陈军；陈志飞；饶有益；陈丽峰；王飞；肖勇
目的 建立检测HBV基因型的PCR熔解曲线法,并验证该方法 临床应用的可靠性.方法 依据文献报道的HBV B、C型全基因组序列,分别设计B、C型的特异引物序列,建立HBV基因分型的PCR熔解曲线法.用该法检测186例HBV DNA阳性血清样本,并从中选取51例样本,用商品化的HBV基因分型试剂盒进行检测,用Kappa一致性检验对两法检测结果 进行比较.结果 186例标本中,PCR熔解曲线法检测到B型133例(71.5%),C型37例(19.9%),B/C混合型16例(占8.6%).选取的51例样本中,熔解曲线法与市售试剂盒检测B型符合率100%,C型符合率100%,B/C混合型符合率81.25%,总符合率94.1%(Kappa=0.909,P<0.05).结果 建立的PCR熔解曲线法操作简便,与商品试剂盒的检测结果 有较高的符合率,可用于临床上HBV B、C以及B/C混合型的检测.
作者：商红艳；程祖建；欧启水 刊期： 2011年第03期
目的 研究氨甲蝶呤(MTX)对映体[L-(+)-MTX和D-(-)-MTX]耐药与二氢叶酸还原酶(DHFR)基因表达的关系.方法 用浓度递增结合低剂量持续诱导法获得A549细胞对不同构型及不同浓度的MTX对映体的耐药细胞株,荧光定量PCR检测耐药细胞株中DHFR基因的相对含量.结果 对两种不同对映体的获得性耐药存在差异,D型耐药细胞耐药指数高于L型;对映体各浓度耐药细胞间耐药指数也有差异.15 μmol/L L型、D型MTX首次诱导耐药细胞的DHFR相对含量低于亲本细胞,对该浓度对映体耐药的各细胞组间没有差别(P>0.05).35～45 μmol/L浓度耐药细胞的DHFR相对含量增加,45μmol/L D型耐药细胞DHFR相对含量高于对应浓度L型耐药细胞,差异有显著性(P<0.05).结果 首次诱导MTX耐药以抑制DHFR基因为主.DHFR基因表达具有手性差异.DHFR基因的检测有望作为肿瘤治疗监测的指标.
作者：李道静；何晓东；孙余婕；凡任芝；许维东；孙利；张永娟；张白银；沈佐君 刊期： 2011年第03期
目的 调查临床分离的鲍曼不动杆菌的分布和耐药性,了解鲍曼不动杆菌质粒对喹诺酮类抗菌药物的常见耐药基因和分子机制,为临床抗感染治疗提供依据.方法 用Vitek系统鉴定细菌,用M-H琼脂稀释法药物敏感试验测定菌株对左氧氟沙星、环丙沙星和加替沙星3种喹诺酮类药物的MIC,PCR扩增质粒上的qnrA、B、C、D、S,氨基糖苷类修饰酶基因aac(6')-Ib及外排泵qepA基因,选取部分PCR扩增产物进行测序分析.结果 鲍曼不动杆菌对环丙沙星、左氧氟沙星和加替沙星的耐药率分别为78.3%、58.3%和40.0%.PCR扩增结果 显示,aac(6')-Ib阳性率达29.2%(35/120),测序发现aac(6')-Ib基因编码的氨基酸密码子不存在点突变,未检出新氨基糖苷类修饰酶aac(6')-Ib-Cr基因;未检测出质粒上的qnrA、B、C、D、S及外排泵qepA基因产物.结果 鲍曼不动杆菌对喹诺酮类药物耐药情况严重,耐药机制与aac(6')-Ib-Cr亚型无关,也没有质粒上的qnrA、B、C、D、S和外排泵qepA基因的因素.
作者：袁星；沈继录；徐元宏；熊自忠 刊期： 2011年第03期
目的 建立流式细胞术(FCM)定量检测不同ABO抗原红细胞嵌合体方法,探讨其在异基因造血干细胞移植(allo-HSCT)中的应用.方法 选取标准 A、B和O型RBC在体外按不同的比例两两混合(嵌合体),采用FCM对5例allo-HSCT患者于术前及术后7、15、30、45、60和90 d体内RBC的嵌合体进行相对计数,计算其供体细胞的嵌合率.结果 体外混合的RBC嵌合体FCM测定值与理论值无显著性差异(P>0.05).5例患者移植后7 d均能检测到供体细胞,其中3例患者移植后90 d达到完全嵌合状态(FDC),1例患者移植后30 d,供体细胞的嵌合率为8.9%,移植后40 d疾病复发而死亡,另1例患者供体细胞的嵌合率由移植后60 d的86.5%下降至90 d的23.7%,死于严重感染.结果 FCM能定量检测不同ABO抗原的RBC嵌合体,可应用于临床allo-HSCT后RBC嵌合体的动态监测.
作者：翟菊萍；顾国浩；王雪明；蒋敏；周毓菁；彭群新；虞秀兰 刊期： 2011年第03期
我们参照第4版[1](以下简称WHO手册)的标准和室内质控管理的相关要求,制备精子质控品并进行为期7个月(4～10月)的精子形态学观察,现报告如下.
作者：徐威香；朱卫中；吴小妹；叶明建 刊期： 2011年第03期
目的 探讨糖化血红蛋白(HbAlc)在糖尿病(DM)诊断中的应用价值.方法 随机选择DM初筛患者535例,均行口服葡萄糖耐量试验(OGTT),用高效液相色谱法检测HbAlc水平.根据OGTY结果 把受试者分为糖耐量正常(NGT)组、血糖调节受损(IGR)组和糖尿病(DM)组,NGT组和IGR组并称为非糖尿病组(non-DM).用ROC曲线分析HbAlc、空腹血糖(FPG)诊断DM及IGR的能力.结果 DM组患者、FPG、餐后2 h血糖(2h PG)及HbAlc均显著高于其他组(P均<0.01);上述指标IGR组亦显著高于NGT组(P均<0.01).DM组男性患者显著多于女性(P<0.01).HbAlc的cut off值为6.1%时,诊断DM的ROC曲线下面积(AUCRoc)为0.849,敏感性为79.1%,特异性为78.4%,与7.0 mmol/L FPG的诊断能力无显著性差异(P>0.05).2者联合应用显著提高诊断能力,AUC<'ROC>=0.885,敏感性为75.0%,特异性为88.0%.以HbAlc 5.7%为cut off值,诊断IGR(AUC<'ROC=0.66)能力显著低于FPG(AUC<'ROC>=0.787),P<0.01.结果 HbAlc的cut off值为6.1%时可用于诊断DM,与7.0 mmol/L FPG联合应用可增加诊断DM的能力,但5.7%HbAlc对IGR的筛查能力较弱,不及5.6 mmol/L FPG.
作者：王连升；庄兴；张琦；陈玉伟；陈福祥 刊期： 2011年第03期
激活素(activin)是参与肝纤维化形成的细胞因子,其中以激活素A(activin A)为重要….我们通过检测105例慢性乙肝患者血清activin A水平,并与肝组织病理改变相对照,进一步探讨activin A在慢性肝病肝纤维化诊断中的作用.
作者：杨清；张晓娜；王胜；韩树海 刊期： 2011年第03期
某些基因正常位点多态性的变异、饮食影响、周围环境中致癌剂的暴露及个体免疫系统的不同可能是白血病发生的影响因素.药物代谢酶类遗传多态性为常见,如编码药物及周围环境有毒物质代谢酶类基因的多态性:I相代谢中编码细胞色素P450基因(CYPs)、Ⅱ相代谢中编码谷胱甘肽-S-甲基转移酶基因(GST)和自由基代谢或氧化胁迫中苯醌氧化还原酶基因(NQO1)的多态性等.
作者：杜秀敏；胡成进 刊期： 2011年第03期
目的 研究伊马替尼(imatinib,IM)治疗慢性粒细胞白血病(chronic myeloid leukemia,CML)耐药患者ABL酪氨酸激酶区突变情况.方法 用巢式PCR扩增对IM治疗耐药的56例CML患者骨髓样本ABL基因激酶区序列,通过测序和序列同源性检索分析ABL激酶区突变情况.结果 56例患者检出突变17例,其中14例为点突变,包括T3151、N358D、F359V、T389A、P441L、E450OK、S410G、F486S;3例检测出插入突变c.1423-1424ins 35bp(P.CA75YfsX11).慢性期患者突变12例(28.6%),加速期、急性期突变者分别为4例和1例..IM急变期、加速期患者突变率高于慢性期,但差异无显著性(χ<'2>=0.253,P>0.05).结果 ABL基因激酶区点突变是CML患者对IM耐药的重要原因,通过检测ABL基因激酶区突变有助于预测IM疗效并及时调整治疗方案.
作者：宋其芳；瞿燕春；杨红宇；王宏 刊期： 2011年第03期
新生儿败血症主要病原菌为葡萄球菌,其中耐甲氧西林葡萄球菌(MRS)对临床常用青霉素类和头孢类抗生素耐药,对其快速鉴定有助于合理选择治疗药物.本文介绍直接用新生儿血培养阳性培养瓶中的上层液体做头孢西丁纸片扩散法鉴定MRS的方法.
作者：黄金伟；陈丽珠；丁文杰；李永昕；吴日荷；黄建胜；李国雄 刊期： 2011年第03期
目的 制备抗人非小细胞肺癌(NSCLC)的单克隆抗体(McAb),并对其生物学特性及特异性进行鉴定.方法 以人肺腺癌细胞株SPC-A1为抗原,免疫BALB/c小鼠,常规细胞融合,间接细胞ELISA法筛选阳性细胞克隆;多种细胞间接ELISA及间接免疫荧光法鉴定其特异性;western blot分析其特异性结合抗原的相对分子量;免疫组化染色分析单抗的组织特异性.结果 得到1株高效价的、稳定分泌IgG1抗人NSCLC单抗的细胞株(NJ488-1),纯化后效价为2×10<'6>;间接细胞ELISA及间接免疫荧光法证实NJ488-1能特异地识别肺癌细胞系,其识别抗原定位于SPC-A1细胞胞浆区;western blot显示NJ488-1特异性结合的抗原相对分子量(Mr)为70 000左右;免疫组化结果 表明NJ488-1与NSCLC组织有强阳性反应.结果 成功地制备并鉴定了抗人NSCLC单抗NJ488-1,为肺癌的进一步研究及NJ488-1的临床应用奠定了基础.
作者：徐婷；潘世扬；王芳；张丽霞；黄珮琚；徐建；孙瑞红；黄蕾；夏文颖；陆雅春；耿雁；彭奠；秦雪君 刊期： 2011年第03期
目的 构建靶向信号转导及转录激活因子5(STATS)的RNAi重组质粒并进行鉴定.方法 设计针对STAT5编码区的有短发夹结构的3对DNA序列,克隆到质粒栽体Pgenesil-1中构建重组质粒,再对其进行酶切鉴定、DNA测序分析.脂质体法转染重组质粒至SMMC7721细胞株中,western-blot、RT-PCR检测STATS基因表达.结果 酶切鉴定和测序分析提示,靶向STAT5的RNAi重组质粒构建成功,3条靶向STATS的序列特异性小发夹状RNA(shRNA)可有效抑制SMMC7721细胞STATS表达,mRNA表达抑制率分别为70.43%、43.02%、45.07%,蛋白质表达抑制率分别为67.45%、37.36%、41.86%(P<0.05).其中以Pgenesil-1-STAT5Al抑制效应强.结果 成功构建靶向STATS的RNAi重组质粒,为进一步用该重组干扰栽体进行体内肿瘤基因治疗的研究奠定了基础.
作者：张丽杰；赵振军；鹿刚；单保恩 刊期： 2011年第03期
目的 了解急性肺损伤(acute lung injury,ALI)患者早期的凝血、纤溶相关指标的变化规律,评价并筛选具有临床指导价值的指标.方法 测定ALI组与健康人对照组、ALI存活亚组和病死亚组患者血浆中凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时间(APTT)、凝血酶时间(TT)、抗凝血酶活性(AT:A)、纤维蛋白原(Fib)、D-二聚体(D-D)、组织型纤溶酶原激活物(t-PA)、纤溶酶原激活物抑制剂(PAI-1)等凝血、纤溶相关指标,比较组间各指标的差异.分析凝血、纤溶相关指标与急性生理和慢性健康评分Ⅱ(APACHEⅡ)的相关性.结果 ALI组血浆PT、APTT、TT及AT:A分别为(10.6±3.8)s、(25.2±5.3)s、(10.2±3.3)s、(45±13.1)%,低于健康对照组(13.3±2.6)s、(34.5±6.2)s、(14.3±4.1)s、(95±19.2)%(P分别<0.05、0.01、0.05、0.01).AU组PAI-1、t-PA分别为(93.56±36.82)、(20.63±5.21)ng/mL高于健康人对照组(36.49±8.79)、(2.32±3.33)ng/mL(P均<0.01).存活亚组与死亡亚组D-D、PAI-1、t-PA、AT:A均有显著性差异.PAI-1、t-PA与APACHEⅡ评分呈正相关(r分别为0.672、0.653;P均<0.01);AT:A与APACHEⅡ评分呈负相关(r=-0.717,P<0.01).结果 PT、APTT、TT、AT:A、PAI-1、t-PA在ALI的发病过程中起重要作用,可作为早期诊断及指导治疗的辅助指标;AT:A、PAI-1、t-PA是评估病情严重程度的监测指标;在ALI发病早期D-D、PAI-1及t-PA升高,AT:A降低,是预后不良的预测指标.
作者：邰文琳；杨红英；秦燕春；瞿晓媛；徐益恒；王殿华 刊期： 2011年第03期
目的 观察citrin缺陷导致的新生儿肝内胆汁淤积症(NICCD)患儿的血清生化指标变化.方法 比较20例NICCD患儿和20例其他原因所致肝内胆汁淤积症患儿(非NICCD患儿)的ALT、AST、ALP及GGT等22项生化指标.结果 NICCD患儿组与非NICCD患儿组比较,ALT、AST/ALT(S/L)、ALP、LDH、GGT、TP、Alb、Glo、I-Bil、TBA、Lact存在统计学意义差异(P均<0.05);LDH和Lact具有一定的鉴别诊断价值.结果 ALT、S/L、ALP等11项生化指标对辅助NICCD诊断具有一定价值.
作者：陈凤平；吴晓蔓 刊期： 2011年第03期
目的 建立血清烯醇化酶(enolase,ENO)活性的全自动速率测定法,进行方法 学评价及初步临床应用.方法 根据烯醇化酶和丙酮酸激酶、乳酸脱氢酶及还原型辅酶I的偶联反应,在Olymbus Au5400全自动生化分析仪上用双试剂速率法测定EN0活性.结果 本方法 批内CV2.3%～3.7%,批间CV4.2%～5.6%;检测下限为0.26 U/L,线性范围0.3～88.6 U/L;溶血标本对测定有正干扰;胆红素浓度≤52 μmol/L无明显干扰;三酰甘油≤3.12 mmol/L对测定无干扰.370例健康人血清EN0活性(x±s)为(5.9±1.9)u/L.33例恶性肿瘤、44例脑挫伤及神经系统疾病患者血清EN0活性分别为(19.0±14.4)U/L、(17.1±11.4)u/L,与健康组比较差异均有统计学意义(P<0.01).结果 全自动速率法测定ENO活性,具有准确、快速、简便、低成本等优点.初步临床应用表明,恶性肿瘤、脑挫伤及神经系统疾病患者血清ENO活性增高,对临床有一定参考价值.
作者：孙建中；王雍；许联红 刊期： 2011年第03期
目的 检测1例不明原因智力低下(mental retardation,MR)患儿的基因组不平衡,寻找其致病原因.方法 经常规G显带核型分析,发现患儿核型为46,XX,del(1)(q25-q31)后运用微阵列比较基因组杂交(array-based comparative genomic hy-bridyzation,array-CGH)技术对患儿进行全基因组高分辨率扫描,对缺失区域的位置和大小作精确分析.结果 array-CGH结果 证实了患儿基因组存在一个病理性的拷贝数变异:del(1)(q25.1-q31.3)(172 832 580-193 394 460,～20.561Mb).结果 del(1)(q25.1-q31.3)是此患儿真正的致病原因;array-cGH技术具有高分辨率、高准确性等优点,有利于基因组异常的检测和临床遗传咨询.
作者：王艳；胡平；季修庆；林颖；李璃；张菁菁；周小燕；成建；马定远；曾荔；许争峰 刊期： 2011年第03期
目的 建立并评价检测人血清载脂蛋白M(apo M)浓度的双抗体夹心ELISA法.方法 用抗apo M单克隆抗体作包被抗体,辣根过氧化物酶(HRP)标记的抗apo M单克隆抗体作酶标记抗体,建立检测apo M的双抗体夹心ELISA法.检测483例体检健康者的血清apo M浓度,建立本实验室的参考值.结果 线性范围为31.3～500 ng/mL,低检测限为23.9 ng/mL;脂蛋白(a)、apo A1和apo B对apo M检测结果 干扰作用小;批内、批间变异系数(CV)均<10%;参考值为(22.1±12.1)μg/mL.结果 建立检测人血清apo M浓度的双抗体夹心ELISA法,为研究apo M的生理功能及其在脂质代谢中的作用提供了一种新的研究工具.
作者：黎照环；胡敏 刊期： 2011年第03期
目的 研究河南省结核分枝杆菌基因型别与耐药性和地区分布关系.方法 用间隔区寡核苷酸序列(spoligotyping)基因分型技术对344株结核分枝杆菌进行分型.结果 344株结核分枝杆菌分为4个基因群[Beijing和Beijing近似群(简称北京群)、T群、MRnu2群、S和LAM3群],共24个基因型,北京基因型有299株,占87.7%,但北京型与非北京型之间耐多药(MDR)株所占比例差异无统计学意义(X<'2>=1.46,P>0.05);北京基因型在≤60岁感染者中分离率占83.6%;除个别地区外,不同地区间的分布无显著性差异.结果 河南省结核分枝杆菌以北京基因型为主要流行型,与MDR和任意耐药无相关性,以≤60岁感染者居多,嵩县分离率略低.
作者：赵玉玲；赵东阳；李辉；杨洪毅；马晓光；赵国强 刊期： 2011年第03期
慢性髓细胞白血病(CML)髓外T淋巴细胞白血病急性变极为罕见,常被误诊为CML并发或继发T细胞淋巴瘤.荧光原位杂交(FISH)技术已成功地用于多发性骨髓瘤患者异常染色体的检查[1-2].本研究通过活检淋巴结组织石蜡包埋切片HE染色后识别原始细胞进行定位,脱色处理后,在同一细胞上进行FISH,识别CML髓外T淋巴细胞急性变.
作者：马金龙；陈宝安；刘苒；丁家华；高冲；姚青；王俊；程坚；赵刚；杜海珍；鲍文；宋慧慧；裴孝平；余正平 刊期： 2011年第03期
目的 探讨凋亡抑制基因livin在卵巢癌细胞中的表达及其生物学意义.方法 收集32例卵巢癌患者癌组织及相应的癌旁组织、细胞培养卵巢癌细胞系A2780,用实时荧光定量PCR和western blot分别检测组织中livin基因的mRNA和蛋白质表达;MTT法检测A2780细胞的生长率;流式细胞术检测A2780细胞的凋亡率.结果 livin mRNA和蛋白质表达在卵巢癌组织中明显高于癌旁组织(t=6.98,P<0.01;t=5.12,P<0.01);与对照组相比,转染livin siRNA组卵巢癌细胞的生长率显著减少(χ<'2>=77.21,P<0.01),细胞凋亡率呈明显增高(χ<'2>=15.68,P<0.01).结果 livin在卵巢癌的发生、发展中起重要的作用,可能成为卵巢癌治疗的新分子靶点.
作者：胡安群；刘海燕；高玲娟 刊期： 2011年第03期
临床检验杂志
主管:江苏省卫生厅
主办：江苏省医学会
