学术投稿

GGT Ⅱ特异膜免疫吸附检测法的建立

李军;魏曙亚;燕林青;候蓉;原荣;苗爱莲;王香林

关键词:肝细胞癌, γ-谷氨酰转肽酶同功酶Ⅱ, 免疫膜吸附测定
摘要:目的使用特异性抗体和植物血凝素(PHA)建立γ-谷氨酰转肽酶同功酶Ⅱ(γ-glutamyltranspeptidase isoenzymesⅡ,GGTⅡ)特异膜免疫吸附检测法,探讨其对肝细胞癌(HCC)的临床价值.方法从HCC患者血清中提取、分离、纯化GGTⅡ,经神经氨酸酶(NMD)消化后,制备GGTⅡ特异性抗体,将纯化的特异性抗体(anti-GGTⅡ)、NMD和PHA吸附并固定到硝酸纤维素膜上,对HCC及其相关疾病患者血清中GGTⅡ进行定性检测.结果本法检测HCC阳性率达86.6%,特异性为95.7%;对直径小于5 cm的HCC检测阳性率达60.6%,对AFP阴性或低浓度的HCC患者检测阳性率为66.2%.结论GGTⅡ特异膜免疫吸附检测法可作为AFP的补充用于HCC的辅助诊断和早期发现.有简便快速、微量灵敏和价格低廉的特点.
临床检验杂志相关文献
  • 重症监护病房感染的病原菌分析

    目的了解ICU感染的病原菌特点及耐药性,为临床经验性用药提供参考依据.方法对本院住ICU的病人标本中检出的病原菌进行统计分析.结果352份阳性标本中革兰阴性杆菌140株占39.8%,其中鲍曼不动杆菌的检出率占首位(28.1%),铜绿假单胞菌次之(9.7%);革兰阳性球菌127株占36.1%,其中金黄色葡萄球菌的检出率占首位(21.9%),表皮葡萄球菌和屎肠球菌次之(均为6.5%);各类真菌85株占24.1%.标本来源以痰为主(86.1%).结论加强ICU感染的病原菌检测非常必要,可指导临床合理用药.

    作者:朱建一;潘宇红 刊期: 2004年第05期

  • 密闭式粪便标本收集管的设计与制作

    我们设计与制作了一种集采样、运输、检验和保存于一体的粪便标本收集管,经过20多个医院应用,得到了临床、检验工作人员和病员的充分肯定.1设计与制作用食品级聚乙烯为原料,制作形状如图1所示.尖底管状结构,分为三个部件:尖底离心管、管盖和椎状小勺.小勺固定在管盖上.管高98 mm,大管径15 mm,管内容积12 ml,椎状小勺容积0.1 ml,管璧厚度1 mm.见图1a.

    作者:蔡美珠;王开正;邓正华 刊期: 2004年第05期

  • 人心肌肌钙蛋白Ⅰ化学发光免疫分析方法的建立

    目的建立检测人心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnI)化学发光免疫分析方法.方法用重组cTnI免疫新西兰兔获得抗体,经DEAE-23层析和(NH4)2SO4沉淀纯化后,用碳化二亚胺(EDC)法标记辣根过氧化物酶,Sephadex G-200纯化.优化鲁米诺-H2O2-肉桂酸发光体系,建立了cTnI化学发光免疫分析法.用该法检测138例正常人及病人血清标本,确定正常值参考范围,并与肌ISA法比较.结果所得抗体的滴度为1:8 000.优化后的发光体系为:鲁米诺(4.5 mmol/L),H2O2(7.5 mmol/L),四苯硼钠(0.8 mmol/L),肉桂酸(0.4 mmol/L),比单独用肉桂酸或四苯硼钠作增强剂灵敏度分别增加了1.19和1.05倍.本法检测灵敏度为0.2 ng/ml,线性范围为0.4~50 ng/ml,批内CV平均9.0%,批间CV平均11.8%,回收率为104.2%.Hb浓度在0~50 nmol/L,T-Bil在0~15μmol/L,TG在0~2.0 mmol/L对测定结果无影响.与ELISA比较,两法结果一致(P>0.05),相关系数r=0.9852(P<0.01).用BioCheck标准品为校正物,确定临床诊断参考范围为<2.12 ng/ml,诊断符合率为96.2%.结论建立的cTnI化学发光免疫分析法可常规用于临床检验.

    作者:吴国球;劳心珍;孙宏伟;黄立新;张粉梅;钱娟英;卢惠霞 刊期: 2004年第05期

  • 全自动酶偶联法测定腺苷脱氨酶

    目的建立全自动测定腺苷脱氨酶(ADA)的酶偶联分光光度法.方法用酶联比色法对pH值、腺苷浓度等反应条件及各种实验参数进行研究.用该法测定了90例健康者的血清样本及99例胸腹水的ADA活性.结果该法低检出限为1.7 U/L,线性范围可达220 U/L(r=0.9989),批内CV为2.9%~5.4%,批间CV为4.7%~6.4%,回收率为99.7%.胆红素<136.8μmol/L,血红蛋白<3.5g/L,抗坏血酸<284μmol/L和三酰甘油<9.03mmol/L的情况下,对测定结果无显著性影响.结论本法灵敏度高,线性、精密度好,结果准确,干扰少,且操作简便快速,适用于全自动生化分析仪分析.

    作者:周美霞;管茶英;陈肖燕 刊期: 2004年第05期

  • 放射土壤杆菌致泌尿系感染1例

    从1例88岁男性、急性泌尿系感染患者尿中,连续两次培养出放射土壤杆菌,报道如下.1细菌生物学特性接种羊血平板35℃过夜,生长菌落呈针尖状,透明、湿润、光滑、边缘整齐,不溶血.原划线处菌苔呈水滴状,48 h后菌落中等大小,麦康凯和尿定位平板上菌落生长良好.

    作者:李平;潘玫;孙贞 刊期: 2004年第05期

  • 铜绿假单胞菌高活性β-内酰胺酶检测及耐药性分析

    我们用改良三维法,检测了141株铜绿假单胞菌的高产AmpC-β内酰胺酶和超广谱-β内酰胺酶(ESBLs),并对其耐药表型及耐药机制进行分析,报告如下.

    作者:刘金波;何海明;周宁;王金富 刊期: 2004年第05期

  • HBsAg 阴性的慢性乙型肝炎患者病毒血症水平与临床的关系

    HBsAg阴性的HBV感染发生率约占乙型肝炎患者的10%~25%[1].此种HBsAg阴性的HBV感染是临床不明原因慢性肝炎的常见病因[2].为探讨HBsAg阴性慢性乙型肝炎患者病毒血症水平状况及其与临床的关系,重叠HCV感染时的影响,我们对44例HBsAg阴性慢性乙型肝炎患者血清HBV标志物(HBVM)及HBV DNA含量、肝内HBcAg表达进行了检测,并与肝组织病理学结果比较,报告如下.

    作者:刘晓梅;张世兰 刊期: 2004年第05期

  • 生物薄片法对不育患者血清抗精子抗体分析及其临床应用

    目的了解不育患者血清抗精子抗体(AsAb)的类型及其吸附精子部位的分布情况,探讨AsAb定位检测在体外受精筛选中的临床应用.方法采用德国欧蒙公司生产的生物薄片试剂盒(间接免疫荧光法)对来我院就诊的1678例不育患者血清进行AsAB检测.结果AsAb总阳性率为7.63%;其中IgM占42.2%,IgG占46.1%,两者同时存在的占8.6%,IgA占3.1%;抗头部的(包括抗头尾部和抗头体尾部)占62.5%,抗体部的未见,抗尾部的占36.7%,抗体尾部的占0.8%.IgM类抗头部的(包括抗头尾部)占84.6%,IgG类抗尾部的占65.7%,IgA类抗头部的占100%.结论血清AsAb类型以IgM和IgG为主,吸附部位以抗头部为主,IgM以抗头部为主,而IgG以抗尾部为主,AsAb定位检测对体外受精治疗者的筛选有独特的价值.

    作者:夏乾峰;覃西;钱士匀 刊期: 2004年第05期

  • Sysmex SE-9000全自动血液分析仪性能的评价

    目的对Sysmex SE-9000+HPC(简称SE-9000+HPC)全自动血液分析仪进行系统评价.方法以国际血液学标准化委员会(ICSH)和美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)制定的评价标准对其性能进行评价,同时对其全血细胞计数(CBC)的参考范围进行测定.结果SE-9000+HPC各项指标的线性良好(r>0.995),在室温或4℃条件下至少可稳定48 h;不精密度的CV均<5%;各参数的携带污染率低(<0.01%);其测定结果与ICSH推荐的参考方法及CD-1600血细胞分析仪结果间相关性均较好(r>0.97);高胆红素及高血脂对CBC各参数基本无干扰(P>0.05);与手工法对943例白细胞分类(DC)结果比较,二者嗜中性粒细胞(N)、淋巴细胞(L)、嗜酸性粒细胞(E)、单核细胞(M)及嗜碱性粒细胞(B)的r分别为0.922、0.923、0.853、0.565和0.182;SE-9000+HPC对DC的敏感性、特异性及总有效性分别为85.2%、65.5%和73.4%;对276例DC异常标本的原始细胞及幼稚粒/红细胞筛选的总有效性≥75%;除RBC、Hb及HCT外,843例健康成人的CBC各项指标间无性别差异(P>0.05).结论SE-9000+HPC各方面性能良好,测定CBC参数快速、准确、精密、可靠、过筛能力强,是一种大中型医院实验室对大批量全血标本的CBC与DC进行快速而有效筛检的全自动血液分析仪.

    作者:彭黎明;府伟灵;高行军 刊期: 2004年第05期

  • 胎儿骨髓间质干细胞与细胞因子对脐血CD34+细胞扩增作用

    目的探讨胎儿骨髓间质干细胞对CD34+细胞体外扩增的造血支持作用.方法体外分离、纯化胎儿骨髓间质干细胞;Mini-MACS免疫磁珠分选3份脐血CD34+细胞;建立胎儿骨髓间质干细胞与CD34+细胞共培养体系:第1组为单独CD34+细胞培养,第2组为胎儿骨髓间质干细胞+CD34+细胞共培养,第3组为细胞因子(干细胞因子,白细胞介素-3,Flt3配体,血小板生成素)+CD34+细胞共培养,第4组为胎儿骨髓间质干细胞+细胞因子+CD34+细胞共培养.用流式细胞仪检测不同培养时间的CD34+细胞.结果胎儿骨髓间质干细胞表达CD29,CD44;免疫磁珠分选CD34+细胞的平均纯度为97.4%;胎儿骨髓间质干细胞+CD34+细胞共培养28 d,有核CD34+细胞仍占有核细胞的6.43%;CD34+细胞在胎儿骨髓间质干细胞、细胞因子作用下培养28 d,有核细胞总数、CD34+细胞数分别被扩增1.65×105倍、788倍.结论胎儿骨髓间质干细胞可有效扩增脐血造血干/祖细胞.

    作者:胡嘉波;许文荣;毛飞;朱伟;孙晓春;钱晖;许化溪 刊期: 2004年第05期

  • 2种方法检测结核分枝杆菌对10种药物耐药性的比较

    目的探讨应用比例法检测结核分枝杆菌耐药性的可行性及可比性.方法用比例法和绝对浓度法分别检测240株结核分枝杆菌对异烟肼(INH)、链霉素(SM)、乙胺丁醇(EMB)、利福平(RFP)、乙硫异烟胺(TH1321)、对氨基水杨酸(PAS)、丁胺卡那(AN)、卡那霉素(KM)、氧氟沙星(OFLX)、卷曲霉素(CPM)的耐药性.结果SM、RFP、CPM、PAS、AN、KM绝对浓度法和比例法检出的耐药率无显著性差异,而INH、EMB、TH1321、OFLX用比例法测试耐药率均明显高于绝对浓度法(P<0.01),两法药敏结果INH、SM、EMB、RFP、TH1321、CPM、AN、KM、OFLX和PAS的符合率分别为:81.7%、90.8%、83.8%、97.9%、83.3%、94.2%、97.5%、95.4%、83.3%、92.5%.结论比例法和绝对浓度法耐药率的差别主要与选定的药物临界浓度有关.

    作者:赵玉玲 刊期: 2004年第05期

  • 实时荧光RT-PCR检测喉鳞状细胞癌组织端粒酶逆转录酶mRNA

    目的建立一种实时荧光逆转录多聚酶链反应(RT-PCR),检测喉鳞状细胞癌组织人端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA表达水平,并与传统的RT-PCR进行比较.方法采用TriZOL提取总RNA并将mRNA逆转录成cDNA,然后利用TaqMan技术定量检测喉鳞状细胞癌组织hTERT mRNA.结果实时荧光RT-PCR检测癌组织的阳性率为97.06%,癌旁组织的阳性率为38.24%,差异显著(x2=24.25,P<0.005),与癌旁组织比较,喉鳞状细胞癌组织hTERT mRNA表达水平平均上升17.88倍;传统的RT-PCR检测喉鳞状细胞癌组织和癌旁组织的阳性率分别为73.53%和11.77%,均显著低于实时荧光RT-PCR的阳性率(P<0.01).结论实时荧光RT-PCR是检测喉癌组织hTERT mRNA水平的一种快速有效、灵敏度和特异性更高的方法,hTERT mRNA表达的上调可能是导致喉鳞状细胞癌发生的重要因素.

    作者:李一荣;吴健民;黄翔;陈凤花;时杰;胡丽华 刊期: 2004年第05期

  • 硫氰酸汞试剂对含有还原型辅酶Ⅱ尿素试剂的交叉污染分析

    全自动生化分析仪存在交叉污染现象的报道较多,但以往报道多见于试剂成分含有高浓度测试物质,通过试剂针携带污染对后面的测试项目造成正误差[1-2].我们在工作中发现硫氰酸汞试剂(测定氯离子)对含有还原型辅酶Ⅱ的尿素试剂存在交叉污染,且对尿素测定造成较大负误差.现将结果报告如下.

    作者:李浩;秦晓燕;刘明琴 刊期: 2004年第05期

  • 脑转移瘤患者脑脊液半胱氨酸蛋白酶抑制剂C变化的临床意义

    目的探讨脑脊液半胱氨酸蛋白酶抑制剂(cystatin C)对脑转移瘤的诊断价值.方法采用速率散射比浊法对27例脑转移瘤患者和20例正常对照进行脑脊液中cystatin C、β2-微球蛋白(β2-MG)和白蛋白(Alb)含量测定.结果患者组脑脊液中cystatin C浓度[(1.25±0.43)mg/L]显著低于对照组[(2.81±0.77)mg/L](P<0.05),β2-MG浓度[(3.18±0.67)mg/L]显著高于对照组[(1.01±0.32)mg/L](P<0.05),Alb浓度[(325.7±41.5)mg/L]显著高于对照组[(185.5±25.8)mg/L](P<0.01);三项检测指标的特异性无显著性差异(P>0.05),cystatin C、Alb检测的敏感性均显著高于β2-MG(P<0.05),cystatin C与Alb检测的敏感性无显著性差异(P>0.05).结论脑脊液cystatin C浓度检测对于脑转移瘤的诊断是一个较好的指标.

    作者:马荣红;温小波;崔天盆;吴健民 刊期: 2004年第05期

  • 人-鼠嵌合抗人组织蛋白酶B抗体体外抑制组织蛋白酶B活性的试验

    目的体外试验人-鼠嵌合抗人组织蛋白酶B(抗Cat B)抗体对Cat B的抑制作用.方法培养1株分泌人-鼠嵌合抗人Cat B抗体细胞,收集细胞培养上清,分离纯化人-鼠嵌合抗人Cat B抗体,用于体外抑制Cat B活性试验.结果该抗体在体外能抑制Cat B活性.结论抗Cat B抗体能特异结合Cat B并抑制其酶活性,将可能用于Cat B过度表达的癌症治疗.

    作者:樊晓晖;Kopitar-Jerala Natasa;Premzl Ales;Kos Janko 刊期: 2004年第05期

  • 过氧化物酶染色鉴别尿细胞管型

    由于管型中各种细胞常发生不同程度的变性,在光学显微镜下正确鉴别常常比较困难,我们采用过氧化物酶染色方法可较好地鉴别管型中的细胞成分[1-2].

    作者:金浩 刊期: 2004年第05期

  • 一种快速简便的SARS冠状病毒RNA提取方法

    目的建立快速简便的SARS冠状病毒RNA提取方法.方法采用异硫氰酸胍-玻璃粉法提取病毒RNA,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测SARS冠状病毒RNA.结果24例SARS患者的粪便和痰液标本同时采用异硫氰酸胍-玻璃粉法和QIAGEN公司的试剂盒提取SARS冠状病毒RNA,其粪便标本RT-PCR的阳性率分别为83.3%(20/24)和100-0%(24/24);痰液标本RT-PCR的阳性率分别为16.7%(4/24)和20.8%(5/24).异硫氰酸胍-玻璃粉法RT-PCR的阳性率与洗脱温度有关.结论异硫氰酸胍-玻璃粉法提取SARS冠状病毒RNA简便、快速、经济,可用于临床.

    作者:戴二黑;郭兆彪;王效义;杨瑞馥 刊期: 2004年第05期

  • 人雌激素和孕激素受体的流式细胞术检测及几种不同抗体的应用

    目的建立人类雌激素受体(ER)和孕激素受体(PR)的流式细胞术检测方法,并比较几种不同抗体的应用情况.方法将乳腺癌细胞株MCF-7、T-47d用不同方法固定处理,比较它们与抗体特异性结合的差异,挑选佳细胞固定方法.同时,以与MDA-MB-231(MM231)细胞反应阳性率不大于5%为标准,对不同浓度的ER抗体1D5和MA1-310、PR抗体1A6和PgR636的反应特异性进行分析比较,并用于临床样本的检测.结果经0.25%多聚甲醛(PFA)预固定、75%乙醇固定、核分离液处理后的细胞,与抗体特异性反应的荧光强度大;在1~4μg/100μl浓度范围内,1D5与MM231反应阳性率低于5%,与MCF-7反应阳性率大于95%.同浓度的MA1-310与MM231和MCF-7反应时的阳性细胞率相当;1A6 1:100稀释,PgR636 1:10~1:200稀释,与MM231反应阳性率低于5%,与T-47d反应阳性率大于95%;用1D5(2μg)、1A6和PgR636(1:100)对12例临床乳腺癌样本ER、PR检测结果分别为(64.36±27.92)%、(53.95±28.17)%和(55.63±26.93)%.结论细胞经0.25%PFA预固定、75%乙醇固定、核分离液处理后,用一定浓度范围的1D5、1A6和PgR636可分别对ER、PR进行流式细胞术定量检测.本研究方法可用于临床样本的检测.

    作者:陶德定;江敏;吴剑宏;冯永东;龚建平 刊期: 2004年第05期

  • KX-21型血液分析仪试剂的研究与应用

    目的研制适用于KX-21血液分析仪的配套试剂.方法用季铵盐型表面活性剂破坏红细胞,进行白细胞计数与分类;用非氰化物还原法进行血红蛋白的测定;以无机盐为主体组成中性等渗稀释液,建立配套的KX-21血液分析检测试剂.结果用自制的KX-21配套试剂和原装配套试剂分别检测全血样品及末梢血稀释样品各200份,两套试剂所测得的红细胞(RBC)、血红蛋白(Hb)、平均红细胞体积(MCV)、血小板(PLT)、白细胞(WBC)、白细胞分类小、中、大(W-SCR、W-MCR、W-LCR)等相关系数均大于0.95;全血样品的各项检测指标CV值均小于10%.结论自制KX-21配套试剂与原装试剂可比性实验表明,两者结果无显著性差异,自配的KX-21配套试剂完全可以替代原装进口试剂,并不影响检测结果,还可达到节约成本的目的.

    作者:陈佑明;杨恒波;黄敬 刊期: 2004年第05期

  • 肾病综合征患儿IL-10基因表达的检测及其意义

    目的探讨原发性肾病综合征患儿白细胞介素-10(interleukin-10,IL-10)基因表达的变化.方法应用逆转录多聚酶链反应(RT-PCR)检测原发性肾病综合征(idiopathic nephritic syndrome,INS)患儿外周血单个核细胞(PBMC)IL-10 mRNA的变化.结果INS患儿急性期IL-10 mRNA较正常对照组显著升高(P<0.01),而缓解期与正常对照组相比较无显著差异(P>0.05).结论检测INS患儿PBMC IL-10可作为观察病情活动的一个免疫学指标.

    作者:颜承靖;文怡;吴元俊 刊期: 2004年第05期

临床检验杂志

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主管:江苏省卫生厅

主办:江苏省医学会