谈卫强；贾兵；陈张根；李炘；叶明；钟慧
目的 构建人血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)表达载体包装质粒pSNAV-VEGF165,并体外检测pSNAV-VEGF165表达和生物学活性.方法 采用分子克隆技术,从pcDNA3(+)-VEGF165质粒获得VEGF165cDNA,并克隆至AAV包装质粒pSNAV上,构建pSNAV-VEGF165 的AAV重组质粒,经酶切及测序鉴定正确,用脂质体介导pSNAV-VEGF165转染HEK293细胞和血管内皮细胞(vascular endothelial cell,VEC),荧光免疫组化方法检测VEGF165蛋白,并用MTT法测定VEGF165对VEC增殖的影响.结果 经酶切鉴定及基因测序证实AAV包装质粒pSNAV-VEGF165构建成功,荧光免疫组化显示VEGF165蛋白的表达,对照组未见VEGF165蛋白的表达,MTT法显示VEGF165蛋白对VEC增殖有促进作用.结论 构建的AAV包装质粒pSNAV-VEGF165在体外具有生物学活性,可作为AAV-VEGF165表达载体的包装质粒.
作者：董跃福；王德春；胡有谷；齐宗华 刊期： 2006年第05期
目的 研究嘌呤能受体(purinergic receptors,P2)家族中P2X不同亚型在新生和成年SD大鼠延髓的表达.方法 成年SD大鼠(6-8 w)和新生SD大鼠(1-5 d),各6只,雌雄不计,取延髓.应用免疫组织化学的方法和图像分析技术,比较P2X2和P2X4受体在新生和成年SD大鼠延髓的表达.结果 P2X2和P2X4嘌呤受体的阳性神经元和阳性纤维在新生鼠和成年鼠的延髓都有广泛表达,主要分布在孤束核、Ⅻ颅神经核和延髓腹外侧区,延髓其他区域为散在的分布.成年鼠和新生鼠的P2X2受体均比P2X4受体表达水平高.在新生鼠延髓,P2X2和P2X4的表达水平均比成年鼠低.结论 P2X2和P2X4阳性神经元和阳性纤维广泛分布在大鼠延髓,为ATP对心血管活动、呼吸活动和痛觉等的调节作用提供了结合位点,也有利于实验中P2X受体亚型阻断剂的选择.随着动物发育成熟,P2X2和P2X4表达水平均增加.
作者：马岩；宁穗；卢宁；李莉；曹银祥；钱源；朱大年；沈霖霖 刊期： 2006年第05期
目的 探讨低声压超声造影诊断体积较小肝癌的价值.方法 使用造影剂SonoVue检查小肝癌249例共267个病灶(大直径≤3 cm),包括原发性肝癌218个,转移性肝癌49个.分析病灶的增强方式和增强时相.结果 多数小肝癌动脉期增强、门脉期消退,原发性和转移性肝癌间增强时相无差异.增强达峰时原发性肝癌以整体增强为主,而转移性肝癌中环状增强的比例明显高于原发性肝癌,两者差异显著.若结合增强方式和时相,本组鉴别诊断肝细胞性肝癌的敏感性为98.1%.结论 超声造影可实时显示小肝癌相对于肝实质增强和消退的动态过程,获得病灶内微血管的影像,从而敏感地鉴别诊断肝癌.
作者：丁红；王文平；黄备建；李超伦；魏瑞雪；徐智章 刊期： 2006年第05期
目的 对心脏原位移植术进行术前评估和危险性因素分析.方法 对2000年5月-2005年4月间本院106例预行原位心脏移植的病例作回顾性分析.资料分为术前一般状态及肺血管反应性评估、术前实验室检查与用药、麻醉情况、外科情况、术后随访5部分.将气管导管拔除延迟作为应变量进行单因素和Logistic分析.结果 除10例经术前评估进入心肺联合移植等待名单外,在其余96例实施原位心脏移植术的病例中,肺高压组经静脉输注前列腺素E1(PGE1)后,肺血管阻力(PVR)和跨肺压(TPG)有下降(P＜0.05),继而吸入NO,PVR下降(26.3±5.6)%(P＜0.05),TPG下降(20.5±3.8)%(P＜0.05);将气管导管拔除延迟(术后超过24 h)作为应变量的单因素分析中发现,肺高压﹑心肺转流后低血压、肾功能损害、供心缺血时间＞4 h和术前EF＜30%有统计学意义(P＜0.05);将单因素分析后有意义的因素一起放入多元Logistic模型进行逐步回归,肺高压与术前射血分数(EF)＜30%进入模型(OR值12.96和3.57).结论 经术前评估和处理,让肺血管达到大扩张状态,使原本认为不可逆的固定的肺高压显现出可逆的有反应的一面,将给此类患者实施心脏移植带来可能;肺高压、心肺转流后低血压、肾功能损害、供心缺血时间＞4 h和术前EF＜30%是术后延迟拔管的危险因素.
作者：陈伟；姜桢 刊期： 2006年第05期
目的 研究Smad泛素化调节因子1(Smurf1)对基因重组人骨形态发生蛋白2(rhBMP-2)诱导成骨作用的影响.方法 通过将质粒pcDEF3-Smurf1临时转染C2C12细胞并应用实时PCR和Western免疫印迹法鉴定其表达Smurf1,空载体pcDNA3.1作为阴性对照;然后用比色法测定细胞碱性磷酸酶活性和实时PCR分析细胞碱性磷酸酶、骨钙素、成骨转录因子Osterix基因表达,观察Smurf1对rhBMP-2诱导C2C12细胞向成骨细胞分化的影响.同时在相差显微镜下观察细胞形态的变化.结果 Smurf1在C2C12细胞可以通过临时转染获得很好的表达.尽管在细胞形态上没有明显的差别,但Smurf1转染的C2C12细胞在rhBMP-2作用48 h后,细胞碱性磷酸酶活性以及细胞碱性磷酸酶、骨钙素、成骨转录因子Osterix基因表达均较对照组明显下降.结论 Smurf1在BMP诱导成骨过程中发挥着负性调节作用.
作者：费琴明；陈统一；张光健；Boden Scott D；TITUS L 刊期： 2006年第05期
目的 探讨环氧合酶-2(cyclooxygenase-2, COX-2)在四氯化碳(CCl4)诱导大鼠肝纤维化形成过程中的作用.方法 用50% CCl4经腹腔注射,每周2次共8周诱导雄性S-D大鼠肝纤维化模型.将S-D大鼠随机分3组:正常对照组给橄榄油腹腔注射;罗非昔布组在CCl4诱导肝纤维化模型的同时给予选择性COX-2抑制剂罗非昔布(按10 mg·d-1·kg-1体重溶于10 mL生理盐水中灌胃);模型对照组在CCl4诱导肝纤维化模型的同时给予同等体积的生理盐水灌胃.第8周末处死大鼠,病理组织学观察肝纤维化严重程度并评分,并通过Masson三色染色法将胶原染成蓝色,用图像分析仪自动分析胶原面积.用Western blot检测肝组织COX-2表达和Ⅳ型胶原.计数肝窦内α-SMA阳性的细胞数来观察肝星状细胞的活化.结果 与肝纤维化模型组相比,罗非昔布干预组肝组织纤维化严重程度明显减轻(平均积分分别为:4.00±0.00 vs 2.89±0.60, P＜0.05)、胶原面积也减少(分别为:30.7±8.9 vs 23.5±6.5, P＜0.05)、肝窦内平均α-SMA阳性细胞数明显减少(分别为:12.5±1.3 vs 7.4±1.4, P＜0.01);Western blot分析提示:与肝纤维化模型组相比,罗非昔布能降低Ⅳ型胶原表达、对COX-2表达无明显影响.结论 COX-2在肝纤维化的形成过程中发挥重要作用,选择性COX-2抑制剂罗非昔布具有减轻或阻止肝纤维生成的作用.
作者：涂传涛；郭津生；方国汀；王吉耀 刊期： 2006年第05期
目的 了解急性间质性肾炎(AIN)的病因、临床表现、肾病理改变.方法 回顾性分析我院自1996年4月至2005年4月肾活检确诊为AIN的患者的临床表现、病理改变、糖皮质激素治疗疗效等.结果 ①肾活检病例为1352例,确诊为AIN 41例(3.03%). ②药物相关性AIN87.8%,抗生素所致的AIN77.78%. ③临床表现包括发热(61.98%),无尿或少尿(61.98%),白细胞尿(48.78%),糖尿(26.83%),皮疹(17.07%),关节痛(12.20%).26.83%患者需透析替代治疗.④ 32例(78.04%)患者经甲基泼尼松龙冲击治疗或予口服泼尼松治疗1月后,43.9%的患者肾功能恢复正常,除1例死亡外,其余患者均摆脱透析治疗.⑤治疗1月后肾功能未恢复正常者与肾功能恢复正常者相比,前者原有肾脏病的比例高(43.48% vs 11.11%,P=0.026),发病时出现尿糖阳性的比率高(47.82% vs 11.11% P=0.0133),但肾组织学上无明显差异.结论 AIN临床表现多样,药物是AIN常见的致病因素.原有肾脏疾病,病程中出现糖尿是预后不良的重要指标.
作者：刘红；丁小强；刘凌汐；滕杰；邹建洲；钟一红；方艺 刊期： 2006年第05期
各种外伤及其他因素如局部缺血,肿瘤等会造成神经系统的部分或全部损伤,从而导致功能丧失和其他神经性疾病.相对中枢神经而言,周围神经再生比较容易,其神经元的轴突在适当条件下可以延伸生长并穿越受损伤区域,达到再生功能,此现象为神经损伤的修复带来了新的希望.借助于外科特别是显微外科的发展,神经损伤的修复和再生研究得到了长足的进展.
作者：杜怀栋；周梁 刊期： 2006年第05期
目的 研究六氧甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶(MGMT)基因导入后人外周血单个核细胞(PBMC)对烷化剂抗药性的改变.方法 利用脂质体法将含人MGMT基因的真核表达载体导入体外培养的外周血单个核细胞,实时PCR及Western blot检测目的基因mRNA及蛋白水平的表达.四氮唑蓝法(MTT)检测细胞对硝卡芥抗药性的改变.结果 转染目的基因组在mRNA及蛋白水平与转空载体及对照相比均为高表达.MTT法结果显示转目的基因组对硝卡芥的IC50是转空载体组及对照组的两倍.结论 MGMT基因导入能够增强外周血单个核细胞对烷化剂的抗性从而起到保护作用.
作者：李栋博；王季石；方琴 刊期： 2006年第05期
Endoglin又名CD105,为细胞膜糖蛋白,通过调节细胞对转化生长因子β(TGF-β)的反应,参与血管发育和重塑.Endoglin在肿瘤新生的血管内皮细胞和肿瘤组织边缘部分血管内皮细胞中高表达,已成为抑制肿瘤血管生成、治疗肿瘤的理想分子靶位.
作者：韩非；朱虹光 刊期： 2006年第05期
目的 了解选择性雌激素受体调节剂(selective estrogen receptor modulators SERM)雷洛昔芬和结合马雌激素对去势大鼠骨质代谢、子宫内膜及子宫湿重的影响.方法 3月龄的清洁级健康雌性SD大鼠50只,随机分为5组,假手术组,去势组,去势后加用结合马雌激素组,去势后加用低剂量雷洛昔芬组和高剂量雷洛昔芬实验组.各组大鼠手术后90天开始灌胃给药,假手术及去势组每天给予等量赋型剂灌胃,治疗90天.各组实验结束时,处死大鼠后留取L3、L4椎体,用骨形态计量学进行定量分析及光镜观察.处死大鼠后,取出双侧子宫称重,并制作病理切片观察子宫内膜腺体数及子宫内膜形态.结果 ①反应骨形成代谢的指标骨钙素在各组间无显著性差异,反应骨吸收的生化指标PYD/Cr、DPD/Cr在去势组中明显升高.②去势组子宫湿重明显下降,结合马雌激素组与后述三组比较子宫湿重增加;与假手术组比较,其余组的子宫内膜腺体数均有减少.结论 雷洛昔芬和雌激素结合马雌激素对去势大鼠骨质疏松均有治疗作用,雷洛昔芬对子宫内膜腺体及子宫湿重无明显刺激作用.
作者：马莉；屠蕊沁；施德源；杨来春 刊期： 2006年第05期
目的 探讨儿童肺隔离症临床特点、诊断和治疗.方法 回顾性分析1978年至2005年间22例肺隔离症的临床资料,叶内型12例,叶外型9例,双侧1例,手术者18例.叶内型手术方法为病变肺叶切除术,叶外型为隔离肺叶切除,无手术死亡,近中期随访手术效果良好.结果 叶内型与叶外型肺隔离症在发病年龄、性别等方面没有差异,均常见于左下肺,叶内型多以反复呼吸道感染起病,但叶外型肺隔离症的症状不典型(P=0.021),血供变异较多(P=0.022),临床合并畸形更为常见(P=0.021).结论 肺隔离症诊断方法以CT、MRI和血管造影为主,叶外型较叶内型临床发现困难,一旦确诊两型均应手术治疗.
作者：陈纲；陈张根；贾兵；李炘 刊期： 2006年第05期
目的 通过体外定向诱导耳蜗前体细胞分化,明确耳蜗前体细胞的位置取材,来源及增殖分化特性,建立完善的耳蜗前体细胞的培养体系.方法 取耳蜗的Corti器位置,利用无血清培养和单细胞克隆技术,进行细胞培养,在相差显微镜下观察细胞形态及生长状况,并用神经巢蛋白(nestin)、溴脱氧尿嘧啶(Brdu)、Myosin ⅦA、P27KIP1等免疫荧光方法,鉴定耳蜗前体细胞和由耳蜗前体细胞分化而来的内耳毛细胞和内耳支持细胞.同时进行细胞计数.结果 从新生大鼠耳蜗分离的组织,经原代和传代培养后,可获得大量未分化,悬浮生长的Nestin阳性细胞团,并具有增殖的能力,诱导分化后的细胞经免疫荧光双标实验可表达Brdu、Myosin ⅦA和P27KIP1阳性.流式细胞仪细胞计数后,发现前体细胞向内耳毛细胞诱导分化的数量较少,向支持细胞分化的较多.结论 从新生大鼠耳蜗分离的细胞是具有自我更新和分化潜能的前体细胞,可诱导分化为内耳毛细胞和内耳支持细胞.
作者：郑鸿燕；邰浩清；周春祥；吴颢昕；詹臻；王明艳 刊期： 2006年第05期
目的 研究吲哚美辛和hTERT-siRNA对胆囊癌细胞株GBC-SD的端粒酶活性、细胞增殖、运动的抑制作用;并试从β-catenin/hTERT信号转导途径揭示其分子机制.方法 采用端粒酶TRAP、半定量RT-PCR和Western Blot印迹方法检测GBC-SD端粒酶活性、hTERT基因和β-catenin基因mRNA、蛋白质表达水平.四甲基偶氮唑盐(MTT)光吸收法检测琥珀酸脱氢酶(SDH)活性并做细胞增殖计数、运用Transwell小室和划线了解癌细胞侵袭与运动情况.结果 质粒pGCsi-H1/GFP-hTERT转染GBC-SD细胞6～24 h再加入吲哚美辛后对GBC-SD细胞的端粒酶、SDH活性、细胞增殖、运动、侵袭力均具有很明显的抑制作用,分别同阴性对照pGCsi-H1/NEGative联合吲哚美辛组、单用吲哚美辛组进行比较,差异有显著性(P＜0.01).pGCsi-H1/GFP-hTERT作用于GBC-SD细胞24h再加入吲哚美辛,检测hTERT mRNA和hTERT蛋白表达,分别与pGCsi-H1/NEGative联合吲哚美辛组、单用吲哚美辛组进行比较,差异有显著性(P＜0.01).pGCsi-H1/GFP-hTERT作用于GBC-SD细胞24h再加入吲哚美辛,检测β-catenin mRNA和β-catenin蛋白表达,分别与pGCsi-H1/NEGative联合吲哚美辛组、单用吲哚美辛组进行比较,无明显差异(P＞0.05).结论 吲哚美辛可增强hTERT-siRNA抑制GBC-SD细胞端粒酶、SDH的活性,及其增殖、运动、侵袭力,降低hTERT mRNA和hTERT蛋白表达,其机制与β-catenin/hTERT信号转导途径受抑存在一定联系.
作者：丁昂；童赛雄；冯平；秦新裕 刊期： 2006年第05期
目的 研究重组高密度脂蛋白-阿克拉霉素(rHDL-ACM)静脉注射给药后在大鼠体内的血液动力学及组织分布,为肝癌靶向治疗寻找新的途径.方法 建立荧光法测定血浆和组织匀浆中rHDL-ACM浓度方法,测定不同时相大鼠血浆或组织匀浆中rHDL-ACM浓度.结果 加入AlCl3作为荧光增强剂, ACM的激发波长为441 nm,发射波长为505 nm.该方法测定rHDL-ACM在大鼠血浆中高中低3种浓度的平均回收率＞84.5%.肝的平均回收率为85.1%,肾的平均回收率为78.2%,脾的平均回收率为86.3%,肺的平均回收率为84.4%.rHDL-ACM在血浆中消除半衰期比fACM消除半衰期延长近一倍.注射rHDL-ACM 4 h后,脾和肺中药物浓度下降迅速,药物显著浓集于肝脏.结论 注射后rHDL-ACM在大鼠肝脏中累积,提示该药具有肝脏靶向作用.
作者：楼滨；董继斌；吴满平 刊期： 2006年第05期
目的 比较非那雄胺和复方敏乐啶治疗男性雄激素源性脱发(AGA)的疗效.方法 107例Hamilton分级在Ⅲ～Ⅴ的患有AGA的男性患者分为2组.组Ⅰ(69例)予非那雄胺(1 mg/d),连服6个月;组Ⅱ(38例)予外用3%复方敏乐啶,每天2次,连用6个月.结果 3个月后Ⅰ组、Ⅱ组头发生长改善总有效率分别为53.62%、44.74%,两组间头发生长改善程度相比差异无显著性(P＞0.05);6个月后Ⅰ组、Ⅱ组头发生长改善总有效率分别为75.36%、57.89%.6个月后两组间头发生长改善程度相比有显著性差异(P＜0.05).结论 非那雄胺治疗AGA的疗效较复方敏乐啶更好且其疗效随治疗时间的延长而提高.
作者：杨勤萍；徐峰；孙春秋；周静；盛友渔 刊期： 2006年第05期
目的 探讨皮质激素在减少骨水泥假体柄型髋关节置换术中血压、心率和氧饱和度波动的临床意义.方法 收集40例行髋关节置换患者的资料,按年龄、性别、原发疾病、麻醉风险评估、手术医师和假体来源进行配对分成2组.每组20例,其中14例全髋置换,6例双极股骨头置换.两组术前准备、手术步骤和术中处理原则均相同.其中一组在行股骨髓腔注入骨水泥前5分钟使用地塞米松10 mg静脉推注,另一组则不给为对照组,在麻醉前、皮肤切开、股骨扩髓、髓腔冲洗、骨水泥植入、假体植入和切口关闭等7个阶段监测患者平均动脉压(MAP)、心率(HR)、氧饱和度(SaO2)和心律等指标,对各项数据作对比分析.结果 40例患者围手术期均安全度过.MAP在骨水泥植入过程中波动为明显,地塞米松组MAP平均下降9.9 mmHg,而对照组下降14.6 mmHg,两者差异有统计学意义.心率在骨水泥植入和假体植入过程中呈现加速,两组之间无显著差异.手术过程中SaO2保持相当稳定,均大于94%.两组每例均出现不同程度的房性或室性早搏或心电传导阻滞表现,各有1例出现较严重心律失常,经麻醉医师处理后均好转稳定.结论 应用骨水泥的髋关节置换手术中,骨水泥植入阶段容易引起血压和心率的波动.骨水泥植入前使用地塞米松能适当减少血压波动的范围.
作者：黄钢勇；夏军；魏亦兵；徐冠华；王思群；周建伟；黄煌渊 刊期： 2006年第05期
目的 总结经皮血管内成形术(PTA) 及内支架置放术治疗6例锁骨下动脉盗血综合征患者的疗效.方法 6例锁骨下动脉盗血综合征患者,血流数字造影显示锁骨下动脉平均狭窄72%,双上肢动脉收缩压差平均为53.3 mmHg.经股动脉途径行球囊血管成形术4例,经股动脉和肱动脉联合入路双向造影支架打通狭窄或闭塞2例,PTA联合支架置入术4例.结果 5例患者的腔内治疗获得成功,术后即刻桡动脉搏动获得改善,双上肢动脉收缩压差平均为22 mmHg.1例腔内治疗失败,导丝无法打通闭塞段动脉.无任何病例发生严重并发症.5例患者术后随访1～19个月,无神经症状复发.结论 采用腔内技术对锁骨下动脉盗血综合征的患者进行PTA和支架置入后其效果可靠,操作相对简单、安全,术后复发率低.
作者：赵洋；符伟国；王玉琦；徐欣；杨珏 刊期： 2006年第05期
目的 构建含有人骨形态发生蛋白2(human bone morphogenetic protein 2, hBMP2)cDNA的重组慢病毒DNA,在293T细胞中进行慢病毒包装和表达检测.用慢病毒感染大鼠骨髓间质干细胞后,观察其向成骨细胞分化的情况.方法 从GenBank中调出hBMP2基因序列,设计带有NheⅠ、AgeⅠ酶切位点引物.从人肝脏组织中抽提总RNA,再反转录成cDNA,扩增出hBMP2 cDNA的全长序列.测序验证后克隆到慢病毒载体pHIV-CS-CDF-CG-PRE上,通过PCR扩增、酶切、测序等方法鉴定重组慢病毒DNA.将该重组慢病毒DNA同辅助质粒一起共感染293T细胞,通过重组而包装成能表达hBMP2基因的有活性的慢病毒.慢病毒感染大鼠骨髓间质干细胞,通过碱性磷酸酶(AP)、钙沉积定量测定、Ⅰ型胶原蛋白表达观察干细胞向成骨细胞转化的情况.结果 ①扩增出1.2 kb左右的hBMP2全长cDNA与GeneBank中的hBMP2阅读框架序列完全一致;②成功构建和克隆了含hBMP2基因的慢病毒重组DNA(pHIV -hBMP2);③对重组慢病毒DNA进行了成功包装和分析.④大鼠骨髓间质干细胞感染慢病毒后,碱性磷酸酶分泌增加,钙沉积增加,Ⅰ型胶原蛋白表达增加,成功向成骨细胞转化.结论 重组慢病毒携带hBMP2基因感染大鼠骨髓间质干细胞可以使其向成骨细胞定向分化,为组织工程研究提供良好的种子细胞.
作者：马晓生；吕飞舟；李小康；黄煌渊；姜建元 刊期： 2006年第05期
目的 观察组织型纤溶酶原激活剂(tissue plasminogen activator, t-PA)对坐骨神经血-神经屏障损伤后修复的影响.方法 选取野生型小鼠和t-PA基因敲除纯合子小鼠,利用持针器钳夹坐骨神经20 s.在损伤后第3, 7, 11, 15天观察小鼠坐骨神经血-神经屏障修复情况.采用尾静脉注射Evans Blue,观察野生型小鼠组和t-PA基因敲除小鼠组血-神经屏障渗透性的差异.利用免疫荧光和Western Blot观察两组小鼠损伤段坐骨神经血-神经屏障重要的组成性蛋白occludin的恢复情况.结果 小鼠坐骨神经损伤后,t-PA基因敲除小鼠组血-神经屏障的通透性在损伤后第7,11,15天高于野生型小鼠组.免疫荧光及其Western Blot显示t-PA基因敲除延缓了坐骨神经损伤后occludin的表达.结论 t-PA基因缺失对小鼠坐骨神经血-神经屏障损伤后的修复有一定的阻碍作用,与坐骨神经血-神经屏障损伤后,其组成性蛋白occludin的表达减少有关.
作者：凌长春；陶贤梅；萧瑶；胡华；陈祖林；宋后燕 刊期： 2006年第05期
复旦学报（医学版）杂志
主管:中华人民共和国教育部
主办：复旦大学
