夏乾峰；覃西；钱士匀
目的获得人线粒体肌酸激酶广泛型亚型(uMtCK)的全长基因,在大肠埃希菌中表达,研制抗uMtCK多克隆抗体.方法采用逆转录PCR从培养的肿瘤细胞(Hela细胞)中成功扩增出1 062 bp的uMtCK的基因片段,插入到质粒pMD18-T中,经酶切和测序证实为uMtCK的基因编码序列,再插入到质粒pQE30,转化大肠埃希菌,诱导重组质粒pQE30-uMtCK表达酶融合蛋白.经亲和层析纯化,并进行SDS-PAGE、western blot鉴定及酶活性测定.纯化的uMtCK蛋白免疫家兔制备抗uMtCK多抗.结果RT-PCR扩增出的片段经酶切鉴定和测序证实为uMtCK的基因;在大肠埃希菌M15中实现了高效、可溶性的融合表达,表达量约17%.重组uMtCK具有CK样催化活性,表明原核表达的uMtCK具有类似于天然蛋白质的生物学活性.经免疫印迹分析,制备的抗uMtCK多抗适合作uMtCK的进一步分析之用.结论人uMtCK在大肠埃希菌中实现了高效表达,制备了针对uMtCK的抗体.
作者：张建；王爱华；顾鹏飞；于嘉屏 刊期： 2004年第05期
目的探讨少数白血病患儿骨髓中两群不同幼稚细胞的免疫表型特点及其性质.方法采用多参数流式细胞术(multiparameter flow cytometry,MCF)及CD45/SSC双对数散点图设门技术分析10例白血病患儿骨髓样本中各群细胞的抗原表达情况.结果10例样本中均检测到两群幼稚细胞群体,一群构成比较高(优势群体,8.5%～76.9%),其中有7例样本存在抗原的异常表达,包括早期、晚期抗原的非同步性表达、错位表达及抗原的缺失;另一群构成比较低(0.7%～13.9%),所有样本均表达B淋巴细胞抗原,为正常的幼稚B淋巴细胞,其中有3例存在抗原的非同步性表达.有7例样本流式细胞术检测的白血病细胞(优势群体)构成比低于形态学结果(P＜0.01).结论少数白血病患儿的骨髓除存在白血病细胞之外也可存在数量不等的正常幼稚B淋巴细胞,有时可伴有抗原的异常表达,需与混合白血病相鉴别.在白血病免疫分型中,流式细胞术对幼稚细胞的定性分析比定量分析更具有临床意义.
作者：巩文玉；刘怡；李志刚；吴敏媛 刊期： 2004年第05期
目的体外试验人-鼠嵌合抗人组织蛋白酶B(抗Cat B)抗体对Cat B的抑制作用.方法培养1株分泌人-鼠嵌合抗人Cat B抗体细胞,收集细胞培养上清,分离纯化人-鼠嵌合抗人Cat B抗体,用于体外抑制Cat B活性试验.结果该抗体在体外能抑制Cat B活性.结论抗Cat B抗体能特异结合Cat B并抑制其酶活性,将可能用于Cat B过度表达的癌症治疗.
作者：樊晓晖；Kopitar-Jerala Natasa；Premzl Ales；Kos Janko 刊期： 2004年第05期
目的对Sysmex SE-9000+HPC(简称SE-9000+HPC)全自动血液分析仪进行系统评价.方法以国际血液学标准化委员会(ICSH)和美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)制定的评价标准对其性能进行评价,同时对其全血细胞计数(CBC)的参考范围进行测定.结果SE-9000+HPC各项指标的线性良好(r＞0.995),在室温或4℃条件下至少可稳定48 h;不精密度的CV均＜5%;各参数的携带污染率低(＜0.01%);其测定结果与ICSH推荐的参考方法及CD-1600血细胞分析仪结果间相关性均较好(r＞0.97);高胆红素及高血脂对CBC各参数基本无干扰(P＞0.05);与手工法对943例白细胞分类(DC)结果比较,二者嗜中性粒细胞(N)、淋巴细胞(L)、嗜酸性粒细胞(E)、单核细胞(M)及嗜碱性粒细胞(B)的r分别为0.922、0.923、0.853、0.565和0.182;SE-9000+HPC对DC的敏感性、特异性及总有效性分别为85.2%、65.5%和73.4%;对276例DC异常标本的原始细胞及幼稚粒/红细胞筛选的总有效性≥75%;除RBC、Hb及HCT外,843例健康成人的CBC各项指标间无性别差异(P＞0.05).结论SE-9000+HPC各方面性能良好,测定CBC参数快速、准确、精密、可靠、过筛能力强,是一种大中型医院实验室对大批量全血标本的CBC与DC进行快速而有效筛检的全自动血液分析仪.
作者：彭黎明；府伟灵；高行军 刊期： 2004年第05期
目的使用特异性抗体和植物血凝素(PHA)建立γ-谷氨酰转肽酶同功酶Ⅱ(γ-glutamyltranspeptidase isoenzymesⅡ,GGTⅡ)特异膜免疫吸附检测法,探讨其对肝细胞癌(HCC)的临床价值.方法从HCC患者血清中提取、分离、纯化GGTⅡ,经神经氨酸酶(NMD)消化后,制备GGTⅡ特异性抗体,将纯化的特异性抗体(anti-GGTⅡ)、NMD和PHA吸附并固定到硝酸纤维素膜上,对HCC及其相关疾病患者血清中GGTⅡ进行定性检测.结果本法检测HCC阳性率达86.6%,特异性为95.7%;对直径小于5 cm的HCC检测阳性率达60.6%,对AFP阴性或低浓度的HCC患者检测阳性率为66.2%.结论GGTⅡ特异膜免疫吸附检测法可作为AFP的补充用于HCC的辅助诊断和早期发现.有简便快速、微量灵敏和价格低廉的特点.
作者：李军；魏曙亚；燕林青；候蓉；原荣；苗爱莲；王香林 刊期： 2004年第05期
由于聚合酶链反应(PCR)技术的高度敏感性和复杂性,分析标准化和质量保证已迫在眉睫.探索一种专门适用于PCR室间质量评价方案(PCR EQA方案)十分必要.EQA是临床实验室和公共卫生实验室质量保证的重要组成部分.1988年美国临床实验室改进法案修正案(CLIA88)规定所有开展中度复杂和高度复杂检验项目的临床实验室都必须首先获得相关检测项目满意的EQA成绩.近几年,PCR技术已经广泛应用于临床实验室,IFCC已把临床诊断分子扩增方法列入EQA计划并将其作为质量评价的一个重要工具[1].
作者：奚伟红 刊期： 2004年第05期
目的建立一种实时荧光逆转录多聚酶链反应(RT-PCR),检测喉鳞状细胞癌组织人端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA表达水平,并与传统的RT-PCR进行比较.方法采用TriZOL提取总RNA并将mRNA逆转录成cDNA,然后利用TaqMan技术定量检测喉鳞状细胞癌组织hTERT mRNA.结果实时荧光RT-PCR检测癌组织的阳性率为97.06%,癌旁组织的阳性率为38.24%,差异显著(x2=24.25,P＜0.005),与癌旁组织比较,喉鳞状细胞癌组织hTERT mRNA表达水平平均上升17.88倍;传统的RT-PCR检测喉鳞状细胞癌组织和癌旁组织的阳性率分别为73.53%和11.77%,均显著低于实时荧光RT-PCR的阳性率(P＜0.01).结论实时荧光RT-PCR是检测喉癌组织hTERT mRNA水平的一种快速有效、灵敏度和特异性更高的方法,hTERT mRNA表达的上调可能是导致喉鳞状细胞癌发生的重要因素.
作者：李一荣；吴健民；黄翔；陈凤花；时杰；胡丽华 刊期： 2004年第05期
美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)于2004年1月推出了需氧菌抗菌药物敏感试验执行标准第14版信息增刊(M100-S14),以取代M100-S13(见NCCLS,Wayne,Pennsylvania,2004,24(1):1-159.).下面简要介绍第14版信息增刊主要更新内容,供临床微生物学实验室工作人员参考.
作者：孙长贵；成军 刊期： 2004年第05期
目的探讨胎儿骨髓间质干细胞对CD34+细胞体外扩增的造血支持作用.方法体外分离、纯化胎儿骨髓间质干细胞;Mini-MACS免疫磁珠分选3份脐血CD34+细胞;建立胎儿骨髓间质干细胞与CD34+细胞共培养体系:第1组为单独CD34+细胞培养,第2组为胎儿骨髓间质干细胞+CD34+细胞共培养,第3组为细胞因子(干细胞因子,白细胞介素-3,Flt3配体,血小板生成素)+CD34+细胞共培养,第4组为胎儿骨髓间质干细胞+细胞因子+CD34+细胞共培养.用流式细胞仪检测不同培养时间的CD34+细胞.结果胎儿骨髓间质干细胞表达CD29,CD44;免疫磁珠分选CD34+细胞的平均纯度为97.4%;胎儿骨髓间质干细胞+CD34+细胞共培养28 d,有核CD34+细胞仍占有核细胞的6.43%;CD34+细胞在胎儿骨髓间质干细胞、细胞因子作用下培养28 d,有核细胞总数、CD34+细胞数分别被扩增1.65×105倍、788倍.结论胎儿骨髓间质干细胞可有效扩增脐血造血干/祖细胞.
作者：胡嘉波；许文荣；毛飞；朱伟；孙晓春；钱晖；许化溪 刊期： 2004年第05期
目的建立内标荧光定量PCR技术检测乙型肝炎病毒(HBV)DNA,以避免PCR扩增过程中可能出现的假阴性或部分抑制.方法在TaqMan荧光探针杂交PCR技术检测HBV载量的基础上,结合内标参照的方法指示PCR的扩增效率.结果本检测方法具有很好的特异性、重复性,检测敏感度达到1×103 copies/ml.经过对382例乙肝患者标本测定证实,标志物为HBsAg(+)、HBeAg(+)、抗HBc(+)的血清检出率为100%,标志物为HBsAg(+)、抗HBe(+)、抗HBc(+)的血清检出率为72.0%,与Roche试剂比较,两者的相关系数为0.987.结论本法快速、简便、特异性好、能指示病毒感染程度.
作者：冯艳铭；李智涛；邵大哓；李振勇；王樯；屈凌波；赵玉芬 刊期： 2004年第05期
目的了解ICU感染的病原菌特点及耐药性,为临床经验性用药提供参考依据.方法对本院住ICU的病人标本中检出的病原菌进行统计分析.结果352份阳性标本中革兰阴性杆菌140株占39.8%,其中鲍曼不动杆菌的检出率占首位(28.1%),铜绿假单胞菌次之(9.7%);革兰阳性球菌127株占36.1%,其中金黄色葡萄球菌的检出率占首位(21.9%),表皮葡萄球菌和屎肠球菌次之(均为6.5%);各类真菌85株占24.1%.标本来源以痰为主(86.1%).结论加强ICU感染的病原菌检测非常必要,可指导临床合理用药.
作者：朱建一；潘宇红 刊期： 2004年第05期
目的对全自动蛋白电泳系统筛查地中海贫血效果进行观察及评价.方法用法国Sebia公司生产的Hydrasys LC电泳仪进行血红蛋白电泳,用其配套的Hyrys扫描系统对HbA、HbA2、HbF、HbH、HbBart's、HbCS区带进行扫描,得出各种血红蛋白含量,用pH8.6醋酸纤维薄膜电泳作HbH、HbBart's、HbA2含量对比,用微量血红蛋白电泳作血红蛋白区带对比;用碱变试验作HbF对比.结果测定标本2472份,检出β地中海贫血173例;α地中海贫血:用pH8.6醋酸纤维薄膜电泳法检出HbH68例、HbBart's 25例,用全自动蛋白电泳系统电泳方法检出HbH 63例、HbBart's 22例,HbCS两种方法均为13例.结论全自动蛋白电泳系统能很好地分辨出增高的HbA2和HbF,对β地中海贫血检查有良好的效果;在α地中海贫血的检查中,对HbCS的检出效果较好,并且能作含量测定,但HbH区带多较淡染,有些标本出现HbBart's区带浓于HbH区带的现象,有假阴性结果出现.
作者：赵应斌；潘柳吟；李丽敏 刊期： 2004年第05期
目的了解不育患者血清抗精子抗体(AsAb)的类型及其吸附精子部位的分布情况,探讨AsAb定位检测在体外受精筛选中的临床应用.方法采用德国欧蒙公司生产的生物薄片试剂盒(间接免疫荧光法)对来我院就诊的1678例不育患者血清进行AsAB检测.结果AsAb总阳性率为7.63%;其中IgM占42.2%,IgG占46.1%,两者同时存在的占8.6%,IgA占3.1%;抗头部的(包括抗头尾部和抗头体尾部)占62.5%,抗体部的未见,抗尾部的占36.7%,抗体尾部的占0.8%.IgM类抗头部的(包括抗头尾部)占84.6%,IgG类抗尾部的占65.7%,IgA类抗头部的占100%.结论血清AsAb类型以IgM和IgG为主,吸附部位以抗头部为主,IgM以抗头部为主,而IgG以抗尾部为主,AsAb定位检测对体外受精治疗者的筛选有独特的价值.
作者：夏乾峰；覃西；钱士匀 刊期： 2004年第05期
2002年初江苏省临床检验中心向全省各级医院检验科推荐Beckman液体生化质控品作为生化室内质量控制品.我室当时使用Randox冻干质控品,我们对两种质控品进行回顾性比较.
作者：罗浔阳；张葵；顾光煜；王丽 刊期： 2004年第05期
我们对IL-1β与反复自然流产(RSA)的关系进行了研究,结果如下.1材料与方法1.1采集标本收集自我院计划生育门诊及住院患者,年龄23～40岁,其中RSA组17例,无RSA史的先兆流产组34例,正常早孕组(孕期≤12周)41例,健康体检组40例.
作者：黄革玲；李健 刊期： 2004年第05期
由于管型中各种细胞常发生不同程度的变性,在光学显微镜下正确鉴别常常比较困难,我们采用过氧化物酶染色方法可较好地鉴别管型中的细胞成分[1-2].
作者：金浩 刊期： 2004年第05期
目的建立全自动测定腺苷脱氨酶(ADA)的酶偶联分光光度法.方法用酶联比色法对pH值、腺苷浓度等反应条件及各种实验参数进行研究.用该法测定了90例健康者的血清样本及99例胸腹水的ADA活性.结果该法低检出限为1.7 U/L,线性范围可达220 U/L(r=0.9989),批内CV为2.9%～5.4%,批间CV为4.7%～6.4%,回收率为99.7%.胆红素＜136.8μmol/L,血红蛋白＜3.5g/L,抗坏血酸＜284μmol/L和三酰甘油＜9.03mmol/L的情况下,对测定结果无显著性影响.结论本法灵敏度高,线性、精密度好,结果准确,干扰少,且操作简便快速,适用于全自动生化分析仪分析.
作者：周美霞；管茶英；陈肖燕 刊期： 2004年第05期
目的探讨应用比例法检测结核分枝杆菌耐药性的可行性及可比性.方法用比例法和绝对浓度法分别检测240株结核分枝杆菌对异烟肼(INH)、链霉素(SM)、乙胺丁醇(EMB)、利福平(RFP)、乙硫异烟胺(TH1321)、对氨基水杨酸(PAS)、丁胺卡那(AN)、卡那霉素(KM)、氧氟沙星(OFLX)、卷曲霉素(CPM)的耐药性.结果SM、RFP、CPM、PAS、AN、KM绝对浓度法和比例法检出的耐药率无显著性差异,而INH、EMB、TH1321、OFLX用比例法测试耐药率均明显高于绝对浓度法(P＜0.01),两法药敏结果INH、SM、EMB、RFP、TH1321、CPM、AN、KM、OFLX和PAS的符合率分别为:81.7%、90.8%、83.8%、97.9%、83.3%、94.2%、97.5%、95.4%、83.3%、92.5%.结论比例法和绝对浓度法耐药率的差别主要与选定的药物临界浓度有关.
作者：赵玉玲 刊期： 2004年第05期
2003年10月我们从1例上呼吸道感染患者痰中分离培养出1株多重耐药的支气管败血鲍特菌(Bordetella bronchiseptica),报道如下.1病例摘要患者,女,48岁,2003年9月底曾患支气管感染,从痰中分离培养出肺炎克雷伯菌并对大部分抗生素敏感,因此选用头孢噻肟钠每12 h一次静滴5 d,痊愈,痰培养转为阴性.
作者：董卫；马雅静；赵海军 刊期： 2004年第05期
目的了解早产儿并发肺炎与支原体(5种)感染的关系.方法收集151例足月产儿和101例早产儿的咽拭子标本,应用套式聚合酶链反应检测解脲脲原体(Uu)、肺炎支原体(Mpn)、人型支原体(Mh)、生殖支原体(Mg)和发酵支原体(Mf)等5种支原体核酸.结果足月产儿Uu、Mpn、Mh、Mg、Mf检出率分别为8.6%,3.3%,2.0%,0%和0%;早产儿分别为41.6%,21.8%,11.9%,4.9%和0%,Uu、Mpn、Mh、Mg 4种支原体检出率显著高于足月产儿(P＜0.01).其中49例剖宫早产儿的Uu、Mpn、Mh、Mg检出率也明显高于98例足月剖宫儿.结论新生儿早产与Uu、Mh、Mpn、Mg等支原体感染相关.
作者：朱云霞；周勤；吴志君 刊期： 2004年第05期
临床检验杂志
主管:江苏省卫生厅
主办：江苏省医学会
