsaponin A1 (2),ilexsaponin B1(3),ilexsaponin B2(4),β-谷甾醇(5).结论:化合物1~5均为首次从毛冬青茎中分离得到.

    作者:应鸽;丁平;代蕾;曹斯琼;徐鸿华 刊期: 2012年第11期

  • 虚证动物模型的研究现状

    目前文献报道的虚证动物模型包括气虚、血虚、阳虚和阴虚4种类型.在中医证候模型上,以扶正固本理论为指导研究中药的干预作用,对于阐述中医从整体出发、调动机体内在因素、提高机体抗病能力,以达到治疗虚证的目的具有重要意义.多年来经过学者们的积极探索,现已建立了40多类中医证候动物模型,但目前的虚证动物模型既有其特点,又存在一定的片面性.如何使动物模型更接近临床,已经成为当前虚证动物模型研制工作中的重大问题.由于反映扶正固本药物的综合干预作用多需要通过2种以上的虚证模型做出综合评价,因此为更全面了解虚证模型的制备及应用情况,就近年来虚证动物模型的制备方法、检测指标以及扶正固本药物在虚证动物模型上的应用情况进行综述,以期为虚证模型在药物研究方面的应用提供参考.

    作者:徐启华;胡明华;马方励;彭博;贺蓉;李建荣 刊期: 2012年第11期

中国实验方剂学杂志

中国实验方剂学杂志

主管:国家中医药管理局

主办:中国中医科学院中药研究所 中华中医药学会