凝结芽孢杆菌PCR快速检测方法研究

刘云国；刘帅帅；周福通；杨大伟；王建广

关键词：凝结芽孢杆菌, PCR, 快速检测

摘要：目的:建立一种特异、灵敏的凝结芽孢杆菌快速检测方法.方法:根据凝结芽孢杆菌寡聚-1,6-葡萄糖苷酶基因设计一对PCR引物,进行了引物的特异性和灵敏度试验.结果:PCR得到了较好的特异性扩增,其它干扰菌都无扩增,灵敏度达5×103 cfu/ml.结论:该方法能够实现凝结芽孢杆菌的快速检测,具有灵敏度高、特异性好的特点.

中国卫生检验杂志相关文献

环境胁迫因子对大肠杆菌的影响

大肠杆菌(Escherichia coli,E. coli)存在于人和动物的肠道中,是肠道正常菌群之一,属于条件致病菌.其中一些特殊的血清型(肠致病性大肠杆菌、肠产毒性大肠杆菌、肠侵袭性大肠杆菌、肠聚集性大肠杆菌和肠出血性大肠杆菌)具有致病性,可引起人类感染性腹泻.

作者：罗中捷；周卓晟；郝春慧；刘红艳；黄正刊期： 2010年第04期
肝内胆管癌患者血清蛋白指纹图谱的检测及其意义

目的:用表面增强激光解析离子化飞行时间质谱(SELDI-TOF-MS)分析肝内胆管癌和健康者血清蛋白指纹图谱的变化,建立能鉴别肝内胆管癌和健康者血清标志物的诊断模型.方法:收集33例肝内胆管癌和31例健康者的血清,用SELDI-TOF-MS及配套H50(疏水芯片)蛋白质芯片检测蛋白指纹的表达.用Biomarker Patterns Software分析软件进行数据处理,建立区分肝内胆管癌和健康者的蛋白质指纹图谱表达模型.结果:在分子量2000～20000范围内,共检测到127个有差异的蛋白峰,其中10个差异有显著性(P<0.01),建立了由2个差异蛋白组成的肝内胆管癌诊断模型,其诊断灵敏度为96.9%(32/33),特异性为96.7(30/31).结论:用SELDI-TOF-MS技术初步建立的区分肝内胆管癌和健康者的蛋白指纹表达模型可以区分肝内胆管癌和健康者,可能为肝内胆管癌的诊断提供新的手段.

作者：俞颖；谭潘丽；钱丽丽刊期： 2010年第04期
杭州市三类面制品中铝含量的调查分析

目的:用铬天青S分光光度法对杭州市内的三类面制品中铝含量进行调查分析.方法:对杭州市内的三类面制品进行采样,用干灰化法处理样品,测定其铝含量.结果:检测的三类面制品共88件,铝含量的合格率仅为20.4%(18/88).其中油条样品为58件,铝含量的合格率为3.4%(2/58);馒头样品为21件,铝含量的合格率为57.1%(12/21);发糕样品为9件,铝含量的合格率为44.4%(4/9).结论:样品经干灰化法处理后,无需考虑pH值影响,用铬天青S比色法测定,结果准确,杭州市油条、馒头、发糕这三类面制品含铝量超标严重,需要引起有关部门注意.

作者：黄闽燕；钟小伶；沈利明刊期： 2010年第04期
沈阳市2005～2009年度冬春流感样病例病原学监测情况分析

目的:分析沈阳市流感病毒的流行特点及其优势株的情况.方法:采集2005年～2009年冬春流行季哨点医院的流感样病例咽拭子,以MDCK细胞进行流感病毒的分离,根据CPE和HA方法鉴定流感病毒的存在,阳性毒株以HI和RT-PCR方法进行分型鉴定.结果:2005～2009年四个监测周期共采集流感样病例咽拭子样本783份,分离到流感病毒161株,总分离率为20.6%.其中A1型(H1N1)62株(38.5%)、A3型(H3N2)71株(44.1%)、B型(Yamagata系和victoria系)28株(17.4%).3种型别的毒株在5～岁和15～岁年龄组分离率高(34.9%,31.7%),但A3亚型在0～组所占比例高(46.5%).11月～次年1月为我市流感流行的冬高峰.结论:近年沈阳地区同时存在3种型别流感毒株流行,每年优势株明显不同,前一年监测周期的优势株在下一个周期中可被其他型别抑制甚至取代,2009～2010年监测周期中应密切关注A3(H3N2)亚型和SWH1N1亚型流感毒株的活动情况,加强学校人群的监测,及时发现流感病毒新变异株.

作者：王冰；陈建平；王迎春；刘建敏；刘娜；侯元；李继耀；李欣刊期： 2010年第04期
Leifson细菌鞭毛染色法的改良

目的:探索对Leifson细菌鞭毛染色方法的改进.方法:对染液、菌液、涂片、固定、染色、冲洗等操作进行改进.结果:菌体呈深红色,鞭毛呈浅红色,镜检涂片视野背景清晰,染色效果好.结论:改进方法简便、操作性好、实用性强.

作者：万滋衡；梁莹刊期： 2010年第04期
乙型肝炎患者病毒核酸载量与乙型肝炎病毒外膜大蛋白含量相关性的研究

目的:探讨乙型肝炎患者病毒核酸载量与血清乙型肝炎病毒外膜大蛋白(HBV-LP)含量的关系.方法:采用酶联免疫吸附试验(ELISA)和实时荧光定量PCR法分别检测307例乙型肝炎患者血清的HBV-LP、HBV-M和HBVDNA,并进行相关性分析.结果:307例乙型肝炎患者血清中HBV-LP含量与HBV DNA拷贝数变化相一致,两者呈正相关(r=0.943);在131份HBeAg阳性血清中,HBV DNA与HBV-LP的阳性率分别为95.42%和93.89%,两者差异无显著性(P>0.05);在176份HBeAg阴性血清中,HBV DNA与HBV-LP的阳性率分别为46.02%和56.25%,两者差异无显著性(P>0.05).结论:血清HBV-LP水平能反映HBV感染者体内HBV复制程度,其灵敏度高于HBeAg,可作为判断HBV复制新的血清学指标.

作者：李小永；温怀凯；陶洪群；张信良；余坚刊期： 2010年第04期
稳健统计技术在消毒实验室质量控制评估中的应用

目的:采用稳健统计技术评价全国消毒实验室检测质量.方法:选择碘伏消毒剂作为质控样品,以铜绿假单胞菌ATCCl5442为试验菌株,按<消毒技术规范>(2002版)中载体定量杀菌试验的要求,通过随机分组对全国31个省级以上疾病预防控制中心消毒实验室进行了盲样比对,并应用稳健统计技术对各实验室检测结果进行评估.结果:检测结果全部为满意的实验室20个,占64.52%;全部检测数据384个,满意结果353个,占总数的比例为91.93%.结论:部分消毒实验室检测工作存在质量控制缺陷,稳健统计技术可用于消毒实验室间质量控制评估.

作者：班海群；赵斌秀；马玲；李涛；李新武刊期： 2010年第04期
韦太夫雷登沙门菌引起的一起食源性疾病暴发

2009年2月9日下午元江县洼垤乡洼垤村张某家因乔迁新居在家自办宴席,宴请宾客,因用卤鹌鹑蛋、烤鸭等食物招待宾客后,出现发热、恶心、呕吐、腹泻等症状.

作者：周燕华；杜春华；潘海燕；张玫；黄江梅刊期： 2010年第04期
氢化物发生-原子荧光光度法测定指甲中的砷

砷中毒严重危害我国居民健康和阻碍经济社会的发展,由于该病影响因素复杂、毒作用机制不明、无早期敏感特异的诊断和监测指标以及理想的治疗药物等,使其危害难以得到彻底控制.

作者：陈兴利刊期： 2010年第04期
2006～2008年长春市保健食品质量监督抽检质量分析及对策建议

目的:了解长春市保健食品卫生安全情况,探讨如何更好地加强保健食品监管.方法:通过每年一次对长春市保健食品的市场抽查,依据国家标准对保健食品进行质量评价.结果:2006年～2008年抽检的91份样品中,标签标注错误占29.7%;未取得保健食品批准文号,伪造或盗用其他标准文号的占23.1%;重金属砷和铅超标占4.4%;所抽检的41份营养补充剂中功效成分不达标占31.7%;所抽检的50份减肥类保健食品中违法添加药物成分占66.0%.结论:长春市保健食品质量存在安全隐患,应引起相关部门的高度重视,加大监管力度.

作者：董巧红；石金娥；李媛媛；杨波刊期： 2010年第04期
2007～2009年丽水市外来婚嫁女艾滋病病毒感染监测

目的:了解丽水市外来婚嫁女艾滋病病毒感染情况,为全市艾滋病防治工作提供决策依据.方法:采用整群抽样方法对丽水市9个县的9560名外来婚嫁女检测艾滋病病毒抗体,2759名外来婚嫁女进行问卷调查,用EPIinfo软件对调查结果进行统计分析.结果:15名外来婚嫁女艾滋病病毒抗体确证阳性,所调查的外来婚嫁女9项艾滋病知识知晓率为48.4%,整体艾滋病知晓率有待提高,对艾滋病的传播途径了解不够.结论:外来婚嫁女艾滋病病毒抗体阳性率达0.15%,对艾滋病虽有一定的认识,但艾滋病知识知晓水平较低,应加强婚前检查宣传,提高居民艾滋病防护意识.

作者：梅少林；雷永良；刘晓红刊期： 2010年第04期
锦州市2007年～2009年季节性流感监测结果分析

目的:通过季节性流感监测,对流感病毒进行抗原性和基因特性分析,及时发现变异病毒和新型毒株,预测流感流行趋势.方法:采用PCR方法进行流感病毒检测,采用MDCK细胞培养法分离流感病毒.结果:从锦州市2007年～2009年季节性流感监测结果来看,2007年和2008年流感毒株分离率较低,分别为6%和8.2%,而2009年流感毒株分离率相对较高,为11.36%.结论:锦州市2007年和2008年的流感流行主要在秋冬季节,主要以甲型H3和BY型为主;2009年全年均有流感毒株出现,主要以甲型为主,并在季节性流感监测中检测出引起世界大流行的新型毒株甲型H1N1型.

作者：郭芳刊期： 2010年第04期
驻京部队大米、面粉卫生质量调查

为了解驻京部队大米及面粉的卫生安全问题,加强饮食卫生质量监督,我们于2009年4～5月对驻京部队84个食堂和招待餐厅的大米及面粉进行了调查与检测,现将调查检测结果报告如下.

作者：王淑丽；陈谷；李文胜；银书军刊期： 2010年第04期
PCR-SSP法与血清学法在HLA-B27检测中的应用与比较

目的:用聚合酶链反应(PCR)和血清学方法检测HLA-B27,并进行比较.方法:对120例来我院进行HLA-B27检测的可疑强直性脊柱炎患者的样本采用PCR技术和血清学方法同时检测,并对二者试验结果进行比较.结果:43例血清学结果阳性者中经PCR-SSP法确认有41例阳性.8例血清学结果可疑经PCR-SSP法确认有6例阳性.69例血清学结果阴性者中经PCR-SSP法确认有67例阴性.结论:PCR-SSP法与血清学方法比较,具有特异性强、快速、简捷、准确性高等优点,适宜大批量操作,对血清学方法有疑问的结果起到确定作用.

作者：刘元明；郝钦芳；张丽萍；段萃娟；杨晓莉刊期： 2010年第04期
171对不育症夫妇支原体检测结果分析

目的:探讨支原体在夫妻间通过性接触的传染性、致病性以及对男性生精功能的影响.方法:对不育症的夫妇双方进行阴道分泌物检验、精液分析及支原体培养.结果:双方均检出支原体24.6%,均未检出40.3%,男或女单方检出35.1%;男女双方支原体阳性组与阴性组的精液WBC异常、白带清洁度异常检出率无统计学意义(P>0.05);支原体阳性组与阴性组的各项精液分析指标无显著性差异(P>0.05).结论:支原体在夫妻间通过性接触的传染性较低,与生殖或泌尿道感染无相关性,通常不引起精液质量的降低.

作者：陶红；朱卫中刊期： 2010年第04期
直接测定虾类硝基呋喃类残留量方法的探讨

目的:探讨用ELISA方法直接测定虾类中硝基呋喃类代谢物残留量中呋喃唑酮代谢物AOZ.方法:样品直接用ELISA检测试剂直接测定虾类中硝基呋喃类代谢物残留量中呋喃唑酮(Furazolidone)代谢物AOZ.结果:本方法与高效液相色谱法比较,结果差异无显著性(P>0.05);回收率在80.0%～90.0%之间,相对标准偏差13.6%.结论:用ELISA检测试剂直接测定虾类中硝基呋喃类代谢物残留量中呋喃唑酮代谢物AOZ,具有准确、简便和快速的优点.

作者：潘心红；罗晓燕；李军涛；李静刊期： 2010年第04期
云南境外禽流感H5N1亚型病毒神经氨酸酶基因进化及分子结构特征分析

目的:禽流感病毒神经氨酸酶(NA)是病毒粒子重要表面抗原之一,其抗原性差异决定病毒神经氨酸酶亚型(N1-N9)的划分.NA介导病毒对敏感细胞的侵染及协助子代病毒粒子的成熟和释放,与病毒的宿主嗜性及毒力有关.方法:对2003～2009年期间采集自云南境外家禽的H5N1亚型阳性样品中病毒NA基因进行测序,并与国内外已知代表毒株进行序列比对及系统发育分析.认识云南境外禽流感H5N1亚型病毒神经氨酸酶(NA)基因分子结构特征.结果:21份代表性病毒样品NA基因核苷酸和氨基酸序列同源性介于94.3%～99.3%、93.1%～99.3%.系统发育分析表明可划分为6个不同进化(亚)分支(1、7、9、2.4、2.3.2、2.3.4).其中进化亚分支2.3.4毒株已成为当前云南境外流行的优势毒株;所有云南境外毒株NA蛋白的49-68位氨基酸均存在缺失.结论:糖基化位点存在特有变异;云南境外毒株对Oseltamivir(达菲)类抗病毒药物可能无耐药性.

作者：董波；张文东；宋建领；赵焕云；叶丛华；田建国；吕粤；岳亮；邱薇；冯子良；张思东；苑述友；范泉水；张应国；张富强刊期： 2010年第04期
利用MPN-PCR法对国内8个沿海城市零售贝类中副溶血弧菌污染情况研究

目的:对国内8个沿海城市大型水产批发市场内零售贝类产品中的副溶血弧菌状况进行定量监测,为进一步的风险评估提供科学数据.方法:利用针对tlh、tdh基因的PCR方法进行副溶血弧菌的快速检测,根据阳性结果进行MPN判定.结果:525份样品中有329份样品中的副溶血弧菌呈tlh阳性,只有一个青岛市九月份缢蛏样品中的副溶血性弧菌同时具备tlh、tdh基因.总的副溶血弧菌(tlh阳性)检出率为62.67%,阳性样品的平均浓度为244.23 MPN/g.贝类样品中以缢蛏中副溶血弧菌的检出率与平均浓度高分别为80%(48/60)和481.11 MPN/g;夏季(6月至9月)检出率及副溶血弧菌浓度高,冬季(11月至次年2月)低.结论:对所得数据用SPSS软件进行分析,结果显示副溶血弧菌在不同城市贝类样品中的分布不存在显著差异(χ2=11.107,P>0.05);除缢蛏外,其它贝类中副溶血弧菌的检出率与平均浓度不存在显著差异(P>0.05);副溶血弧菌在贝类样品中的分布呈现季节性差异(χ2=24.207,P<0.05).

作者：曹慧慧；赵峰；于维森；周德庆刊期： 2010年第04期
白细胞内HBV DNA快速荧光PCR方法的建立及应用

目的:采用细胞核酸释放剂(Cell nucleic releaser,CNR),建立在同一PCR扩增管内同时进行细胞核酸提取和荧光PCR扩增的白细胞HBV DNA检测技术.方法:白细胞的处理:新鲜抗凝(EI)TA-Na2)全血0.2 ml,破碎红细胞,用生理盐水洗涤四次,弃净残液,加20 μl白细胞温化剂制备成白细胞悬液.白细胞HBV DNA核酸提取与扩增:取3 μl的CNR和等量的白细胞悬液在PCR扩增管底轻轻吹打混匀,覆盖30 μl无菌石蜡油,37℃,60 s→99℃,7 min→37℃,30 s,直接加入已配制荧光PCR反应液,3000 g/min离心1 min,进行实时荧光定量PCR扩增.采用QiaGen的核酸提取方法作为对照.选择144例血清HBV DNA检测结果大于104IU/ml和131例血清无HBV DNA检出的乙肝患者标本为研究对象,20例非乙肝患者全白细胞作为特异性研究标本.结果:采用融红细胞的方法分离白细胞和CNR分离核酸,无白细胞和核酸丢失之嫌,可对全白细胞内的HBV DNA进行准确定量,该方法具有较好的灵敏性和重复性.与QiaGen核酸提取方法相关性良好(r=0.96),144例血清HBV DNA大于104IU/ml的乙肝患者其白细胞全部大于100 IU/ml,131例血清HBV DNA阴性的乙肝患者有56例(42.7%)白细胞HBV DNA大于100 IU/ml.结论:基于CNR核酸提取方法的全白细胞HBV DNA定量技术,操作简单、且具有较好的敏感性和重复性,可作为研究白细胞内HBV DNA临床意义的检测手段.

作者：李永利；廖华芳；王雪飞；刘立明；王海滨刊期： 2010年第04期
麻痹性贝类毒素细胞检测法的建立

目的:麻痹性贝类毒素的N-2a细胞检测方法的建立并确定可能的检测限值.方法:使用不同浓度毒素标准品结合藜芦定和乌本苷共同作用对数生长期的N-2a细胞,通过cck-8试剂盒检测细胞毒性,确立细胞检测方法的检出限及比较各毒素作用大小,并同步利用小鼠生物法进行验证,通过精确记录小鼠死亡时间,比较各毒素的毒作用大小.结果:麻痹性贝类毒素能明显降低藜芦定和乌本苷的细胞毒性,且具有剂量-反应关系,通过比较得出毒素各成分毒性大小为:neoSTX>STX>dcSTX>GTX1,4>GTX2,3>dcGTX2,3;小鼠生物法的毒作用平均死亡时间为:neoSTX组(6.5 min),GTX1,4组(8.0 min),STX组(9.0 min),dcSTX组(15 min);GTX2,3组和deGTX2,3组未见动物死亡.结论:细胞检测与小鼠生物法具有较好的一致性,表明所建立的细胞检测法可行,且细胞毒性试验检测方法具有较高的灵敏度,低检出限值可达到10-9 mol/L剂量水平,其中浓度在10-6～10-8 mol/L间具有较好的线性.

作者：黄海燕；付英斌；赵昆山；袁建辉；周丽；刘建军刊期： 2010年第04期