吴丽娜；秦晓松
目的 建立一种快速准确的检测结核分枝杆菌(MTB)核酸的环介导等温扩增(LAMP)方法.方法 以重复插入序列IS6110为目的基因,设计LAMP引物,特异检测MTB核酸.用本法与痰涂片抗酸染色镜检法、实时荧光PCR法对100例可疑患者痰标本进行对比检查.结果 LAMP法特异性强,仅扩增MTB复合群核酸；灵敏度高,检测限达100 fg；而实时荧光PCR检测限为1 pg.对100例疑似结核病患者痰液标本检测,涂片抗酸染色法、LAMP法、实时荧光PCR法的阳性率分别为28％、39％和38％.结论 本研究建立的LAMP方法检测MTB核酸特异性强、灵敏度高、时间短且操作简便,有望成为临床快速检测MTB的新方法.
作者：沈会平；张耀祺；杨坚；石磊；陈涛；李国周；赵红波；莫自耀 刊期： 2011年第05期
目的 建立环介导等温扩增(LAMP)技术快速检测临床标本中金黄色葡萄球菌(SA)的方法.方法 基于金黄色葡萄球菌femA基因部分序列设计一套(共4条)特异性引物,包括特异性识别靶序列上6个不同区域的两条内引物和两条外引物.通过条件优化,建立检测SA的LAMP方法.用该法检测临床分离的40株SA、12种其他革兰阳性球菌和8种革兰阴性杆菌,对方法特异性进行评价.SA标准菌株ATCC 25923进行10n稀释后测定方法的灵敏度.用LAMP方法及普通培养法检测临床60份咽拭子标本,评价方法的准确性.结果 LAMP技术佳反应温度为65℃,临床分离的40株SA检测阳性率达100％；其他菌株均无非特异性反应；低检测限14 CFU/test.以培养法为标准,LAMP试验检测60份咽拭子标本的敏感性、特异性、阳性预测值和阴性预测值为87.5％、100％、100％和98.1％.结论 LAMP技术操作简便、快速、灵敏度高、特异性强,可于60 min内快速筛查咽拭子标本中SA.
作者：史伟峰；史梅；罗光华；王玉月；张俊 刊期： 2011年第05期
目的 研究膜联蛋白5(annexin 5,A5)对坐骨神经选择性损伤引起的慢性疼痛应激致雄性SD大鼠生殖损伤的保护作用.方法 32只雄性SD大鼠随机分为4组,分别建立对照组、假手术组、手术组和手术+A5组模型.手术+A5组于术后第2天腹腔注射15μg/kg剂量的A5,其他实验组腹腔注射等量的pH 8.0 Tris-HCl,每日1次,连续21 d.分别测各组SD大鼠体重、称重睾丸和附睾,计算其脏器系数,并对附睾尾进行精子计数.HE染色观察睾丸组织结构变化.用化学发光法检测各组大鼠血清中睾酮浓度.结果 手术组大鼠与对照组相比,睾丸系数、附睾系数以及精子相对计数均降低(P＜0.05)；睾酮水平下降显著[(5.10±2.61) vs (22.40±4.30) mmol/L,P＜0.0l)]；病理切片见睾丸生精细胞与腔内精子数量明显减少.假手术组大鼠与对照组比,上述指标均无统计学差异.手术+A5组与手术组比,精子相对计数与睾酮含量[(19.67±2.02)vs(5.10±2.61) mmol/L,P＜0.01]均显著提高,其他参数均有不同程度的恢复,睾丸生精细胞与腔内精子数量减少程度显著恢复.结论 A5对慢性疼痛应激引起的生殖损伤具有一定的保护作用.
作者：林钗英；时姗姗；陶晓倩；柳海燕；靖俊；姚兵 刊期： 2011年第05期
目的 制备有免疫原性的白念珠菌果糖二磷酸醛缩酶(fructose-bisphosphate aldolase,Fba1)重组蛋白.方法 以白念珠菌C1标准株基因组DNA为模板,用PCR法扩增Fba1 DNA序列,与克隆载体pMD18-T连接、测序,再与原核表达载体pET28a(+)连接,构建成重组表达质粒pET28a(+)/Fba1,转化大肠埃希菌BL21( DE3),IPTG诱导重组融合蛋白表达,亲和层析柱纯化重组蛋白.用抗His标签的单克隆抗体鉴定融合蛋白,并用确诊为侵袭性白念珠菌病(ICAI)、且抗白念珠菌烯醇化酶抗体阳性的患者血清进行抗原性鉴定.结果 Fba1 DNA序列与GenBank中的序列一致.在大肠埃希菌中获得白念珠菌Fab1重组蛋白的高效表达,表达产物以可溶性蛋白为主,终蛋白质得率为7.6 mg/g湿菌.经免疫印迹鉴定,重组蛋白与抗His标签的单克隆抗体和确诊ICAI患者血清呈特异性反应,显示出良好的抗原反应性.结论 成功制备了具有良好抗原反应性的重组蛋白,为建立特异性诊断ICAI的新方法打下基础.
作者：陆静芬；李芳秋；史利宁；王颖 刊期： 2011年第05期
交叉配血不合的原因主要是不规则抗体或自身抗体,即抗IgG类抗体的干扰;另外,某些物质过高引起或破坏了红细胞(RBC)表面的电位差,使RBC的相对平衡状态被破坏而产生非特异性凝集时也可导致血型鉴定困难、交叉配血不合等现象.本文报告对4例交叉配血不合的原因分析.
作者：孔亚红 刊期： 2011年第05期
目的 研究我院烧伤科2010年4～6月分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)菌株耐药性及分子流行病学特点,找出流行菌株,为指导临床经验用药提供参考.方法 采用纸片扩散法(K-B法)及葡萄球菌A蛋白基因(spa)分型技术对分离的24株MRSA进行药物敏感性试验和同源性分析.结果 分离的菌株对青霉素、苯唑西林、阿莫西林/克拉维酸、亚胺培南、美罗培南全部耐药,其余抗菌药物除万古霉素外耐药率均在50％以上,未发现万古霉素耐药株.spa基因分型发现3个spa型,t030型共22株,t3226和t632型各1株,提示分离菌株具有高度的同源性.结论 我院烧伤科MRSA菌株具有多重耐药的特征,spa t030型菌株是其主要型别.
作者：师志云；赵志军；贾伟；李刚；张楠；纵帅；魏军 刊期： 2011年第05期
目的 探讨细胞色素P450 2C9基因(CYP2C9)多态性位点1075A＞C与个体间华法林稳定剂量差异的关系.方法 用实时荧光PCR结合熔解曲线分析的方法,对323例已获得华法林稳定剂量患者的CYP2C9 1075A＞C位点进行分型；比较不同基因型患者的华法林稳定剂量的差异.结果 323例患者中,CYP2C9基因型*1/*1(AA)、*1/*3(AC)和*3/*3(CC)分别有294例、28例和1例,各占91.02％、8.67％和0.31％,等位基因*1(1075A)和*3(1075C)的频率分别为95.36％和4.64％.在CYP2C9的3种基因型中,*1/*1基因型组华法林剂量(3.07±1.12)mg/d显著高于*1/*3基因型组(1.71±0.53) mg/d(F22.555,P＜O.01),*3/*3基因型患者的剂量低,仅为0.625 mg/d.结论 CYP2C9基因多态性是影响个体间华法林用量差异的一个主要遗传因素,对患者的CYP2C9 1075A＞C位点进行分型,可作为华法林个体化用药的一个重要依据.
作者：黄盛文；向道康；陈保林；黄凌；安邦权；罗振元 刊期： 2011年第05期
目的 评价Bactec MGIT 960系统自临床标本分离分枝杆菌的价值.方法 收集临床标本共578份,分别接种于Bactec MGIT 960系统和改良罗氏培养基,分离到的分枝杆菌用荧光PCR进行菌种鉴定.结果 578份临床标本中,共分离出171株分枝杆菌(29.6％).两种方法均阳性有105株,仅Bactec MGIT 960系统阳性有54株,仅罗氏培养基阳性有12株.Bactec MGIT 960系统分离率为27.5％ (159/578),罗氏培养基法为20.2％ (117/578).BactecMGIT960系统法阳性平均报告时间为10.2 d,罗氏培养基法为27.5d.Bactec MGIT 960系统法污染率为7.6％,罗氏培养基法为4.3％.结论 Bactec MGIT 960分枝杆菌检测技术是一种较好的快速分离分枝杆菌的方法,联合改良罗氏培养基可进一步提高分离率.
作者：陈晓；杨青；徐根云；孔海深 刊期： 2011年第05期
目的 以血清γ-谷氨酰基转移酶(GGT)催化活性参考方法测量不确定度评定为例,建立临床酶学催化活性测量参考方法的不确定度评定模型.方法 依据GGT参考方法测量流程,以GGT催化活性浓度为核心评价指标,确立影响GGT催化活性浓度测量的主要因素.采用实验和理论评估相结合的方法对已确认的各因素对GGT催化活性测量的影响量进行评定.以波长和温度对GGT催化活性参考方法测量影响量的评估为例,介绍基于“实验设计”的各因素对GGT参考方法测量灵敏系数的评定方法,在此基础上按GUM理论评定每一因素的相对标准不确定度并将其作为一个独立的不确定度分量按GUM理论合成到GGT测量的标准不确定度中,以标准不确定度×2得到扩展不确定度,建立GGT参考方法测量不确定度评定模型.结果 建立的GGT催化活性参考方法测量不确定度评定模型为:Cenzyme =1/ει·vreaction+vsample+vstarter/vsample·ΔA/Δt·f0·fcv.结论该不确定度评定模型适用于酶催化活性参考方法测量不确定度的评定.
作者：陈宝荣；孙慧颖；邵燕；胡滨；李月玲 刊期： 2011年第05期
目的 评价7种室间质量评价(EQA)材料和4种市售材料在9个检测系统上测定血清ALT和AST的基质效应.方法 参照美国临床实验室标准化协会( CLSI) EP14-A2指南,根据ALT和AST的参考方法建立不含磷酸吡哆醛的比对方法.9个检测系统的常规方法为待评方法.用比对方法和待评方法同时测定新鲜人血清、EQA材料及市售材料的ALT和AST水平,评价非血清样品的基质效应.结果 ALT测定中1种EQA材料对所有检测系统均表现基质效应,AST测定中2种EQA材料对所有检测系统无基质效应,其他材料视系统的不同而表现出不同的情况.结论 基质效应影响血清ALT和AST测定的准确性和可比性,应充分重视基质效应对临床检验量值溯源的影响.
作者：郑松柏；王建兵；黄宪章；马艳；庄俊华；徐宁；周华友；陈茶 刊期： 2011年第05期
目的 对1例遗传性多发性外生骨疣(hereditary multiple exostoses,EXT)家系的EXT1和EXT2基因编码序列进行突变检测,寻找引起该病的致病基因突变.方法利用与EXT1、EXT2紧密连锁的短串联重复序列(short tandem repeat,STR)对该家系进行连锁分析,确定候选基因,用PCR-测序法对候选基因的编码区及外显子与内含子交界处进行突变分析.结果 DNA测序分析发现,先证者致病基因EXT2第3外显子有一新的637G＞A无义突变,致使编码第192位的氨基酸的密码子提前出现终止密码,使编码蛋白成为只有191个氨基酸的截断型蛋白,其余外显子未发现突变.家系调查发现,该突变来自于先证者父亲.先证者EXT1基因未发现变异.结论EXT2基因637G＞A突变是导致这个家系发生多发性骨疣的分子机制.
作者：江梅；邹晶晶 刊期： 2011年第05期
羧基端糖肽( copeptin)是一种与精氨酸血管加压素(arginine vasopressin,AVP)同源且与其等摩尔分泌的稳定糖肽.copeptin的检测简便、快速,可有效地反映内源性AVP的水平.近年来,其对多种疾病预后评估和危险分层的作用成为研究的热点.本文重点阐述其在疾病诊断和预后评估方面的研究进展.
作者：潘萌萌；王辉 刊期： 2011年第05期
目的 了解新疆地区结缔组织病(CTD)患者血清中抗核抗体(ANA)荧光核型、靶抗原与CTD之间的相关性.方法 采用间接免疫荧光法(IIF)检测ANA荧光核型；采用免疫印迹法和酶免疫法检测抗核抗体谱和自身抗体.结果 新疆地区564例ANA阳性CTD患者中,ANA荧光核型有单一及复合核型.单一核型中核颗粒型多见(靶抗原依次为SSA、nRNP、Sm),其次核均质型(靶抗原依次为dsDNA、核小体和组蛋白).复合核型中,双核型以核颗粒型+核均质型,核颗粒型+胞浆颗粒型组合为主.三核型以核颗粒型+核均质型+胞浆颗粒型常见.在荧光核型、靶抗原及疾病关系分析结果中发现:SLE患者单核型以核均质和核颗粒常见,双核型以核颗粒+核均质、核颗粒+胞浆颗粒组合常见,三核型为核颗粒、核均质、胞浆颗粒同时出现.另外抗核糖体P蛋白以往引起胞浆颗粒荧光,而本研究中核颗粒型检出率为27.03％.抗着丝点抗体在SLE、原发性胆汁性肝硬化( PBC)、硬皮病及重叠综合征中均能检出.结论 新疆地区CTD患者血清ANA荧光核型呈现多样性.以核颗粒为优势核型；靶抗原SSA不仅可以引起经典的核颗粒荧光,还可呈现核均质、核仁型、胞浆颗粒型荧光.核糖体p蛋白呈现核颗粒型荧光.抗着丝点抗体具有较宽的疾病谱；SLE患者荧光核型呈现多样性,自身抗体谱广于其他自身免疫性疾病(AID).
作者：王晓东；董潇阳；刘旭；哈地丽亚；哈斯木；邓淑文 刊期： 2011年第05期
目的 建立一种五重荧光定量RT-PCR检测并鉴别流感病毒A( Flu A)、流感病毒B( Flu B)、呼吸道合胞病毒(RSV)以及新甲型H1N1流感病毒(nH1N1)的方法.方法 以人细胞RNA酶P基因为内参,用Primer Express 3.0设计PCR引物和探针.用一系列不同滴度的病毒培养物和不同来源的呼吸道病毒分别进行灵敏度和特异性分析.结果 该法灵敏度较好,可测半数组织培养感染剂量(TCID50/mL)为0.02 ～0.2的病毒量,特异性达100％,每对引物和探针只检测出相应的病毒,无交叉反应.已确诊的nH1N1、Flu B、RSV感染患者的样本用该法均成功地测出.结论 建立的五重荧光定量RT-PCR法灵敏度和特异性都较高,可检测出多种呼吸道病毒,对临床呼吸道病毒感染的诊断有一定的价值.
作者：崔大伟；郑书发；范剑；楼滨；余斐；秦志梅；邹伟华；吴英萍；陈凌晓；陈瑜 刊期： 2011年第05期
细菌性阴道病( bacterial vaginosis,BV)是育龄妇女常见的阴道感染性疾病之一.虽已有一些快速检测方法[1],但目前诊断BV仍常按Amsel标准[2].该标准操作较为繁琐,易受多种因素干扰,湿片下线索细胞不易识别,易漏检、误检,标本不易保存,不便于质量控制.Nugent计分法[3]各形态菌数量判断标准较低:每油镜视野0(-)≤1个(1+),2～5个(2+),6～30个(3+),＞30个(4+),而且未提及线索细胞.《全国临床检验操作规程》[4]中提到阴道分泌物涂片革兰染色后的细菌名称和线索细胞,但无细菌数量判断标准.本研究拟结合线索细胞对Nugent计分法进行改良(简称改良法),用于BV的临床诊断,现报道如下.
作者：黄莉；彭晓枫；谢婷婷；陈美芬；夏曙华 刊期： 2011年第05期
近年来临床实验室认可活动越来越普遍,并规定认可过程必须评定测量不确定度.临床实验室人员也逐渐认识到评定测量不确定度的重要性,但评定方法尚未完全一致.近年来关于不确定度评定的相关指南及研究性论文呈指数级增长,但应该评定“测量程序”还是评定“测量结果”的不确定度存在较大争议.二者在评定方法、报告方式和评定效果三方面都存在显著差异.本文从不确定度评定的理论和实践两方面进行了分析,认为在医学检验中评定“测量结果”的不确定度更为合理,也更有意义.
作者：王惠民；季伙燕 刊期： 2011年第05期
目的 探讨用重组苦瓜蛋白MAP30(Momordica anti-HIV protein of 30 ku)诱导人食管癌细胞株EC-1.71细胞凋亡状况.方法 MAP30诱导EC-1.71细胞后,透射电镜观察细胞凋亡的形态特征；JC-1荧光探针检测细胞线粒体膜电位(△Ψm)变化；ELISA法检测细胞培养上清液中细胞色素c(Cytc)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平；免疫细胞化学法检测细胞ERK1/PERK1,AKT/PAKT和NF-κB表达；荧光微板阅读仪检测细胞caspase-12活性.结果 MAP30诱导可以使EC-1.71细胞固缩,核膜扭曲,核染色质聚集成块并靠近核膜,内质网高度膨胀、扩张；△Ψm水平下降；Cytc和TNF-α含量增加；胞质中ERK1、AKT表达增强而胞核中PERK1、PAKT表达降低,NF-κB活性降低,caspase-12活性增强.结论 MAP30可以诱导EC-1.71细胞凋亡.
作者：韩晓红；邵世和；薛延军；陈德玉；黄河；李先茜；许化溪 刊期： 2011年第05期
目的 研究人胚胎骨髓间充质干细胞(fetal mesenchymal stem cells,FMSC)及其突变肿瘤细胞F6死亡相关蛋白激酶(death-associated protein kinase,DAPK)基因的表达及启动子区域甲基化.方法 用RT-PCR和甲基化特异性PCR( methylation-specific PCR,MS-PCR)技术对FMSC及F6细胞系DAPK基因的表达和启动子甲基化状态进行检测,并对甲基化产物测序鉴定.结果 DAPK基因在FMSC中表达而在F6中不表达.通过MS-PCR检测证实F6中DAPK基因发生甲基化,FMSC中DAPK基因发生未完全甲基化.结论 DAPK基因启动子区域发生甲基化可能是促使其基因表达下调的重要机制,在FMSC突变成F6肿瘤细胞过程中发挥重要作用.
作者：徐学静；张葵；顾光煜；钱晖；许文荣 刊期： 2011年第05期
目的 探讨结核分枝杆菌相关γ-干扰素体外释放试验(TB-IGRA)在结核病诊断中的应用价值.方法 用国产TB-IGRA试剂定量检测268例结核病患者和104例体检健康者外周血结核特异性γ-干扰素的含量,同时与澳大利亚QFT-GIT试剂和结核菌素纯化蛋白质衍生物(PPD)皮试进行平行比较分析.结果 国产TB-IGRA试剂、QFT-GIT试剂和PPD皮试3种方法的敏感性分别为90.7％、88.1％和75.4％,特异性分别为76.9％、80.8％和54.8％,阳性预测值分别为91.0％、92.2％和81.1％,阴性预测值分别为76.2％、72.4％和46.3％,准确性分别为86.8％、86.0％和69.6％.三种方法对肺结核与肺外结核的检测效果无显著差异.结论 TB-IGRA法对诊断结核病有较高的敏感性和准确性,在结核病防控中有较好的应用价值.
作者：李晓非；熊俊辉；汪亚玲；朱莉莉；吕松琴；张军 刊期： 2011年第05期
全自动血培养仪广泛用于临床,为血液感染提供了方便快速的检测方法.而脑膜炎、关节炎、心包炎等诊断有赖采用传统培养方法(固体培养基如血平板或巧克力平板培养,或使用脑心浸液增菌)作体液培养,病原菌检出率较低.有作者推荐使用血培养仪进行体液的病原菌培养,对此本文作总结和讨论.
作者：鲁炳怀；时琰丽；朱凤霞 刊期： 2011年第05期
临床检验杂志
主管:江苏省卫生厅
主办：江苏省医学会
