王晓东；董潇阳；刘旭；哈地丽亚；哈斯木；邓淑文
目的 制备嗜酸性粒细胞阳离子蛋白(eosinophilia cationic protein,ECP)双抗体夹心ELISA法检测试剂盒.方法 葡萄球菌A蛋白亲和层析法纯化抗ECP单克隆抗体,过碘酸钠法进行抗ECP多克隆抗体HRP标记,制备ELISA试剂盒,进行条件优化和实验效能评价,检测过敏性皮肤病患者ECP水平.结果 通过对各种反应条件的优化,确定了适工作条件:单抗适包被浓度为1:500稀释,酶标多抗适浓度为1:8000稀释,适血清稀释液为稀释液Ⅱ(0.01 mol/L PBS,0.1％ Tween 20,0.1％溴化十六烷基三甲基铵,2.0 g/L小牛血清清蛋白,20 mmol/L乙二胺四乙酸),佳反应时间为60 min,反应温度为37℃；本研究制备的试剂盒线性范围为2.5 ～ 200 ng/mL,灵敏度为2.75 ng/mL,相对偏差为11.5％,批内变异系数(CV)＜10％,批间CV＜ 15％,与美国ADL试剂盒比较相关系数(r)为0.97,本试剂盒天津地区居民的正常参考值为(9.0±3.7)ng/mL.过敏性皮肤病患者ECP水平与健康人差异具统计学意义.结论 该双抗体夹心ELISA检测ECP试剂盒具有灵敏度高、特异性好、操作简便等优点,可在临床上广泛应用,为过敏性疾病的诊治提供依据.
作者：赵俊芳；王学谦；李桂珍；李会强 刊期： 2011年第05期
羧基端糖肽( copeptin)是一种与精氨酸血管加压素(arginine vasopressin,AVP)同源且与其等摩尔分泌的稳定糖肽.copeptin的检测简便、快速,可有效地反映内源性AVP的水平.近年来,其对多种疾病预后评估和危险分层的作用成为研究的热点.本文重点阐述其在疾病诊断和预后评估方面的研究进展.
作者：潘萌萌；王辉 刊期： 2011年第05期
目的 探讨载脂蛋白A5(apoA5)c553G/T基因多态性与代谢综合征(MS)的相关性.方法 用聚合酶链反应限制性片段长度多态性(PCR-RFLP)分析apoA5 c533G/T位点多态性在203例MS患者和216名体检健康者中的分布,并用酶法检测其血脂和血糖水平.结果 c553T等位基因在高三酰甘油(TG)血症人群中的分布频率明显高于健康对照组(P＜0.05).Logistic回归分析显示,apoA5 c553T等位基因对MS高TG血症(OR=3.380,P＜0.05)具有独立的影响.MS组和健康对照组apoA5 c553TT纯合子及GT杂合子个体比GG纯合子个体具有高TG水平.结论 apoA5 c553G/T基因多态性与血浆TG具有相关性,apoA5 c553T等位基因可能为MS的危险因素.
作者：丁妍；来名安；朱静；卢智勇；袁雅红；王小莉；李东升 刊期： 2011年第05期
目的 研究我院烧伤科2010年4～6月分离的耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)菌株耐药性及分子流行病学特点,找出流行菌株,为指导临床经验用药提供参考.方法 采用纸片扩散法(K-B法)及葡萄球菌A蛋白基因(spa)分型技术对分离的24株MRSA进行药物敏感性试验和同源性分析.结果 分离的菌株对青霉素、苯唑西林、阿莫西林/克拉维酸、亚胺培南、美罗培南全部耐药,其余抗菌药物除万古霉素外耐药率均在50％以上,未发现万古霉素耐药株.spa基因分型发现3个spa型,t030型共22株,t3226和t632型各1株,提示分离菌株具有高度的同源性.结论 我院烧伤科MRSA菌株具有多重耐药的特征,spa t030型菌株是其主要型别.
作者：师志云；赵志军；贾伟；李刚；张楠；纵帅；魏军 刊期： 2011年第05期
目的 以血清γ-谷氨酰基转移酶(GGT)催化活性参考方法测量不确定度评定为例,建立临床酶学催化活性测量参考方法的不确定度评定模型.方法 依据GGT参考方法测量流程,以GGT催化活性浓度为核心评价指标,确立影响GGT催化活性浓度测量的主要因素.采用实验和理论评估相结合的方法对已确认的各因素对GGT催化活性测量的影响量进行评定.以波长和温度对GGT催化活性参考方法测量影响量的评估为例,介绍基于“实验设计”的各因素对GGT参考方法测量灵敏系数的评定方法,在此基础上按GUM理论评定每一因素的相对标准不确定度并将其作为一个独立的不确定度分量按GUM理论合成到GGT测量的标准不确定度中,以标准不确定度×2得到扩展不确定度,建立GGT参考方法测量不确定度评定模型.结果 建立的GGT催化活性参考方法测量不确定度评定模型为:Cenzyme =1/ει·vreaction+vsample+vstarter/vsample·ΔA/Δt·f0·fcv.结论该不确定度评定模型适用于酶催化活性参考方法测量不确定度的评定.
作者：陈宝荣；孙慧颖；邵燕；胡滨；李月玲 刊期： 2011年第05期
目的 研究人胚胎骨髓间充质干细胞(fetal mesenchymal stem cells,FMSC)及其突变肿瘤细胞F6死亡相关蛋白激酶(death-associated protein kinase,DAPK)基因的表达及启动子区域甲基化.方法 用RT-PCR和甲基化特异性PCR( methylation-specific PCR,MS-PCR)技术对FMSC及F6细胞系DAPK基因的表达和启动子甲基化状态进行检测,并对甲基化产物测序鉴定.结果 DAPK基因在FMSC中表达而在F6中不表达.通过MS-PCR检测证实F6中DAPK基因发生甲基化,FMSC中DAPK基因发生未完全甲基化.结论 DAPK基因启动子区域发生甲基化可能是促使其基因表达下调的重要机制,在FMSC突变成F6肿瘤细胞过程中发挥重要作用.
作者：徐学静；张葵；顾光煜；钱晖；许文荣 刊期： 2011年第05期
目的 探讨细胞色素P450 2C9基因(CYP2C9)多态性位点1075A＞C与个体间华法林稳定剂量差异的关系.方法 用实时荧光PCR结合熔解曲线分析的方法,对323例已获得华法林稳定剂量患者的CYP2C9 1075A＞C位点进行分型；比较不同基因型患者的华法林稳定剂量的差异.结果 323例患者中,CYP2C9基因型*1/*1(AA)、*1/*3(AC)和*3/*3(CC)分别有294例、28例和1例,各占91.02％、8.67％和0.31％,等位基因*1(1075A)和*3(1075C)的频率分别为95.36％和4.64％.在CYP2C9的3种基因型中,*1/*1基因型组华法林剂量(3.07±1.12)mg/d显著高于*1/*3基因型组(1.71±0.53) mg/d(F22.555,P＜O.01),*3/*3基因型患者的剂量低,仅为0.625 mg/d.结论 CYP2C9基因多态性是影响个体间华法林用量差异的一个主要遗传因素,对患者的CYP2C9 1075A＞C位点进行分型,可作为华法林个体化用药的一个重要依据.
作者：黄盛文；向道康；陈保林；黄凌；安邦权；罗振元 刊期： 2011年第05期
目的 对1例遗传性多发性外生骨疣(hereditary multiple exostoses,EXT)家系的EXT1和EXT2基因编码序列进行突变检测,寻找引起该病的致病基因突变.方法利用与EXT1、EXT2紧密连锁的短串联重复序列(short tandem repeat,STR)对该家系进行连锁分析,确定候选基因,用PCR-测序法对候选基因的编码区及外显子与内含子交界处进行突变分析.结果 DNA测序分析发现,先证者致病基因EXT2第3外显子有一新的637G＞A无义突变,致使编码第192位的氨基酸的密码子提前出现终止密码,使编码蛋白成为只有191个氨基酸的截断型蛋白,其余外显子未发现突变.家系调查发现,该突变来自于先证者父亲.先证者EXT1基因未发现变异.结论EXT2基因637G＞A突变是导致这个家系发生多发性骨疣的分子机制.
作者：江梅；邹晶晶 刊期： 2011年第05期
目的 探讨用重组苦瓜蛋白MAP30(Momordica anti-HIV protein of 30 ku)诱导人食管癌细胞株EC-1.71细胞凋亡状况.方法 MAP30诱导EC-1.71细胞后,透射电镜观察细胞凋亡的形态特征；JC-1荧光探针检测细胞线粒体膜电位(△Ψm)变化；ELISA法检测细胞培养上清液中细胞色素c(Cytc)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的水平；免疫细胞化学法检测细胞ERK1/PERK1,AKT/PAKT和NF-κB表达；荧光微板阅读仪检测细胞caspase-12活性.结果 MAP30诱导可以使EC-1.71细胞固缩,核膜扭曲,核染色质聚集成块并靠近核膜,内质网高度膨胀、扩张；△Ψm水平下降；Cytc和TNF-α含量增加；胞质中ERK1、AKT表达增强而胞核中PERK1、PAKT表达降低,NF-κB活性降低,caspase-12活性增强.结论 MAP30可以诱导EC-1.71细胞凋亡.
作者：韩晓红；邵世和；薛延军；陈德玉；黄河；李先茜；许化溪 刊期： 2011年第05期
目的 研究膜联蛋白5(annexin 5,A5)对坐骨神经选择性损伤引起的慢性疼痛应激致雄性SD大鼠生殖损伤的保护作用.方法 32只雄性SD大鼠随机分为4组,分别建立对照组、假手术组、手术组和手术+A5组模型.手术+A5组于术后第2天腹腔注射15μg/kg剂量的A5,其他实验组腹腔注射等量的pH 8.0 Tris-HCl,每日1次,连续21 d.分别测各组SD大鼠体重、称重睾丸和附睾,计算其脏器系数,并对附睾尾进行精子计数.HE染色观察睾丸组织结构变化.用化学发光法检测各组大鼠血清中睾酮浓度.结果 手术组大鼠与对照组相比,睾丸系数、附睾系数以及精子相对计数均降低(P＜0.05)；睾酮水平下降显著[(5.10±2.61) vs (22.40±4.30) mmol/L,P＜0.0l)]；病理切片见睾丸生精细胞与腔内精子数量明显减少.假手术组大鼠与对照组比,上述指标均无统计学差异.手术+A5组与手术组比,精子相对计数与睾酮含量[(19.67±2.02)vs(5.10±2.61) mmol/L,P＜0.01]均显著提高,其他参数均有不同程度的恢复,睾丸生精细胞与腔内精子数量减少程度显著恢复.结论 A5对慢性疼痛应激引起的生殖损伤具有一定的保护作用.
作者：林钗英；时姗姗；陶晓倩；柳海燕；靖俊；姚兵 刊期： 2011年第05期
目的 制备有免疫原性的白念珠菌果糖二磷酸醛缩酶(fructose-bisphosphate aldolase,Fba1)重组蛋白.方法 以白念珠菌C1标准株基因组DNA为模板,用PCR法扩增Fba1 DNA序列,与克隆载体pMD18-T连接、测序,再与原核表达载体pET28a(+)连接,构建成重组表达质粒pET28a(+)/Fba1,转化大肠埃希菌BL21( DE3),IPTG诱导重组融合蛋白表达,亲和层析柱纯化重组蛋白.用抗His标签的单克隆抗体鉴定融合蛋白,并用确诊为侵袭性白念珠菌病(ICAI)、且抗白念珠菌烯醇化酶抗体阳性的患者血清进行抗原性鉴定.结果 Fba1 DNA序列与GenBank中的序列一致.在大肠埃希菌中获得白念珠菌Fab1重组蛋白的高效表达,表达产物以可溶性蛋白为主,终蛋白质得率为7.6 mg/g湿菌.经免疫印迹鉴定,重组蛋白与抗His标签的单克隆抗体和确诊ICAI患者血清呈特异性反应,显示出良好的抗原反应性.结论 成功制备了具有良好抗原反应性的重组蛋白,为建立特异性诊断ICAI的新方法打下基础.
作者：陆静芬；李芳秋；史利宁；王颖 刊期： 2011年第05期
目的 用PCR检测体外诱导的万古霉素耐药金黄色葡萄球菌(VRSA)的耐药基因vanA,探讨体外诱导VRSA对万古霉素耐药机制.方法 用万古霉素体外诱导将1株异质性VRSA逐步诱导为VRSA;检测金黄色葡萄球菌特异性nuc基因和万古霉素耐药基因vanA.结果 基因检测发现VRSA菌株均不含vanA基因.结论 VRSA不含vanA基因,故细胞壁增厚是导致金黄色葡萄球菌对万古霉素耐药的主要机制.
作者：张涛；马筱玲；戴媛媛；鲁怀伟；陈多炎 刊期： 2011年第05期
多发性骨髓瘤(MM)细胞和浆细胞包涵体的名称和形态学描述尚不一致,给初学者和临床诊断带来一定困难,为此我们结合临床实践及国内外文献对浆细胞包涵体名称和形态学特点作一阐述.1包涵体的形成与名称Kanoh等[1]将包涵体的形成分为4类:(1)来源于免疫球蛋白;(2)属于淀粉样蛋白;(3)由溶酶体颗粒组成;(4)不属于以上3种类型.Tkachuk[2]认为,骨髓瘤细胞或浆细胞胞质中如存在多个小空泡称为Mott细胞;含有的体积大的同质性球状包涵体为Russel小体;胞核中包涵体称为Dutcher小体.
作者：史敏；李顺义 刊期： 2011年第05期
全自动血培养仪广泛用于临床,为血液感染提供了方便快速的检测方法.而脑膜炎、关节炎、心包炎等诊断有赖采用传统培养方法(固体培养基如血平板或巧克力平板培养,或使用脑心浸液增菌)作体液培养,病原菌检出率较低.有作者推荐使用血培养仪进行体液的病原菌培养,对此本文作总结和讨论.
作者：鲁炳怀；时琰丽；朱凤霞 刊期： 2011年第05期
系统性红斑狼疮(systemic lupus erythematosus,SLE)是一种慢性自身免疫性疾病,患者体内往往存在多种自身抗体,病因未明.研究表明,遗传因素在SLE发病机制、临床症状及相关自身抗体的产生等方面都起重要作用.疾病分布和临床表现存在种族差异[1],与白种人比,亚洲人SLE发病率(每10万名女性中约有100名患者)高[2].
作者：李萍；李永哲 刊期： 2011年第05期
细菌性阴道病( bacterial vaginosis,BV)是育龄妇女常见的阴道感染性疾病之一.虽已有一些快速检测方法[1],但目前诊断BV仍常按Amsel标准[2].该标准操作较为繁琐,易受多种因素干扰,湿片下线索细胞不易识别,易漏检、误检,标本不易保存,不便于质量控制.Nugent计分法[3]各形态菌数量判断标准较低:每油镜视野0(-)≤1个(1+),2～5个(2+),6～30个(3+),＞30个(4+),而且未提及线索细胞.《全国临床检验操作规程》[4]中提到阴道分泌物涂片革兰染色后的细菌名称和线索细胞,但无细菌数量判断标准.本研究拟结合线索细胞对Nugent计分法进行改良(简称改良法),用于BV的临床诊断,现报道如下.
作者：黄莉；彭晓枫；谢婷婷；陈美芬；夏曙华 刊期： 2011年第05期
早在18世纪就有关于不确定度的论述,到上世纪60年代,人们对检测结果质量的科学表达越来越关注,测量不确定度的概念逐渐为测量人员重视并有所应用.1995年7个国际组织制定的《测量不确定度表达指南》(GUM)[1]的发表,使对测量不确定度的要求快速进入相关的技术标准.
作者：吕京 刊期： 2011年第05期
目的 探讨Ⅰ类MHC链相关蛋白(MICA)在妇科恶性肿瘤中的表达,并分析其与临床病理参数的关系及临床应用价值.方法 用ELISA法对58名确诊妇科恶性肿瘤患者和98名体检健康者进行血清可溶性MICA(sMICA)浓度检测,分析其表达水平与肿瘤病理参数间关系.用ROC曲线对sMICA结果进行分析与评价.结果 妇科恶性肿瘤患者血清中sMICA水平为0.79(0.52,1.28) ng/mL,对照组为为0.32(0.18,0.47) ng/mL,两者具有显著性差异(U=-0.673,P＜0.01).除FIGO分期Ⅲ～Ⅳ期组患者血清sMICA水平与Ⅰ～Ⅱ期组相比有统计学差异(U1.98,P≤0.05)外,疾病类型、肿瘤浸润程度、肿瘤分化程度及组织类型各组间无显著性差异(P＞0.05).临界值为0.302 ng/mL时,对妇科恶性肿瘤诊断的ROC曲线下面积( AUCROC)为0.816,敏感性为0.847,特异性为0.718.结论 血清中sMICA表达水平与妇科恶性肿瘤的发生密切相关,以sMICA 0.302 ng/mL为临界值,有助于妇科恶性肿瘤的诊断.
作者：谭菌；黄颖烽；杨劭宇；罗宏图；周泰成 刊期： 2011年第05期
目的 评价Bactec MGIT 960系统自临床标本分离分枝杆菌的价值.方法 收集临床标本共578份,分别接种于Bactec MGIT 960系统和改良罗氏培养基,分离到的分枝杆菌用荧光PCR进行菌种鉴定.结果 578份临床标本中,共分离出171株分枝杆菌(29.6％).两种方法均阳性有105株,仅Bactec MGIT 960系统阳性有54株,仅罗氏培养基阳性有12株.Bactec MGIT 960系统分离率为27.5％ (159/578),罗氏培养基法为20.2％ (117/578).BactecMGIT960系统法阳性平均报告时间为10.2 d,罗氏培养基法为27.5d.Bactec MGIT 960系统法污染率为7.6％,罗氏培养基法为4.3％.结论 Bactec MGIT 960分枝杆菌检测技术是一种较好的快速分离分枝杆菌的方法,联合改良罗氏培养基可进一步提高分离率.
作者：陈晓；杨青；徐根云；孔海深 刊期： 2011年第05期
近年来临床实验室认可活动越来越普遍,并规定认可过程必须评定测量不确定度.临床实验室人员也逐渐认识到评定测量不确定度的重要性,但评定方法尚未完全一致.近年来关于不确定度评定的相关指南及研究性论文呈指数级增长,但应该评定“测量程序”还是评定“测量结果”的不确定度存在较大争议.二者在评定方法、报告方式和评定效果三方面都存在显著差异.本文从不确定度评定的理论和实践两方面进行了分析,认为在医学检验中评定“测量结果”的不确定度更为合理,也更有意义.
作者：王惠民；季伙燕 刊期： 2011年第05期
临床检验杂志
主管:江苏省卫生厅
主办：江苏省医学会
