2种方法检测结核分枝杆菌对10种药物耐药性的比较

赵玉玲

关键词：结核分枝杆菌, 比例法, 绝对浓度法, 耐药性

摘要：目的探讨应用比例法检测结核分枝杆菌耐药性的可行性及可比性.方法用比例法和绝对浓度法分别检测240株结核分枝杆菌对异烟肼(INH)、链霉素(SM)、乙胺丁醇(EMB)、利福平(RFP)、乙硫异烟胺(TH1321)、对氨基水杨酸(PAS)、丁胺卡那(AN)、卡那霉素(KM)、氧氟沙星(OFLX)、卷曲霉素(CPM)的耐药性.结果SM、RFP、CPM、PAS、AN、KM绝对浓度法和比例法检出的耐药率无显著性差异,而INH、EMB、TH1321、OFLX用比例法测试耐药率均明显高于绝对浓度法(P＜0.01),两法药敏结果INH、SM、EMB、RFP、TH1321、CPM、AN、KM、OFLX和PAS的符合率分别为:81.7%、90.8%、83.8%、97.9%、83.3%、94.2%、97.5%、95.4%、83.3%、92.5%.结论比例法和绝对浓度法耐药率的差别主要与选定的药物临界浓度有关.

临床检验杂志相关文献

内标荧光定量PCR技术在乙型肝炎病毒定量中的应用

目的建立内标荧光定量PCR技术检测乙型肝炎病毒(HBV)DNA,以避免PCR扩增过程中可能出现的假阴性或部分抑制.方法在TaqMan荧光探针杂交PCR技术检测HBV载量的基础上,结合内标参照的方法指示PCR的扩增效率.结果本检测方法具有很好的特异性、重复性,检测敏感度达到1×103 copies/ml.经过对382例乙肝患者标本测定证实,标志物为HBsAg(+)、HBeAg(+)、抗HBc(+)的血清检出率为100%,标志物为HBsAg(+)、抗HBe(+)、抗HBc(+)的血清检出率为72.0%,与Roche试剂比较,两者的相关系数为0.987.结论本法快速、简便、特异性好、能指示病毒感染程度.

作者：冯艳铭；李智涛；邵大哓；李振勇；王樯；屈凌波；赵玉芬刊期： 2004年第05期
一种快速简便的SARS冠状病毒RNA提取方法

目的建立快速简便的SARS冠状病毒RNA提取方法.方法采用异硫氰酸胍-玻璃粉法提取病毒RNA,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测SARS冠状病毒RNA.结果24例SARS患者的粪便和痰液标本同时采用异硫氰酸胍-玻璃粉法和QIAGEN公司的试剂盒提取SARS冠状病毒RNA,其粪便标本RT-PCR的阳性率分别为83.3%(20/24)和100-0%(24/24);痰液标本RT-PCR的阳性率分别为16.7%(4/24)和20.8%(5/24).异硫氰酸胍-玻璃粉法RT-PCR的阳性率与洗脱温度有关.结论异硫氰酸胍-玻璃粉法提取SARS冠状病毒RNA简便、快速、经济,可用于临床.

作者：戴二黑；郭兆彪；王效义；杨瑞馥刊期： 2004年第05期
放射土壤杆菌致泌尿系感染1例

从1例88岁男性、急性泌尿系感染患者尿中,连续两次培养出放射土壤杆菌,报道如下.1细菌生物学特性接种羊血平板35℃过夜,生长菌落呈针尖状,透明、湿润、光滑、边缘整齐,不溶血.原划线处菌苔呈水滴状,48 h后菌落中等大小,麦康凯和尿定位平板上菌落生长良好.

作者：李平；潘玫；孙贞刊期： 2004年第05期
人心肌肌钙蛋白Ⅰ化学发光免疫分析方法的建立

目的建立检测人心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnI)化学发光免疫分析方法.方法用重组cTnI免疫新西兰兔获得抗体,经DEAE-23层析和(NH4)2SO4沉淀纯化后,用碳化二亚胺(EDC)法标记辣根过氧化物酶,Sephadex G-200纯化.优化鲁米诺-H2O2-肉桂酸发光体系,建立了cTnI化学发光免疫分析法.用该法检测138例正常人及病人血清标本,确定正常值参考范围,并与肌ISA法比较.结果所得抗体的滴度为1:8 000.优化后的发光体系为:鲁米诺(4.5 mmol/L),H2O2(7.5 mmol/L),四苯硼钠(0.8 mmol/L),肉桂酸(0.4 mmol/L),比单独用肉桂酸或四苯硼钠作增强剂灵敏度分别增加了1.19和1.05倍.本法检测灵敏度为0.2 ng/ml,线性范围为0.4～50 ng/ml,批内CV平均9.0%,批间CV平均11.8%,回收率为104.2%.Hb浓度在0～50 nmol/L,T-Bil在0～15μmol/L,TG在0～2.0 mmol/L对测定结果无影响.与ELISA比较,两法结果一致(P＞0.05),相关系数r=0.9852(P＜0.01).用BioCheck标准品为校正物,确定临床诊断参考范围为＜2.12 ng/ml,诊断符合率为96.2%.结论建立的cTnI化学发光免疫分析法可常规用于临床检验.

作者：吴国球；劳心珍；孙宏伟；黄立新；张粉梅；钱娟英；卢惠霞刊期： 2004年第05期
重症监护病房感染的病原菌分析

目的了解ICU感染的病原菌特点及耐药性,为临床经验性用药提供参考依据.方法对本院住ICU的病人标本中检出的病原菌进行统计分析.结果352份阳性标本中革兰阴性杆菌140株占39.8%,其中鲍曼不动杆菌的检出率占首位(28.1%),铜绿假单胞菌次之(9.7%);革兰阳性球菌127株占36.1%,其中金黄色葡萄球菌的检出率占首位(21.9%),表皮葡萄球菌和屎肠球菌次之(均为6.5%);各类真菌85株占24.1%.标本来源以痰为主(86.1%).结论加强ICU感染的病原菌检测非常必要,可指导临床合理用药.

作者：朱建一；潘宇红刊期： 2004年第05期
KSHV ORF73C基因原核表达产物的纯化与免疫原性分析

目的纯化卡波济肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)潜伏相关核抗原(LANA)羧基端编码基因ORF73C原核表达蛋白并分析其免疫原性.方法含重组质粒pGEX-6p-1+ORF73C(pORF73C)的宿主菌BL21经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达.用glutathione Sepharose 4B亲和层析柱纯化表达产物后,以重组3C蛋白酶对融合蛋白进行解离,SDS-PAGE对表达及纯化产物进行鉴定.以纯化的ORF73C蛋白免疫小鼠获得抗血清,建立ELISA检测其免疫原性.结果SDS-PAGE显示蛋白条带大小分别为49 000和23 000,与预期的ORF73C融合蛋白及ORF73C蛋白分子量大小一致;ELISA检测显示,抗ORF73C多抗免疫反应性高于未免疫小鼠血清2倍以上.结论成功获得了纯化的ORF73C蛋白,经ELISA显示其有较强免疫原性.

作者：汤巧；卢春；黄丽；钱超；曾怡；张玲刊期： 2004年第05期
密闭式粪便标本收集管的设计与制作

我们设计与制作了一种集采样、运输、检验和保存于一体的粪便标本收集管,经过20多个医院应用,得到了临床、检验工作人员和病员的充分肯定.1设计与制作用食品级聚乙烯为原料,制作形状如图1所示.尖底管状结构,分为三个部件:尖底离心管、管盖和椎状小勺.小勺固定在管盖上.管高98 mm,大管径15 mm,管内容积12 ml,椎状小勺容积0.1 ml,管璧厚度1 mm.见图1a.

作者：蔡美珠；王开正；邓正华刊期： 2004年第05期
CRP含量在细菌凝集反应中的变化

CRP是一种急性期反应蛋白,初因其能与肺炎链球菌细胞壁中一种非型特异的多糖(C-多糖)发生沉淀反应而得名.我们发现一些CRP含量高(≥20mg/L)的血清,在与细菌混合可使细菌发生凝集.为了了解CRP是否参与细菌凝集过程,我们收集了一批CRP含量高的血清进行了研究.

作者：段兴同；马玉娇；张新民；郭晓静刊期： 2004年第05期
从痰标本中分离出1株多重耐药的支气管败血鲍特菌

2003年10月我们从1例上呼吸道感染患者痰中分离培养出1株多重耐药的支气管败血鲍特菌(Bordetella bronchiseptica),报道如下.1病例摘要患者,女,48岁,2003年9月底曾患支气管感染,从痰中分离培养出肺炎克雷伯菌并对大部分抗生素敏感,因此选用头孢噻肟钠每12 h一次静滴5 d,痊愈,痰培养转为阴性.

作者：董卫；马雅静；赵海军刊期： 2004年第05期
过氧化物酶染色鉴别尿细胞管型

由于管型中各种细胞常发生不同程度的变性,在光学显微镜下正确鉴别常常比较困难,我们采用过氧化物酶染色方法可较好地鉴别管型中的细胞成分[1-2].

作者：金浩刊期： 2004年第05期
胎儿骨髓间质干细胞与细胞因子对脐血CD34+细胞扩增作用

目的探讨胎儿骨髓间质干细胞对CD34+细胞体外扩增的造血支持作用.方法体外分离、纯化胎儿骨髓间质干细胞;Mini-MACS免疫磁珠分选3份脐血CD34+细胞;建立胎儿骨髓间质干细胞与CD34+细胞共培养体系:第1组为单独CD34+细胞培养,第2组为胎儿骨髓间质干细胞+CD34+细胞共培养,第3组为细胞因子(干细胞因子,白细胞介素-3,Flt3配体,血小板生成素)+CD34+细胞共培养,第4组为胎儿骨髓间质干细胞+细胞因子+CD34+细胞共培养.用流式细胞仪检测不同培养时间的CD34+细胞.结果胎儿骨髓间质干细胞表达CD29,CD44;免疫磁珠分选CD34+细胞的平均纯度为97.4%;胎儿骨髓间质干细胞+CD34+细胞共培养28 d,有核CD34+细胞仍占有核细胞的6.43%;CD34+细胞在胎儿骨髓间质干细胞、细胞因子作用下培养28 d,有核细胞总数、CD34+细胞数分别被扩增1.65×105倍、788倍.结论胎儿骨髓间质干细胞可有效扩增脐血造血干/祖细胞.

作者：胡嘉波；许文荣；毛飞；朱伟；孙晓春；钱晖；许化溪刊期： 2004年第05期
脑转移瘤患者脑脊液半胱氨酸蛋白酶抑制剂C变化的临床意义

目的探讨脑脊液半胱氨酸蛋白酶抑制剂(cystatin C)对脑转移瘤的诊断价值.方法采用速率散射比浊法对27例脑转移瘤患者和20例正常对照进行脑脊液中cystatin C、β2-微球蛋白(β2-MG)和白蛋白(Alb)含量测定.结果患者组脑脊液中cystatin C浓度[(1.25±0.43)mg/L]显著低于对照组[(2.81±0.77)mg/L](P＜0.05),β2-MG浓度[(3.18±0.67)mg/L]显著高于对照组[(1.01±0.32)mg/L](P＜0.05),Alb浓度[(325.7±41.5)mg/L]显著高于对照组[(185.5±25.8)mg/L](P＜0.01);三项检测指标的特异性无显著性差异(P＞0.05),cystatin C、Alb检测的敏感性均显著高于β2-MG(P＜0.05),cystatin C与Alb检测的敏感性无显著性差异(P＞0.05).结论脑脊液cystatin C浓度检测对于脑转移瘤的诊断是一个较好的指标.

作者：马荣红；温小波；崔天盆；吴健民刊期： 2004年第05期
早产儿并发肺炎与5种支原体感染的关系

目的了解早产儿并发肺炎与支原体(5种)感染的关系.方法收集151例足月产儿和101例早产儿的咽拭子标本,应用套式聚合酶链反应检测解脲脲原体(Uu)、肺炎支原体(Mpn)、人型支原体(Mh)、生殖支原体(Mg)和发酵支原体(Mf)等5种支原体核酸.结果足月产儿Uu、Mpn、Mh、Mg、Mf检出率分别为8.6%,3.3%,2.0%,0%和0%;早产儿分别为41.6%,21.8%,11.9%,4.9%和0%,Uu、Mpn、Mh、Mg 4种支原体检出率显著高于足月产儿(P＜0.01).其中49例剖宫早产儿的Uu、Mpn、Mh、Mg检出率也明显高于98例足月剖宫儿.结论新生儿早产与Uu、Mh、Mpn、Mg等支原体感染相关.

作者：朱云霞；周勤；吴志君刊期： 2004年第05期
生化液体质控品与冻干质控品的应用比较

2002年初江苏省临床检验中心向全省各级医院检验科推荐Beckman液体生化质控品作为生化室内质量控制品.我室当时使用Randox冻干质控品,我们对两种质控品进行回顾性比较.

作者：罗浔阳；张葵；顾光煜；王丽刊期： 2004年第05期
浅谈国内支原体培养和鉴定中存在的问题

近几年来,泌尿生殖道的支原体,即解脲脲原体(Ureaplasma Urealyticum,Uu)和人型支原体(M.hominis,Mh)感染,在国内受到了很大的重视,就其流行性和耐药等方面涌现了大量的文献报道.在这些报道中[1～5],支原体的分离培养和鉴定方法均存在着一些问题.其中,尤为突出的就是仅凭肉汤培养基颜色的变化来判断有无支原体生长,而不是根据它们在固体培养基上的典型菌落形态,这是令人疑惑不解的.我们综合国内外有关文献资料,就肉汤颜色变化与支原体培养阴阳性结论的问题进行探讨,以期得到大家的重视.

作者：赵旺胜；柏兵刊期： 2004年第05期
应用全自动蛋白电泳系统检查地中海贫血

目的对全自动蛋白电泳系统筛查地中海贫血效果进行观察及评价.方法用法国Sebia公司生产的Hydrasys LC电泳仪进行血红蛋白电泳,用其配套的Hyrys扫描系统对HbA、HbA2、HbF、HbH、HbBart's、HbCS区带进行扫描,得出各种血红蛋白含量,用pH8.6醋酸纤维薄膜电泳作HbH、HbBart's、HbA2含量对比,用微量血红蛋白电泳作血红蛋白区带对比;用碱变试验作HbF对比.结果测定标本2472份,检出β地中海贫血173例;α地中海贫血:用pH8.6醋酸纤维薄膜电泳法检出HbH68例、HbBart's 25例,用全自动蛋白电泳系统电泳方法检出HbH 63例、HbBart's 22例,HbCS两种方法均为13例.结论全自动蛋白电泳系统能很好地分辨出增高的HbA2和HbF,对β地中海贫血检查有良好的效果;在α地中海贫血的检查中,对HbCS的检出效果较好,并且能作含量测定,但HbH区带多较淡染,有些标本出现HbBart's区带浓于HbH区带的现象,有假阴性结果出现.

作者：赵应斌；潘柳吟；李丽敏刊期： 2004年第05期
人雌激素和孕激素受体的流式细胞术检测及几种不同抗体的应用

目的建立人类雌激素受体(ER)和孕激素受体(PR)的流式细胞术检测方法,并比较几种不同抗体的应用情况.方法将乳腺癌细胞株MCF-7、T-47d用不同方法固定处理,比较它们与抗体特异性结合的差异,挑选佳细胞固定方法.同时,以与MDA-MB-231(MM231)细胞反应阳性率不大于5%为标准,对不同浓度的ER抗体1D5和MA1-310、PR抗体1A6和PgR636的反应特异性进行分析比较,并用于临床样本的检测.结果经0.25%多聚甲醛(PFA)预固定、75%乙醇固定、核分离液处理后的细胞,与抗体特异性反应的荧光强度大;在1～4μg/100μl浓度范围内,1D5与MM231反应阳性率低于5%,与MCF-7反应阳性率大于95%.同浓度的MA1-310与MM231和MCF-7反应时的阳性细胞率相当;1A6 1:100稀释,PgR636 1:10～1:200稀释,与MM231反应阳性率低于5%,与T-47d反应阳性率大于95%;用1D5(2μg)、1A6和PgR636(1:100)对12例临床乳腺癌样本ER、PR检测结果分别为(64.36±27.92)%、(53.95±28.17)%和(55.63±26.93)%.结论细胞经0.25%PFA预固定、75%乙醇固定、核分离液处理后,用一定浓度范围的1D5、1A6和PgR636可分别对ER、PR进行流式细胞术定量检测.本研究方法可用于临床样本的检测.

作者：陶德定；江敏；吴剑宏；冯永东；龚建平刊期： 2004年第05期
血清IL-1 β测定用于判别自然流产

我们对IL-1β与反复自然流产(RSA)的关系进行了研究,结果如下.1材料与方法1.1采集标本收集自我院计划生育门诊及住院患者,年龄23～40岁,其中RSA组17例,无RSA史的先兆流产组34例,正常早孕组(孕期≤12周)41例,健康体检组40例.

作者：黄革玲；李健刊期： 2004年第05期
人线粒体肌酸激酶广泛型亚型在大肠埃希菌中的表达及抗体制备

目的获得人线粒体肌酸激酶广泛型亚型(uMtCK)的全长基因,在大肠埃希菌中表达,研制抗uMtCK多克隆抗体.方法采用逆转录PCR从培养的肿瘤细胞(Hela细胞)中成功扩增出1 062 bp的uMtCK的基因片段,插入到质粒pMD18-T中,经酶切和测序证实为uMtCK的基因编码序列,再插入到质粒pQE30,转化大肠埃希菌,诱导重组质粒pQE30-uMtCK表达酶融合蛋白.经亲和层析纯化,并进行SDS-PAGE、western blot鉴定及酶活性测定.纯化的uMtCK蛋白免疫家兔制备抗uMtCK多抗.结果RT-PCR扩增出的片段经酶切鉴定和测序证实为uMtCK的基因;在大肠埃希菌M15中实现了高效、可溶性的融合表达,表达量约17%.重组uMtCK具有CK样催化活性,表明原核表达的uMtCK具有类似于天然蛋白质的生物学活性.经免疫印迹分析,制备的抗uMtCK多抗适合作uMtCK的进一步分析之用.结论人uMtCK在大肠埃希菌中实现了高效表达,制备了针对uMtCK的抗体.

作者：张建；王爱华；顾鹏飞；于嘉屏刊期： 2004年第05期
从患儿中段尿中分离出1株潘氏变形杆菌

Proteus Penneri(潘氏变形杆菌,原称普通变形杆菌生物1群),系临床少见分离菌,我们从一脊柱侧弯患儿的中段尿中分离出1株,现报道如下.1病历摘要患儿,男,12岁,2003年5月7日来我院就诊,主诉为尿痛、小便失禁,体温正常,实验室检查:尿常规:蛋白微量,隐血(+),镜检:白细胞(3+),红细胞1～4/HP;中段尿细菌培养分离出潘氏变形杆菌纯培养.临床用环丙沙星、呋喃妥因治疗,2周后临床症状基本消失,尿常规检查正常,中段尿培养阴性.

作者：承燕萍；李珍大；王卫萍；邵海枫刊期： 2004年第05期