学术投稿

PAI-2的两个突变体对TNF-α诱导细胞凋亡的抗性

张宇清;侯敏;王霞;孙兴会;李平;朱运松

关键词:纤溶酶原激活剂抑制物2型, 肿瘤坏死因子-α, 细胞凋亡, 突变体
摘要:目的研究纤溶酶原激活剂抑制物2型(PAI-2)的两种不同突变体抵抗肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导Hela细胞凋亡的活性差异,探讨PAI-2CD螺旋间区的空间构象对其抗凋亡功能的影响.方法分别构建突变体PAI-2D和PAI-2M真核表达质粒.转染Hela细胞,RT-PCR鉴定,筛选出能稳定表达PAI-2D和PAI-2M的阳性细胞株.用MTT法检测PAI-2的这两个突变体抗凋亡的活性,并利用计算机同源模建,比较PAI-2的这两个突变体空间构象的变化.结果突变体PAI-2M能抑制TNF-α诱导的Hela细胞凋亡,而PAI-2D则不能.PAI-2M较好地保持了野生型PAI-2的空间构象,而PAI-2DCD螺旋间区的空间构象则发生了较大的变化.结论 PAI-2抑制TNF-α诱导的细胞凋亡依赖于其CD螺旋间区空间构象的完整性,而与PENF结构域(PENF73-76)无关.
复旦学报(医学版)杂志相关文献
  • 禁欲时间对男性精液质量的影响

    目的了解不同禁欲时间的男性精液质量状况,为临床治疗不育提供参考.方法对来自全国7个省市562名健康男性的精液质量进行分析.结果随着禁欲时间的延长,精液量、精子密度、精子总数都有所增加,差异有统计学意义(P<0.05).结论精子数目过少的男性,禁欲时间可以稍长,但不宜超过7 d.精子活力差而精子数量足够的男性,则禁欲时间可以稍短,3 d左右即可.

    作者:李文英;武俊青;高尔生;杨秋英;陶建国;陈锡宽 刊期: 2003年第04期

  • 小鼠局灶性脑缺血后ICAM-1、Mac-1和MPO活性的变化

    目的研究缺血脑组织内的炎症反应过程及其在缺血基底节及其周围皮质的不同特征.方法用线栓法制作小鼠大脑中动脉持续性栓塞模型(pMCAO),用免疫组化法观察缺血区血管内皮细胞黏附因子ICAM-1和白细胞Mac-1的表达,测定髓过氧化物酶(MPO)活性.结果 MCAO后4 h,缺血区ICAM-1阳性血管开始增加,24~48 h达高峰,72 h后减少;各时段缺血皮质区的阳性血管数均多于基底节.MCAO后24 h缺血基底节Mac-1阳性细胞明显增加,48 h到达顶峰,72 h后缓慢减少;而在缺血皮质,MCAO后4 h,Mac-1阳性白细胞已开始增加,48 h达到顶峰,72 h后仍保持较高的数量,各时段缺血皮质区的Mac-1阳性细胞数均多于基底节区.MCAO后12 h缺血基底节MPO活性开始升高,24 h到达高峰,72 h后逐步下降;在缺血皮质,MCAO后12 hMPO活性小幅升高,24 h后达到顶峰,并维持较高水平至120 h.结论小鼠大脑中动脉持续性栓塞早期,缺血脑组织ICAM-1、Mac-1表达和MPO活性平行升高,提示小鼠局灶性脑缺血后存在缺血性损伤诱导的主动性炎症反应,与缺血基底节区相比,周围皮质的炎症反应更为持久而强烈.

    作者:王知秋;陈衔城;杨国源;周良辅 刊期: 2003年第04期

  • 反义转化生长因子βⅠ型受体表达质粒对实验性肝纤维化的影响

    作者: 刊期: 2003年第04期

  • 糖尿病和非糖尿病患者尿路感染的比较

    目的探讨糖尿病患者的尿路感染特点.方法选择179例住院的尿病原学阳性的尿感患者.据有无糖尿病分成两组,对其临床资料、病原体的分布及两种主要病原菌大肠埃希菌和肠球菌的药敏结果进行对照.结果糖尿病患者无症状菌尿的发生率较高,对治疗的反应性较差,并且易于发生多重致病菌的感染,在医院感染中真菌的感染机会较多.在对各种抗生素的耐药方面,两组患者差异无显著意义.结论要重视糖尿病患者尿病原体的培养,治疗过程中可能需要抗生素的联合运用和抗真菌药物的使用.

    作者:钟一红;丁小强;邹静怀;胡必杰;徐少伟 刊期: 2003年第04期

  • 旋转铰链型膝关节假体置换治疗膝部恶性肿瘤

    目的了解旋转铰链型膝关节假体置换治疗膝部恶性肿瘤的近期疗效.方法胫骨近端或股骨远端恶性骨肿瘤广泛切除后,采用铰链型膝关节假体置换重建,同时辅以化疗.结果 10例患者平均随访17个月,无远处转移迹象,1例局部复发.MSTS功能评分提示所有患者各项评估都在3.5分以上,表明术后近期效果满意.结论旋转铰链型膝关节假体置换是治疗膝部恶性肿瘤的有效方法,具有关节功能早期恢复的特点.

    作者:张弛;姚振均;陈峥嵘 刊期: 2003年第04期

  • 血液稀释结合控制性降压对肺血管外肺水的影响

    目的研究急性等容量血液稀释结合控制性降压对血容量、心脏前负荷、肺血管外肺水和血浆胶体渗透压的影响.方法 ASAⅠ~Ⅱ级的髋关节手术病人24例,随机均分为组Ⅰ(对照组)和组Ⅱ(降压组).两组均采用硬膜外阻滞复合全身麻醉.组Ⅱ术前进行等容血液稀释,术中施行控制性降压,并进行自体血回输.术中测定静脉血细胞比容(Hct)和中心静脉压(CVP),经股动脉放置PiCCO(PV2014L13,Pulson Medical Systems)热稀释导管,监测动脉压(BP)、心脏指数(CI)、每搏心排量(SV)、外周阻力(SVR)、心脏舒张末期容量(GEDV)、胸内血容量(ITBV)和血管外肺水容积量(EVLW).结果组Ⅰ病人平均输库血量和出血量明显高于组Ⅱ;两组病人的Hct分别由基础值(42±2.3)%和(43±2.5)%降为(32±2.8)%和(39±3.2)%,差异有显著意义;其余指标差异无显著性.结论 6%H-ES(200/0.5)扩容效果持久、稳定;血液稀释结合控制性降压及自体血回输既保持了血容量和心脏前负荷,同时不增加血管外肺水,另外可以明显减少术中出血;血液稀释后Hct仍大大超过低安全水平线,具有很高的安全性.

    作者:仓静;马琦;薛张纲;蒋豪 刊期: 2003年第04期

  • PAI-2的两个突变体对TNF-α诱导细胞凋亡的抗性

    目的研究纤溶酶原激活剂抑制物2型(PAI-2)的两种不同突变体抵抗肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导Hela细胞凋亡的活性差异,探讨PAI-2CD螺旋间区的空间构象对其抗凋亡功能的影响.方法分别构建突变体PAI-2D和PAI-2M真核表达质粒.转染Hela细胞,RT-PCR鉴定,筛选出能稳定表达PAI-2D和PAI-2M的阳性细胞株.用MTT法检测PAI-2的这两个突变体抗凋亡的活性,并利用计算机同源模建,比较PAI-2的这两个突变体空间构象的变化.结果突变体PAI-2M能抑制TNF-α诱导的Hela细胞凋亡,而PAI-2D则不能.PAI-2M较好地保持了野生型PAI-2的空间构象,而PAI-2DCD螺旋间区的空间构象则发生了较大的变化.结论 PAI-2抑制TNF-α诱导的细胞凋亡依赖于其CD螺旋间区空间构象的完整性,而与PENF结构域(PENF73-76)无关.

    作者:张宇清;侯敏;王霞;孙兴会;李平;朱运松 刊期: 2003年第04期

  • 胰岛素、胰高血糖素和地塞米松调节PEPCK启动子活性的体外研究

    目的探讨胰岛素、胰高血糖素和地塞米松对PEPCK启动子活性的影响及其意义.方法将PEPCK启动子构建入表达载体pGL3-Basic,采用Lipofect脂质体转染法将携带PEPCK启动子的质粒pGL3-Basic-PEPCK转染至大鼠肝细胞株Hepal-6细胞,12 h后加入不同浓度的胰岛素、胰高血糖素和地塞米松,孵育48 h后分别检测其报告基因萤虫素酶的活性.结果生理水平的胰岛素可明显抑制PEPCK启动子的活性,与胰岛素的浓度正相关;地塞米松则上调PEPCK启动子的活性,而胰高血糖素对其活性无影响.结论 PEPCK启动子在肝细胞中受胰岛素的负调控、地塞米松的正调控,若用于调控胰岛素基因的表达,将使糖尿病的基因治疗更安全更可行.

    作者:沈坤堂;秦新裕;张新;韩泽广 刊期: 2003年第04期

  • 人反义VEGF121 cDNA表达质粒的构建及其对膀胱癌细胞增殖的影响

    目的构建人反义VEGF121 cDNA真核表达质粒,研究反义基因治疗对膀胱癌细胞增殖的影响.方法 将VEGF121反向克隆入真核表达载体pcDNA3中,酶切鉴定.用此真核表达重组质粒转染人膀胱癌细胞株T24,G418筛选获得阳性克隆,RT-PCR法测定转染前后T24细胞中VEGF mRNA表达,ELISA法检测转染前后T24细胞中VEGF蛋白表达.利用MTT法、软琼脂克隆形成试验、流式细胞仪和电镜等检测转染前后T24细胞的生物学性状.结果获得反义VEGF121 cDNA质粒表达重组质粒.VEGF121反义RNA部分阻断了T24细胞中VEGF表达,转染后肿瘤细胞VEGFmRNA和VEGF蛋白表达都明显减少;转染后单个细胞的克隆形成能力明显减弱;形态学超微结构显示细胞器扩张和肿胀,核染色质边集,凝集成块,可见明显的凋亡改变.结论 成功构建了反义VEGF121 cDNA真核表达质粒,转染该质粒可明显抑制膀胱癌细胞增殖,为膀胱癌的基因治疗提供了一定的实验依据.

    作者:金建军;王跃祥;丁强;李纲;瞿连喜;宋后燕;张元芳 刊期: 2003年第04期

  • 记忆合金支架治疗前列腺部尿道梗阻的远期疗效

    目的观察镍钛记忆合金网状支架治疗前列腺部尿道梗阻的远期疗效.方法 1993年11月-1996年8月应用网状镍钛记忆合金尿道支架治疗前列腺部尿道梗阻患者15例,其中前列腺增生14例,前列腺癌1例.分别于术后3个月及6年随访.结果术后6年,症状明显改善,国际前列腺症状评分(IPSS)比术前减少16.6,残余尿(RUV)从平均151.2 mL减少至29.1 mL,平均尿流率(MFR)从平均3.0 mL/s增加到11.1 mL/s.结论镍钛记忆合金网状支架对治疗良性前列腺增生症(BPH)引起的前列腺部尿道梗阻是一种有效的措施,特别适用于不能耐受手术或预期寿命不长的尿潴留患者.

    作者:徐志兵;王国民;张永康 刊期: 2003年第04期

  • 甘草黄酮对B16黑色素瘤细胞代谢的影响

    目的研究甘草黄酮对B16黑色素瘤细胞的作用,并与一些美白药物进行比较,探讨其美白的作用及安全性.方法测定药物对体外培养的B16黑色素瘤细胞系的细胞活力、细胞酪氨酸酶活性及细胞内黑素含量的影响,并与氢醌、熊果苷及维生素C磷酸酯的结果比较.结果几种化合物对B16细胞酪氨酸酶活性均有抑制作用,且呈浓度依赖性;药物作用后细胞黑素生成量显著减少.甘草黄酮和维生素C磷酸酯的细胞毒性较低,而氢醌和熊果苷具有明显的细胞毒性.结论甘草黄酮有较强的抑制酪氨酸酶活性和黑素生成的作用,同时对黑素细胞的细胞毒性较低,是较为安全有效的美白药物.

    作者:马晶波;冯树芳;李锋;黄岚;郑志忠 刊期: 2003年第04期

  • REML法和MCMC法在数量性状核心家系遗传方差分量模型中参数估计的比较

    目的比较限制性大似然估计(REML)和马尔可夫链蒙特卡罗(MCMC)方法在数量性状遗传方差分量模型中参数估计的偏差和精度.方法计算机模拟50个数量性状核心家系数据集,运用SAS软件中的PROC MIXED程序和WinBUGS软件进行参数估计,比较不同样本含量时两法参数估计结果.结果在本试验参数指定条件下,对固定效应参数,两法估计的相对偏差低于2%;对随机效应,估计偏差较高.小样本时,MCMC法估计结果比REML法更接近真值.结论在模拟数量性状方差分量模型时,大样本家系资料可根据实际情况选用两法;小样本家系资料,MCMC法可得到比REML法更稳健的估计,推荐使用.

    作者:郜艳晖;姜庆五;孟炜;陈启明;赵耐青;沈福民 刊期: 2003年第04期

  • 显微外科技术在大鼠肾移植模型中的应用

    大鼠是目前器官移植实验中常用的实验动物.自20世纪60年代以来,大鼠异体肾移植模型建造技术不断改进.作者结合本研究所长期肾脏移植经验与手外科研究所显微外科技术优势,进行了50例大鼠异体肾脏移植训练,获得较好的效果.

    作者:赵鸿;王翔;丁强;张元芳 刊期: 2003年第04期

  • 腺病毒介导p21基因转染抑制人血管平滑肌细胞增殖的研究

    目的研究抗增殖性p21基因转染对体外培养的人血管平滑肌细胞(HVSMC)的增殖抑制作用及其作用机制.方法通过腺病毒介导将外源性p21基因转入HVSMC,通过免疫印迹法(Western blot)检测p21基因的表达,原位末端标记法(TUNEL)、DNA片段梯度分析及流式细胞分析(FCM)观察靶细胞的细胞周期变化及凋亡,利用酶联免疫光度仪分析靶细胞的增殖抑制情况.结果 Western blot结果显示p21基因转染后的HVSMC可高水平表达p21蛋白,而另两组无表达.感染后5 d,Adp21组的细胞数为0.275 5±0.01(525 nm波长下吸光度A值),AdlacZ组为0.340 9±0.02,空白组为0.347 5±0.02,Adp21组较另两组的差异有统计学意义(P<0.01).TUNEL、DNA片段梯度分析及FCM检测均提示靶细胞发生了凋亡.FCM检测还发现明显的细胞周期阻滞现象,Adp21组G0-G1期细胞比例为66.23%,S期细胞比例为10.18%,而另两组G0-G1期和S期细胞比例分别为:47.73%、30.56%和45.31%、32.34%.结论复制缺陷性腺病毒在体外可有效介导外源性p21基因转染HVSMC,转染后的细胞除发生细胞周期阻滞外还出现明显的凋亡,其生长增殖受到抑制.

    作者:余波;张学利;王铁平;李平;蔡端 刊期: 2003年第04期

  • 儿童口腔黏膜细胞内Ca2+含量与患龋状况的关系

    目的探讨儿童口腔黏膜细胞内Ca2+含量与儿童患龋状况的关系.方法将46名3~5岁儿童根据龋蚀指数分为两组:龋病高危组(25例)、无龋组(21例).刮取儿童口腔黏膜脱落细胞,Fluo-3染色,用激光扫描共聚焦显微镜检测细胞内Ca2+的荧光强度值,统计分析其与龋患程度的关系.结果高危组儿童口腔黏膜细胞内Ca2+的荧光强度低于无龋组,两组间差异有高度统计学意义;不同性别间细胞内Ca2+的荧光强度的差异无统计学意义;高危组儿童口腔黏膜细胞内Ca2+的荧光强度与dft、CSI呈负相关关系.结论儿童口腔黏膜细胞内Ca2+的荧光强度与龋患程度具有一定的相关性,龋患程度重则细胞内Ca2+的荧光强度低.口腔黏膜细胞内Ca2+的荧光强度值或可作为预测儿童龋病易感性的一项参考指标.

    作者:吉雅丽;石四箴 刊期: 2003年第04期

  • B超定位剔除子宫肌壁间妊娠1例报道

    临床资料患者37岁,因停经51 d,宫内节育器合并妊娠于2002年4月8日在本院门诊行人工流产及取环术.术中仅刮出少量内膜组织未见绒毛,取出金属环1枚.病理诊断为蜕膜样组织及分泌期内膜.B超检查:宫内仍见完整孕囊.疑漏吸而在B超监视下再次刮宫,仍吸不到孕囊,考虑子宫肌壁间妊娠可能,收入院治疗.

    作者:曹时珍;陈亚萍 刊期: 2003年第04期

  • 腹腔镜肾上腺切除术(附12例报告)

    目的探讨腹腔镜肾上腺切除术的临床价值.方法分析腹腔镜肾上腺切除术12例的临床资料,其中经腹腔途径切除10例,经后腹腔途径切除2例.从手术的适应证、手术途径、手术方法及术后恢复等多方面进行讨论.结果本组12例成功11例,1例中转开放.手术时间90~300 min,平均130 min.出血量20~200mL,平均出血量50 mL.引流管1~30 d拔除.术后住院6~30 d,平均10 d.术后并发症包括:胸腔积液1例,Trocar穿刺孔皮下组织脂肪液化和感染各1例.成功11例病理结果为:肾上腺嗜铬细胞瘤3例,功能性肾上腺皮质腺瘤4例(其中原醛症和皮质醇症各2例),原醛腺瘤样增生1例,无功能肾上腺皮质腺瘤1例,肾上腺髓样脂肪瘤2例.中转开放1例为无功能肾上腺皮质腺瘤.结论如能熟练操作腹腔镜,并选择合理的适应证,腹腔镜肾上腺切除术是首选的治疗方法.

    作者:孙立安;王国民;徐志兵;刘宇军;王杭 刊期: 2003年第04期

  • 癫癎小鼠海马内活化素βA mRNA表达的变化

    目的探讨匹鲁卡品(pilocarpine,PC)诱导的癫癎小鼠海马内活化素(activin,ACT)β A mRNA表达的变化.方法应用逆转录-聚合酶链反应研究癫癎持续状态(status epilepticus,SE)与非持续状态(NSE)小鼠不同时间海马ACT βAmRNA的表达;原位杂交技术研究SE后不同时间小鼠海马ACT βAmRNA表达的分布.结果 NSE组各时间点间及与相应对照组间ACT βAmRNA表达无显著差异(P>0.05);SE开始前(0 h)的抽搐小鼠ACT β AmRNA表达显著低于正常与相应NSE组,在SE 1 h时已较0 h显著增高(P<0.01),但与正常及相应NSE组无差异.于SE1 h控制癫癎发作之后仍继续增高,6 h达高峰,48 h下降至略高于对照水平.与对照组及NSE组相比,3、6、24 h增高有极显著差异(6 h P<0.001,3、24 h P≤0.01).ACT β A mRNA表达明显上调的部位早于SE后3 h出现于海马CA2与DG区,6 h后CA3区也见明显表达,24 h后仅CA2、CA3区有表达,48 h后与对照组相似未见明显表达.结论 PC诱导的SE能明显上调海马ACT β A mRNA的表达,而NSE对之无明显上调作用;ACT βA mRNA表达的上调很可能是神经元对抗兴奋性损害的一种内源性保护效应.

    作者:余巨明;任惠民;蒋雨平 刊期: 2003年第04期

  • 上鼓室封闭和外侧壁重建技术在鼓室成形术中的应用

    作者: 刊期: 2003年第04期

  • 星点设计-效应面法优化苯甲酸利扎曲普坦片的处方

    目的星点设计-效应面优化法优化苯甲酸利扎曲普坦片的处方.方法以微晶纤维素的用量和交联聚维酮的用量为考察因素,崩解时间为指标,用线性方程和二次及三次多项式描述崩解时间和两个影响因素之间的数学关系,根据佳数学模型描绘效应面,选择佳处方,并进行预测分析.结果崩解时间与微晶纤维素的用量和交联聚维酮用量间的关系不能用线性方程描述,二次及三次多项式拟合,相关系数分别为0.992 4和0.998 5,具有较高的可信度.优选的佳条件为微晶纤维素的用量为3.0 g,交联聚维酮的用量为0.3 g.佳处方的崩解时间理论值与预测值差为-2.68%.结论所建立的模型预测性良好.

    作者:吴伟;阙俐;陈健;沈熊;夏红 刊期: 2003年第04期

复旦学报(医学版)杂志

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主管:中华人民共和国教育部

主办:复旦大学