白细胞内HBV DNA快速荧光PCR方法的建立及应用

李永利；廖华芳；王雪飞；刘立明；王海滨

关键词：实时荧光PCR, 白细胞, 核酸释放剂, 乙肝病毒核酸

摘要：目的:采用细胞核酸释放剂(Cell nucleic releaser,CNR),建立在同一PCR扩增管内同时进行细胞核酸提取和荧光PCR扩增的白细胞HBV DNA检测技术.方法:白细胞的处理:新鲜抗凝(EI)TA-Na2)全血0.2 ml,破碎红细胞,用生理盐水洗涤四次,弃净残液,加20 μl白细胞温化剂制备成白细胞悬液.白细胞HBV DNA核酸提取与扩增:取3 μl的CNR和等量的白细胞悬液在PCR扩增管底轻轻吹打混匀,覆盖30 μl无菌石蜡油,37℃,60 s→99℃,7 min→37℃,30 s,直接加入已配制荧光PCR反应液,3000 g/min离心1 min,进行实时荧光定量PCR扩增.采用QiaGen的核酸提取方法作为对照.选择144例血清HBV DNA检测结果大于104IU/ml和131例血清无HBV DNA检出的乙肝患者标本为研究对象,20例非乙肝患者全白细胞作为特异性研究标本.结果:采用融红细胞的方法分离白细胞和CNR分离核酸,无白细胞和核酸丢失之嫌,可对全白细胞内的HBV DNA进行准确定量,该方法具有较好的灵敏性和重复性.与QiaGen核酸提取方法相关性良好(r=0.96),144例血清HBV DNA大于104IU/ml的乙肝患者其白细胞全部大于100 IU/ml,131例血清HBV DNA阴性的乙肝患者有56例(42.7%)白细胞HBV DNA大于100 IU/ml.结论:基于CNR核酸提取方法的全白细胞HBV DNA定量技术,操作简单、且具有较好的敏感性和重复性,可作为研究白细胞内HBV DNA临床意义的检测手段.

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应用纸片法检测食品霉菌的研究

目的:建立一种简便快速的方法用于检测食品中的霉菌.方法:采用霉菌快速检测纸片法和国家标准霉菌检测方法对367份食品检样进行对照试验.结果:建立的霉菌快速检测纸片法能在3 d内完成检测,与国家标准方法检出率的总符合率为96.73%;合格率的总符合率为96.46%,在统计学上无显著性差异.结论:应用霉菌快速检测纸片检验能准确、快速反映食品中霉菌的实际污染数量.

作者：刘玉兰刊期： 2010年第04期
超声波萃取毛细管气相色谱法测定工作场所中的尼古丁

目的:用硅胶管采样,以超声波萃取为辅助,毛细管气相色谱法测定空气中尼古丁的含量.方法:用个体采样器采集尼古丁气体,用碱性乙酸乙酯洗脱硅胶管,色谱法定性定量,经FFAP通用柱分离、FID检测.结果:发现硅胶作吸附剂对尼古丁的吸附/脱附效率都很高,采样效率为100%,洗脱效率大于95%,样品稳定时间可达14 d.在1.00～500.0 ng/μl呈良好的线性关系,相关系数r大于0.999,检出限为0.2 ng/μl,每100 mg硅胶对尼古丁的吸附容量大于20 mg.结论:应用本法操作简便,实用性强,回收率高,重现性好,且所需时间较短,可用来批量测定工作场所中的痕量尼古丁.

作者：刘兰侠；杨龙彪；张燕；倪蓉刊期： 2010年第04期
西北地区葡萄酒国家监督抽查检测结果与分析

目的:了解我国西北地区葡萄酒产品质量状况,为完善葡萄酒行业的监管体系提供科学依据.方法:从2008年至2009年,共对西北3个省的葡萄酒产品质量状况进行国家监督抽查,按照<葡萄酒产品质量国家监督抽查实施规范>要求进行检验并评价分析.结果:连续两年的国家监督抽检促进了葡萄酒行业产品稳步提高,2008年葡萄酒产品质量的合格率为82.6%,2009年合格率上升至90.0%.不合格项目主要是甜味剂和酒精度.结论:葡萄酒产品质量同质化现象应引起重视,加强监管并保护有地方特色的葡萄酒品牌,推动我国葡萄酒行业发展.

作者：易新萍；许东滨；周文革刊期： 2010年第04期
石家庄市售国产配方奶粉和婴幼儿食品中阪崎肠杆菌污染调查

目的:了解石家庄市场上国产配方奶粉及婴幼儿食品中的阪崎肠杆菌污染状况.方法:参照GB/T4789.40-2008规定的阪崎肠杆菌的检验方法进行,同时利用16s rDNA基因序列对可疑菌进行了鉴定,并对检测出的阪崎肠杆菌进行药敏检测.结果:在122份样品中,共检出18株阪崎肠杆菌,且18株菌均对常用抗生素敏感.结论:配方奶粉及婴幼儿食品中阪崎肠杆菌污染问题严重,存在严重潜在危险,应引起有关部门的重视.

作者：李秀娟；李丽婕；高伟利；田会方；宋红梅；徐保红刊期： 2010年第04期
乙型肝炎患者病毒核酸载量与乙型肝炎病毒外膜大蛋白含量相关性的研究

目的:探讨乙型肝炎患者病毒核酸载量与血清乙型肝炎病毒外膜大蛋白(HBV-LP)含量的关系.方法:采用酶联免疫吸附试验(ELISA)和实时荧光定量PCR法分别检测307例乙型肝炎患者血清的HBV-LP、HBV-M和HBVDNA,并进行相关性分析.结果:307例乙型肝炎患者血清中HBV-LP含量与HBV DNA拷贝数变化相一致,两者呈正相关(r=0.943);在131份HBeAg阳性血清中,HBV DNA与HBV-LP的阳性率分别为95.42%和93.89%,两者差异无显著性(P>0.05);在176份HBeAg阴性血清中,HBV DNA与HBV-LP的阳性率分别为46.02%和56.25%,两者差异无显著性(P>0.05).结论:血清HBV-LP水平能反映HBV感染者体内HBV复制程度,其灵敏度高于HBeAg,可作为判断HBV复制新的血清学指标.

作者：李小永；温怀凯；陶洪群；张信良；余坚刊期： 2010年第04期
中国石蒜总生物碱提取工艺优化及其含量动态变化

目的:探讨超声提取中国石蒜(Lycoris chinensis)总生物碱的佳工艺条件,以及不同产地、不同部位和不同时期总生物碱含量的动态变化.方法:在单因素实验的基础上,采用正交实验优化中国石蒜总生物碱超声提取工艺,以石蒜碱为标准品,用比色法测定中国石蒜总生物碱含量.结果:料液比和乙醇浓度是影响中国石蒜总生物碱超声提取效果的主要因素;中国石蒜鳞茎总生物碱含量在开花期高,盛叶期含量低,但各个时期总碱含量没有显著性差异(P>0.05),其范围在5.2～5.6 mg/g之间;不同产地中国石蒜鳞茎总生物碱含量差异明显(P<0.05),琅琊山居群高,黄山居群低;中国石蒜果实的总生物碱含量高,达9.19 mg/g,其次是花序,叶片中含量低.结论:在超声工作频率为40 KHz时,中国石蒜总生物碱佳超声提取工艺为:提取温度60℃,乙醇浓度65%,料液比为1:20,提取时间为2 h.

作者：刘坤；周守标；张栋刊期： 2010年第04期
气相色谱法测定苹果中代森锰锌

目的:建立测定苹果中代森锰锌的气相色谱法.方法:代森锰锌在加热条件下,反应生成二硫化碳,用气相色谱进行测定.结果:线性范围为0.00～5.00 μg,加标回收率为93.8%～104.7%,相对标准偏差为3.9%.结论:方法简单、快速、结果准确可靠,适合苹果中代森锰锌的检测分析.

作者：田映刊期： 2010年第04期
紫外分光光度法测定保健食品中原花青素的研究

目的:建立保健食品中原花青素含量的紫外分光光度的测定方法.方法:葡萄原花青素能在热酸性条件下可醇解产生花色素,利用其还原性在铁盐的催化反应下产生特征性的红色,其显色灵敏而稳定,比色测定样品溶液在550 nm波长处的吸光度.结果:对照品原花青素的检测浓度在10.71～160.66 μg/ml范围内与吸光度呈良好的线性关系,r=0.9991,平均回收率为95.03%,RSD为1.67%.结论:紫外分光光度法灵敏、快速、准确、成本低,适用于保健食品中原花青素的测定.

作者：蔡晓；杨长晓刊期： 2010年第04期
稳健统计技术在消毒实验室质量控制评估中的应用

目的:采用稳健统计技术评价全国消毒实验室检测质量.方法:选择碘伏消毒剂作为质控样品,以铜绿假单胞菌ATCCl5442为试验菌株,按<消毒技术规范>(2002版)中载体定量杀菌试验的要求,通过随机分组对全国31个省级以上疾病预防控制中心消毒实验室进行了盲样比对,并应用稳健统计技术对各实验室检测结果进行评估.结果:检测结果全部为满意的实验室20个,占64.52%;全部检测数据384个,满意结果353个,占总数的比例为91.93%.结论:部分消毒实验室检测工作存在质量控制缺陷,稳健统计技术可用于消毒实验室间质量控制评估.

作者：班海群；赵斌秀；马玲；李涛；李新武刊期： 2010年第04期
公共场所中央空调系统军团菌污染环节的调查

目的:探索中央空调系统中各环节军团菌的污染情况和可能的污染环节.方法:对17家商场、车站、宾馆、办公楼、医院等公共场所中央空调系统的冷却塔水、冷凝水、生物膜、淤泥、冷却塔水中原虫、空调送风末端积尘六环节样品进行军团菌检测.结果:80份中央空调系统各环节样品,军团菌总检出率20%,共分离到16株嗜肺军团菌,血清型有Lp1、LP6和Lp9三种.冷却塔水检出率高52.9%,冷凝水检出率5.9%,生物膜检出率20.0%,淤泥检出率12.5%,冷却塔水中原虫检出率20%,空调送风末端积尘中均未检出嗜肺军团菌.88.9%冷却塔水每ml水样中军团数均小于100个.结论:中央空调系统的多个环节存在军团菌污染,受军团菌污染的各环节相互作用,如果不进行定期清洗消毒,将可能增大军团菌传播的危险性.

作者：胡元玮；徐卸佐；朱淑英；方琼楼刊期： 2010年第04期
韦太夫雷登沙门菌引起的一起食源性疾病暴发

2009年2月9日下午元江县洼垤乡洼垤村张某家因乔迁新居在家自办宴席,宴请宾客,因用卤鹌鹑蛋、烤鸭等食物招待宾客后,出现发热、恶心、呕吐、腹泻等症状.

作者：周燕华；杜春华；潘海燕；张玫；黄江梅刊期： 2010年第04期
胰岛素对多囊卵巢综合征患者雄激素产生的影响

目的:探讨胰岛素水平在多囊卵巢综合征(PCOS)患者血清中的变化及其对PCOS患者雄激素产生的影响.方法:用化学发光酶免疫分析法、放射免疫分析法对32例PCOS患者和30例正常对照(排卵正常,无怀孕妇女)血清中胰岛素(In)、血糖(Glu)、黄体生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)、催乳素(PRL)、雌二醇(E2)、睾酮(T)进行检测.结果:根据胰岛素抵抗指数(IR),将32例PCOS患者分成胰岛素抵抗组(PCOS-IR)和非胰岛素抵抗组(PCOS-NIR).PCOS-IR组血清中胰岛素水平高于PCOS-NIR组(P<0.05),且PCOS-IR组的胰岛素水平与睾酮呈正相关(r=0.87,P<0.05).结论:胰岛素对PCOS-IR患者雄激素的产生具有一定影响.

作者：王彩虹；丁鸿燕刊期： 2010年第04期
蛋白粉对小鼠免疫功能的调节作用

目的:研究蛋白粉对小鼠免疫功能的影响.方法:将蛋白粉按1.67～5.00 g/kgBW给小鼠灌胃30 d后,分别测定小鼠的迟发型变态反应、Con A诱导的小鼠淋巴细胞转化功能、血清溶血素、腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力、碳廓清能力及NK细胞活性.结果:蛋白粉可明显促进二硝基氟苯诱导的小鼠迟发型变态反应、显著提高小鼠血清溶血素水平、提高小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞的能力、增强小鼠NK细胞杀伤活性、增强小鼠碳廓清吞噬指数.结论:蛋白粉能从细胞免疫功能、体液免疫功能、单核-巨噬细胞功能及NK细胞活性方面促进正常小鼠的免疫功能.

作者：杨鸿武；王晓丹；赵翠霞；袁雪芬；谢韬刊期： 2010年第04期
有害残留物快速检测技术研究进展

随着我国人民生活水平和健康意识的不断提高,环境、食品、药品的安全,尤其是其有害残留物问题,日益成为社会各界的关注焦点.同时由于世界贸易一体化的不断深入,我国食品、农产品及中草药的出口不断增大,但与此同时遇到的出口障碍也不断增加,其中很重要的原因就是有害残留物含量超标问题.

作者：谢婷婷；戚爱棣；杨美华刊期： 2010年第04期
负化学源气质联用快速测定母乳中的十溴联苯醚

目的:本实验通过单独分离母乳中的十溴联苯醚(BDE209),建立稳定性同位素内标稀释负化学源气质联用(NCI-MS)快速测定十溴联苯醚(BDE209)的方法.方法:母乳样品冷冻干燥,经正己烷-二氯甲烷索氏提取过多层硅胶柱,净化分离,进样检测.结果:实验结果表明,相关系数r≥0.9999,仪器检出限为4.4 Pg,方法检出限为0.08 ng.在0.5～5000 μg/L浓度范围内,其平均回收率为61.2%～116%,相对标准偏差范围为4.9%～8.6%.结论:本方法快速、准确,具有较低的检出限,较好的回收率和精密度,符合分析测定的要求,可用于母乳样品的检测.

作者：张玉黔；代澎；胡海涛刊期： 2010年第04期
辣椒油中酸价测定方法的探讨分析

目的:本文运用不同前处理方法进行比较,解决国家标准方法[1]测定辣椒油中的酸价时,由于辣椒油中的色素存在而影响滴定终点的判断问题.方法:利用添加适量中性饱和食盐水及用活性碳吸附两种方法前处理后再按照国标法测定酸价,其结果与准确度和精密度都较高的自动电位滴定法相比较.结果:用添加中性饱和食盐水法和活性碳吸附法都可以清晰观察到滴定终点;辣椒油试样量在3～4 g,用添加中性饱和食盐水法与自动电位滴定法结果无统计学差异,结果准确;活性碳吸附法测定低浓度酸价的油脂相对偏差较大,高浓度的与自动电位滴定法无统计学差异.结论:对于深色油脂如辣椒油中的酸价首选自动电位滴定法,如没有自动电位滴定仪的基层单位,低浓度的可以用添加中性饱和食盐水方法,中、高浓度的可以用活性碳吸附法和添加中性饱和食盐水方法,两种方法都可以清晰地观察到滴定终点,结果精密度都较好,准确度较高.可以作为国标法中测定辣椒油中酸价的有效补充.

作者：李兰芳；栾玉明；潘翊；陈若虹刊期： 2010年第04期
从哨点流感样病例监测咽拭子中检出甲型H1N1病毒核酸

目的:进行流感病毒核酸检测以发现不同型别的流感患者,为临床治疗和预防控制提供依据.方法:哨点医院患者的咽拭子标本,先采用RT-PCR方法检测流感病毒核酸A、B及季节性H1、H3,A未分型的采用real-time RTPCR方法检测甲型H1N1病毒核酸.结果:从哨点医院的流感样病例14份咽拭子标本中的5份A未分型的标本中用real-time RT-PCR方法检测出甲型H1N1病毒核酸特异性扩增曲线.结论:检出甲型H1N1病毒核酸确诊一例甲型H1N1流感病例.应加大监测检测力度,防止疫情扩散.

作者：张清杰刊期： 2010年第04期
面粉中痕量溴酸盐离子色谱测定法的研究

目的:建立面粉中痕量溴酸盐的离子色谱测定方法.方法:选用Dionex IonPac AS19型分析柱,抑制型电导检测器.EG40淋洗液发生器在线产生KOH淋洗液,进行梯度淋洗,进样体积为250 μl.结果:溴酸盐浓度在5～100 μg/L范围内具有良好的线性关系(r=0.9999),RSD<5%,检出限为0.70 μg/L.样品加标回收率为90.5%～97.5%.结论:该方法分析快速,灵敏度高,重现性好.

作者：杨合灿；胡亚奇；俎志平刊期： 2010年第04期
环境胁迫因子对大肠杆菌的影响

大肠杆菌(Escherichia coli,E. coli)存在于人和动物的肠道中,是肠道正常菌群之一,属于条件致病菌.其中一些特殊的血清型(肠致病性大肠杆菌、肠产毒性大肠杆菌、肠侵袭性大肠杆菌、肠聚集性大肠杆菌和肠出血性大肠杆菌)具有致病性,可引起人类感染性腹泻.

作者：罗中捷；周卓晟；郝春慧；刘红艳；黄正刊期： 2010年第04期
河北省2004～2008年流感病原学监测分析

目的:分析河北省2004～2008年流行性感冒(流感)流行特点和流感病毒优势毒株的情况,为流感防治提供科学依据.方法:在流感流行季节,采集流感样病例(Influenza Like Illness,ILI)咽拭子标本,用MDCK(Madin Darby Canine Kidney)细胞培养分离流感病毒,经血凝抑制(Hemasslutination Inhibition,HI)试验鉴定病毒型别.结果:2004年10月一2008年3月共采集ILI咽拭子标本3179份,分离到流感病毒288株,血清学鉴定结果A(H1N1)亚型78株,占27.08%,A(H3N2)亚型113株,占39.24%,B-Victoria系36株,占12.50%,B-Yamagata系61株,占21.18%.在2004～2005年流行期和2006～2007年流行期均以A(H3N2)亚型流感病毒占优势;2005～2006年流行期以A(H1N1)亚型流感病毒占优势;2007～2008年流行期优势流行株为B-Yamagata系流感病毒.除2005～2006年流行期外,我省流感病毒流行高峰期均在1月份.结论:河北省流感病毒流行有明显季节性,1月为发病高峰,感染人群中流感毒株A(H1N1)、A(H3N2)亚型和B-Victoria、B-Yamagata系交替出现,流行优势毒株不断发生变化.

作者：彭世强；刘艳芳；韩光跃；高伟；齐顺祥刊期： 2010年第04期