涂传涛；郭津生；方国汀；王吉耀
目的 探讨皮质激素在减少骨水泥假体柄型髋关节置换术中血压、心率和氧饱和度波动的临床意义.方法 收集40例行髋关节置换患者的资料,按年龄、性别、原发疾病、麻醉风险评估、手术医师和假体来源进行配对分成2组.每组20例,其中14例全髋置换,6例双极股骨头置换.两组术前准备、手术步骤和术中处理原则均相同.其中一组在行股骨髓腔注入骨水泥前5分钟使用地塞米松10 mg静脉推注,另一组则不给为对照组,在麻醉前、皮肤切开、股骨扩髓、髓腔冲洗、骨水泥植入、假体植入和切口关闭等7个阶段监测患者平均动脉压(MAP)、心率(HR)、氧饱和度(SaO2)和心律等指标,对各项数据作对比分析.结果 40例患者围手术期均安全度过.MAP在骨水泥植入过程中波动为明显,地塞米松组MAP平均下降9.9 mmHg,而对照组下降14.6 mmHg,两者差异有统计学意义.心率在骨水泥植入和假体植入过程中呈现加速,两组之间无显著差异.手术过程中SaO2保持相当稳定,均大于94%.两组每例均出现不同程度的房性或室性早搏或心电传导阻滞表现,各有1例出现较严重心律失常,经麻醉医师处理后均好转稳定.结论 应用骨水泥的髋关节置换手术中,骨水泥植入阶段容易引起血压和心率的波动.骨水泥植入前使用地塞米松能适当减少血压波动的范围.
作者：黄钢勇；夏军；魏亦兵；徐冠华；王思群；周建伟；黄煌渊 刊期： 2006年第05期
目的 研究六氧甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶(MGMT)基因导入后人外周血单个核细胞(PBMC)对烷化剂抗药性的改变.方法 利用脂质体法将含人MGMT基因的真核表达载体导入体外培养的外周血单个核细胞,实时PCR及Western blot检测目的基因mRNA及蛋白水平的表达.四氮唑蓝法(MTT)检测细胞对硝卡芥抗药性的改变.结果 转染目的基因组在mRNA及蛋白水平与转空载体及对照相比均为高表达.MTT法结果显示转目的基因组对硝卡芥的IC50是转空载体组及对照组的两倍.结论 MGMT基因导入能够增强外周血单个核细胞对烷化剂的抗性从而起到保护作用.
作者：李栋博；王季石；方琴 刊期： 2006年第05期
目的 对心脏原位移植术进行术前评估和危险性因素分析.方法 对2000年5月-2005年4月间本院106例预行原位心脏移植的病例作回顾性分析.资料分为术前一般状态及肺血管反应性评估、术前实验室检查与用药、麻醉情况、外科情况、术后随访5部分.将气管导管拔除延迟作为应变量进行单因素和Logistic分析.结果 除10例经术前评估进入心肺联合移植等待名单外,在其余96例实施原位心脏移植术的病例中,肺高压组经静脉输注前列腺素E1(PGE1)后,肺血管阻力(PVR)和跨肺压(TPG)有下降(P＜0.05),继而吸入NO,PVR下降(26.3±5.6)%(P＜0.05),TPG下降(20.5±3.8)%(P＜0.05);将气管导管拔除延迟(术后超过24 h)作为应变量的单因素分析中发现,肺高压﹑心肺转流后低血压、肾功能损害、供心缺血时间＞4 h和术前EF＜30%有统计学意义(P＜0.05);将单因素分析后有意义的因素一起放入多元Logistic模型进行逐步回归,肺高压与术前射血分数(EF)＜30%进入模型(OR值12.96和3.57).结论 经术前评估和处理,让肺血管达到大扩张状态,使原本认为不可逆的固定的肺高压显现出可逆的有反应的一面,将给此类患者实施心脏移植带来可能;肺高压、心肺转流后低血压、肾功能损害、供心缺血时间＞4 h和术前EF＜30%是术后延迟拔管的危险因素.
作者：陈伟；姜桢 刊期： 2006年第05期
目的 研究色素上皮细胞源性因子(PEDF)在体内、外的高表达对黑色素瘤细胞生长、转移等生物学行为的影响.方法 用脂质体转染pcDNA3-PEDF质粒导入黑色素瘤A375细胞,G418筛选,蛋白质印迹鉴定.四甲基偶氮唑蓝(MTT)分析体外PEDF转染肿瘤细胞的增殖.以PEDF高表达的肿瘤细胞皮下注射于裸鼠,检测原发性肿瘤的生长.采用抗鼠CD31单克隆抗体免疫组化检测肿瘤微血管密度.苏木精-伊红染色检测肺转移.结果 体外研究显示,PEDF显著抑制黑色素瘤A375细胞的增殖;在裸鼠皮下接种高表达PEDF的肿瘤细胞后,与对照细胞比较,高表达PEDF的细胞在裸鼠皮下致瘤能力减弱,肿瘤生长明显减慢;CD31染色显示高表达PEDF的肿瘤微血管密度明显降低[(34±3.75) :(12.37±3.52) (P＜0.01)],且苏木精伊红染色发现肿瘤肺转移也被显著抑制.结论 PEDF可以显著抑制黑色素瘤的新生血管生成,抑制肿瘤的生长和转移,可能为治疗黑色素瘤提供实验室依据.
作者：于波；程滨珠；钟绮丽；邵勇；廖康煌 刊期： 2006年第05期
目的 建立一种反相高效液相色谱法测定多西紫杉醇注射液含量,同时检测其有关物质.方法 采用Alltima C18色谱柱(150 mm×4.6 mm, 5 μm),以甲醇: 20 mmol/L醋酸钠缓冲液(冰醋酸调pH值至5.0)(75: 25, V/V)为流动相,流速1.0 mL/min;检测波长为232 nm,柱温为室温.结果 在选定的色谱条件下,多西紫杉醇的分析不受辅料和有关物质的干扰,定量限为500 ng, 在25～800 μg·mL-1范围内线性关系良好(r=0.999 9);平均加样回收率为99.92%,日内、日间RSD均＜4%.结论 本法测定多西紫杉醇及其有关物质专属性强,灵敏度高,重现性好,可用于测定注射液中多西紫杉醇的含量和其有关物质检查.
作者：杨蓓；郑璐侠；段更利；陈执中 刊期： 2006年第05期
目的 研究Muller细胞在视网膜前体细胞向视网膜神经节细胞分化中的作用.方法 分离培养Muller细胞和不同时期的胚胎视网膜前体细胞,将其与Muller细胞共同培养,并进一步用Muller细胞条件培养液来诱导视网膜前体细胞的分化.倒置相差显微镜每天观察细胞的生长和分化情况,Thy1.1标记视网膜神经节细胞并计数.结果 视网膜前体细胞能分化为多种视网膜细胞类型,包括视网膜神经节细胞.不同时期、不同培养条件下的视网膜前体细胞向视网膜神经节细胞分化的百分比不同.单独培养组、共同培养组和Muller细胞条件培养液组视网膜神经节细胞的百分比,E14分别为(16.91±4.05)%,(47.25±9.67)%和(42.36±10.52)%,E18则分别为(4.65±1.88)%,(9.90±3.19)%和(8.69±3.01)%.相同时期的视网膜前体细胞,共同培养组和Muller细胞条件培养液组视网膜神经节细胞的百分比较单独培养组高,差异有统计学意义.相同培养条件下,E14视网膜前体细胞向视网膜神经节细胞分化的百分比较E18高,差异有统计学意义.结论 Muller细胞能诱导视网膜前体细胞向视网膜神经节细胞分化,可能通过Muller细胞释放某些可溶性因子发挥作用.
作者：姚静；孙兴怀 刊期： 2006年第05期
目的 建立简便、快速纯化D-氨基酸氧化酶(DAAO)的新方法,以利用高纯度的DAAO转化头孢菌素C制备戊二酰-7-氨基头孢霉烷酸(GL-7ACA).方法 通过基因工程手段,构建N端和C端各镶嵌6个组氨酸的DAAO重组质粒,电转化Pichia pastoris GS115电感受态细胞,利用PCR方法筛选阳性转化子,再经甲醇诱导筛选出高表达菌.结果 高表达重组菌(PHD12)摇瓶发酵单位达到2 000 IU/L,发酵罐内达到22 500 IU/L.并利用Ni螯合型树脂对表达的DAAO经一步分离纯化,以60%的总收率获得纯化产物.纯化产物保持良好的转化CPC-Na活性.结论 利用基因工程表达组氨酸标记蛋白,可简化基因工程的下游工序.
作者：冯美卿；史训龙；孙传文；周伟；周珮 刊期： 2006年第05期
目的 探讨儿童肺隔离症临床特点、诊断和治疗.方法 回顾性分析1978年至2005年间22例肺隔离症的临床资料,叶内型12例,叶外型9例,双侧1例,手术者18例.叶内型手术方法为病变肺叶切除术,叶外型为隔离肺叶切除,无手术死亡,近中期随访手术效果良好.结果 叶内型与叶外型肺隔离症在发病年龄、性别等方面没有差异,均常见于左下肺,叶内型多以反复呼吸道感染起病,但叶外型肺隔离症的症状不典型(P=0.021),血供变异较多(P=0.022),临床合并畸形更为常见(P=0.021).结论 肺隔离症诊断方法以CT、MRI和血管造影为主,叶外型较叶内型临床发现困难,一旦确诊两型均应手术治疗.
作者：陈纲；陈张根；贾兵；李炘 刊期： 2006年第05期
目的 研究嘌呤能受体(purinergic receptors,P2)家族中P2X不同亚型在新生和成年SD大鼠延髓的表达.方法 成年SD大鼠(6-8 w)和新生SD大鼠(1-5 d),各6只,雌雄不计,取延髓.应用免疫组织化学的方法和图像分析技术,比较P2X2和P2X4受体在新生和成年SD大鼠延髓的表达.结果 P2X2和P2X4嘌呤受体的阳性神经元和阳性纤维在新生鼠和成年鼠的延髓都有广泛表达,主要分布在孤束核、Ⅻ颅神经核和延髓腹外侧区,延髓其他区域为散在的分布.成年鼠和新生鼠的P2X2受体均比P2X4受体表达水平高.在新生鼠延髓,P2X2和P2X4的表达水平均比成年鼠低.结论 P2X2和P2X4阳性神经元和阳性纤维广泛分布在大鼠延髓,为ATP对心血管活动、呼吸活动和痛觉等的调节作用提供了结合位点,也有利于实验中P2X受体亚型阻断剂的选择.随着动物发育成熟,P2X2和P2X4表达水平均增加.
作者：马岩；宁穗；卢宁；李莉；曹银祥；钱源；朱大年；沈霖霖 刊期： 2006年第05期
目的 研究吲哚美辛和hTERT-siRNA对胆囊癌细胞株GBC-SD的端粒酶活性、细胞增殖、运动的抑制作用;并试从β-catenin/hTERT信号转导途径揭示其分子机制.方法 采用端粒酶TRAP、半定量RT-PCR和Western Blot印迹方法检测GBC-SD端粒酶活性、hTERT基因和β-catenin基因mRNA、蛋白质表达水平.四甲基偶氮唑盐(MTT)光吸收法检测琥珀酸脱氢酶(SDH)活性并做细胞增殖计数、运用Transwell小室和划线了解癌细胞侵袭与运动情况.结果 质粒pGCsi-H1/GFP-hTERT转染GBC-SD细胞6～24 h再加入吲哚美辛后对GBC-SD细胞的端粒酶、SDH活性、细胞增殖、运动、侵袭力均具有很明显的抑制作用,分别同阴性对照pGCsi-H1/NEGative联合吲哚美辛组、单用吲哚美辛组进行比较,差异有显著性(P＜0.01).pGCsi-H1/GFP-hTERT作用于GBC-SD细胞24h再加入吲哚美辛,检测hTERT mRNA和hTERT蛋白表达,分别与pGCsi-H1/NEGative联合吲哚美辛组、单用吲哚美辛组进行比较,差异有显著性(P＜0.01).pGCsi-H1/GFP-hTERT作用于GBC-SD细胞24h再加入吲哚美辛,检测β-catenin mRNA和β-catenin蛋白表达,分别与pGCsi-H1/NEGative联合吲哚美辛组、单用吲哚美辛组进行比较,无明显差异(P＞0.05).结论 吲哚美辛可增强hTERT-siRNA抑制GBC-SD细胞端粒酶、SDH的活性,及其增殖、运动、侵袭力,降低hTERT mRNA和hTERT蛋白表达,其机制与β-catenin/hTERT信号转导途径受抑存在一定联系.
作者：丁昂；童赛雄；冯平；秦新裕 刊期： 2006年第05期
目的 研究Smad泛素化调节因子1(Smurf1)对基因重组人骨形态发生蛋白2(rhBMP-2)诱导成骨作用的影响.方法 通过将质粒pcDEF3-Smurf1临时转染C2C12细胞并应用实时PCR和Western免疫印迹法鉴定其表达Smurf1,空载体pcDNA3.1作为阴性对照;然后用比色法测定细胞碱性磷酸酶活性和实时PCR分析细胞碱性磷酸酶、骨钙素、成骨转录因子Osterix基因表达,观察Smurf1对rhBMP-2诱导C2C12细胞向成骨细胞分化的影响.同时在相差显微镜下观察细胞形态的变化.结果 Smurf1在C2C12细胞可以通过临时转染获得很好的表达.尽管在细胞形态上没有明显的差别,但Smurf1转染的C2C12细胞在rhBMP-2作用48 h后,细胞碱性磷酸酶活性以及细胞碱性磷酸酶、骨钙素、成骨转录因子Osterix基因表达均较对照组明显下降.结论 Smurf1在BMP诱导成骨过程中发挥着负性调节作用.
作者：费琴明；陈统一；张光健；Boden Scott D；TITUS L 刊期： 2006年第05期
目的 筛选影响H5N1亚型甲型流感病毒对哺乳动物毒力变异的HA序列主要氨基酸位点.方法 根据相关文献提供的实验结果,将54株H5N1病毒株按其对哺乳动物的毒力强弱分为高毒力组和低毒力组,在NCBI Genbank数据库中下载HA基因序列,用随机森林模型完成主要变异氨基酸位点的筛选.结果 在HA序列中共筛选出8个关键位点,均位于HA1节段,分别为:279、102、228、156、154、172、140、8.位点154和156与其余几个关键位点间、位点140与172间均存在较强的协同交互作用,用上述关键位点重建的随机森林模型对病毒株毒力分类的准确率为83.33%.结论 所筛选出的8个变异位点可能在决定H5N1病毒毒力上起关键作用,值得对其分子生物学作用机理做深入研究.
作者：许慧琳；张文彤；赵耐青；姜庆五 刊期： 2006年第05期
目的 分析儿童眼内炎的临床特点和治疗效果,为临床诊治提供指导.方法 回顾性分析2001年1月至2002年12月我院住院患者中儿童眼内炎62例62眼的年龄、性别、致伤原因、就诊时间、感染类型、治疗方式和治疗效果等.结果 除4眼放弃治疗外,所有病例炎症都得到控制.视力记录完整的46眼中,Ⅰ组(玻璃体腔注药+玻璃体手术25眼)视力改善15眼,稳定9眼,减退1眼,Ⅱ组(单纯玻璃体手术12眼)视力改善9眼,稳定3眼,Ⅲ组(单纯玻璃体腔注药9眼)视力改善2眼,稳定7眼.经Mann-Whitney t检验,Ⅰ组与Ⅲ组,Ⅱ组与Ⅲ组手术后视力差异有统计学意义(P＜0.05),Ⅰ组与Ⅱ组手术后视力差异无统计学意义(P＞0.05).结论 儿童眼内炎由于其自身特点,单纯玻璃体腔注药效果欠佳,一经诊断明确,应立即行玻璃体手术,多数患儿的炎症得到控制,视力得到改善.
作者：罗晓刚；姚静；徐格致 刊期： 2006年第05期
各种外伤及其他因素如局部缺血,肿瘤等会造成神经系统的部分或全部损伤,从而导致功能丧失和其他神经性疾病.相对中枢神经而言,周围神经再生比较容易,其神经元的轴突在适当条件下可以延伸生长并穿越受损伤区域,达到再生功能,此现象为神经损伤的修复带来了新的希望.借助于外科特别是显微外科的发展,神经损伤的修复和再生研究得到了长足的进展.
作者：杜怀栋；周梁 刊期： 2006年第05期
目的 总结经皮血管内成形术(PTA) 及内支架置放术治疗6例锁骨下动脉盗血综合征患者的疗效.方法 6例锁骨下动脉盗血综合征患者,血流数字造影显示锁骨下动脉平均狭窄72%,双上肢动脉收缩压差平均为53.3 mmHg.经股动脉途径行球囊血管成形术4例,经股动脉和肱动脉联合入路双向造影支架打通狭窄或闭塞2例,PTA联合支架置入术4例.结果 5例患者的腔内治疗获得成功,术后即刻桡动脉搏动获得改善,双上肢动脉收缩压差平均为22 mmHg.1例腔内治疗失败,导丝无法打通闭塞段动脉.无任何病例发生严重并发症.5例患者术后随访1～19个月,无神经症状复发.结论 采用腔内技术对锁骨下动脉盗血综合征的患者进行PTA和支架置入后其效果可靠,操作相对简单、安全,术后复发率低.
作者：赵洋；符伟国；王玉琦；徐欣；杨珏 刊期： 2006年第05期
目的 利用昆虫细胞杆状病毒系统表达人的重组可溶性L-型选择蛋白配体凝集素(human recombinant soluble L-selectin:sL-selectin),探索在真核细胞中高效表达人的重组可溶性L-型选择蛋白配体凝集素的新途径.方法 将已经重组好的杆状病毒感染昆虫细胞,表达sL-选凝素于细胞培养上清,利用末端连接的 ZZ-结构域(蛋白A来源的首尾相连的二聚化Z结构域)与IgG-琼脂糖-6的结合而分离纯化,通过 SDS-PAGE鉴定分子量的大小,并用特异性抗体验证,另外通过重组的sL-选凝素与SMMC7721的黏附观察其活性.结果 sL-选凝素可在昆虫细胞中表达,产物的分子量约为46 000,与人肝癌细胞SMMC7721的结合率可达70%.结论 sL-选凝素可通过杆状病毒载体在昆虫细胞中有效表达,分离纯化后依然保持生理活性.
作者：胡萍；石必枝；吴兴中 刊期： 2006年第05期
目的 探讨B细胞淋巴瘤/白血病基因2(Bcl-2) Loop domain结构域在Bcl-2 蛋白结构中的作用.方法 应用PCR及Western blot方法检测Bcl-2 Loop domain结构域突变前后Bcl-2蛋白的表达情况.结果 Bcl-2 Loop domain结构域突变后Bcl-2蛋白只在沉淀中检测到,在上清中未检测到.结论 Bcl-2 Loop domain结构域被突变后,Bcl-2蛋白空间结构发生改变,推测Bcl-2 Loop domain结构域在Bcl-2 蛋白结构中起到重要作用.
作者：刘娜；孙志扬；李杨；宋海燕；孙庆文 刊期： 2006年第05期
目的 观察组织型纤溶酶原激活剂(tissue plasminogen activator, t-PA)对坐骨神经血-神经屏障损伤后修复的影响.方法 选取野生型小鼠和t-PA基因敲除纯合子小鼠,利用持针器钳夹坐骨神经20 s.在损伤后第3, 7, 11, 15天观察小鼠坐骨神经血-神经屏障修复情况.采用尾静脉注射Evans Blue,观察野生型小鼠组和t-PA基因敲除小鼠组血-神经屏障渗透性的差异.利用免疫荧光和Western Blot观察两组小鼠损伤段坐骨神经血-神经屏障重要的组成性蛋白occludin的恢复情况.结果 小鼠坐骨神经损伤后,t-PA基因敲除小鼠组血-神经屏障的通透性在损伤后第7,11,15天高于野生型小鼠组.免疫荧光及其Western Blot显示t-PA基因敲除延缓了坐骨神经损伤后occludin的表达.结论 t-PA基因缺失对小鼠坐骨神经血-神经屏障损伤后的修复有一定的阻碍作用,与坐骨神经血-神经屏障损伤后,其组成性蛋白occludin的表达减少有关.
作者：凌长春；陶贤梅；萧瑶；胡华；陈祖林；宋后燕 刊期： 2006年第05期
目的 观察早老蛋白-1(Presenilin-1,PS1)的过度表达对tau蛋白磷酸化的影响.方法 在NG-108细胞上转染不同的PS1质粒, 利用免疫双标,免疫印记, 免疫细胞化学,MTT,Western blot 等方法, 观察早老蛋白-1的过度表达对tau蛋白磷酸化的影响.结果 免疫双标显示,在散发性AD(sporadic Alzheimer disease)患者脑内, PS1主要分布于神经元,并与磷酸化tau蛋白部分共存.免疫印迹显示, 与空质粒组相比,转染野生型PS1组和转染一种家族性AD(familial Alzheimer disease,FAD)突变型早老蛋白-1(mPS1)质粒组的NG-108细胞中磷酸化的tau蛋白均增加.MTT方法未检测到这两组的转染细胞与对照组有显著差异.用Confocal显微镜观察PS1-EGFP质粒转染组, 发现在转染后早期12 h,PS1-EGFP主要分布在细胞膜表面或细胞器上,随后PS1-EGFP主要在细胞浆中弥散分布.同时,免疫细胞化学检测显示,部分PS1-EGFP 转染细胞中有明显的tau蛋白磷酸化,并且这些磷酸化tau蛋白能与PS1-EGFP蛋白一起形成聚集体.在给予磷酸酯酶抑制剂岗田酸后, PS1-EGFP 转染细胞比未转染细胞含有更多的磷酸化的tau蛋白.结论 野生型PS1可能参与了散发性阿茨海默氏病中的tau蛋白的病理改变.
作者：陈波；程敏；王寅；孙凤艳；朱粹青 刊期： 2006年第05期
目的 构建含有人骨形态发生蛋白2(human bone morphogenetic protein 2, hBMP2)cDNA的重组慢病毒DNA,在293T细胞中进行慢病毒包装和表达检测.用慢病毒感染大鼠骨髓间质干细胞后,观察其向成骨细胞分化的情况.方法 从GenBank中调出hBMP2基因序列,设计带有NheⅠ、AgeⅠ酶切位点引物.从人肝脏组织中抽提总RNA,再反转录成cDNA,扩增出hBMP2 cDNA的全长序列.测序验证后克隆到慢病毒载体pHIV-CS-CDF-CG-PRE上,通过PCR扩增、酶切、测序等方法鉴定重组慢病毒DNA.将该重组慢病毒DNA同辅助质粒一起共感染293T细胞,通过重组而包装成能表达hBMP2基因的有活性的慢病毒.慢病毒感染大鼠骨髓间质干细胞,通过碱性磷酸酶(AP)、钙沉积定量测定、Ⅰ型胶原蛋白表达观察干细胞向成骨细胞转化的情况.结果 ①扩增出1.2 kb左右的hBMP2全长cDNA与GeneBank中的hBMP2阅读框架序列完全一致;②成功构建和克隆了含hBMP2基因的慢病毒重组DNA(pHIV -hBMP2);③对重组慢病毒DNA进行了成功包装和分析.④大鼠骨髓间质干细胞感染慢病毒后,碱性磷酸酶分泌增加,钙沉积增加,Ⅰ型胶原蛋白表达增加,成功向成骨细胞转化.结论 重组慢病毒携带hBMP2基因感染大鼠骨髓间质干细胞可以使其向成骨细胞定向分化,为组织工程研究提供良好的种子细胞.
作者：马晓生；吕飞舟；李小康；黄煌渊；姜建元 刊期： 2006年第05期
复旦学报（医学版）杂志
主管:中华人民共和国教育部
主办：复旦大学
