学术投稿

结核分枝杆菌katG、rpoB、rpsL耐药基因快速检测方法的建立

杨柳;苏明权;程晓东;岳乔红;马越云;刘家云;郝晓柯

关键词:结核分枝杆菌, KatG, rpoB, rpsl, 基因突变, multi-PCR-SSCP
摘要:目的:建立一套应用multi-PCR-SSCP(multiple-Polymerase Chain Reaction-Single Strand Cinformation Polymorphism)快速检测结核分枝杆菌耐药基因突变的方法,评价该方法的临床应用价值.方法:分别用常规PCR和multi-PCR-SSCP检测58株结核分枝杆菌临床分离株katG、rpoB、rpsL基因突变并与常规药敏试验检测结果进行对比.结果:经常规药敏试验检测,58株结核分枝杆菌临床分离株中有41株耐药,其中,耐异烟肼(INH)35株;耐利福平(RFP)31株;耐链霉素(SM)31株.单基因PCR-SSCP与multi-PCR-SSCP分析结果一致,检出katG,rpoB、rpsL基因的突变率分别为65.7%(23/35)、84%(26/31)、71%(22/31),17株药物敏感株中有1株rpoB基因SSCP电泳条带与结核杆菌标准株结果有差异. 结论:multi-PCR-SSCP方法敏感、特异,可快速检测结核分枝杆菌katG、rpoB、rpsL耐药基因的突变,将该方法与药敏试验联合应用可互相弥补,成为临床指导用药的好方法.
中国卫生检验杂志相关文献
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    作者:孙丽萍;李晖 刊期: 2009年第08期

  • 辛伐他汀对陈旧性心肌梗死伴高脂血症患者胰岛素抵抗的影响

    目的:观察陈旧性心肌梗死(OMI)伴高脂血症患者胰岛素抵抗(IR)状态及辛伐他汀对其影响.方法:48例OMI伴高脂血症患者随机分为常规治疗组(R组)24例和常规+辛伐他汀治疗组(S 组)24例.比较二组治疗前后血脂水平(TC、TG、LDL-C、HDL-C)、空腹血糖(FPG)、胰岛素抵抗(HOMA-IR)和胰岛素敏感指数(ISI)的变化,并与24例健康对照组(C组)比较.结果:与对照组相比,OMI伴高脂血症患者TC、TG、LDL-C升高,HDL-C降低(P<0.05);CHD组FPG有上升趋势(P>0.05),FINS增高,ISI下降,IR增高(均P<0.01),ISI降低,HOMA-IR:增加(P<0.001);R组和S组患者治疗后ISI升高,而HOMA-IR降低,S组治疗后ISI增高和HOMA-IR降低的程度明显优于R组(P<0.05).结论:OMI伴高脂血症患者存在IR,辛伐他汀可提高其胰岛素敏感性.

    作者:晁国营 刊期: 2009年第08期

  • 兰溪市农村儿童肠道志贺菌的分离率与耐药性分析

    目的:探讨兰溪市农村儿童肠道志贺菌的分离情况及耐药性的情况,为儿童细菌性腹泻的治疗与预防提供依据.方法:采集兰溪市农村在校和不在校的3078名儿童(年龄6~12岁)的新鲜粪便,经粪便细菌培养鉴定,并用.KB法进行体外抗菌药物的敏感性检测.结果:在3078名儿童的肠道中分离到志贺菌86株(2.79%),其中痢疾志贺菌17株,占分离菌株的19.8%;福氏志贺菌Ⅱ 57株,占分离菌株的66.3%;宋内志贺菌12株,占分离菌株的13.9%,鲍氏志贺菌0株.体外抗菌药物敏感性检测显示,86株志贺菌总的耐药率,氨苄西林76.7%、头孢曲松14.0%、亚胺培南0.0%、氯霉素9.3%、四环素75.6%、庆大霉素37.2%、环丙沙星4.7%、复方新诺明81.4%.结论:兰溪市农村的儿童肠道中携带有一定比例的志贺菌,其中以福氏志贺菌为主.体外抗菌药物的敏感性以三代头孢菌素、亚胺培南、环丙沙星较好.

    作者:陈一梅 刊期: 2009年第08期

  • 白银市农村生活饮用水水质检测结果分析

    白银市位于甘肃省中部,全市总人口171.56万人,农业人口占全市总人口的77%,农村生活饮用水源主要是地下水和地面水,以分散式供水为主.为了解我市农村生活饮用水卫生状况,保证全市农村饮水安全,对全市农村217份生活饮用水按照国标GB/T5750-2006进行检测分析,为有效保护和利用有限的水资源和我市农村生活饮用水的改水规划、监督、检测提供科学依据.

    作者:赵振艳 刊期: 2009年第08期

  • 2005~2007年深圳市松岗镇生活饮用水检测结果分析

    目的:了解深圳市松岗镇桶(瓶)装饮用水(纯净水、矿泉水)、直饮水、自来水和井水四种水的卫生质量,为卫生监督管理提供科学依据.方法:对2005~2007年间深圳松岗镇生产和销售的桶(瓶)装饮用水(纯净水、矿泉水)、直饮水、井水和自来水送检和抽检的样本进行检测和分析.结果:共检测水样599份,合格524份,总合格率87.5%;其中瓶(桶)装水合格率为93.6%,直饮水为91.2%,自来水为89.9%,井水为61.1%.结论:深圳市松岗镇生活饮用水卫生总体状况较好.

    作者:邓红莲;李攀;曾雁玲;任燕 刊期: 2009年第08期

  • 高效液相色谱法考察大黄素在HBSS溶液中的溶解度及其稳定性

    目的:考察大黄素在HBSS溶液中的溶解度和稳定性.方法:将大黄素按照不同浓度溶于有机溶剂和HBSS溶液中,用高效液相法比较两者溶解度的差别.再考察不同时间点,不同pH值下的大黄素的稳定性.结果:大黄素在HBSS溶液中溶解度较低,在可溶范围内和有机相中的溶解度无显著性差异,大黄素极不稳定,1天之后已经降解,用螯合剂和抗氧剂可以明显增强其稳定性.结论:大黄素HBSS溶液可以用于灌流实验.

    作者:刘薇;叶玲;赵洁;夏笔军;刘中秋 刊期: 2009年第08期

  • 离子色谱法快速测定蔬菜中吲哚乙酸

    目的:采用梯度淋洗离子色谱法快速测定蔬菜中吲哚乙酸含量.方法:选用IonpacAS11阴离子分析柱,0 ~20 mmol/L KOH淋洗液,流速为1.0 ml/min,电导检测器.用纯水萃取样品,经高速离心、过C18小柱、用0.25 μm微孔滤膜过滤后直接进样.结果:本法相关性好(r=0.9990),精密度高(RSD%<5.0),样品加标平均回收率为88.3%~101%,低检出量0.10μg/g.结论:该法操作简单、快速、准确、灵敏,适用于大批样分析.

    作者:颜金良;王立 刊期: 2009年第08期

  • 下城区饮食和公共场所从业人员肠道沙门菌携带状况调查分析

    目的:了解和分析杭州市下城区饮食、公共场所从业人员肠道沙门菌携带情况及菌型分布特点、耐药状况.方法:按沙门菌分离鉴定方法进行检测,WHO推荐的K-B法进行药敏试验.结果:73601名饮食和公共场所从业人员中检出沙门菌217株,检出率0.30%,分布于7个血清群,29个血清型,其中B群占比例高,依次为B群、E1群、E4群、C1群、D群、C2群、E2群,有5个血清型为我区首次检出.217株沙门菌对阿莫西林/克拉维拉、氨苄西林/舒巴坦、头孢噻肟、头孢哌酮、环丙沙星、氧氟沙星的敏感度较高,均在94%以上,妥布霉素、阿米卡星、庆大霉素的敏感度略低,而复方新诺明、氨苄青霉素耐药率高为16.59%.结论:本文实验结果可为研究我区饮食、公共场所从业人员沙门菌健康带菌者菌型分布规律及其对抗生素的敏感性提供参考.

    作者:商晓春;帅慧群;赵雪琴;张睿;胡薇薇 刊期: 2009年第08期

  • 火焰原子吸收分光光度法测定工作场所空气中锡及其化合物

    锡及其化合物在生产和生活中广泛应用.锡及其无机化合物大多属于低毒或微毒类,无机锡难于经消化道吸收,吸入的锡化合物主要滞留在肺.接触高浓度无机锡尘可引起眼、喉及呼吸道刺激症状,可引起肺部明显x线改变;接触锡烟可致金属烟雾热[1].

    作者:黄忠科;艾中元;宋为丽;张莉 刊期: 2009年第08期

  • 痰片结核杆菌的检查与质量控制

    痰涂片检查是国家控制结核病患者的主要手段[1],是发现肺结核传染源、确定诊断、制订化疗方案、考核疗效以及评价防治效果的重要方式.其质量控制是国家结核病防治规程(NTP)的重要组成部分.痰检工作的好坏,在一定程度上可直接反映整个结核病控制项目基础工作水平和质量的好坏.直接厚涂片法简单,易行,经济和快速而普遍被采用,检出率可达20%~40%[2].

    作者:殷华美 刊期: 2009年第08期

  • 海盐县2005~2007年食用碘盐监测结果分析

    目的:了解海盐县盐业公司、居民户及学生家食用盐含碘情况,客观地评价碘盐干预措施的效果,为进一步消除碘缺乏病工作提供有力科学依据和为合理补碘提供科学资料.方法:按<全国碘缺乏病监测方案>和<浙江省碘盐监测实施细则>抽样,对盐业公司、居民户、学生家碘盐监测结果进行分析.结果:检测盐业公司盐样324份,碘盐合格率100%.检测居民户盐样864份,碘盐覆盖率97.9%,合格碘盐食用率93.9%,非碘盐2.1%.检测学生家食用盐样600份,碘盐覆盖率97.5%,合格碘盐食用率90.5%,非碘盐2.5%.结论:海盐县盐业公司碘盐合格率100%,居民户合格碘盐食用率93.9%,学生家合格碘盐食用率90.5%,虽然达到国家标准要求90%以上,但仍有部分居民户尤其学生家食用不合格碘盐甚至无碘盐情况居多,应进一步扩大调查监测范围、频率和加强健康教育宣传力度[1],确保居民户和学生家食用合格碘盐.

    作者:徐宏伟;何燕刚;倪春苗 刊期: 2009年第08期

  • 流动注射在线蒸馏测定水中氰化物含量的影响因素

    目的:采用连续流动在线蒸馏法测定水中的氰化物,探索佳的检测条件,使实验结果更为准确.方法:本实验从水样的采集到检测严格按照实验室要求进行控制,比较分析过程中的各种影响因素.结果:本试验测定两份水样,精密度分别为2.33%,2.31%.回收率为99.2%,98.6%,检出限为0.0002 mg/L.结论:水中氰化物的影响因素较为复杂,掌握其原理,控制条件可以得到较为准确的实验结果.

    作者:潘淼;李永纪;王同蕾 刊期: 2009年第08期

  • 高效液相色谱法同时测定动物源食品中22种兽药残留技术研究

    目的:建立动物源食品(畜、禽、水产品)中22种兽药(磺胺、磺胺醋酰、磺胺噻唑、磺胺嘧啶、磺胺吡啶、磺胺氯哒嗪、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶、喹乙醇、呋喃唑酮、氯霉素、磺胺甲恶唑、磺胺甲噻二唑、磺胺-5-甲氧嘧啶、敌菌净、甲氧苄啶、磺胺二甲异恶唑、磺胺甲氧哒嗪、磺胺间甲氧嘧啶钠、苯酰磺胺、磺胺二甲氧嘧啶、磺胺喹恶啉)残留同时测定的高效液相色谱法.方法:优化22种兽药残留同时测定的高效液相色谱分析条件:色谱柱Discovery C18,梯度变速洗脱,紫外检测波长270 nm.样品用乙腈-氯仿(10+1)提取、正己烷脱脂,乙腈-氯仿(1+2)反提取兽药,用流动相溶解定容,上机分析测定.结果:22种兽药在优化的色谱分析条件下分离效果较好,其线性范围较宽,并在此浓度范围内显良好的线性关系(r=0.99~0.9999),在畜、禽、水产品中3个浓度添加水平平均回收率为61.2%~103.0%,相对标准偏差为1.0%~9.5%,低检出浓度为0.004~0.018 mg/kg.结论:方法准确,重现性、精密度好,杂质干扰少,且简便快速,成本低,适用范围广,可满足兽药多残留分析要求.

    作者:赵亚华;李勇;何学芳 刊期: 2009年第08期

  • 固相萃取-高效液相色谱法同时测定大豆中5种除草剂

    目的:建立大豆中5种除草剂多残留同时检测的高效液相色谱分析方法.方法:样品经甲醇提取,C18固相萃取小柱净化后,采用高效液相色谱方法分离,检测波长为230 nm.结果:5种除草剂(普杀特、苯达松、氟磺胺草醚、喹禾灵、2,4-滴丁酯)在0.5~10.0 mg/L范围内线性良好,回收率为77.9%~101.8%,相对标准偏差为1.24%~6.50%,方法的定量限为0.05~0.08 mg/kg,能达到国家有关上述除草剂残留限量的要求.结论:本法操作简便,准确可靠,为质量监控提供了参考.

    作者:崔勇;刘思洁;张冠英;张博;王蕴馨;李青 刊期: 2009年第08期

  • 上海市售散装熟肉制品微生物污染状况调查分析

    目的:了解市售散装熟肉制品被微生物污染的状况,为食源性疾病的预防和控制提供科学依据.方法:于2006年1月和2006年4月分两次在上海市34家(次)超市和67家(次)熟食店以购买形式购买具有代表性的散装熟肉制品共计480件,依照国家标准进行检验和结果评价.结果:共检散装熟肉制品480件(超市240件,熟食店240件),合格137件,总合格率为28.54%.结论:上海市市售散装熟肉制品被微生物污染的程度较为严重,总合格率偏低;超市和熟食店、中式和西式的样品合格率均存在显著差异.影响其合格率的因素是多方面的,包括产品的加工方法、销售过程的操作方法以及温度变化和运输、储存、环境设施条件等.

    作者:盛满钰;宋昌彦;陈欣钦 刊期: 2009年第08期

  • 宁波地区2008年麻疹病毒分离株H和N基因特征分析

    目的:分析宁波地区2008年麻疹病毒H和N基因的序列特征.方法:采用RT-PCR扩增2008年宁波地区麻疹分离株血凝素蛋白(H)和核蛋白(N)C末端456 bp核苷酸并进行序列测定,与GenBank中麻疹病毒各基因型参考株比较并分析毒株变异情况.结果:共分离到11株麻疹病毒,均为H1a基因亚型.与H1a参考株China93-2的H和N基因的氨基酸同源性分别为98.5%~98.7%和96.1%~98.7%;与中国疫苗株S191的H和N基因的氨基酸同源性分别为95.0%~95.5%和86.8%~89.5%.结论:宁波地区2008年流行的麻疹病毒均为H1a基因亚型,与中国疫苗株S191在基因特征上存在明显差异.

    作者:傅燕;倪红霞;胡逢蛟;高红;张姝;刘健毅 刊期: 2009年第08期

  • 大米、蔬菜、水果中氯氟吡氧乙酸残留量测定方法研究

    目的:建立高效液相色谱法测定大米、蔬菜、水果中氯氟吡氧乙酸含量的方法.方法:采用C18色谱柱,以甲醇+乙酸钠(0.1 mol/L)(40+60)为流动相,检测波长为215 nm,柱温为25℃.结果:在0.02~1.00μg/ml浓度之间呈现良好的线性关系,相对标准偏差为1.79%~5.65%.回收率在89.5%~105.0%之间.结论:本法操作简便、准确、快速,适合测定大米、蔬菜、水果中氯氟吡氧乙酸残留量.

    作者:刘思洁;方赤光;李青;崔勇 刊期: 2009年第08期

  • 伤寒和甲型副伤寒沙门菌PFGE分型方法研究与应用

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    作者:徐景野;许国章;金春光;章丹阳;沈玄艺 刊期: 2009年第08期

  • 1469例女性阴道分泌物支原体衣原体结果分析

    目的:了解女性生殖道支原体、衣原体疾病的危害性与耐药性.方法:2006年1月~2008年12月间,标本来自我院妇科门诊病人,送检的1469份分泌物解脲脲原体(Uu)、人型支原体(:Mh)培养及沙眼衣原体(CT)检测.支原体培养采用法国生物梅里埃公司生产的成套试剂盒检测,沙眼衣原体检测采用英国立明生产免疫层析法试剂盒.结果:沙眼衣原体检查340份,阳性152例(44.7%),支原体检查1129份标本,Uu感染635例(56.24%),Uu+Mh感染105例(9.3%),Mh感染109例(9.67%),并同时进行了抗生素药物敏感试验,Uu对氧氟沙星(OFL)、环丙沙星(CIP)耐药率分别为75.6%、82.3%,四环素(TET)、强力霉素(DOX)、交沙霉素(JOS)耐药率低于5%.结论:女性生殖道支原体、衣原体疾病检测尤其重要,交沙霉素、多西环素、米诺环素是治疗支原体、衣原体感染的首选药物,进行病原体的培养(或检测)鉴定和药物敏感试验,为临床妇科疾病的治疗提供了可靠依据.

    作者:祝慧华 刊期: 2009年第08期

中国卫生检验杂志

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主管:中华人民共和国国家卫生和计划生育委员会

主办:中华预防医学会