李道静；何晓东；孙余婕；凡任芝；许维东；孙利；张永娟；张白银；沈佐君
目的 建立检测烟曲霉DNA的荧光定量PCR方法,评价其在小鼠侵袭性烟曲霉肺部感染诊断中的意义.方法 根据烟曲霉ITSI区域基因组序列,设计合成引物和荧光标记探针,优化荧光定量PCR条件,从特异性、扩增效率、灵敏度及重复性方面进行评价.建立小鼠烟曲霉肺部感染模型,用荧光定量PCR对36只实验小鼠肺组织及支气管肺泡灌洗液(bronchoalveolar lavage fluid,BALF)进行检测.结果 本研究设计的引物和探针特异性扩增烟曲霉DNA,低检出量为每毫升10<'2>个烟曲霉孢子,在10<'3>～10<'7>拷贝数(Cp)内具有良好的线性关系(R<'2>=0.999).在0.5×10<'3>Cp/mL与0.5×10<'5>Cp/mL两个浓度时,批内变异系数为0.39%、0.53%,批间变异系数为2.22%、4.58%.结果 成功建立了荧光定量PCR检测烟曲霉DNA方法,该法特异性强、灵敏度高、重复性好,将有助于烟曲霉感染的早期诊断和针对性治疗.
作者：毛璞；余志辉；黄红川；杨淳；黎毅敏 刊期： 2011年第03期
目的 构建靶向信号转导及转录激活因子5(STATS)的RNAi重组质粒并进行鉴定.方法 设计针对STAT5编码区的有短发夹结构的3对DNA序列,克隆到质粒栽体Pgenesil-1中构建重组质粒,再对其进行酶切鉴定、DNA测序分析.脂质体法转染重组质粒至SMMC7721细胞株中,western-blot、RT-PCR检测STATS基因表达.结果 酶切鉴定和测序分析提示,靶向STAT5的RNAi重组质粒构建成功,3条靶向STATS的序列特异性小发夹状RNA(shRNA)可有效抑制SMMC7721细胞STATS表达,mRNA表达抑制率分别为70.43%、43.02%、45.07%,蛋白质表达抑制率分别为67.45%、37.36%、41.86%(P<0.05).其中以Pgenesil-1-STAT5Al抑制效应强.结果 成功构建靶向STATS的RNAi重组质粒,为进一步用该重组干扰栽体进行体内肿瘤基因治疗的研究奠定了基础.
作者：张丽杰；赵振军；鹿刚；单保恩 刊期： 2011年第03期
目的 用刃天青显色法快速测定结核分枝杆菌(MTB)MIC及菌型初步鉴定,并确定抗结核药物折点浓度.方法 用30株国家结核参比实验室熟练度测试质控菌株和64株临床分离菌株为试验菌株,在96孔培养板中,用Middlebrook 7H9液体培养基将抗结核药物进行连续双倍稀释后,加入一定浓度菌液,用刃天青显色法测定MIC.根据罗氏培养基药敏比例法结果,用ROC曲线分析建立显色法药物折点浓度.同时选择24株非结核分枝杆菌(NTM),用对硝基苯甲酸(PNB)进行初步的菌型鉴定.结果 刃天青显色药敏试验5种抗结核药物链霉素、异烟肼、利福平、乙胺丁醇和氧氟沙星的折点浓度分别为1、0.5、0.5、2、2μg/mL,其敏感性分别为100%、97%、97%、88%和100%,特异性分别为100%、100%、100%、91%和100%.在菌型鉴定中,94株MTB在PNB中均未生长,24株NTM均生长.结果 刃天青显色法测定MIC具有操作简便、快速、成本低廉和准确的优势,且能进行初步的菌型鉴定,适于结核病专业实验室应用.
作者：陈军；陈志飞；饶有益；陈丽峰；王飞；肖勇 刊期： 2011年第03期
某些基因正常位点多态性的变异、饮食影响、周围环境中致癌剂的暴露及个体免疫系统的不同可能是白血病发生的影响因素.药物代谢酶类遗传多态性为常见,如编码药物及周围环境有毒物质代谢酶类基因的多态性:I相代谢中编码细胞色素P450基因(CYPs)、Ⅱ相代谢中编码谷胱甘肽-S-甲基转移酶基因(GST)和自由基代谢或氧化胁迫中苯醌氧化还原酶基因(NQO1)的多态性等.
作者：杜秀敏；胡成进 刊期： 2011年第03期
伴放线凝聚杆菌旧称伴放线放线杆菌(Actinobacillus ac-tinomycetemcomitans),现已划分到凝聚杆菌属.本菌为人类口腔正常菌群,主要引起心内膜炎、心瓣膜损害,引起乳腺感染少见.
作者：刘晓富；朱亚宝 刊期： 2011年第03期
激活素(activin)是参与肝纤维化形成的细胞因子,其中以激活素A(activin A)为重要….我们通过检测105例慢性乙肝患者血清activin A水平,并与肝组织病理改变相对照,进一步探讨activin A在慢性肝病肝纤维化诊断中的作用.
作者：杨清；张晓娜；王胜；韩树海 刊期： 2011年第03期
慢性髓细胞白血病(CML)髓外T淋巴细胞白血病急性变极为罕见,常被误诊为CML并发或继发T细胞淋巴瘤.荧光原位杂交(FISH)技术已成功地用于多发性骨髓瘤患者异常染色体的检查[1-2].本研究通过活检淋巴结组织石蜡包埋切片HE染色后识别原始细胞进行定位,脱色处理后,在同一细胞上进行FISH,识别CML髓外T淋巴细胞急性变.
作者：马金龙；陈宝安；刘苒；丁家华；高冲；姚青；王俊；程坚；赵刚；杜海珍；鲍文；宋慧慧；裴孝平；余正平 刊期： 2011年第03期
目的 观察细胞液泡蛋白质分选因子4B(VPS4B)显性负性突变体VPS4B-K180Q在体外抑制乙型肝炎病毒(HBV)复制的效应.方法 用不同剂量野生型VPS4B真核表达质粒pXF3H-VPS4B和K180Q突变型真核表达质粒pXF3H-K180Q与pHBVl.3共转染Huh7细胞,时间分辨荧光免疫分析法(TRFIA)定量检测细胞培养上清中的HBsAg和HBeAg含量,Southernblot分析细胞内HBV核衣壳相关DNA水平,实时定量PCR检测HBV相关mRNA水平变化.结果 野生型VPS4B可抑制HBsAg和HBeAg的分泌,对细胞内HBV核衣壳相关DNA和mRNA的抑制作用较弱;低剂量突变型VPS4可显著抑制HBsAg和HBeAg的分泌,对细胞内HBV核衣壳相关DNA和mRNA的抑制作用较强,且均呈剂量依赖的抑制效应.结果 计 VPS4B及其显性负性突变体可在体外表现出抗HBV的作用,突变型VPS4B抑制HBV能力高于野生型VPS4B.
作者：王维鹏；夏剑波；李磊；郝友华；杨东亮 刊期： 2011年第03期
目的 制备抗人非小细胞肺癌(NSCLC)的单克隆抗体(McAb),并对其生物学特性及特异性进行鉴定.方法 以人肺腺癌细胞株SPC-A1为抗原,免疫BALB/c小鼠,常规细胞融合,间接细胞ELISA法筛选阳性细胞克隆;多种细胞间接ELISA及间接免疫荧光法鉴定其特异性;western blot分析其特异性结合抗原的相对分子量;免疫组化染色分析单抗的组织特异性.结果 得到1株高效价的、稳定分泌IgG1抗人NSCLC单抗的细胞株(NJ488-1),纯化后效价为2×10<'6>;间接细胞ELISA及间接免疫荧光法证实NJ488-1能特异地识别肺癌细胞系,其识别抗原定位于SPC-A1细胞胞浆区;western blot显示NJ488-1特异性结合的抗原相对分子量(Mr)为70 000左右;免疫组化结果 表明NJ488-1与NSCLC组织有强阳性反应.结果 成功地制备并鉴定了抗人NSCLC单抗NJ488-1,为肺癌的进一步研究及NJ488-1的临床应用奠定了基础.
作者：徐婷；潘世扬；王芳；张丽霞；黄珮琚；徐建；孙瑞红；黄蕾；夏文颖；陆雅春；耿雁；彭奠；秦雪君 刊期： 2011年第03期
目的 研究伊马替尼(imatinib,IM)治疗慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)耐药患者ABL酪氨酸激酶区突变情况.方法 用巢式PCR扩增对IM治疗耐药的56例CML患者骨髓样本ABL基因激酶区序列,通过测序和序列同源性检索分析ABL激酶区突变情况.结果 56例患者检出突变17例,其中14例为点突变,包括T3151、N358D、F359V、T389A、P441L、E450OK、S410G、F486S;3例检测出插入突变c.1423-1424ins 35bp(P.CA75YfsX11).慢性期患者突变12例(28.6%),加速期、急性期突变者分别为4例和1例..IM急变期、加速期患者突变率高于慢性期,但差异无显著性(χ<'2>=0.253,P>0.05).结果 ABL基因激酶区点突变是CML患者对IM耐药的重要原因,通过检测ABL基因激酶区突变有助于预测IM疗效并及时调整治疗方案.
作者：宋其芳；瞿燕春；杨红宇；王宏 刊期： 2011年第03期
目的 建立检测HBV基因型的PCR熔解曲线法,并验证该方法 临床应用的可靠性.方法 依据文献报道的HBV B、C型全基因组序列,分别设计B、C型的特异引物序列,建立HBV基因分型的PCR熔解曲线法.用该法检测186例HBV DNA阳性血清样本,并从中选取51例样本,用商品化的HBV基因分型试剂盒进行检测,用Kappa一致性检验对两法检测结果 进行比较.结果 186例标本中,PCR熔解曲线法检测到B型133例(71.5%),C型37例(19.9%),B/C混合型16例(占8.6%).选取的51例样本中,熔解曲线法与市售试剂盒检测B型符合率100%,C型符合率100%,B/C混合型符合率81.25%,总符合率94.1%(Kappa=0.909,P<0.05).结果 建立的PCR熔解曲线法操作简便,与商品试剂盒的检测结果 有较高的符合率,可用于临床上HBV B、C以及B/C混合型的检测.
作者：商红艳；程祖建；欧启水 刊期： 2011年第03期
目的 探讨术前血清细胞角蛋白片段19(Cyfra21-1)水平对临床I期非小细胞肺癌(NSCLC)患者预后评估的价值.方法 253例临床I期的NSCLC患者,肺癌完全切除后将切除标本的病理检查和术后临床观察与术前的血清Cyfra21-1水平进行相关分析.结果 69例(27.3%)NSCLC患者Cyfra21-1水平异常增高(≥3.3 ng/mL).Cyfra21-1正常组和增高组的5年生存率分别为91.3%和17.4%.Cyfra21-1增高组患者的预后明显不良(P<0.01).在单因素分析中,术前Cyfra21-1水平、肿瘤的T、N分期和病理分期等与预后均有明显的相关性.而多因素分析显示,Cyfra21-1水平可作为一个独立的预后判断因素[相对危险度(RR)=15.04,P<0.01].结果 Cyfra21-1水平是临床I期NSCLC患者预后不良的一个独立判断指标.早期NSCLC患者术前Cyfra21-1水平增高可能预示早期死亡的风险增高.
作者：王火强；郑金旭；李梅 刊期： 2011年第03期
目的 建立血清烯醇化酶(enolase,ENO)活性的全自动速率测定法,进行方法 学评价及初步临床应用.方法 根据烯醇化酶和丙酮酸激酶、乳酸脱氢酶及还原型辅酶I的偶联反应,在Olymbus Au5400全自动生化分析仪上用双试剂速率法测定EN0活性.结果 本方法 批内CV2.3%～3.7%,批间CV4.2%～5.6%;检测下限为0.26 U/L,线性范围0.3～88.6 U/L;溶血标本对测定有正干扰;胆红素浓度≤52 μmol/L无明显干扰;三酰甘油≤3.12 mmol/L对测定无干扰.370例健康人血清EN0活性(x±s)为(5.9±1.9)u/L.33例恶性肿瘤、44例脑挫伤及神经系统疾病患者血清EN0活性分别为(19.0±14.4)U/L、(17.1±11.4)u/L,与健康组比较差异均有统计学意义(P<0.01).结果 全自动速率法测定ENO活性,具有准确、快速、简便、低成本等优点.初步临床应用表明,恶性肿瘤、脑挫伤及神经系统疾病患者血清ENO活性增高,对临床有一定参考价值.
作者：孙建中；王雍；许联红 刊期： 2011年第03期
目的 评价脑脊液(CSF)总tau蛋白(t-tau)和磷酸化tau蛋白(P-tau)浓度预测阿尔茨海默病(Alzheimer'S disease,AD)的有效性和准确性.方法 全面检索tau蛋白浓度预测轻度认知功能障碍(mild cognitive impairment,MCI)转化为AD的诊断性试验文献,评价纳入文献的质量,用Review Manager 5.1和Meta Disk 1.4软件进行Meta分析,计算合并效应量.结果 共纳入15项研究,MCI进展为AD的t-tau基线浓度(pg/mL)高于对照组[加权均数差(WMD):320.7;95%CI:274.2～367.3],p-tau基线浓度(pg/mL)亦高于时照组(WMD:32.8;95%CI:29.5～36.0).t-tau预测AD的诊断优势比(diagnostic odds ration,DOR)为14.1(95%CI:8.2～24.4);p-tau的DOR为22.4(95%CI:10.4～48.3).结果 CSF中tau蛋白可作为预测AD发生的重要指标.
作者：耿劲松；董建成；倪衡建；施李丽；吴辉群；蒋葵 刊期： 2011年第03期
CLSI M100-S20(2010年)[1]将产ESBLs菌株对头孢噻肟、头孢曲松、头孢他啶、头孢唑肟和氨曲南的药敏折点和报告规则作了重大修订.本文回顾性分析了新、旧两种判读标准对我院分离的862株产ESBLs大肠埃希菌、肺炎克雷伯菌和奇异变形杆菌药敏结果的影响,现报告如下.
作者：公衍文；李继霞；王燕；薛炼；胡成进 刊期： 2011年第03期
目的 观察citrin缺陷导致的新生儿肝内胆汁淤积症(NICCD)患儿的血清生化指标变化.方法 比较20例NICCD患儿和20例其他原因所致肝内胆汁淤积症患儿(非NICCD患儿)的ALT、AST、ALP及GGT等22项生化指标.结果 NICCD患儿组与非NICCD患儿组比较,ALT、AST/ALT(S/L)、ALP、LDH、GGT、TP、Alb、Glo、I-Bil、TBA、Lact存在统计学意义差异(P均<0.05);LDH和Lact具有一定的鉴别诊断价值.结果 ALT、S/L、ALP等11项生化指标对辅助NICCD诊断具有一定价值.
作者：陈凤平；吴晓蔓 刊期： 2011年第03期
目的 建立并评价检测人血清载脂蛋白M(apo M)浓度的双抗体夹心ELISA法.方法 用抗apo M单克隆抗体作包被抗体,辣根过氧化物酶(HRP)标记的抗apo M单克隆抗体作酶标记抗体,建立检测apo M的双抗体夹心ELISA法.检测483例体检健康者的血清apo M浓度,建立本实验室的参考值.结果 线性范围为31.3～500 ng/mL,低检测限为23.9 ng/mL;脂蛋白(a)、apo A1和apo B对apo M检测结果 干扰作用小;批内、批间变异系数(CV)均<10%;参考值为(22.1±12.1)μg/mL.结果 建立检测人血清apo M浓度的双抗体夹心ELISA法,为研究apo M的生理功能及其在脂质代谢中的作用提供了一种新的研究工具.
作者：黎照环；胡敏 刊期： 2011年第03期
目的 研究河南省结核分枝杆菌基因型别与耐药性和地区分布关系.方法 用间隔区寡核苷酸序列(spoligotyping)基因分型技术对344株结核分枝杆菌进行分型.结果 344株结核分枝杆菌分为4个基因群[Beijing和Beijing近似群(简称北京群)、T群、MRnu2群、S和LAM3群],共24个基因型,北京基因型有299株,占87.7%,但北京型与非北京型之间耐多药(MDR)株所占比例差异无统计学意义(X<'2>=1.46,P>0.05);北京基因型在≤60岁感染者中分离率占83.6%;除个别地区外,不同地区间的分布无显著性差异.结果 河南省结核分枝杆菌以北京基因型为主要流行型,与MDR和任意耐药无相关性,以≤60岁感染者居多,嵩县分离率略低.
作者：赵玉玲；赵东阳；李辉；杨洪毅；马晓光；赵国强 刊期： 2011年第03期
目的 探讨凋亡抑制基因livin在卵巢癌细胞中的表达及其生物学意义.方法 收集32例卵巢癌患者癌组织及相应的癌旁组织、细胞培养卵巢癌细胞系A2780,用实时荧光定量PCR和western blot分别检测组织中livin基因的mRNA和蛋白质表达;MTT法检测A2780细胞的生长率;流式细胞术检测A2780细胞的凋亡率.结果 livin mRNA和蛋白质表达在卵巢癌组织中明显高于癌旁组织(t=6.98,P<0.01;t=5.12,P<0.01);与对照组相比,转染livin siRNA组卵巢癌细胞的生长率显著减少(χ<'2>=77.21,P<0.01),细胞凋亡率呈明显增高(χ<'2>=15.68,P<0.01).结果 livin在卵巢癌的发生、发展中起重要的作用,可能成为卵巢癌治疗的新分子靶点.
作者：胡安群；刘海燕；高玲娟 刊期： 2011年第03期
目的 研究棒状杆菌的药敏试验方法,了解临床标本中分离的棒状杆菌对常用抗菌药物的敏感性.方法 以微量肉汤稀释法测定12种抗生素的低抑菌浓度(MIC),用SENSITITRE<'R> CMP2IHM微量肉汤药敏板进行质控对照.结果 184株棒状杆菌对青霉素、头孢噻肟、红霉素、环丙沙星、四环素、多西环素、克林霉素的耐药率超过50%.超过50%的菌株对亚胺培南、庆大霉素和利福平敏感,未发现对万古霉素和利奈唑胺耐药.结果 用微量肉汤稀释法检测临床分离棒状杆菌的MIC值,用CLSI M45-A判断标准判读结果,可为临床提供准确的敏感或耐药结果.棒状杆菌对多种抗菌药物的敏感性降低,多重耐药株在增加.
作者：陈东科；许宏涛；艾晓曼；胡云建 刊期： 2011年第03期
临床检验杂志
主管:江苏省卫生厅
主办：江苏省医学会
