朱于莉；杨晓梅；李娜；江娟；陈洁敏；秦智强；李敏；吕元；魏武；瞿涤
目的 研究Smad泛素化调节因子1(Smurf1)对基因重组人骨形态发生蛋白2(rhBMP-2)诱导成骨作用的影响.方法 通过将质粒pcDEF3-Smurf1临时转染C2C12细胞并应用实时PCR和Western免疫印迹法鉴定其表达Smurf1,空载体pcDNA3.1作为阴性对照;然后用比色法测定细胞碱性磷酸酶活性和实时PCR分析细胞碱性磷酸酶、骨钙素、成骨转录因子Osterix基因表达,观察Smurf1对rhBMP-2诱导C2C12细胞向成骨细胞分化的影响.同时在相差显微镜下观察细胞形态的变化.结果 Smurf1在C2C12细胞可以通过临时转染获得很好的表达.尽管在细胞形态上没有明显的差别,但Smurf1转染的C2C12细胞在rhBMP-2作用48 h后,细胞碱性磷酸酶活性以及细胞碱性磷酸酶、骨钙素、成骨转录因子Osterix基因表达均较对照组明显下降.结论 Smurf1在BMP诱导成骨过程中发挥着负性调节作用.
作者：费琴明；陈统一；张光健；Boden Scott D；TITUS L 刊期： 2006年第05期
目的 建立一种反相高效液相色谱法测定多西紫杉醇注射液含量,同时检测其有关物质.方法 采用Alltima C18色谱柱(150 mm×4.6 mm, 5 μm),以甲醇: 20 mmol/L醋酸钠缓冲液(冰醋酸调pH值至5.0)(75: 25, V/V)为流动相,流速1.0 mL/min;检测波长为232 nm,柱温为室温.结果 在选定的色谱条件下,多西紫杉醇的分析不受辅料和有关物质的干扰,定量限为500 ng, 在25～800 μg·mL-1范围内线性关系良好(r=0.999 9);平均加样回收率为99.92%,日内、日间RSD均＜4%.结论 本法测定多西紫杉醇及其有关物质专属性强,灵敏度高,重现性好,可用于测定注射液中多西紫杉醇的含量和其有关物质检查.
作者：杨蓓；郑璐侠；段更利；陈执中 刊期： 2006年第05期
目的 观察早老蛋白-1(Presenilin-1,PS1)的过度表达对tau蛋白磷酸化的影响.方法 在NG-108细胞上转染不同的PS1质粒, 利用免疫双标,免疫印记, 免疫细胞化学,MTT,Western blot 等方法, 观察早老蛋白-1的过度表达对tau蛋白磷酸化的影响.结果 免疫双标显示,在散发性AD(sporadic Alzheimer disease)患者脑内, PS1主要分布于神经元,并与磷酸化tau蛋白部分共存.免疫印迹显示, 与空质粒组相比,转染野生型PS1组和转染一种家族性AD(familial Alzheimer disease,FAD)突变型早老蛋白-1(mPS1)质粒组的NG-108细胞中磷酸化的tau蛋白均增加.MTT方法未检测到这两组的转染细胞与对照组有显著差异.用Confocal显微镜观察PS1-EGFP质粒转染组, 发现在转染后早期12 h,PS1-EGFP主要分布在细胞膜表面或细胞器上,随后PS1-EGFP主要在细胞浆中弥散分布.同时,免疫细胞化学检测显示,部分PS1-EGFP 转染细胞中有明显的tau蛋白磷酸化,并且这些磷酸化tau蛋白能与PS1-EGFP蛋白一起形成聚集体.在给予磷酸酯酶抑制剂岗田酸后, PS1-EGFP 转染细胞比未转染细胞含有更多的磷酸化的tau蛋白.结论 野生型PS1可能参与了散发性阿茨海默氏病中的tau蛋白的病理改变.
作者：陈波；程敏；王寅；孙凤艳；朱粹青 刊期： 2006年第05期
目的 探讨皮质激素在减少骨水泥假体柄型髋关节置换术中血压、心率和氧饱和度波动的临床意义.方法 收集40例行髋关节置换患者的资料,按年龄、性别、原发疾病、麻醉风险评估、手术医师和假体来源进行配对分成2组.每组20例,其中14例全髋置换,6例双极股骨头置换.两组术前准备、手术步骤和术中处理原则均相同.其中一组在行股骨髓腔注入骨水泥前5分钟使用地塞米松10 mg静脉推注,另一组则不给为对照组,在麻醉前、皮肤切开、股骨扩髓、髓腔冲洗、骨水泥植入、假体植入和切口关闭等7个阶段监测患者平均动脉压(MAP)、心率(HR)、氧饱和度(SaO2)和心律等指标,对各项数据作对比分析.结果 40例患者围手术期均安全度过.MAP在骨水泥植入过程中波动为明显,地塞米松组MAP平均下降9.9 mmHg,而对照组下降14.6 mmHg,两者差异有统计学意义.心率在骨水泥植入和假体植入过程中呈现加速,两组之间无显著差异.手术过程中SaO2保持相当稳定,均大于94%.两组每例均出现不同程度的房性或室性早搏或心电传导阻滞表现,各有1例出现较严重心律失常,经麻醉医师处理后均好转稳定.结论 应用骨水泥的髋关节置换手术中,骨水泥植入阶段容易引起血压和心率的波动.骨水泥植入前使用地塞米松能适当减少血压波动的范围.
作者：黄钢勇；夏军；魏亦兵；徐冠华；王思群；周建伟；黄煌渊 刊期： 2006年第05期
目的 总结经皮血管内成形术(PTA) 及内支架置放术治疗6例锁骨下动脉盗血综合征患者的疗效.方法 6例锁骨下动脉盗血综合征患者,血流数字造影显示锁骨下动脉平均狭窄72%,双上肢动脉收缩压差平均为53.3 mmHg.经股动脉途径行球囊血管成形术4例,经股动脉和肱动脉联合入路双向造影支架打通狭窄或闭塞2例,PTA联合支架置入术4例.结果 5例患者的腔内治疗获得成功,术后即刻桡动脉搏动获得改善,双上肢动脉收缩压差平均为22 mmHg.1例腔内治疗失败,导丝无法打通闭塞段动脉.无任何病例发生严重并发症.5例患者术后随访1～19个月,无神经症状复发.结论 采用腔内技术对锁骨下动脉盗血综合征的患者进行PTA和支架置入后其效果可靠,操作相对简单、安全,术后复发率低.
作者：赵洋；符伟国；王玉琦；徐欣；杨珏 刊期： 2006年第05期
目的 研究六氧甲基鸟嘌呤DNA甲基转移酶(MGMT)基因导入后人外周血单个核细胞(PBMC)对烷化剂抗药性的改变.方法 利用脂质体法将含人MGMT基因的真核表达载体导入体外培养的外周血单个核细胞,实时PCR及Western blot检测目的基因mRNA及蛋白水平的表达.四氮唑蓝法(MTT)检测细胞对硝卡芥抗药性的改变.结果 转染目的基因组在mRNA及蛋白水平与转空载体及对照相比均为高表达.MTT法结果显示转目的基因组对硝卡芥的IC50是转空载体组及对照组的两倍.结论 MGMT基因导入能够增强外周血单个核细胞对烷化剂的抗性从而起到保护作用.
作者：李栋博；王季石；方琴 刊期： 2006年第05期
目的 本研究旨在评价经胸右心室穿刺测量大鼠右心室压力的可行性和安全性.方法 将健康雄性SD大鼠(300～350 g)分为实验组(n=8)及对照组(n=8),采用24G BD Intima-Ⅱ(0.7 mm×19 mm)密闭式静脉留置导管,穿刺一侧颈动脉监测其平均压(MCSP);实验组在超声引导下进行经胸右心室穿刺测压,对照组仅刺破胸壁肌肉.导管留置于右心室60 min连续测量右心室压力(RVSP).拔除导管后将两组大鼠于相同环境中饲养至一个月,并于实验前及实验后多个不同时点应用超声心动图检测各组大鼠心功能及血流动力学指标.结果 除了对照组1只死于麻醉意外、实验组2只在穿刺后24 h以内死亡外,其余大鼠一个月时均存活;所有存活大鼠体重增长满意.在导管留置过程中,RVSP及MCSP测值保持稳定;两组之间及实验组操作前后心功能及血流动力学检测指标未见显著差异.结论 超声心动图引导下,经胸右心室穿刺可以准确地测量和监测右心室压力.
作者：信怡；黄国英；夏红萍；邓海燕 刊期： 2006年第05期
目的 建立简便、快速纯化D-氨基酸氧化酶(DAAO)的新方法,以利用高纯度的DAAO转化头孢菌素C制备戊二酰-7-氨基头孢霉烷酸(GL-7ACA).方法 通过基因工程手段,构建N端和C端各镶嵌6个组氨酸的DAAO重组质粒,电转化Pichia pastoris GS115电感受态细胞,利用PCR方法筛选阳性转化子,再经甲醇诱导筛选出高表达菌.结果 高表达重组菌(PHD12)摇瓶发酵单位达到2 000 IU/L,发酵罐内达到22 500 IU/L.并利用Ni螯合型树脂对表达的DAAO经一步分离纯化,以60%的总收率获得纯化产物.纯化产物保持良好的转化CPC-Na活性.结论 利用基因工程表达组氨酸标记蛋白,可简化基因工程的下游工序.
作者：冯美卿；史训龙；孙传文；周伟；周珮 刊期： 2006年第05期
目的 研究重组高密度脂蛋白-阿克拉霉素(rHDL-ACM)静脉注射给药后在大鼠体内的血液动力学及组织分布,为肝癌靶向治疗寻找新的途径.方法 建立荧光法测定血浆和组织匀浆中rHDL-ACM浓度方法,测定不同时相大鼠血浆或组织匀浆中rHDL-ACM浓度.结果 加入AlCl3作为荧光增强剂, ACM的激发波长为441 nm,发射波长为505 nm.该方法测定rHDL-ACM在大鼠血浆中高中低3种浓度的平均回收率＞84.5%.肝的平均回收率为85.1%,肾的平均回收率为78.2%,脾的平均回收率为86.3%,肺的平均回收率为84.4%.rHDL-ACM在血浆中消除半衰期比fACM消除半衰期延长近一倍.注射rHDL-ACM 4 h后,脾和肺中药物浓度下降迅速,药物显著浓集于肝脏.结论 注射后rHDL-ACM在大鼠肝脏中累积,提示该药具有肝脏靶向作用.
作者：楼滨；董继斌；吴满平 刊期： 2006年第05期
目的 探讨环氧合酶-2(cyclooxygenase-2, COX-2)在四氯化碳(CCl4)诱导大鼠肝纤维化形成过程中的作用.方法 用50% CCl4经腹腔注射,每周2次共8周诱导雄性S-D大鼠肝纤维化模型.将S-D大鼠随机分3组:正常对照组给橄榄油腹腔注射;罗非昔布组在CCl4诱导肝纤维化模型的同时给予选择性COX-2抑制剂罗非昔布(按10 mg·d-1·kg-1体重溶于10 mL生理盐水中灌胃);模型对照组在CCl4诱导肝纤维化模型的同时给予同等体积的生理盐水灌胃.第8周末处死大鼠,病理组织学观察肝纤维化严重程度并评分,并通过Masson三色染色法将胶原染成蓝色,用图像分析仪自动分析胶原面积.用Western blot检测肝组织COX-2表达和Ⅳ型胶原.计数肝窦内α-SMA阳性的细胞数来观察肝星状细胞的活化.结果 与肝纤维化模型组相比,罗非昔布干预组肝组织纤维化严重程度明显减轻(平均积分分别为:4.00±0.00 vs 2.89±0.60, P＜0.05)、胶原面积也减少(分别为:30.7±8.9 vs 23.5±6.5, P＜0.05)、肝窦内平均α-SMA阳性细胞数明显减少(分别为:12.5±1.3 vs 7.4±1.4, P＜0.01);Western blot分析提示:与肝纤维化模型组相比,罗非昔布能降低Ⅳ型胶原表达、对COX-2表达无明显影响.结论 COX-2在肝纤维化的形成过程中发挥重要作用,选择性COX-2抑制剂罗非昔布具有减轻或阻止肝纤维生成的作用.
作者：涂传涛；郭津生；方国汀；王吉耀 刊期： 2006年第05期
目的 研究嘌呤能受体(purinergic receptors,P2)家族中P2X不同亚型在新生和成年SD大鼠延髓的表达.方法 成年SD大鼠(6-8 w)和新生SD大鼠(1-5 d),各6只,雌雄不计,取延髓.应用免疫组织化学的方法和图像分析技术,比较P2X2和P2X4受体在新生和成年SD大鼠延髓的表达.结果 P2X2和P2X4嘌呤受体的阳性神经元和阳性纤维在新生鼠和成年鼠的延髓都有广泛表达,主要分布在孤束核、Ⅻ颅神经核和延髓腹外侧区,延髓其他区域为散在的分布.成年鼠和新生鼠的P2X2受体均比P2X4受体表达水平高.在新生鼠延髓,P2X2和P2X4的表达水平均比成年鼠低.结论 P2X2和P2X4阳性神经元和阳性纤维广泛分布在大鼠延髓,为ATP对心血管活动、呼吸活动和痛觉等的调节作用提供了结合位点,也有利于实验中P2X受体亚型阻断剂的选择.随着动物发育成熟,P2X2和P2X4表达水平均增加.
作者：马岩；宁穗；卢宁；李莉；曹银祥；钱源；朱大年；沈霖霖 刊期： 2006年第05期
目的 利用昆虫细胞杆状病毒系统表达人的重组可溶性L-型选择蛋白配体凝集素(human recombinant soluble L-selectin:sL-selectin),探索在真核细胞中高效表达人的重组可溶性L-型选择蛋白配体凝集素的新途径.方法 将已经重组好的杆状病毒感染昆虫细胞,表达sL-选凝素于细胞培养上清,利用末端连接的 ZZ-结构域(蛋白A来源的首尾相连的二聚化Z结构域)与IgG-琼脂糖-6的结合而分离纯化,通过 SDS-PAGE鉴定分子量的大小,并用特异性抗体验证,另外通过重组的sL-选凝素与SMMC7721的黏附观察其活性.结果 sL-选凝素可在昆虫细胞中表达,产物的分子量约为46 000,与人肝癌细胞SMMC7721的结合率可达70%.结论 sL-选凝素可通过杆状病毒载体在昆虫细胞中有效表达,分离纯化后依然保持生理活性.
作者：胡萍；石必枝；吴兴中 刊期： 2006年第05期
缺氧诱导因子-1(hypoxia-inducible factor-1,HIF-1)是哺乳动物和人体细胞内存在着的一类介导缺氧适应性反应的转录因子,能激活许多缺氧反应性基因的表达.
作者：蒋阳；叶志斌 刊期： 2006年第05期
目的 研究色素上皮细胞源性因子(PEDF)在体内、外的高表达对黑色素瘤细胞生长、转移等生物学行为的影响.方法 用脂质体转染pcDNA3-PEDF质粒导入黑色素瘤A375细胞,G418筛选,蛋白质印迹鉴定.四甲基偶氮唑蓝(MTT)分析体外PEDF转染肿瘤细胞的增殖.以PEDF高表达的肿瘤细胞皮下注射于裸鼠,检测原发性肿瘤的生长.采用抗鼠CD31单克隆抗体免疫组化检测肿瘤微血管密度.苏木精-伊红染色检测肺转移.结果 体外研究显示,PEDF显著抑制黑色素瘤A375细胞的增殖;在裸鼠皮下接种高表达PEDF的肿瘤细胞后,与对照细胞比较,高表达PEDF的细胞在裸鼠皮下致瘤能力减弱,肿瘤生长明显减慢;CD31染色显示高表达PEDF的肿瘤微血管密度明显降低[(34±3.75) :(12.37±3.52) (P＜0.01)],且苏木精伊红染色发现肿瘤肺转移也被显著抑制.结论 PEDF可以显著抑制黑色素瘤的新生血管生成,抑制肿瘤的生长和转移,可能为治疗黑色素瘤提供实验室依据.
作者：于波；程滨珠；钟绮丽；邵勇；廖康煌 刊期： 2006年第05期
Endoglin又名CD105,为细胞膜糖蛋白,通过调节细胞对转化生长因子β(TGF-β)的反应,参与血管发育和重塑.Endoglin在肿瘤新生的血管内皮细胞和肿瘤组织边缘部分血管内皮细胞中高表达,已成为抑制肿瘤血管生成、治疗肿瘤的理想分子靶位.
作者：韩非；朱虹光 刊期： 2006年第05期
目的 研究吲哚美辛和hTERT-siRNA对胆囊癌细胞株GBC-SD的端粒酶活性、细胞增殖、运动的抑制作用;并试从β-catenin/hTERT信号转导途径揭示其分子机制.方法 采用端粒酶TRAP、半定量RT-PCR和Western Blot印迹方法检测GBC-SD端粒酶活性、hTERT基因和β-catenin基因mRNA、蛋白质表达水平.四甲基偶氮唑盐(MTT)光吸收法检测琥珀酸脱氢酶(SDH)活性并做细胞增殖计数、运用Transwell小室和划线了解癌细胞侵袭与运动情况.结果 质粒pGCsi-H1/GFP-hTERT转染GBC-SD细胞6～24 h再加入吲哚美辛后对GBC-SD细胞的端粒酶、SDH活性、细胞增殖、运动、侵袭力均具有很明显的抑制作用,分别同阴性对照pGCsi-H1/NEGative联合吲哚美辛组、单用吲哚美辛组进行比较,差异有显著性(P＜0.01).pGCsi-H1/GFP-hTERT作用于GBC-SD细胞24h再加入吲哚美辛,检测hTERT mRNA和hTERT蛋白表达,分别与pGCsi-H1/NEGative联合吲哚美辛组、单用吲哚美辛组进行比较,差异有显著性(P＜0.01).pGCsi-H1/GFP-hTERT作用于GBC-SD细胞24h再加入吲哚美辛,检测β-catenin mRNA和β-catenin蛋白表达,分别与pGCsi-H1/NEGative联合吲哚美辛组、单用吲哚美辛组进行比较,无明显差异(P＞0.05).结论 吲哚美辛可增强hTERT-siRNA抑制GBC-SD细胞端粒酶、SDH的活性,及其增殖、运动、侵袭力,降低hTERT mRNA和hTERT蛋白表达,其机制与β-catenin/hTERT信号转导途径受抑存在一定联系.
作者：丁昂；童赛雄；冯平；秦新裕 刊期： 2006年第05期
目的 了解选择性雌激素受体调节剂(selective estrogen receptor modulators SERM)雷洛昔芬和结合马雌激素对去势大鼠骨质代谢、子宫内膜及子宫湿重的影响.方法 3月龄的清洁级健康雌性SD大鼠50只,随机分为5组,假手术组,去势组,去势后加用结合马雌激素组,去势后加用低剂量雷洛昔芬组和高剂量雷洛昔芬实验组.各组大鼠手术后90天开始灌胃给药,假手术及去势组每天给予等量赋型剂灌胃,治疗90天.各组实验结束时,处死大鼠后留取L3、L4椎体,用骨形态计量学进行定量分析及光镜观察.处死大鼠后,取出双侧子宫称重,并制作病理切片观察子宫内膜腺体数及子宫内膜形态.结果 ①反应骨形成代谢的指标骨钙素在各组间无显著性差异,反应骨吸收的生化指标PYD/Cr、DPD/Cr在去势组中明显升高.②去势组子宫湿重明显下降,结合马雌激素组与后述三组比较子宫湿重增加;与假手术组比较,其余组的子宫内膜腺体数均有减少.结论 雷洛昔芬和雌激素结合马雌激素对去势大鼠骨质疏松均有治疗作用,雷洛昔芬对子宫内膜腺体及子宫湿重无明显刺激作用.
作者：马莉；屠蕊沁；施德源；杨来春 刊期： 2006年第05期
目的 构建人血管内皮细胞生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)腺相关病毒(adeno-associated virus,AAV)表达载体包装质粒pSNAV-VEGF165,并体外检测pSNAV-VEGF165表达和生物学活性.方法 采用分子克隆技术,从pcDNA3(+)-VEGF165质粒获得VEGF165cDNA,并克隆至AAV包装质粒pSNAV上,构建pSNAV-VEGF165 的AAV重组质粒,经酶切及测序鉴定正确,用脂质体介导pSNAV-VEGF165转染HEK293细胞和血管内皮细胞(vascular endothelial cell,VEC),荧光免疫组化方法检测VEGF165蛋白,并用MTT法测定VEGF165对VEC增殖的影响.结果 经酶切鉴定及基因测序证实AAV包装质粒pSNAV-VEGF165构建成功,荧光免疫组化显示VEGF165蛋白的表达,对照组未见VEGF165蛋白的表达,MTT法显示VEGF165蛋白对VEC增殖有促进作用.结论 构建的AAV包装质粒pSNAV-VEGF165在体外具有生物学活性,可作为AAV-VEGF165表达载体的包装质粒.
作者：董跃福；王德春；胡有谷；齐宗华 刊期： 2006年第05期
目的 通过体外定向诱导耳蜗前体细胞分化,明确耳蜗前体细胞的位置取材,来源及增殖分化特性,建立完善的耳蜗前体细胞的培养体系.方法 取耳蜗的Corti器位置,利用无血清培养和单细胞克隆技术,进行细胞培养,在相差显微镜下观察细胞形态及生长状况,并用神经巢蛋白(nestin)、溴脱氧尿嘧啶(Brdu)、Myosin ⅦA、P27KIP1等免疫荧光方法,鉴定耳蜗前体细胞和由耳蜗前体细胞分化而来的内耳毛细胞和内耳支持细胞.同时进行细胞计数.结果 从新生大鼠耳蜗分离的组织,经原代和传代培养后,可获得大量未分化,悬浮生长的Nestin阳性细胞团,并具有增殖的能力,诱导分化后的细胞经免疫荧光双标实验可表达Brdu、Myosin ⅦA和P27KIP1阳性.流式细胞仪细胞计数后,发现前体细胞向内耳毛细胞诱导分化的数量较少,向支持细胞分化的较多.结论 从新生大鼠耳蜗分离的细胞是具有自我更新和分化潜能的前体细胞,可诱导分化为内耳毛细胞和内耳支持细胞.
作者：郑鸿燕；邰浩清；周春祥；吴颢昕；詹臻；王明艳 刊期： 2006年第05期
目的 探讨B细胞淋巴瘤/白血病基因2(Bcl-2) Loop domain结构域在Bcl-2 蛋白结构中的作用.方法 应用PCR及Western blot方法检测Bcl-2 Loop domain结构域突变前后Bcl-2蛋白的表达情况.结果 Bcl-2 Loop domain结构域突变后Bcl-2蛋白只在沉淀中检测到,在上清中未检测到.结论 Bcl-2 Loop domain结构域被突变后,Bcl-2蛋白空间结构发生改变,推测Bcl-2 Loop domain结构域在Bcl-2 蛋白结构中起到重要作用.
作者：刘娜；孙志扬；李杨；宋海燕；孙庆文 刊期： 2006年第05期
复旦学报（医学版）杂志
主管:中华人民共和国教育部
主办：复旦大学
