李栋博；王季石；方琴
目的 研究六氧甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶(MGMT)基因导入后人外周血单个核细胞(PBMC)对烷化剂抗药性的改变.方法 利用脂质体法将含人MGMT基因的真核表达载体导入体外培养的外周血单个核细胞,实时PCR及Western blot检测目的基因mRNA及蛋白水平的表达.四氮唑蓝法(MTT)检测细胞对硝卡芥抗药性的改变.结果 转染目的基因组在mRNA及蛋白水平与转空载体及对照相比均为高表达.MTT法结果显示转目的基因组对硝卡芥的IC50是转空载体组及对照组的两倍.结论 MGMT基因导入能够增强外周血单个核细胞对烷化剂的抗性从而起到保护作用.
作者：李栋博；王季石；方琴 刊期： 2006年第05期
各种外伤及其他因素如局部缺血,肿瘤等会造成神经系统的部分或全部损伤,从而导致功能丧失和其他神经性疾病.相对中枢神经而言,周围神经再生比较容易,其神经元的轴突在适当条件下可以延伸生长并穿越受损伤区域,达到再生功能,此现象为神经损伤的修复带来了新的希望.借助于外科特别是显微外科的发展,神经损伤的修复和再生研究得到了长足的进展.
作者：杜怀栋；周梁 刊期： 2006年第05期
目的 建立一种反相高效液相色谱法测定多西紫杉醇注射液含量,同时检测其有关物质.方法 采用Alltima C18色谱柱(150 mm×4.6 mm, 5 μm),以甲醇: 20 mmol/L醋酸钠缓冲液(冰醋酸调pH值至5.0)(75: 25, V/V)为流动相,流速1.0 mL/min;检测波长为232 nm,柱温为室温.结果 在选定的色谱条件下,多西紫杉醇的分析不受辅料和有关物质的干扰,定量限为500 ng, 在25～800 μg·mL-1范围内线性关系良好(r=0.999 9);平均加样回收率为99.92%,日内、日间RSD均＜4%.结论 本法测定多西紫杉醇及其有关物质专属性强,灵敏度高,重现性好,可用于测定注射液中多西紫杉醇的含量和其有关物质检查.
作者：杨蓓；郑璐侠；段更利；陈执中 刊期： 2006年第05期
目的 比较非那雄胺和复方敏乐啶治疗男性雄激素源性脱发(AGA)的疗效.方法 107例Hamilton分级在Ⅲ～Ⅴ的患有AGA的男性患者分为2组.组Ⅰ(69例)予非那雄胺(1 mg/d),连服6个月;组Ⅱ(38例)予外用3%复方敏乐啶,每天2次,连用6个月.结果 3个月后Ⅰ组、Ⅱ组头发生长改善总有效率分别为53.62%、44.74%,两组间头发生长改善程度相比差异无显著性(P＞0.05);6个月后Ⅰ组、Ⅱ组头发生长改善总有效率分别为75.36%、57.89%.6个月后两组间头发生长改善程度相比有显著性差异(P＜0.05).结论 非那雄胺治疗AGA的疗效较复方敏乐啶更好且其疗效随治疗时间的延长而提高.
作者：杨勤萍；徐峰；孙春秋；周静；盛友渔 刊期： 2006年第05期
缺氧诱导因子-1(hypoxia-inducible factor-1,HIF-1)是哺乳动物和人体细胞内存在着的一类介导缺氧适应性反应的转录因子,能激活许多缺氧反应性基因的表达.
作者：蒋阳；叶志斌 刊期： 2006年第05期
目的 观察早老蛋白-1(Presenilin-1,PS1)的过度表达对tau蛋白磷酸化的影响.方法 在NG-108细胞上转染不同的PS1质粒, 利用免疫双标,免疫印记, 免疫细胞化学,MTT,Western blot 等方法, 观察早老蛋白-1的过度表达对tau蛋白磷酸化的影响.结果 免疫双标显示,在散发性AD(sporadic Alzheimer disease)患者脑内, PS1主要分布于神经元,并与磷酸化tau蛋白部分共存.免疫印迹显示, 与空质粒组相比,转染野生型PS1组和转染一种家族性AD(familial Alzheimer disease,FAD)突变型早老蛋白-1(mPS1)质粒组的NG-108细胞中磷酸化的tau蛋白均增加.MTT方法未检测到这两组的转染细胞与对照组有显著差异.用Confocal显微镜观察PS1-EGFP质粒转染组, 发现在转染后早期12 h,PS1-EGFP主要分布在细胞膜表面或细胞器上,随后PS1-EGFP主要在细胞浆中弥散分布.同时,免疫细胞化学检测显示,部分PS1-EGFP 转染细胞中有明显的tau蛋白磷酸化,并且这些磷酸化tau蛋白能与PS1-EGFP蛋白一起形成聚集体.在给予磷酸酯酶抑制剂岗田酸后, PS1-EGFP 转染细胞比未转染细胞含有更多的磷酸化的tau蛋白.结论 野生型PS1可能参与了散发性阿茨海默氏病中的tau蛋白的病理改变.
作者：陈波；程敏；王寅；孙凤艳；朱粹青 刊期： 2006年第05期
目的 观察组织型纤溶酶原激活剂(tissue plasminogen activator, t-PA)对坐骨神经血-神经屏障损伤后修复的影响.方法 选取野生型小鼠和t-PA基因敲除纯合子小鼠,利用持针器钳夹坐骨神经20 s.在损伤后第3, 7, 11, 15天观察小鼠坐骨神经血-神经屏障修复情况.采用尾静脉注射Evans Blue,观察野生型小鼠组和t-PA基因敲除小鼠组血-神经屏障渗透性的差异.利用免疫荧光和Western Blot观察两组小鼠损伤段坐骨神经血-神经屏障重要的组成性蛋白occludin的恢复情况.结果 小鼠坐骨神经损伤后,t-PA基因敲除小鼠组血-神经屏障的通透性在损伤后第7,11,15天高于野生型小鼠组.免疫荧光及其Western Blot显示t-PA基因敲除延缓了坐骨神经损伤后occludin的表达.结论 t-PA基因缺失对小鼠坐骨神经血-神经屏障损伤后的修复有一定的阻碍作用,与坐骨神经血-神经屏障损伤后,其组成性蛋白occludin的表达减少有关.
作者：凌长春；陶贤梅；萧瑶；胡华；陈祖林；宋后燕 刊期： 2006年第05期
目的 探讨皮质激素在减少骨水泥假体柄型髋关节置换术中血压、心率和氧饱和度波动的临床意义.方法 收集40例行髋关节置换患者的资料,按年龄、性别、原发疾病、麻醉风险评估、手术医师和假体来源进行配对分成2组.每组20例,其中14例全髋置换,6例双极股骨头置换.两组术前准备、手术步骤和术中处理原则均相同.其中一组在行股骨髓腔注入骨水泥前5分钟使用地塞米松10 mg静脉推注,另一组则不给为对照组,在麻醉前、皮肤切开、股骨扩髓、髓腔冲洗、骨水泥植入、假体植入和切口关闭等7个阶段监测患者平均动脉压(MAP)、心率(HR)、氧饱和度(SaO2)和心律等指标,对各项数据作对比分析.结果 40例患者围手术期均安全度过.MAP在骨水泥植入过程中波动为明显,地塞米松组MAP平均下降9.9 mmHg,而对照组下降14.6 mmHg,两者差异有统计学意义.心率在骨水泥植入和假体植入过程中呈现加速,两组之间无显著差异.手术过程中SaO2保持相当稳定,均大于94%.两组每例均出现不同程度的房性或室性早搏或心电传导阻滞表现,各有1例出现较严重心律失常,经麻醉医师处理后均好转稳定.结论 应用骨水泥的髋关节置换手术中,骨水泥植入阶段容易引起血压和心率的波动.骨水泥植入前使用地塞米松能适当减少血压波动的范围.
作者：黄钢勇；夏军；魏亦兵；徐冠华；王思群；周建伟；黄煌渊 刊期： 2006年第05期
目的 构建人血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)表达载体包装质粒pSNAV-VEGF165,并体外检测pSNAV-VEGF165表达和生物学活性.方法 采用分子克隆技术,从pcDNA3(+)-VEGF165质粒获得VEGF165cDNA,并克隆至AAV包装质粒pSNAV上,构建pSNAV-VEGF165 的AAV重组质粒,经酶切及测序鉴定正确,用脂质体介导pSNAV-VEGF165转染HEK293细胞和血管内皮细胞(vascular endothelial cell,VEC),荧光免疫组化方法检测VEGF165蛋白,并用MTT法测定VEGF165对VEC增殖的影响.结果 经酶切鉴定及基因测序证实AAV包装质粒pSNAV-VEGF165构建成功,荧光免疫组化显示VEGF165蛋白的表达,对照组未见VEGF165蛋白的表达,MTT法显示VEGF165蛋白对VEC增殖有促进作用.结论 构建的AAV包装质粒pSNAV-VEGF165在体外具有生物学活性,可作为AAV-VEGF165表达载体的包装质粒.
作者：董跃福；王德春；胡有谷；齐宗华 刊期： 2006年第05期
目的 总结心内直视手术应用鱼精蛋白所致严重循环抑制病例的救治经验.方法 回顾我中心自1995年4月～2005年8月间,心脏直视手术中输注鱼精蛋白中和肝素后出现严重循环抑制的病例资料,分析其临床特点及发生鱼精蛋白毒性反应的影响因素.结果 共有7例病人在术中出现了严重的循环抑制,都发生于输注鱼精蛋白后3-7 min(平均4 min);其中3例经心脏按摩和血管活性药的应用后好转,4例重新全量肝素化后建立体外转流(时间分别为258、173、155、97 min).全组7例病人全部抢救成功.平均机械通气时间57 h(36-84 h);平均ICU留置时间82 h(64-112 h).结论 鱼精蛋白过敏反应所导致的严重循环抑制为突发事件且往往危及生命,必要的预防措施和及时有效的抢救是成功挽救患者生命的重要环节.
作者：谈卫强；贾兵；陈张根；李炘；叶明；钟慧 刊期： 2006年第05期
目的 通过体外定向诱导耳蜗前体细胞分化,明确耳蜗前体细胞的位置取材,来源及增殖分化特性,建立完善的耳蜗前体细胞的培养体系.方法 取耳蜗的Corti器位置,利用无血清培养和单细胞克隆技术,进行细胞培养,在相差显微镜下观察细胞形态及生长状况,并用神经巢蛋白(nestin)、溴脱氧尿嘧啶(Brdu)、Myosin ⅦA、P27KIP1等免疫荧光方法,鉴定耳蜗前体细胞和由耳蜗前体细胞分化而来的内耳毛细胞和内耳支持细胞.同时进行细胞计数.结果 从新生大鼠耳蜗分离的组织,经原代和传代培养后,可获得大量未分化,悬浮生长的Nestin阳性细胞团,并具有增殖的能力,诱导分化后的细胞经免疫荧光双标实验可表达Brdu、Myosin ⅦA和P27KIP1阳性.流式细胞仪细胞计数后,发现前体细胞向内耳毛细胞诱导分化的数量较少,向支持细胞分化的较多.结论 从新生大鼠耳蜗分离的细胞是具有自我更新和分化潜能的前体细胞,可诱导分化为内耳毛细胞和内耳支持细胞.
作者：郑鸿燕；邰浩清；周春祥；吴颢昕；詹臻；王明艳 刊期： 2006年第05期
目的 研究表皮葡萄球菌trap基因表达与生物膜形成的相关性及其对agr系统的活化作用.方法 采用微量板半定量法检测表皮葡萄球菌生物膜表型,二维电泳和高灵敏度的基质辅助激光解吸附飞行时间质谱分析比较表皮葡萄球菌标准株蛋白质表达谱,实时定量逆转录PCR检测trap基因和RNA Ⅲ的转录水平,CLUSTAL X对表皮葡萄球菌trap基因与金黄色葡萄球菌序列进行分析,Mega软件构建进化树.结果 比较分析形成生物膜的表皮葡萄球菌ATCC 35984株与不形成生物膜的ATCC 12228株生长中期的蛋白质组,发现ATCC 35984株的TRAP蛋白量明显高于ATCC 12228株.转录水平的检测显示ATCC 12228株和生物膜阳性临床SE1457、SE671株的trap基因均低转录,但RNAⅢ的转录水平未降低.SE1457株agr系统突变后,RNAⅢ的转录明显降低, trap基因的转录无变化.RNAⅢ的转录随细菌生长变化而增加,trap基因转录保持不变.trap序列分析显示其在表皮葡萄球菌与金黄色葡萄球菌中较为保守,但存在明显的进化距离.结论 在本论文所研究的表皮葡萄球菌菌株中,trap基因的转录和翻译与细菌生物膜的形成不存在直接的调控相关性;并提示TRAP蛋白不是表皮葡萄球菌agr系统活化所必需的细菌产物;表皮葡萄球菌trap基因序列与金黄色葡萄球菌之间存在差异,可能与其功能差异相关.
作者：朱于莉；杨晓梅；李娜；江娟；陈洁敏；秦智强；李敏；吕元；魏武；瞿涤 刊期： 2006年第05期
目的 研究Smad泛素化调节因子1(Smurf1)对基因重组人骨形态发生蛋白2(rhBMP-2)诱导成骨作用的影响.方法 通过将质粒pcDEF3-Smurf1临时转染C2C12细胞并应用实时PCR和Western免疫印迹法鉴定其表达Smurf1,空载体pcDNA3.1作为阴性对照;然后用比色法测定细胞碱性磷酸酶活性和实时PCR分析细胞碱性磷酸酶、骨钙素、成骨转录因子Osterix基因表达,观察Smurf1对rhBMP-2诱导C2C12细胞向成骨细胞分化的影响.同时在相差显微镜下观察细胞形态的变化.结果 Smurf1在C2C12细胞可以通过临时转染获得很好的表达.尽管在细胞形态上没有明显的差别,但Smurf1转染的C2C12细胞在rhBMP-2作用48 h后,细胞碱性磷酸酶活性以及细胞碱性磷酸酶、骨钙素、成骨转录因子Osterix基因表达均较对照组明显下降.结论 Smurf1在BMP诱导成骨过程中发挥着负性调节作用.
作者：费琴明；陈统一；张光健；Boden Scott D；TITUS L 刊期： 2006年第05期
目的 分析儿童眼内炎的临床特点和治疗效果,为临床诊治提供指导.方法 回顾性分析2001年1月至2002年12月我院住院患者中儿童眼内炎62例62眼的年龄、性别、致伤原因、就诊时间、感染类型、治疗方式和治疗效果等.结果 除4眼放弃治疗外,所有病例炎症都得到控制.视力记录完整的46眼中,Ⅰ组(玻璃体腔注药+玻璃体手术25眼)视力改善15眼,稳定9眼,减退1眼,Ⅱ组(单纯玻璃体手术12眼)视力改善9眼,稳定3眼,Ⅲ组(单纯玻璃体腔注药9眼)视力改善2眼,稳定7眼.经Mann-Whitney t检验,Ⅰ组与Ⅲ组,Ⅱ组与Ⅲ组手术后视力差异有统计学意义(P＜0.05),Ⅰ组与Ⅱ组手术后视力差异无统计学意义(P＞0.05).结论 儿童眼内炎由于其自身特点,单纯玻璃体腔注药效果欠佳,一经诊断明确,应立即行玻璃体手术,多数患儿的炎症得到控制,视力得到改善.
作者：罗晓刚；姚静；徐格致 刊期： 2006年第05期
目的 研究嘌呤能受体(purinergic receptors,P2)家族中P2X不同亚型在新生和成年SD大鼠延髓的表达.方法 成年SD大鼠(6-8 w)和新生SD大鼠(1-5 d),各6只,雌雄不计,取延髓.应用免疫组织化学的方法和图像分析技术,比较P2X2和P2X4受体在新生和成年SD大鼠延髓的表达.结果 P2X2和P2X4嘌呤受体的阳性神经元和阳性纤维在新生鼠和成年鼠的延髓都有广泛表达,主要分布在孤束核、Ⅻ颅神经核和延髓腹外侧区,延髓其他区域为散在的分布.成年鼠和新生鼠的P2X2受体均比P2X4受体表达水平高.在新生鼠延髓,P2X2和P2X4的表达水平均比成年鼠低.结论 P2X2和P2X4阳性神经元和阳性纤维广泛分布在大鼠延髓,为ATP对心血管活动、呼吸活动和痛觉等的调节作用提供了结合位点,也有利于实验中P2X受体亚型阻断剂的选择.随着动物发育成熟,P2X2和P2X4表达水平均增加.
作者：马岩；宁穗；卢宁；李莉；曹银祥；钱源；朱大年；沈霖霖 刊期： 2006年第05期
目的 研究吲哚美辛和hTERT-siRNA对胆囊癌细胞株GBC-SD的端粒酶活性、细胞增殖、运动的抑制作用;并试从β-catenin/hTERT信号转导途径揭示其分子机制.方法 采用端粒酶TRAP、半定量RT-PCR和Western Blot印迹方法检测GBC-SD端粒酶活性、hTERT基因和β-catenin基因mRNA、蛋白质表达水平.四甲基偶氮唑盐(MTT)光吸收法检测琥珀酸脱氢酶(SDH)活性并做细胞增殖计数、运用Transwell小室和划线了解癌细胞侵袭与运动情况.结果 质粒pGCsi-H1/GFP-hTERT转染GBC-SD细胞6～24 h再加入吲哚美辛后对GBC-SD细胞的端粒酶、SDH活性、细胞增殖、运动、侵袭力均具有很明显的抑制作用,分别同阴性对照pGCsi-H1/NEGative联合吲哚美辛组、单用吲哚美辛组进行比较,差异有显著性(P＜0.01).pGCsi-H1/GFP-hTERT作用于GBC-SD细胞24h再加入吲哚美辛,检测hTERT mRNA和hTERT蛋白表达,分别与pGCsi-H1/NEGative联合吲哚美辛组、单用吲哚美辛组进行比较,差异有显著性(P＜0.01).pGCsi-H1/GFP-hTERT作用于GBC-SD细胞24h再加入吲哚美辛,检测β-catenin mRNA和β-catenin蛋白表达,分别与pGCsi-H1/NEGative联合吲哚美辛组、单用吲哚美辛组进行比较,无明显差异(P＞0.05).结论 吲哚美辛可增强hTERT-siRNA抑制GBC-SD细胞端粒酶、SDH的活性,及其增殖、运动、侵袭力,降低hTERT mRNA和hTERT蛋白表达,其机制与β-catenin/hTERT信号转导途径受抑存在一定联系.
作者：丁昂；童赛雄；冯平；秦新裕 刊期： 2006年第05期
目的 探讨表皮葡萄球菌atlE基因编码的AtlE蛋白介导生物膜起始黏附的相关机制.方法 采用RT-PCR法检测表皮葡萄球菌atlE基因在不同时期的表达水平,用紫外分光光度计检测DNA的方法检测了相应时期的胞外DNA的释放量,并用DNA酶(DNase Ⅰ)研究表皮葡萄球菌胞外DNA在生物膜形成和起始黏附中的作用;采用 pBT2质粒同源重组敲除的方法构建了表皮葡萄球菌1457的atlE基因突变株,研究atlE基因敲除突变对起始黏附能力、生物膜形成及胞外DNA释放能力的影响.结果 表皮葡萄球菌atlE基因的表达与胞外DNA的释放量有相关性;DNA酶能影响未成熟生物膜且能降低起始黏附能力;ΔatlE 菌株胞外DNA的释放减少,起始黏附能力明显降低,不形成生物膜.结论 表皮葡萄球菌atlE基因编码的AtlE蛋白能通过释放胞外DNA在表皮葡萄球菌的生物膜起作用.
作者：欧元祝；朱于莉；陈洁敏；秦智强；江娟；杨晓梅；瞿涤 刊期： 2006年第05期
目的 比较研究小鼠体内外胸腺细胞CD4+CD25+双阳性T细胞发育的动态变化,为天然调节性T细胞的研究提供基础数据.方法 采用14.5天龄胚鼠胸腺进行体外培养,以FACS检测不同时间点胸腺细胞的表型变化,同时计数每个胸腺小叶的细胞数变化.结果 胸腺在体内发育的第14.5、15、16、17、18、19天CD4+CD25+双阳性T细胞的比例、细胞的数量与在体外胸腺培养的第1～6天在胸腺细胞中的比例、细胞数发育趋势相似;CD4+CD25+双阳性T细胞占CD4+T细胞的比例分别为8.19%、16.41%、24.06%、13.62%、8.10%、2.35%,占CD25+细胞的比例分别为0.34%、1.08%、2.40%、10.59%、32.51%、34.04%.与体内结果相似,胸腺细胞体外培养的结果显示:在培养的第1～6天,CD4+CD25+T细胞占CD4+T细胞的比例分别为58.29%、12.14%、6.08%、17.78%、9.06%、4.04%,占CD25+T细胞的比例分别为3.75%、10.81%、17.20%、51.93%、61.64%、80.06%.结论 体外培养的CD4+CD25+双阳性胸腺细胞数量和比例变化与体内发育变化趋势一致,在体外培养第4天(约等于18.5天胚鼠)和体内发育的第17天该群细胞比例大,这将为天然调节性T细胞的发生、发育学研究提供有效的参考.
作者：邵先安；徐薇；龚燕平；张瑞华；王缨；储以微；李宝华；蒋正刚；熊思东 刊期： 2006年第05期
目的 筛选影响H5N1亚型甲型流感病毒对哺乳动物毒力变异的HA序列主要氨基酸位点.方法 根据相关文献提供的实验结果,将54株H5N1病毒株按其对哺乳动物的毒力强弱分为高毒力组和低毒力组,在NCBI Genbank数据库中下载HA基因序列,用随机森林模型完成主要变异氨基酸位点的筛选.结果 在HA序列中共筛选出8个关键位点,均位于HA1节段,分别为:279、102、228、156、154、172、140、8.位点154和156与其余几个关键位点间、位点140与172间均存在较强的协同交互作用,用上述关键位点重建的随机森林模型对病毒株毒力分类的准确率为83.33%.结论 所筛选出的8个变异位点可能在决定H5N1病毒毒力上起关键作用,值得对其分子生物学作用机理做深入研究.
作者：许慧琳；张文彤；赵耐青；姜庆五 刊期： 2006年第05期
目的 利用昆虫细胞杆状病毒系统表达人的重组可溶性L-型选择蛋白配体凝集素(human recombinant soluble L-selectin:sL-selectin),探索在真核细胞中高效表达人的重组可溶性L-型选择蛋白配体凝集素的新途径.方法 将已经重组好的杆状病毒感染昆虫细胞,表达sL-选凝素于细胞培养上清,利用末端连接的 ZZ-结构域(蛋白A来源的首尾相连的二聚化Z结构域)与IgG-琼脂糖-6的结合而分离纯化,通过 SDS-PAGE鉴定分子量的大小,并用特异性抗体验证,另外通过重组的sL-选凝素与SMMC7721的黏附观察其活性.结果 sL-选凝素可在昆虫细胞中表达,产物的分子量约为46 000,与人肝癌细胞SMMC7721的结合率可达70%.结论 sL-选凝素可通过杆状病毒载体在昆虫细胞中有效表达,分离纯化后依然保持生理活性.
作者：胡萍；石必枝；吴兴中 刊期： 2006年第05期
复旦学报（医学版）杂志
主管:中华人民共和国教育部
主办：复旦大学
