学术投稿

胰岛素、胰高血糖素和地塞米松调节PEPCK启动子活性的体外研究

沈坤堂;秦新裕;张新;韩泽广

关键词:胰岛素, 磷酸烯醇式丙酮酸羧激酶, 基因调控, 基因治疗, 糖尿病
摘要:目的探讨胰岛素、胰高血糖素和地塞米松对PEPCK启动子活性的影响及其意义.方法将PEPCK启动子构建入表达载体pGL3-Basic,采用Lipofect脂质体转染法将携带PEPCK启动子的质粒pGL3-Basic-PEPCK转染至大鼠肝细胞株Hepal-6细胞,12 h后加入不同浓度的胰岛素、胰高血糖素和地塞米松,孵育48 h后分别检测其报告基因萤虫素酶的活性.结果生理水平的胰岛素可明显抑制PEPCK启动子的活性,与胰岛素的浓度正相关;地塞米松则上调PEPCK启动子的活性,而胰高血糖素对其活性无影响.结论 PEPCK启动子在肝细胞中受胰岛素的负调控、地塞米松的正调控,若用于调控胰岛素基因的表达,将使糖尿病的基因治疗更安全更可行.
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  • 兔分级脊髓损伤后运动诱发电位的变化

    目的了解不同程度脊髓损伤(spinal cord injury,SCI)与运动诱发电位(motor evoked potential,MEP)变化之间的关系以及MEP在判断运动预后功能中的作用.方法对21只兔采用改良Allen,打击法分别用60、120gcf gram×centimeter×force(gcf)冲量打击兔T10-11脊髓,建立不同程度SCI模型,并在伤前及伤后24 h连续记录兔双侧腓肠肌MEP,用Tarlow's评分衡量兔下肢运动神经功能.结果脊髓轻度打击伤时,兔MEP波幅明显降低,但恢复良好;中度打击伤时,MEP波幅的下降更明显,且不能完全恢复;重度打击伤时,MEP波均无法引出,至24 h也不能恢复MEP波形.结论 MEP可敏感而准确地反映脊髓损伤后中枢神经功能的损伤程度,可作为一种有效的监护脊髓功能的手段,并可作为判断运动神经功能预后的可靠指标.

    作者:吕飞舟;姜建元;张志玉;黄煌渊;顾玉东 刊期: 2003年第04期

  • 癫癎小鼠海马内活化素βA mRNA表达的变化

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    作者:余巨明;任惠民;蒋雨平 刊期: 2003年第04期

  • 病毒性心肌炎小鼠心肌组织中趋化因子表达谱的改变及其意义

    作者: 刊期: 2003年第04期

  • 胰岛素、胰高血糖素和地塞米松调节PEPCK启动子活性的体外研究

    目的探讨胰岛素、胰高血糖素和地塞米松对PEPCK启动子活性的影响及其意义.方法将PEPCK启动子构建入表达载体pGL3-Basic,采用Lipofect脂质体转染法将携带PEPCK启动子的质粒pGL3-Basic-PEPCK转染至大鼠肝细胞株Hepal-6细胞,12 h后加入不同浓度的胰岛素、胰高血糖素和地塞米松,孵育48 h后分别检测其报告基因萤虫素酶的活性.结果生理水平的胰岛素可明显抑制PEPCK启动子的活性,与胰岛素的浓度正相关;地塞米松则上调PEPCK启动子的活性,而胰高血糖素对其活性无影响.结论 PEPCK启动子在肝细胞中受胰岛素的负调控、地塞米松的正调控,若用于调控胰岛素基因的表达,将使糖尿病的基因治疗更安全更可行.

    作者:沈坤堂;秦新裕;张新;韩泽广 刊期: 2003年第04期

  • 儿童口腔黏膜细胞内Ca2+含量与患龋状况的关系

    目的探讨儿童口腔黏膜细胞内Ca2+含量与儿童患龋状况的关系.方法将46名3~5岁儿童根据龋蚀指数分为两组:龋病高危组(25例)、无龋组(21例).刮取儿童口腔黏膜脱落细胞,Fluo-3染色,用激光扫描共聚焦显微镜检测细胞内Ca2+的荧光强度值,统计分析其与龋患程度的关系.结果高危组儿童口腔黏膜细胞内Ca2+的荧光强度低于无龋组,两组间差异有高度统计学意义;不同性别间细胞内Ca2+的荧光强度的差异无统计学意义;高危组儿童口腔黏膜细胞内Ca2+的荧光强度与dft、CSI呈负相关关系.结论儿童口腔黏膜细胞内Ca2+的荧光强度与龋患程度具有一定的相关性,龋患程度重则细胞内Ca2+的荧光强度低.口腔黏膜细胞内Ca2+的荧光强度值或可作为预测儿童龋病易感性的一项参考指标.

    作者:吉雅丽;石四箴 刊期: 2003年第04期

  • 糖尿病和非糖尿病患者尿路感染的比较

    目的探讨糖尿病患者的尿路感染特点.方法选择179例住院的尿病原学阳性的尿感患者.据有无糖尿病分成两组,对其临床资料、病原体的分布及两种主要病原菌大肠埃希菌和肠球菌的药敏结果进行对照.结果糖尿病患者无症状菌尿的发生率较高,对治疗的反应性较差,并且易于发生多重致病菌的感染,在医院感染中真菌的感染机会较多.在对各种抗生素的耐药方面,两组患者差异无显著意义.结论要重视糖尿病患者尿病原体的培养,治疗过程中可能需要抗生素的联合运用和抗真菌药物的使用.

    作者:钟一红;丁小强;邹静怀;胡必杰;徐少伟 刊期: 2003年第04期

  • 肺栓塞的影像诊断和介入治疗

    静脉血栓栓塞性疾病(venous thromboembolic disease,VTD)包括深静脉血栓形成(deep vein thrombosis,DVT)和肺动脉栓塞(pulmonary embolism,PE).肺通气/灌注(V/Q)扫描证实:约40%的DVT病人合并无症状的肺动脉栓塞[1].

    作者:李文涛;王建华 刊期: 2003年第04期

  • 反义转化生长因子βⅠ型受体表达质粒对实验性肝纤维化的影响

    作者: 刊期: 2003年第04期

  • 星点设计-效应面法优化苯甲酸利扎曲普坦片的处方

    目的星点设计-效应面优化法优化苯甲酸利扎曲普坦片的处方.方法以微晶纤维素的用量和交联聚维酮的用量为考察因素,崩解时间为指标,用线性方程和二次及三次多项式描述崩解时间和两个影响因素之间的数学关系,根据佳数学模型描绘效应面,选择佳处方,并进行预测分析.结果崩解时间与微晶纤维素的用量和交联聚维酮用量间的关系不能用线性方程描述,二次及三次多项式拟合,相关系数分别为0.992 4和0.998 5,具有较高的可信度.优选的佳条件为微晶纤维素的用量为3.0 g,交联聚维酮的用量为0.3 g.佳处方的崩解时间理论值与预测值差为-2.68%.结论所建立的模型预测性良好.

    作者:吴伟;阙俐;陈健;沈熊;夏红 刊期: 2003年第04期

  • 抗PSMA膜外段单克隆抗体的制备及其初步应用

    目的制备抗前列腺特异性膜抗原(PSMA)膜外段的单克隆抗体.方法原核表达含有PSMA膜外段多肽的融合蛋白,免疫雌性Balb/c小鼠后取效价较高的小鼠行小鼠脾细胞与SP2/0细胞融合,以酶联免疫吸附实验(ELISA)、免疫细胞化学、免疫组织化学法筛选、鉴定分泌特异性抗PSMA膜外段的单克隆杂交瘤细胞株.结果经过ELISA初筛得到55个阳性杂交瘤细胞株,其中8株经免疫组化证实为可用于前列腺癌石蜡包埋组织切片的免疫组化染色.结论获得了8株可持续分泌抗PSMA膜外段单克隆抗体的杂交瘤细胞株,产生的单抗以后可用于前列腺癌的诊断,并为前列腺癌的免疫治疗奠定了基础.

    作者:任加强;郑莉;陈琦;李华;张敏;张膺宇;张秀荣;朱虹光 刊期: 2003年第04期

  • 禁欲时间对男性精液质量的影响

    目的了解不同禁欲时间的男性精液质量状况,为临床治疗不育提供参考.方法对来自全国7个省市562名健康男性的精液质量进行分析.结果随着禁欲时间的延长,精液量、精子密度、精子总数都有所增加,差异有统计学意义(P<0.05).结论精子数目过少的男性,禁欲时间可以稍长,但不宜超过7 d.精子活力差而精子数量足够的男性,则禁欲时间可以稍短,3 d左右即可.

    作者:李文英;武俊青;高尔生;杨秋英;陶建国;陈锡宽 刊期: 2003年第04期

  • 3H-脱氧葡萄糖掺入判断高能X线照射A549肺腺癌多细胞肿瘤球体的疗效

    目的用3H-脱氧葡萄糖(3H-DG)掺入判断6MV X线照射A549肺腺癌多细胞肿瘤球体(MTS)的疗效.方法 MTS分别作低剂量分割和单次照射,中等剂量单次照射.MTS消化成单个细胞后用流式细胞仪检测细胞周期和凋亡比率.96孔盘每孔1个MTS,加37 kBq3H-DG后掺入60 min,吸出MTS抽滤后测量β计数.结果 2~8 Gy低剂量照射后未见明显细胞周期阻滞和凋亡,分割照射组MTS的摄取减低,4.84 Gy单次照射后的摄取明显高于其他各组(P<0.05);15~30 Gy照射后,细胞G2-M期阻滞百分率增加,各照射组3H-DG摄取均小于对照组(P<0.05),随照射剂量递增,MTS摄取3H-DG的能力降低;15 Gy照射后第10天有活细胞增殖,25或30 Gy照射后第40天有活细胞增殖.结论用3H-DG可以监测高能X线照射A549肺腺癌MTS的疗效,不同剂量照射后球体细胞的再增殖时间对于设计放疗方案和安排18F-FDG显像时间有指导作用.

    作者:史德刚;黄钢;苗积生;林祥通;贺晓东;苏斌 刊期: 2003年第04期

  • 高脂血症对血浆t-PA和PAI-1活性的影响

    目的探讨高脂血症患者的纤溶系统的变化.方法选取正常人及高脂血症者,测定其血脂、血浆t-PA和PAI-1活性.结果高脂血症组比正常人血浆tPA活性下降,而PAI-1的活性有升高;在TG及LDL-C升高者,其血浆t-PA活性比正常人血浆t-PA活性降低,而血浆PAI-1活性比正常人升高;单纯TC升高者血浆PAI-1活性接近正常人组,而血浆t-PA活性比正常人组明显降低.结论高脂血症对纤溶系统有一定的影响,其中甘油三酯和LDL-C对纤溶系统的影响更明显,而胆固醇对纤溶系统也有一定的影响.

    作者:王蔚;高鸿祥;童步高;葛均波;韩琴琴 刊期: 2003年第04期

  • 血管内皮生长因子在乳腺良恶性疾病患者血清中的表达

    目的了解乳腺良恶性疾病患者术前血清中的血管内皮生长因子(VEGF)与各项临床和病理特征之间的关系,探讨其在乳腺癌诊断中的意义.方法选择乳腺癌患者101例,乳腺良性病变患者57例.采用酶联免疫吸附法测定这些患者术前血清中的VEGF,另选40例健康女性作对照.结果对照组的VEGF中位数为70.52pg/mL,良性组为62.35 pg/mL,两组间差异无统计学意义(P=0.227).乳腺癌组的VEGF为201.43pg/mL,高于对照及良性疾病组(P=0.003和P=0.001).乳腺癌中,浸润性导管癌的VEGF为251.1pg/mL,而浸润性小叶癌的VEGF为72.67pg/mL,两组间差异具有统计学意义(P=0.045).原发性乳腺癌患者血清中的VEGF随着TNM分期的增加而升高,VEGF与患者是否绝经、肿块的大小、激素受体的状态、腋淋巴结转移与否以及肿瘤的分化无关.以对照组的95%可信限的上限203.45pg/mL作为临界值,VEGF在乳腺癌组的阳性率为29.70%.本实验中,血清VEGF诊断乳腺癌的敏感度为29.70%,特异度为98.25%.结论随着TNM分期的增加,乳腺癌患者血清中的VEGF逐渐上升.浸润性导管癌患者血清中的VEGF比浸润性小叶癌患者的明显增高.血清中的VEGF在早期乳腺癌中阳性率较低,对于早期乳腺癌的诊断意义不大.

    作者:朱玮;秦新裕;陈君雪 刊期: 2003年第04期

  • 颈椎侧块钢板螺钉系统的应用进展

    棘突间钢丝是经典的颈椎后路固定技术,但对于多节段骨折、合并棘突骨折、椎板骨折、颈椎后伸和旋转不稳定等损伤的疗效不佳[1].颈椎侧块钢板螺钉由Roy-Camille等在1970年首先报告[2],应用于治疗颈椎骨折脱位病人,逐渐成为治疗颈椎疾病的一种内固定手段[3~5].

    作者:魏亦兵;顾玉东;周建伟 刊期: 2003年第04期

  • 显微外科技术在大鼠肾移植模型中的应用

    大鼠是目前器官移植实验中常用的实验动物.自20世纪60年代以来,大鼠异体肾移植模型建造技术不断改进.作者结合本研究所长期肾脏移植经验与手外科研究所显微外科技术优势,进行了50例大鼠异体肾脏移植训练,获得较好的效果.

    作者:赵鸿;王翔;丁强;张元芳 刊期: 2003年第04期

  • 血液稀释结合控制性降压对肺血管外肺水的影响

    目的研究急性等容量血液稀释结合控制性降压对血容量、心脏前负荷、肺血管外肺水和血浆胶体渗透压的影响.方法 ASAⅠ~Ⅱ级的髋关节手术病人24例,随机均分为组Ⅰ(对照组)和组Ⅱ(降压组).两组均采用硬膜外阻滞复合全身麻醉.组Ⅱ术前进行等容血液稀释,术中施行控制性降压,并进行自体血回输.术中测定静脉血细胞比容(Hct)和中心静脉压(CVP),经股动脉放置PiCCO(PV2014L13,Pulson Medical Systems)热稀释导管,监测动脉压(BP)、心脏指数(CI)、每搏心排量(SV)、外周阻力(SVR)、心脏舒张末期容量(GEDV)、胸内血容量(ITBV)和血管外肺水容积量(EVLW).结果组Ⅰ病人平均输库血量和出血量明显高于组Ⅱ;两组病人的Hct分别由基础值(42±2.3)%和(43±2.5)%降为(32±2.8)%和(39±3.2)%,差异有显著意义;其余指标差异无显著性.结论 6%H-ES(200/0.5)扩容效果持久、稳定;血液稀释结合控制性降压及自体血回输既保持了血容量和心脏前负荷,同时不增加血管外肺水,另外可以明显减少术中出血;血液稀释后Hct仍大大超过低安全水平线,具有很高的安全性.

    作者:仓静;马琦;薛张纲;蒋豪 刊期: 2003年第04期

  • 乳牙牙釉质钙含量、分布与患龋状况的关系

    目的研究乳牙牙釉质中钙元素的含量及分布,探讨其与患龋状况的关系.方法运用扫描电镜和能谱仪测定38颗正常的下颌乳中切牙横剖面不同部位、不同深度的牙釉质钙元素含量,并以标本所在个体的龋患状况分组,进行统计学分析.结果牙釉质外层钙含量大于中层、内层有高度统计学意义.牙釉质钙含量均值在无龋组、患龋低危组、高危组间的差异无统计学意义.有龋组牙釉质的近中侧、唇侧钙含量值与dft呈低度负相关关系.正常乳牙牙釉质中钙的分布呈非均质状态,由外至内其含量呈依次降低趋势;正常下颌乳中切牙的牙釉质钙含量值不能很好地反映个体的龋患状况.结论在宿主因素方面,牙釉质钙含量的差异可能不是龋发生的主要因素.

    作者:赖红;石四箴 刊期: 2003年第04期

  • 用Chelex-100快速提取微量血痕中的DNA

    目的观察用Chelex-100从微量血痕中提取DNA的效果.方法 40份血痕纱布,取血痕3 mm×3mm置于1.5 mL离心管中,采用5%Chelex-100加煮沸法,提取血痕纱布中的DNA.提取液经过紫外分光光法测定,测其A260/280的比值,计算提取液DNA的纯度和浓度;DNA提取液经微型琼脂糖凝胶电泳,检测其DNA电泳带.结果 Chelex-100能快速在1 h之内提取微量血痕中的DNA,其提取液DNA纯度:27 5%样品纯度A260/280比值大于1.6,72.5%样品纯度比值在1.08~1.54之间;提取液DNA浓度:80%样品小于100μg/mL,20%样品在100~166 μg/mL之间.微型琼脂糖凝胶电泳未观察到DNA条带.结论用Chelex-100法有助于快速提取微量血痕中的DNA.

    作者:周月琴;朱伟;刘志萍;吴文庆 刊期: 2003年第04期

  • PAI-2的两个突变体对TNF-α诱导细胞凋亡的抗性

    目的研究纤溶酶原激活剂抑制物2型(PAI-2)的两种不同突变体抵抗肿瘤坏死因子-α(TNF-α)诱导Hela细胞凋亡的活性差异,探讨PAI-2CD螺旋间区的空间构象对其抗凋亡功能的影响.方法分别构建突变体PAI-2D和PAI-2M真核表达质粒.转染Hela细胞,RT-PCR鉴定,筛选出能稳定表达PAI-2D和PAI-2M的阳性细胞株.用MTT法检测PAI-2的这两个突变体抗凋亡的活性,并利用计算机同源模建,比较PAI-2的这两个突变体空间构象的变化.结果突变体PAI-2M能抑制TNF-α诱导的Hela细胞凋亡,而PAI-2D则不能.PAI-2M较好地保持了野生型PAI-2的空间构象,而PAI-2DCD螺旋间区的空间构象则发生了较大的变化.结论 PAI-2抑制TNF-α诱导的细胞凋亡依赖于其CD螺旋间区空间构象的完整性,而与PENF结构域(PENF73-76)无关.

    作者:张宇清;侯敏;王霞;孙兴会;李平;朱运松 刊期: 2003年第04期

复旦学报(医学版)杂志

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