奚伟红
目的研制适用于KX-21血液分析仪的配套试剂.方法用季铵盐型表面活性剂破坏红细胞,进行白细胞计数与分类;用非氰化物还原法进行血红蛋白的测定;以无机盐为主体组成中性等渗稀释液,建立配套的KX-21血液分析检测试剂.结果用自制的KX-21配套试剂和原装配套试剂分别检测全血样品及末梢血稀释样品各200份,两套试剂所测得的红细胞(RBC)、血红蛋白(Hb)、平均红细胞体积(MCV)、血小板(PLT)、白细胞(WBC)、白细胞分类小、中、大(W-SCR、W-MCR、W-LCR)等相关系数均大于0.95;全血样品的各项检测指标CV值均小于10%.结论自制KX-21配套试剂与原装试剂可比性实验表明,两者结果无显著性差异,自配的KX-21配套试剂完全可以替代原装进口试剂,并不影响检测结果,还可达到节约成本的目的.
作者：陈佑明；杨恒波；黄敬 刊期： 2004年第05期
我们对IL-1β与反复自然流产(RSA)的关系进行了研究,结果如下.1材料与方法1.1采集标本收集自我院计划生育门诊及住院患者,年龄23～40岁,其中RSA组17例,无RSA史的先兆流产组34例,正常早孕组(孕期≤12周)41例,健康体检组40例.
作者：黄革玲；李健 刊期： 2004年第05期
目的体外试验人-鼠嵌合抗人组织蛋白酶B(抗Cat B)抗体对Cat B的抑制作用.方法培养1株分泌人-鼠嵌合抗人Cat B抗体细胞,收集细胞培养上清,分离纯化人-鼠嵌合抗人Cat B抗体,用于体外抑制Cat B活性试验.结果该抗体在体外能抑制Cat B活性.结论抗Cat B抗体能特异结合Cat B并抑制其酶活性,将可能用于Cat B过度表达的癌症治疗.
作者：樊晓晖；Kopitar-Jerala Natasa；Premzl Ales；Kos Janko 刊期： 2004年第05期
目的建立一种实时荧光逆转录多聚酶链反应(RT-PCR),检测喉鳞状细胞癌组织人端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA表达水平,并与传统的RT-PCR进行比较.方法采用TriZOL提取总RNA并将mRNA逆转录成cDNA,然后利用TaqMan技术定量检测喉鳞状细胞癌组织hTERT mRNA.结果实时荧光RT-PCR检测癌组织的阳性率为97.06%,癌旁组织的阳性率为38.24%,差异显著(x2=24.25,P＜0.005),与癌旁组织比较,喉鳞状细胞癌组织hTERT mRNA表达水平平均上升17.88倍;传统的RT-PCR检测喉鳞状细胞癌组织和癌旁组织的阳性率分别为73.53%和11.77%,均显著低于实时荧光RT-PCR的阳性率(P＜0.01).结论实时荧光RT-PCR是检测喉癌组织hTERT mRNA水平的一种快速有效、灵敏度和特异性更高的方法,hTERT mRNA表达的上调可能是导致喉鳞状细胞癌发生的重要因素.
作者：李一荣；吴健民；黄翔；陈凤花；时杰；胡丽华 刊期： 2004年第05期
目的建立全自动测定腺苷脱氨酶(ADA)的酶偶联分光光度法.方法用酶联比色法对pH值、腺苷浓度等反应条件及各种实验参数进行研究.用该法测定了90例健康者的血清样本及99例胸腹水的ADA活性.结果该法低检出限为1.7 U/L,线性范围可达220 U/L(r=0.9989),批内CV为2.9%～5.4%,批间CV为4.7%～6.4%,回收率为99.7%.胆红素＜136.8μmol/L,血红蛋白＜3.5g/L,抗坏血酸＜284μmol/L和三酰甘油＜9.03mmol/L的情况下,对测定结果无显著性影响.结论本法灵敏度高,线性、精密度好,结果准确,干扰少,且操作简便快速,适用于全自动生化分析仪分析.
作者：周美霞；管茶英；陈肖燕 刊期： 2004年第05期
目的建立检测人心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnI)化学发光免疫分析方法.方法用重组cTnI免疫新西兰兔获得抗体,经DEAE-23层析和(NH4)2SO4沉淀纯化后,用碳化二亚胺(EDC)法标记辣根过氧化物酶,Sephadex G-200纯化.优化鲁米诺-H2O2-肉桂酸发光体系,建立了cTnI化学发光免疫分析法.用该法检测138例正常人及病人血清标本,确定正常值参考范围,并与肌ISA法比较.结果所得抗体的滴度为1:8 000.优化后的发光体系为:鲁米诺(4.5 mmol/L),H2O2(7.5 mmol/L),四苯硼钠(0.8 mmol/L),肉桂酸(0.4 mmol/L),比单独用肉桂酸或四苯硼钠作增强剂灵敏度分别增加了1.19和1.05倍.本法检测灵敏度为0.2 ng/ml,线性范围为0.4～50 ng/ml,批内CV平均9.0%,批间CV平均11.8%,回收率为104.2%.Hb浓度在0～50 nmol/L,T-Bil在0～15μmol/L,TG在0～2.0 mmol/L对测定结果无影响.与ELISA比较,两法结果一致(P＞0.05),相关系数r=0.9852(P＜0.01).用BioCheck标准品为校正物,确定临床诊断参考范围为＜2.12 ng/ml,诊断符合率为96.2%.结论建立的cTnI化学发光免疫分析法可常规用于临床检验.
作者：吴国球；劳心珍；孙宏伟；黄立新；张粉梅；钱娟英；卢惠霞 刊期： 2004年第05期
目的使用特异性抗体和植物血凝素(PHA)建立γ-谷氨酰转肽酶同功酶Ⅱ(γ-glutamyltranspeptidase isoenzymesⅡ,GGTⅡ)特异膜免疫吸附检测法,探讨其对肝细胞癌(HCC)的临床价值.方法从HCC患者血清中提取、分离、纯化GGTⅡ,经神经氨酸酶(NMD)消化后,制备GGTⅡ特异性抗体,将纯化的特异性抗体(anti-GGTⅡ)、NMD和PHA吸附并固定到硝酸纤维素膜上,对HCC及其相关疾病患者血清中GGTⅡ进行定性检测.结果本法检测HCC阳性率达86.6%,特异性为95.7%;对直径小于5 cm的HCC检测阳性率达60.6%,对AFP阴性或低浓度的HCC患者检测阳性率为66.2%.结论GGTⅡ特异膜免疫吸附检测法可作为AFP的补充用于HCC的辅助诊断和早期发现.有简便快速、微量灵敏和价格低廉的特点.
作者：李军；魏曙亚；燕林青；候蓉；原荣；苗爱莲；王香林 刊期： 2004年第05期
全自动生化分析仪存在交叉污染现象的报道较多,但以往报道多见于试剂成分含有高浓度测试物质,通过试剂针携带污染对后面的测试项目造成正误差[1-2].我们在工作中发现硫氰酸汞试剂(测定氯离子)对含有还原型辅酶Ⅱ的尿素试剂存在交叉污染,且对尿素测定造成较大负误差.现将结果报告如下.
作者：李浩；秦晓燕；刘明琴 刊期： 2004年第05期
Proteus Penneri(潘氏变形杆菌,原称普通变形杆菌生物1群),系临床少见分离菌,我们从一脊柱侧弯患儿的中段尿中分离出1株,现报道如下.1病历摘要患儿,男,12岁,2003年5月7日来我院就诊,主诉为尿痛、小便失禁,体温正常,实验室检查:尿常规:蛋白微量,隐血(+),镜检:白细胞(3+),红细胞1～4/HP;中段尿细菌培养分离出潘氏变形杆菌纯培养.临床用环丙沙星、呋喃妥因治疗,2周后临床症状基本消失,尿常规检查正常,中段尿培养阴性.
作者：承燕萍；李珍大；王卫萍；邵海枫 刊期： 2004年第05期
目的探讨脑脊液半胱氨酸蛋白酶抑制剂(cystatin C)对脑转移瘤的诊断价值.方法采用速率散射比浊法对27例脑转移瘤患者和20例正常对照进行脑脊液中cystatin C、β2-微球蛋白(β2-MG)和白蛋白(Alb)含量测定.结果患者组脑脊液中cystatin C浓度[(1.25±0.43)mg/L]显著低于对照组[(2.81±0.77)mg/L](P＜0.05),β2-MG浓度[(3.18±0.67)mg/L]显著高于对照组[(1.01±0.32)mg/L](P＜0.05),Alb浓度[(325.7±41.5)mg/L]显著高于对照组[(185.5±25.8)mg/L](P＜0.01);三项检测指标的特异性无显著性差异(P＞0.05),cystatin C、Alb检测的敏感性均显著高于β2-MG(P＜0.05),cystatin C与Alb检测的敏感性无显著性差异(P＞0.05).结论脑脊液cystatin C浓度检测对于脑转移瘤的诊断是一个较好的指标.
作者：马荣红；温小波；崔天盆；吴健民 刊期： 2004年第05期
从1例88岁男性、急性泌尿系感染患者尿中,连续两次培养出放射土壤杆菌,报道如下.1细菌生物学特性接种羊血平板35℃过夜,生长菌落呈针尖状,透明、湿润、光滑、边缘整齐,不溶血.原划线处菌苔呈水滴状,48 h后菌落中等大小,麦康凯和尿定位平板上菌落生长良好.
作者：李平；潘玫；孙贞 刊期： 2004年第05期
目的建立应用于临床的尿蛋白十二烷基硫酸钠(SDS)-琼脂糖凝胶(AGE)电泳方法.方法分别对Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型4种琼脂糖、不同的缓冲对、电压和电泳时间进行实验,确定佳的分离条件,建立测定方法.结果当Ⅳ型琼脂糖凝胶浓度为40 g/L,SDS含量为1 g/L,在pH 7.0的AMP-咪唑-HCl缓冲体系下进行电泳,可以有效地将尿蛋白按分子量大小进行分离.57份临床尿蛋白阳性标本电泳结果表明,生理性蛋白尿24例,中、高分子蛋白尿5例,小分子蛋白尿11例和混合型蛋白尿17例.结论本法具有分离效果好、操作简便、灵敏度高、成本低廉等优点,可以将尿蛋白按分子量大小分为小分子、中分子以及混合型,对肾脏疾病的受损部位和损伤程度的判断具有较高的价值,适于基层实验室的常规开展.
作者：吴惠毅；孙召东；刘安定；仇为民；赵绍林；杨新玲 刊期： 2004年第05期
目的对Sysmex SE-9000+HPC(简称SE-9000+HPC)全自动血液分析仪进行系统评价.方法以国际血液学标准化委员会(ICSH)和美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)制定的评价标准对其性能进行评价,同时对其全血细胞计数(CBC)的参考范围进行测定.结果SE-9000+HPC各项指标的线性良好(r＞0.995),在室温或4℃条件下至少可稳定48 h;不精密度的CV均＜5%;各参数的携带污染率低(＜0.01%);其测定结果与ICSH推荐的参考方法及CD-1600血细胞分析仪结果间相关性均较好(r＞0.97);高胆红素及高血脂对CBC各参数基本无干扰(P＞0.05);与手工法对943例白细胞分类(DC)结果比较,二者嗜中性粒细胞(N)、淋巴细胞(L)、嗜酸性粒细胞(E)、单核细胞(M)及嗜碱性粒细胞(B)的r分别为0.922、0.923、0.853、0.565和0.182;SE-9000+HPC对DC的敏感性、特异性及总有效性分别为85.2%、65.5%和73.4%;对276例DC异常标本的原始细胞及幼稚粒/红细胞筛选的总有效性≥75%;除RBC、Hb及HCT外,843例健康成人的CBC各项指标间无性别差异(P＞0.05).结论SE-9000+HPC各方面性能良好,测定CBC参数快速、准确、精密、可靠、过筛能力强,是一种大中型医院实验室对大批量全血标本的CBC与DC进行快速而有效筛检的全自动血液分析仪.
作者：彭黎明；府伟灵；高行军 刊期： 2004年第05期
目的建立内标荧光定量PCR技术检测乙型肝炎病毒(HBV)DNA,以避免PCR扩增过程中可能出现的假阴性或部分抑制.方法在TaqMan荧光探针杂交PCR技术检测HBV载量的基础上,结合内标参照的方法指示PCR的扩增效率.结果本检测方法具有很好的特异性、重复性,检测敏感度达到1×103 copies/ml.经过对382例乙肝患者标本测定证实,标志物为HBsAg(+)、HBeAg(+)、抗HBc(+)的血清检出率为100%,标志物为HBsAg(+)、抗HBe(+)、抗HBc(+)的血清检出率为72.0%,与Roche试剂比较,两者的相关系数为0.987.结论本法快速、简便、特异性好、能指示病毒感染程度.
作者：冯艳铭；李智涛；邵大哓；李振勇；王樯；屈凌波；赵玉芬 刊期： 2004年第05期
CRP是一种急性期反应蛋白,初因其能与肺炎链球菌细胞壁中一种非型特异的多糖(C-多糖)发生沉淀反应而得名.我们发现一些CRP含量高(≥20mg/L)的血清,在与细菌混合可使细菌发生凝集.为了了解CRP是否参与细菌凝集过程,我们收集了一批CRP含量高的血清进行了研究.
作者：段兴同；马玉娇；张新民；郭晓静 刊期： 2004年第05期
目的纯化卡波济肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)潜伏相关核抗原(LANA)羧基端编码基因ORF73C原核表达蛋白并分析其免疫原性.方法含重组质粒pGEX-6p-1+ORF73C(pORF73C)的宿主菌BL21经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达.用glutathione Sepharose 4B亲和层析柱纯化表达产物后,以重组3C蛋白酶对融合蛋白进行解离,SDS-PAGE对表达及纯化产物进行鉴定.以纯化的ORF73C蛋白免疫小鼠获得抗血清,建立ELISA检测其免疫原性.结果SDS-PAGE显示蛋白条带大小分别为49 000和23 000,与预期的ORF73C融合蛋白及ORF73C蛋白分子量大小一致;ELISA检测显示,抗ORF73C多抗免疫反应性高于未免疫小鼠血清2倍以上.结论成功获得了纯化的ORF73C蛋白,经ELISA显示其有较强免疫原性.
作者：汤巧；卢春；黄丽；钱超；曾怡；张玲 刊期： 2004年第05期
目的探讨胎儿骨髓间质干细胞对CD34+细胞体外扩增的造血支持作用.方法体外分离、纯化胎儿骨髓间质干细胞;Mini-MACS免疫磁珠分选3份脐血CD34+细胞;建立胎儿骨髓间质干细胞与CD34+细胞共培养体系:第1组为单独CD34+细胞培养,第2组为胎儿骨髓间质干细胞+CD34+细胞共培养,第3组为细胞因子(干细胞因子,白细胞介素-3,Flt3配体,血小板生成素)+CD34+细胞共培养,第4组为胎儿骨髓间质干细胞+细胞因子+CD34+细胞共培养.用流式细胞仪检测不同培养时间的CD34+细胞.结果胎儿骨髓间质干细胞表达CD29,CD44;免疫磁珠分选CD34+细胞的平均纯度为97.4%;胎儿骨髓间质干细胞+CD34+细胞共培养28 d,有核CD34+细胞仍占有核细胞的6.43%;CD34+细胞在胎儿骨髓间质干细胞、细胞因子作用下培养28 d,有核细胞总数、CD34+细胞数分别被扩增1.65×105倍、788倍.结论胎儿骨髓间质干细胞可有效扩增脐血造血干/祖细胞.
作者：胡嘉波；许文荣；毛飞；朱伟；孙晓春；钱晖；许化溪 刊期： 2004年第05期
目的了解早产儿并发肺炎与支原体(5种)感染的关系.方法收集151例足月产儿和101例早产儿的咽拭子标本,应用套式聚合酶链反应检测解脲脲原体(Uu)、肺炎支原体(Mpn)、人型支原体(Mh)、生殖支原体(Mg)和发酵支原体(Mf)等5种支原体核酸.结果足月产儿Uu、Mpn、Mh、Mg、Mf检出率分别为8.6%,3.3%,2.0%,0%和0%;早产儿分别为41.6%,21.8%,11.9%,4.9%和0%,Uu、Mpn、Mh、Mg 4种支原体检出率显著高于足月产儿(P＜0.01).其中49例剖宫早产儿的Uu、Mpn、Mh、Mg检出率也明显高于98例足月剖宫儿.结论新生儿早产与Uu、Mh、Mpn、Mg等支原体感染相关.
作者：朱云霞；周勤；吴志君 刊期： 2004年第05期
目的建立快速简便的SARS冠状病毒RNA提取方法.方法采用异硫氰酸胍-玻璃粉法提取病毒RNA,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测SARS冠状病毒RNA.结果24例SARS患者的粪便和痰液标本同时采用异硫氰酸胍-玻璃粉法和QIAGEN公司的试剂盒提取SARS冠状病毒RNA,其粪便标本RT-PCR的阳性率分别为83.3%(20/24)和100-0%(24/24);痰液标本RT-PCR的阳性率分别为16.7%(4/24)和20.8%(5/24).异硫氰酸胍-玻璃粉法RT-PCR的阳性率与洗脱温度有关.结论异硫氰酸胍-玻璃粉法提取SARS冠状病毒RNA简便、快速、经济,可用于临床.
作者：戴二黑；郭兆彪；王效义；杨瑞馥 刊期： 2004年第05期
我们设计与制作了一种集采样、运输、检验和保存于一体的粪便标本收集管,经过20多个医院应用,得到了临床、检验工作人员和病员的充分肯定.1设计与制作用食品级聚乙烯为原料,制作形状如图1所示.尖底管状结构,分为三个部件:尖底离心管、管盖和椎状小勺.小勺固定在管盖上.管高98 mm,大管径15 mm,管内容积12 ml,椎状小勺容积0.1 ml,管璧厚度1 mm.见图1a.
作者：蔡美珠；王开正；邓正华 刊期： 2004年第05期
临床检验杂志
主管:江苏省卫生厅
主办：江苏省医学会
