学术投稿

用Chelex-100快速提取微量血痕中的DNA

周月琴;朱伟;刘志萍;吴文庆

关键词:微量血痕, DNA, Chelex-100
摘要:目的观察用Chelex-100从微量血痕中提取DNA的效果.方法 40份血痕纱布,取血痕3 mm×3mm置于1.5 mL离心管中,采用5%Chelex-100加煮沸法,提取血痕纱布中的DNA.提取液经过紫外分光光法测定,测其A260/280的比值,计算提取液DNA的纯度和浓度;DNA提取液经微型琼脂糖凝胶电泳,检测其DNA电泳带.结果 Chelex-100能快速在1 h之内提取微量血痕中的DNA,其提取液DNA纯度:27 5%样品纯度A260/280比值大于1.6,72.5%样品纯度比值在1.08~1.54之间;提取液DNA浓度:80%样品小于100μg/mL,20%样品在100~166 μg/mL之间.微型琼脂糖凝胶电泳未观察到DNA条带.结论用Chelex-100法有助于快速提取微量血痕中的DNA.
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    作者:李文涛;王建华 刊期: 2003年第04期

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  • 3H-脱氧葡萄糖掺入判断高能X线照射A549肺腺癌多细胞肿瘤球体的疗效

    目的用3H-脱氧葡萄糖(3H-DG)掺入判断6MV X线照射A549肺腺癌多细胞肿瘤球体(MTS)的疗效.方法 MTS分别作低剂量分割和单次照射,中等剂量单次照射.MTS消化成单个细胞后用流式细胞仪检测细胞周期和凋亡比率.96孔盘每孔1个MTS,加37 kBq3H-DG后掺入60 min,吸出MTS抽滤后测量β计数.结果 2~8 Gy低剂量照射后未见明显细胞周期阻滞和凋亡,分割照射组MTS的摄取减低,4.84 Gy单次照射后的摄取明显高于其他各组(P<0.05);15~30 Gy照射后,细胞G2-M期阻滞百分率增加,各照射组3H-DG摄取均小于对照组(P<0.05),随照射剂量递增,MTS摄取3H-DG的能力降低;15 Gy照射后第10天有活细胞增殖,25或30 Gy照射后第40天有活细胞增殖.结论用3H-DG可以监测高能X线照射A549肺腺癌MTS的疗效,不同剂量照射后球体细胞的再增殖时间对于设计放疗方案和安排18F-FDG显像时间有指导作用.

    作者:史德刚;黄钢;苗积生;林祥通;贺晓东;苏斌 刊期: 2003年第04期

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    作者:赵鸿;王翔;丁强;张元芳 刊期: 2003年第04期

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  • 禁欲时间对男性精液质量的影响

    目的了解不同禁欲时间的男性精液质量状况,为临床治疗不育提供参考.方法对来自全国7个省市562名健康男性的精液质量进行分析.结果随着禁欲时间的延长,精液量、精子密度、精子总数都有所增加,差异有统计学意义(P<0.05).结论精子数目过少的男性,禁欲时间可以稍长,但不宜超过7 d.精子活力差而精子数量足够的男性,则禁欲时间可以稍短,3 d左右即可.

    作者:李文英;武俊青;高尔生;杨秋英;陶建国;陈锡宽 刊期: 2003年第04期

  • 腹腔镜肾上腺切除术(附12例报告)

    目的探讨腹腔镜肾上腺切除术的临床价值.方法分析腹腔镜肾上腺切除术12例的临床资料,其中经腹腔途径切除10例,经后腹腔途径切除2例.从手术的适应证、手术途径、手术方法及术后恢复等多方面进行讨论.结果本组12例成功11例,1例中转开放.手术时间90~300 min,平均130 min.出血量20~200mL,平均出血量50 mL.引流管1~30 d拔除.术后住院6~30 d,平均10 d.术后并发症包括:胸腔积液1例,Trocar穿刺孔皮下组织脂肪液化和感染各1例.成功11例病理结果为:肾上腺嗜铬细胞瘤3例,功能性肾上腺皮质腺瘤4例(其中原醛症和皮质醇症各2例),原醛腺瘤样增生1例,无功能肾上腺皮质腺瘤1例,肾上腺髓样脂肪瘤2例.中转开放1例为无功能肾上腺皮质腺瘤.结论如能熟练操作腹腔镜,并选择合理的适应证,腹腔镜肾上腺切除术是首选的治疗方法.

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    目的研究抗增殖性p21基因转染对体外培养的人血管平滑肌细胞(HVSMC)的增殖抑制作用及其作用机制.方法通过腺病毒介导将外源性p21基因转入HVSMC,通过免疫印迹法(Western blot)检测p21基因的表达,原位末端标记法(TUNEL)、DNA片段梯度分析及流式细胞分析(FCM)观察靶细胞的细胞周期变化及凋亡,利用酶联免疫光度仪分析靶细胞的增殖抑制情况.结果 Western blot结果显示p21基因转染后的HVSMC可高水平表达p21蛋白,而另两组无表达.感染后5 d,Adp21组的细胞数为0.275 5±0.01(525 nm波长下吸光度A值),AdlacZ组为0.340 9±0.02,空白组为0.347 5±0.02,Adp21组较另两组的差异有统计学意义(P<0.01).TUNEL、DNA片段梯度分析及FCM检测均提示靶细胞发生了凋亡.FCM检测还发现明显的细胞周期阻滞现象,Adp21组G0-G1期细胞比例为66.23%,S期细胞比例为10.18%,而另两组G0-G1期和S期细胞比例分别为:47.73%、30.56%和45.31%、32.34%.结论复制缺陷性腺病毒在体外可有效介导外源性p21基因转染HVSMC,转染后的细胞除发生细胞周期阻滞外还出现明显的凋亡,其生长增殖受到抑制.

    作者:余波;张学利;王铁平;李平;蔡端 刊期: 2003年第04期

  • 兔分级脊髓损伤后运动诱发电位的变化

    目的了解不同程度脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)与运动诱发电位(motor evoked potential,MEP)变化之间的关系以及MEP在判断运动预后功能中的作用.方法对21只兔采用改良Allen,打击法分别用60、120gcf gram×centimeter×force(gcf)冲量打击兔T10-11脊髓,建立不同程度SCI模型,并在伤前及伤后24 h连续记录兔双侧腓肠肌MEP,用Tarlow's评分衡量兔下肢运动神经功能.结果脊髓轻度打击伤时,兔MEP波幅明显降低,但恢复良好;中度打击伤时,MEP波幅的下降更明显,且不能完全恢复;重度打击伤时,MEP波均无法引出,至24 h也不能恢复MEP波形.结论 MEP可敏感而准确地反映脊髓损伤后中枢神经功能的损伤程度,可作为一种有效的监护脊髓功能的手段,并可作为判断运动神经功能预后的可靠指标.

    作者:吕飞舟;姜建元;张志玉;黄煌渊;顾玉东 刊期: 2003年第04期

  • 反义转化生长因子βⅠ型受体表达质粒对实验性肝纤维化的影响

    作者: 刊期: 2003年第04期

  • 抗PSMA膜外段单克隆抗体的制备及其初步应用

    目的制备抗前列腺特异性膜抗原(PSMA)膜外段的单克隆抗体.方法原核表达含有PSMA膜外段多肽的融合蛋白,免疫雌性Balb/c小鼠后取效价较高的小鼠行小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合,以酶联免疫吸附实验(ELISA)、免疫细胞化学、免疫组织化学法筛选、鉴定分泌特异性抗PSMA膜外段的单克隆杂交瘤细胞株.结果经过ELISA初筛得到55个阳性杂交瘤细胞株,其中8株经免疫组化证实为可用于前列腺癌石蜡包埋组织切片的免疫组化染色.结论获得了8株可持续分泌抗PSMA膜外段单克隆抗体的杂交瘤细胞株,产生的单抗以后可用于前列腺癌的诊断,并为前列腺癌的免疫治疗奠定了基础.

    作者:任加强;郑莉;陈琦;李华;张敏;张膺宇;张秀荣;朱虹光 刊期: 2003年第04期

  • 用Chelex-100快速提取微量血痕中的DNA

    目的观察用Chelex-100从微量血痕中提取DNA的效果.方法 40份血痕纱布,取血痕3 mm×3mm置于1.5 mL离心管中,采用5%Chelex-100加煮沸法,提取血痕纱布中的DNA.提取液经过紫外分光光法测定,测其A260/280的比值,计算提取液DNA的纯度和浓度;DNA提取液经微型琼脂糖凝胶电泳,检测其DNA电泳带.结果 Chelex-100能快速在1 h之内提取微量血痕中的DNA,其提取液DNA纯度:27 5%样品纯度A260/280比值大于1.6,72.5%样品纯度比值在1.08~1.54之间;提取液DNA浓度:80%样品小于100μg/mL,20%样品在100~166 μg/mL之间.微型琼脂糖凝胶电泳未观察到DNA条带.结论用Chelex-100法有助于快速提取微量血痕中的DNA.

    作者:周月琴;朱伟;刘志萍;吴文庆 刊期: 2003年第04期

  • 旋转铰链型膝关节假体置换治疗膝部恶性肿瘤

    目的了解旋转铰链型膝关节假体置换治疗膝部恶性肿瘤的近期疗效.方法胫骨近端或股骨远端恶性骨肿瘤广泛切除后,采用铰链型膝关节假体置换重建,同时辅以化疗.结果 10例患者平均随访17个月,无远处转移迹象,1例局部复发.MSTS功能评分提示所有患者各项评估都在3.5分以上,表明术后近期效果满意.结论旋转铰链型膝关节假体置换是治疗膝部恶性肿瘤的有效方法,具有关节功能早期恢复的特点.

    作者:张弛;姚振均;陈峥嵘 刊期: 2003年第04期

  • 上鼓室封闭和外侧壁重建技术在鼓室成形术中的应用

    作者: 刊期: 2003年第04期

  • 人反义VEGF121 cDNA表达质粒的构建及其对膀胱癌细胞增殖的影响

    目的构建人反义VEGF121 cDNA真核表达质粒,研究反义基因治疗对膀胱癌细胞增殖的影响.方法 将VEGF121反向克隆入真核表达载体pcDNA3中,酶切鉴定.用此真核表达重组质粒转染人膀胱癌细胞株T24,G418筛选获得阳性克隆,RT-PCR法测定转染前后T24细胞中VEGF mRNA表达,ELISA法检测转染前后T24细胞中VEGF蛋白表达.利用MTT法、软琼脂克隆形成试验、流式细胞仪和电镜等检测转染前后T24细胞的生物学性状.结果获得反义VEGF121 cDNA质粒表达重组质粒.VEGF121反义RNA部分阻断了T24细胞中VEGF表达,转染后肿瘤细胞VEGFmRNA和VEGF蛋白表达都明显减少;转染后单个细胞的克隆形成能力明显减弱;形态学超微结构显示细胞器扩张和肿胀,核染色质边集,凝集成块,可见明显的凋亡改变.结论 成功构建了反义VEGF121 cDNA真核表达质粒,转染该质粒可明显抑制膀胱癌细胞增殖,为膀胱癌的基因治疗提供了一定的实验依据.

    作者:金建军;王跃祥;丁强;李纲;瞿连喜;宋后燕;张元芳 刊期: 2003年第04期

  • 儿童口腔黏膜细胞内Ca2+含量与患龋状况的关系

    目的探讨儿童口腔黏膜细胞内Ca2+含量与儿童患龋状况的关系.方法将46名3~5岁儿童根据龋蚀指数分为两组:龋病高危组(25例)、无龋组(21例).刮取儿童口腔黏膜脱落细胞,Fluo-3染色,用激光扫描共聚焦显微镜检测细胞内Ca2+的荧光强度值,统计分析其与龋患程度的关系.结果高危组儿童口腔黏膜细胞内Ca2+的荧光强度低于无龋组,两组间差异有高度统计学意义;不同性别间细胞内Ca2+的荧光强度的差异无统计学意义;高危组儿童口腔黏膜细胞内Ca2+的荧光强度与dft、CSI呈负相关关系.结论儿童口腔黏膜细胞内Ca2+的荧光强度与龋患程度具有一定的相关性,龋患程度重则细胞内Ca2+的荧光强度低.口腔黏膜细胞内Ca2+的荧光强度值或可作为预测儿童龋病易感性的一项参考指标.

    作者:吉雅丽;石四箴 刊期: 2003年第04期

  • 血液稀释结合控制性降压对肺血管外肺水的影响

    目的研究急性等容量血液稀释结合控制性降压对血容量、心脏前负荷、肺血管外肺水和血浆胶体渗透压的影响.方法 ASAⅠ~Ⅱ级的髋关节手术病人24例,随机均分为组Ⅰ(对照组)和组Ⅱ(降压组).两组均采用硬膜外阻滞复合全身麻醉.组Ⅱ术前进行等容血液稀释,术中施行控制性降压,并进行自体血回输.术中测定静脉血细胞比容(Hct)和中心静脉压(CVP),经股动脉放置PiCCO(PV2014L13,Pulson Medical Systems)热稀释导管,监测动脉压(BP)、心脏指数(CI)、每搏心排量(SV)、外周阻力(SVR)、心脏舒张末期容量(GEDV)、胸内血容量(ITBV)和血管外肺水容积量(EVLW).结果组Ⅰ病人平均输库血量和出血量明显高于组Ⅱ;两组病人的Hct分别由基础值(42±2.3)%和(43±2.5)%降为(32±2.8)%和(39±3.2)%,差异有显著意义;其余指标差异无显著性.结论 6%H-ES(200/0.5)扩容效果持久、稳定;血液稀释结合控制性降压及自体血回输既保持了血容量和心脏前负荷,同时不增加血管外肺水,另外可以明显减少术中出血;血液稀释后Hct仍大大超过低安全水平线,具有很高的安全性.

    作者:仓静;马琦;薛张纲;蒋豪 刊期: 2003年第04期

  • PAI-2的两个突变体对TNF-α诱导细胞凋亡的抗性

    目的研究纤溶酶原激活剂抑制物2型(PAI-2)的两种不同突变体抵抗肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导Hela细胞凋亡的活性差异,探讨PAI-2CD螺旋间区的空间构象对其抗凋亡功能的影响.方法分别构建突变体PAI-2D和PAI-2M真核表达质粒.转染Hela细胞,RT-PCR鉴定,筛选出能稳定表达PAI-2D和PAI-2M的阳性细胞株.用MTT法检测PAI-2的这两个突变体抗凋亡的活性,并利用计算机同源模建,比较PAI-2的这两个突变体空间构象的变化.结果突变体PAI-2M能抑制TNF-α诱导的Hela细胞凋亡,而PAI-2D则不能.PAI-2M较好地保持了野生型PAI-2的空间构象,而PAI-2DCD螺旋间区的空间构象则发生了较大的变化.结论 PAI-2抑制TNF-α诱导的细胞凋亡依赖于其CD螺旋间区空间构象的完整性,而与PENF结构域(PENF73-76)无关.

    作者:张宇清;侯敏;王霞;孙兴会;李平;朱运松 刊期: 2003年第04期

  • 胰岛素、胰高血糖素和地塞米松调节PEPCK启动子活性的体外研究

    目的探讨胰岛素、胰高血糖素和地塞米松对PEPCK启动子活性的影响及其意义.方法将PEPCK启动子构建入表达载体pGL3-Basic,采用Lipofect脂质体转染法将携带PEPCK启动子的质粒pGL3-Basic-PEPCK转染至大鼠肝细胞株Hepal-6细胞,12 h后加入不同浓度的胰岛素、胰高血糖素和地塞米松,孵育48 h后分别检测其报告基因萤虫素酶的活性.结果生理水平的胰岛素可明显抑制PEPCK启动子的活性,与胰岛素的浓度正相关;地塞米松则上调PEPCK启动子的活性,而胰高血糖素对其活性无影响.结论 PEPCK启动子在肝细胞中受胰岛素的负调控、地塞米松的正调控,若用于调控胰岛素基因的表达,将使糖尿病的基因治疗更安全更可行.

    作者:沈坤堂;秦新裕;张新;韩泽广 刊期: 2003年第04期

  • 乳牙釉质表面氟浓度与患龋状况的关系

    目的探讨牙齿不同部位之间、易患龋牙与非易患龋牙之间牙釉质表面氟浓度有无差异.方法收集上海、北京和深圳3个地区儿童的下颌乳中切牙45颗,并利用微样酸蚀法分析乳牙釉质表面氟元素的分布.结果氟浓度从釉质表面到内部有由高到低的变化趋势,牙磨耗是牙齿丧失氟的重要元素,未发现釉质表层氟浓度与龋蚀指数(CSI)、龋补牙数(dft)有相关性(P>0.05).结论乳牙釉质表面氟浓度与患龋状况无明显相关性.

    作者:王子华;石四箴 刊期: 2003年第04期

复旦学报(医学版)杂志

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