马荣红；温小波；崔天盆；吴健民
由于管型中各种细胞常发生不同程度的变性,在光学显微镜下正确鉴别常常比较困难,我们采用过氧化物酶染色方法可较好地鉴别管型中的细胞成分[1-2].
作者：金浩 刊期： 2004年第05期
目的建立快速简便的SARS冠状病毒RNA提取方法.方法采用异硫氰酸胍-玻璃粉法提取病毒RNA,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测SARS冠状病毒RNA.结果24例SARS患者的粪便和痰液标本同时采用异硫氰酸胍-玻璃粉法和QIAGEN公司的试剂盒提取SARS冠状病毒RNA,其粪便标本RT-PCR的阳性率分别为83.3%(20/24)和100-0%(24/24);痰液标本RT-PCR的阳性率分别为16.7%(4/24)和20.8%(5/24).异硫氰酸胍-玻璃粉法RT-PCR的阳性率与洗脱温度有关.结论异硫氰酸胍-玻璃粉法提取SARS冠状病毒RNA简便、快速、经济,可用于临床.
作者：戴二黑；郭兆彪；王效义；杨瑞馥 刊期： 2004年第05期
CRP是一种急性期反应蛋白,初因其能与肺炎链球菌细胞壁中一种非型特异的多糖(C-多糖)发生沉淀反应而得名.我们发现一些CRP含量高(≥20mg/L)的血清,在与细菌混合可使细菌发生凝集.为了了解CRP是否参与细菌凝集过程,我们收集了一批CRP含量高的血清进行了研究.
作者：段兴同；马玉娇；张新民；郭晓静 刊期： 2004年第05期
目的探讨脑脊液半胱氨酸蛋白酶抑制剂(cystatin C)对脑转移瘤的诊断价值.方法采用速率散射比浊法对27例脑转移瘤患者和20例正常对照进行脑脊液中cystatin C、β2-微球蛋白(β2-MG)和白蛋白(Alb)含量测定.结果患者组脑脊液中cystatin C浓度[(1.25±0.43)mg/L]显著低于对照组[(2.81±0.77)mg/L](P＜0.05),β2-MG浓度[(3.18±0.67)mg/L]显著高于对照组[(1.01±0.32)mg/L](P＜0.05),Alb浓度[(325.7±41.5)mg/L]显著高于对照组[(185.5±25.8)mg/L](P＜0.01);三项检测指标的特异性无显著性差异(P＞0.05),cystatin C、Alb检测的敏感性均显著高于β2-MG(P＜0.05),cystatin C与Alb检测的敏感性无显著性差异(P＞0.05).结论脑脊液cystatin C浓度检测对于脑转移瘤的诊断是一个较好的指标.
作者：马荣红；温小波；崔天盆；吴健民 刊期： 2004年第05期
目的体外试验人-鼠嵌合抗人组织蛋白酶B(抗Cat B)抗体对Cat B的抑制作用.方法培养1株分泌人-鼠嵌合抗人Cat B抗体细胞,收集细胞培养上清,分离纯化人-鼠嵌合抗人Cat B抗体,用于体外抑制Cat B活性试验.结果该抗体在体外能抑制Cat B活性.结论抗Cat B抗体能特异结合Cat B并抑制其酶活性,将可能用于Cat B过度表达的癌症治疗.
作者：樊晓晖；Kopitar-Jerala Natasa；Premzl Ales；Kos Janko 刊期： 2004年第05期
目的建立应用于临床的尿蛋白十二烷基硫酸钠(SDS)-琼脂糖凝胶(AGE)电泳方法.方法分别对Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型4种琼脂糖、不同的缓冲对、电压和电泳时间进行实验,确定佳的分离条件,建立测定方法.结果当Ⅳ型琼脂糖凝胶浓度为40 g/L,SDS含量为1 g/L,在pH 7.0的AMP-咪唑-HCl缓冲体系下进行电泳,可以有效地将尿蛋白按分子量大小进行分离.57份临床尿蛋白阳性标本电泳结果表明,生理性蛋白尿24例,中、高分子蛋白尿5例,小分子蛋白尿11例和混合型蛋白尿17例.结论本法具有分离效果好、操作简便、灵敏度高、成本低廉等优点,可以将尿蛋白按分子量大小分为小分子、中分子以及混合型,对肾脏疾病的受损部位和损伤程度的判断具有较高的价值,适于基层实验室的常规开展.
作者：吴惠毅；孙召东；刘安定；仇为民；赵绍林；杨新玲 刊期： 2004年第05期
我们设计与制作了一种集采样、运输、检验和保存于一体的粪便标本收集管,经过20多个医院应用,得到了临床、检验工作人员和病员的充分肯定.1设计与制作用食品级聚乙烯为原料,制作形状如图1所示.尖底管状结构,分为三个部件:尖底离心管、管盖和椎状小勺.小勺固定在管盖上.管高98 mm,大管径15 mm,管内容积12 ml,椎状小勺容积0.1 ml,管璧厚度1 mm.见图1a.
作者：蔡美珠；王开正；邓正华 刊期： 2004年第05期
目的探讨在β-内酰胺类抗生素/舒巴坦联合制剂对鲍曼不动杆菌的抑菌作用中,舒巴坦发挥何种作用.方法将舒巴坦配制成10μg/片和30μg/片2种浓度的纸片,应用K-B法检测舒巴坦单剂纸片以及氨苄西林/舒巴坦、头孢哌酮/舒巴坦对鲍曼不动杆菌的抑菌圈直径,同时增加了舒巴坦分别与哌拉西林、替卡西林、头孢唑林、头孢呋辛、头孢三嗪、头孢噻肟等6种药物组成的复合纸片.并选择菌株进行舒巴坦对鲍曼不动杆菌的低抑菌浓度试验,用革兰染色法和电镜观察鲍曼不动杆菌的菌体及细胞壁的改变.结果无论是氨苄西林/舒巴坦、头孢哌酮/舒巴坦还是另外6种β-内酰胺类药物与舒巴坦的组合制剂的抑菌圈直径与舒巴坦单剂的抑菌圈直径相比均无显著性差异(P＞0.05).革兰染色光镜下可见菌体改变为长丝状,电镜下可见在亚抑菌浓度时细胞壁缺失.结论对鲍曼不动杆菌体外的抗菌试验显示,舒巴坦对该菌的细胞壁损伤在复合制剂中起主要作用,和舒巴坦与何种主药组合对β-内酰胺酶的抑制作用无明显相关性.
作者：褚少朋；邵海枫；李珍大；王卫萍；曹红琴 刊期： 2004年第05期
目的建立人类雌激素受体(ER)和孕激素受体(PR)的流式细胞术检测方法,并比较几种不同抗体的应用情况.方法将乳腺癌细胞株MCF-7、T-47d用不同方法固定处理,比较它们与抗体特异性结合的差异,挑选佳细胞固定方法.同时,以与MDA-MB-231(MM231)细胞反应阳性率不大于5%为标准,对不同浓度的ER抗体1D5和MA1-310、PR抗体1A6和PgR636的反应特异性进行分析比较,并用于临床样本的检测.结果经0.25%多聚甲醛(PFA)预固定、75%乙醇固定、核分离液处理后的细胞,与抗体特异性反应的荧光强度大;在1～4μg/100μl浓度范围内,1D5与MM231反应阳性率低于5%,与MCF-7反应阳性率大于95%.同浓度的MA1-310与MM231和MCF-7反应时的阳性细胞率相当;1A6 1:100稀释,PgR636 1:10～1:200稀释,与MM231反应阳性率低于5%,与T-47d反应阳性率大于95%;用1D5(2μg)、1A6和PgR636(1:100)对12例临床乳腺癌样本ER、PR检测结果分别为(64.36±27.92)%、(53.95±28.17)%和(55.63±26.93)%.结论细胞经0.25%PFA预固定、75%乙醇固定、核分离液处理后,用一定浓度范围的1D5、1A6和PgR636可分别对ER、PR进行流式细胞术定量检测.本研究方法可用于临床样本的检测.
作者：陶德定；江敏；吴剑宏；冯永东；龚建平 刊期： 2004年第05期
目的建立全自动测定腺苷脱氨酶(ADA)的酶偶联分光光度法.方法用酶联比色法对pH值、腺苷浓度等反应条件及各种实验参数进行研究.用该法测定了90例健康者的血清样本及99例胸腹水的ADA活性.结果该法低检出限为1.7 U/L,线性范围可达220 U/L(r=0.9989),批内CV为2.9%～5.4%,批间CV为4.7%～6.4%,回收率为99.7%.胆红素＜136.8μmol/L,血红蛋白＜3.5g/L,抗坏血酸＜284μmol/L和三酰甘油＜9.03mmol/L的情况下,对测定结果无显著性影响.结论本法灵敏度高,线性、精密度好,结果准确,干扰少,且操作简便快速,适用于全自动生化分析仪分析.
作者：周美霞；管茶英；陈肖燕 刊期： 2004年第05期
目的建立一种实时荧光逆转录多聚酶链反应(RT-PCR),检测喉鳞状细胞癌组织人端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA表达水平,并与传统的RT-PCR进行比较.方法采用TriZOL提取总RNA并将mRNA逆转录成cDNA,然后利用TaqMan技术定量检测喉鳞状细胞癌组织hTERT mRNA.结果实时荧光RT-PCR检测癌组织的阳性率为97.06%,癌旁组织的阳性率为38.24%,差异显著(x2=24.25,P＜0.005),与癌旁组织比较,喉鳞状细胞癌组织hTERT mRNA表达水平平均上升17.88倍;传统的RT-PCR检测喉鳞状细胞癌组织和癌旁组织的阳性率分别为73.53%和11.77%,均显著低于实时荧光RT-PCR的阳性率(P＜0.01).结论实时荧光RT-PCR是检测喉癌组织hTERT mRNA水平的一种快速有效、灵敏度和特异性更高的方法,hTERT mRNA表达的上调可能是导致喉鳞状细胞癌发生的重要因素.
作者：李一荣；吴健民；黄翔；陈凤花；时杰；胡丽华 刊期： 2004年第05期
HBsAg阴性的HBV感染发生率约占乙型肝炎患者的10%～25%[1].此种HBsAg阴性的HBV感染是临床不明原因慢性肝炎的常见病因[2].为探讨HBsAg阴性慢性乙型肝炎患者病毒血症水平状况及其与临床的关系,重叠HCV感染时的影响,我们对44例HBsAg阴性慢性乙型肝炎患者血清HBV标志物(HBVM)及HBV DNA含量、肝内HBcAg表达进行了检测,并与肝组织病理学结果比较,报告如下.
作者：刘晓梅；张世兰 刊期： 2004年第05期
目的获得人线粒体肌酸激酶广泛型亚型(uMtCK)的全长基因,在大肠埃希菌中表达,研制抗uMtCK多克隆抗体.方法采用逆转录PCR从培养的肿瘤细胞(Hela细胞)中成功扩增出1 062 bp的uMtCK的基因片段,插入到质粒pMD18-T中,经酶切和测序证实为uMtCK的基因编码序列,再插入到质粒pQE30,转化大肠埃希菌,诱导重组质粒pQE30-uMtCK表达酶融合蛋白.经亲和层析纯化,并进行SDS-PAGE、western blot鉴定及酶活性测定.纯化的uMtCK蛋白免疫家兔制备抗uMtCK多抗.结果RT-PCR扩增出的片段经酶切鉴定和测序证实为uMtCK的基因;在大肠埃希菌M15中实现了高效、可溶性的融合表达,表达量约17%.重组uMtCK具有CK样催化活性,表明原核表达的uMtCK具有类似于天然蛋白质的生物学活性.经免疫印迹分析,制备的抗uMtCK多抗适合作uMtCK的进一步分析之用.结论人uMtCK在大肠埃希菌中实现了高效表达,制备了针对uMtCK的抗体.
作者：张建；王爱华；顾鹏飞；于嘉屏 刊期： 2004年第05期
目的了解不育患者血清抗精子抗体(AsAb)的类型及其吸附精子部位的分布情况,探讨AsAb定位检测在体外受精筛选中的临床应用.方法采用德国欧蒙公司生产的生物薄片试剂盒(间接免疫荧光法)对来我院就诊的1678例不育患者血清进行AsAB检测.结果AsAb总阳性率为7.63%;其中IgM占42.2%,IgG占46.1%,两者同时存在的占8.6%,IgA占3.1%;抗头部的(包括抗头尾部和抗头体尾部)占62.5%,抗体部的未见,抗尾部的占36.7%,抗体尾部的占0.8%.IgM类抗头部的(包括抗头尾部)占84.6%,IgG类抗尾部的占65.7%,IgA类抗头部的占100%.结论血清AsAb类型以IgM和IgG为主,吸附部位以抗头部为主,IgM以抗头部为主,而IgG以抗尾部为主,AsAb定位检测对体外受精治疗者的筛选有独特的价值.
作者：夏乾峰；覃西；钱士匀 刊期： 2004年第05期
Proteus Penneri(潘氏变形杆菌,原称普通变形杆菌生物1群),系临床少见分离菌,我们从一脊柱侧弯患儿的中段尿中分离出1株,现报道如下.1病历摘要患儿,男,12岁,2003年5月7日来我院就诊,主诉为尿痛、小便失禁,体温正常,实验室检查:尿常规:蛋白微量,隐血(+),镜检:白细胞(3+),红细胞1～4/HP;中段尿细菌培养分离出潘氏变形杆菌纯培养.临床用环丙沙星、呋喃妥因治疗,2周后临床症状基本消失,尿常规检查正常,中段尿培养阴性.
作者：承燕萍；李珍大；王卫萍；邵海枫 刊期： 2004年第05期
目的使用特异性抗体和植物血凝素(PHA)建立γ-谷氨酰转肽酶同功酶Ⅱ(γ-glutamyltranspeptidase isoenzymesⅡ,GGTⅡ)特异膜免疫吸附检测法,探讨其对肝细胞癌(HCC)的临床价值.方法从HCC患者血清中提取、分离、纯化GGTⅡ,经神经氨酸酶(NMD)消化后,制备GGTⅡ特异性抗体,将纯化的特异性抗体(anti-GGTⅡ)、NMD和PHA吸附并固定到硝酸纤维素膜上,对HCC及其相关疾病患者血清中GGTⅡ进行定性检测.结果本法检测HCC阳性率达86.6%,特异性为95.7%;对直径小于5 cm的HCC检测阳性率达60.6%,对AFP阴性或低浓度的HCC患者检测阳性率为66.2%.结论GGTⅡ特异膜免疫吸附检测法可作为AFP的补充用于HCC的辅助诊断和早期发现.有简便快速、微量灵敏和价格低廉的特点.
作者：李军；魏曙亚；燕林青；候蓉；原荣；苗爱莲；王香林 刊期： 2004年第05期
目的对Sysmex SE-9000+HPC(简称SE-9000+HPC)全自动血液分析仪进行系统评价.方法以国际血液学标准化委员会(ICSH)和美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)制定的评价标准对其性能进行评价,同时对其全血细胞计数(CBC)的参考范围进行测定.结果SE-9000+HPC各项指标的线性良好(r＞0.995),在室温或4℃条件下至少可稳定48 h;不精密度的CV均＜5%;各参数的携带污染率低(＜0.01%);其测定结果与ICSH推荐的参考方法及CD-1600血细胞分析仪结果间相关性均较好(r＞0.97);高胆红素及高血脂对CBC各参数基本无干扰(P＞0.05);与手工法对943例白细胞分类(DC)结果比较,二者嗜中性粒细胞(N)、淋巴细胞(L)、嗜酸性粒细胞(E)、单核细胞(M)及嗜碱性粒细胞(B)的r分别为0.922、0.923、0.853、0.565和0.182;SE-9000+HPC对DC的敏感性、特异性及总有效性分别为85.2%、65.5%和73.4%;对276例DC异常标本的原始细胞及幼稚粒/红细胞筛选的总有效性≥75%;除RBC、Hb及HCT外,843例健康成人的CBC各项指标间无性别差异(P＞0.05).结论SE-9000+HPC各方面性能良好,测定CBC参数快速、准确、精密、可靠、过筛能力强,是一种大中型医院实验室对大批量全血标本的CBC与DC进行快速而有效筛检的全自动血液分析仪.
作者：彭黎明；府伟灵；高行军 刊期： 2004年第05期
阿尔茨海默病(AD)及血管性痴呆(VD)是老年期痴呆常见的两种类型.老年斑(SP)和神经原纤维缠结(NFT)是AD的两大病理改变.其中β淀粉样蛋白(Aβ)是SP的主要成分,NFT与tau蛋白密切相关,而IL-6在AD神经中枢炎症反应中起重要作用.因此,脑脊液中Aβ1-42、tau蛋白及IL-6水平的测定对AD的诊断具有重要意义.
作者：刘俊恒；潘继承；朱建一；李爱民 刊期： 2004年第05期
目的建立检测人心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnI)化学发光免疫分析方法.方法用重组cTnI免疫新西兰兔获得抗体,经DEAE-23层析和(NH4)2SO4沉淀纯化后,用碳化二亚胺(EDC)法标记辣根过氧化物酶,Sephadex G-200纯化.优化鲁米诺-H2O2-肉桂酸发光体系,建立了cTnI化学发光免疫分析法.用该法检测138例正常人及病人血清标本,确定正常值参考范围,并与肌ISA法比较.结果所得抗体的滴度为1:8 000.优化后的发光体系为:鲁米诺(4.5 mmol/L),H2O2(7.5 mmol/L),四苯硼钠(0.8 mmol/L),肉桂酸(0.4 mmol/L),比单独用肉桂酸或四苯硼钠作增强剂灵敏度分别增加了1.19和1.05倍.本法检测灵敏度为0.2 ng/ml,线性范围为0.4～50 ng/ml,批内CV平均9.0%,批间CV平均11.8%,回收率为104.2%.Hb浓度在0～50 nmol/L,T-Bil在0～15μmol/L,TG在0～2.0 mmol/L对测定结果无影响.与ELISA比较,两法结果一致(P＞0.05),相关系数r=0.9852(P＜0.01).用BioCheck标准品为校正物,确定临床诊断参考范围为＜2.12 ng/ml,诊断符合率为96.2%.结论建立的cTnI化学发光免疫分析法可常规用于临床检验.
作者：吴国球；劳心珍；孙宏伟；黄立新；张粉梅；钱娟英；卢惠霞 刊期： 2004年第05期
目的探讨胎儿骨髓间质干细胞对CD34+细胞体外扩增的造血支持作用.方法体外分离、纯化胎儿骨髓间质干细胞;Mini-MACS免疫磁珠分选3份脐血CD34+细胞;建立胎儿骨髓间质干细胞与CD34+细胞共培养体系:第1组为单独CD34+细胞培养,第2组为胎儿骨髓间质干细胞+CD34+细胞共培养,第3组为细胞因子(干细胞因子,白细胞介素-3,Flt3配体,血小板生成素)+CD34+细胞共培养,第4组为胎儿骨髓间质干细胞+细胞因子+CD34+细胞共培养.用流式细胞仪检测不同培养时间的CD34+细胞.结果胎儿骨髓间质干细胞表达CD29,CD44;免疫磁珠分选CD34+细胞的平均纯度为97.4%;胎儿骨髓间质干细胞+CD34+细胞共培养28 d,有核CD34+细胞仍占有核细胞的6.43%;CD34+细胞在胎儿骨髓间质干细胞、细胞因子作用下培养28 d,有核细胞总数、CD34+细胞数分别被扩增1.65×105倍、788倍.结论胎儿骨髓间质干细胞可有效扩增脐血造血干/祖细胞.
作者：胡嘉波；许文荣；毛飞；朱伟；孙晓春；钱晖；许化溪 刊期： 2004年第05期
临床检验杂志
主管:江苏省卫生厅
主办：江苏省医学会
