陶德定；江敏；吴剑宏；冯永东；龚建平
目的探讨胎儿骨髓间质干细胞对CD34+细胞体外扩增的造血支持作用.方法体外分离、纯化胎儿骨髓间质干细胞;Mini-MACS免疫磁珠分选3份脐血CD34+细胞;建立胎儿骨髓间质干细胞与CD34+细胞共培养体系:第1组为单独CD34+细胞培养,第2组为胎儿骨髓间质干细胞+CD34+细胞共培养,第3组为细胞因子(干细胞因子,白细胞介素-3,Flt3配体,血小板生成素)+CD34+细胞共培养,第4组为胎儿骨髓间质干细胞+细胞因子+CD34+细胞共培养.用流式细胞仪检测不同培养时间的CD34+细胞.结果胎儿骨髓间质干细胞表达CD29,CD44;免疫磁珠分选CD34+细胞的平均纯度为97.4%;胎儿骨髓间质干细胞+CD34+细胞共培养28 d,有核CD34+细胞仍占有核细胞的6.43%;CD34+细胞在胎儿骨髓间质干细胞、细胞因子作用下培养28 d,有核细胞总数、CD34+细胞数分别被扩增1.65×105倍、788倍.结论胎儿骨髓间质干细胞可有效扩增脐血造血干/祖细胞.
作者：胡嘉波；许文荣；毛飞；朱伟；孙晓春；钱晖；许化溪 刊期： 2004年第05期
目的建立人类雌激素受体(ER)和孕激素受体(PR)的流式细胞术检测方法,并比较几种不同抗体的应用情况.方法将乳腺癌细胞株MCF-7、T-47d用不同方法固定处理,比较它们与抗体特异性结合的差异,挑选佳细胞固定方法.同时,以与MDA-MB-231(MM231)细胞反应阳性率不大于5%为标准,对不同浓度的ER抗体1D5和MA1-310、PR抗体1A6和PgR636的反应特异性进行分析比较,并用于临床样本的检测.结果经0.25%多聚甲醛(PFA)预固定、75%乙醇固定、核分离液处理后的细胞,与抗体特异性反应的荧光强度大;在1～4μg/100μl浓度范围内,1D5与MM231反应阳性率低于5%,与MCF-7反应阳性率大于95%.同浓度的MA1-310与MM231和MCF-7反应时的阳性细胞率相当;1A6 1:100稀释,PgR636 1:10～1:200稀释,与MM231反应阳性率低于5%,与T-47d反应阳性率大于95%;用1D5(2μg)、1A6和PgR636(1:100)对12例临床乳腺癌样本ER、PR检测结果分别为(64.36±27.92)%、(53.95±28.17)%和(55.63±26.93)%.结论细胞经0.25%PFA预固定、75%乙醇固定、核分离液处理后,用一定浓度范围的1D5、1A6和PgR636可分别对ER、PR进行流式细胞术定量检测.本研究方法可用于临床样本的检测.
作者：陶德定；江敏；吴剑宏；冯永东；龚建平 刊期： 2004年第05期
严重急性呼吸综合征(severe acute respiratory syndrome,SARS)是新发生的传染病,2002年11月中旬起在我国流行,迄今还存在许多未解之谜,包括它是否可以通过空气、飞沫、接触、血液等途径传播.国家卫生部和世界卫生组织血液安全和临床技术部(WHO/BCT)分别于2003年4月23日和5月15日下发<关于做好传染性非典型肺炎发生地区血液工作的通知>和提出几点建议[1-2].为探讨是否存在流行前献血者为SARS冠状病毒隐性感染者,我们对163份SARS流行前无偿献血的标本回顾性检测SARS冠状病毒抗体,现报告如下.
作者：彭道波；赖福才；郭叔珍；王燕军；陈金军；侯金林 刊期： 2004年第05期
2003年10月我们从1例上呼吸道感染患者痰中分离培养出1株多重耐药的支气管败血鲍特菌(Bordetella bronchiseptica),报道如下.1病例摘要患者,女,48岁,2003年9月底曾患支气管感染,从痰中分离培养出肺炎克雷伯菌并对大部分抗生素敏感,因此选用头孢噻肟钠每12 h一次静滴5 d,痊愈,痰培养转为阴性.
作者：董卫；马雅静；赵海军 刊期： 2004年第05期
目的探讨在β-内酰胺类抗生素/舒巴坦联合制剂对鲍曼不动杆菌的抑菌作用中,舒巴坦发挥何种作用.方法将舒巴坦配制成10μg/片和30μg/片2种浓度的纸片,应用K-B法检测舒巴坦单剂纸片以及氨苄西林/舒巴坦、头孢哌酮/舒巴坦对鲍曼不动杆菌的抑菌圈直径,同时增加了舒巴坦分别与哌拉西林、替卡西林、头孢唑林、头孢呋辛、头孢三嗪、头孢噻肟等6种药物组成的复合纸片.并选择菌株进行舒巴坦对鲍曼不动杆菌的低抑菌浓度试验,用革兰染色法和电镜观察鲍曼不动杆菌的菌体及细胞壁的改变.结果无论是氨苄西林/舒巴坦、头孢哌酮/舒巴坦还是另外6种β-内酰胺类药物与舒巴坦的组合制剂的抑菌圈直径与舒巴坦单剂的抑菌圈直径相比均无显著性差异(P＞0.05).革兰染色光镜下可见菌体改变为长丝状,电镜下可见在亚抑菌浓度时细胞壁缺失.结论对鲍曼不动杆菌体外的抗菌试验显示,舒巴坦对该菌的细胞壁损伤在复合制剂中起主要作用,和舒巴坦与何种主药组合对β-内酰胺酶的抑制作用无明显相关性.
作者：褚少朋；邵海枫；李珍大；王卫萍；曹红琴 刊期： 2004年第05期
美国临床实验室标准化委员会(NCCLS)于2004年1月推出了需氧菌抗菌药物敏感试验执行标准第14版信息增刊(M100-S14),以取代M100-S13(见NCCLS,Wayne,Pennsylvania,2004,24(1):1-159.).下面简要介绍第14版信息增刊主要更新内容,供临床微生物学实验室工作人员参考.
作者：孙长贵；成军 刊期： 2004年第05期
我们设计与制作了一种集采样、运输、检验和保存于一体的粪便标本收集管,经过20多个医院应用,得到了临床、检验工作人员和病员的充分肯定.1设计与制作用食品级聚乙烯为原料,制作形状如图1所示.尖底管状结构,分为三个部件:尖底离心管、管盖和椎状小勺.小勺固定在管盖上.管高98 mm,大管径15 mm,管内容积12 ml,椎状小勺容积0.1 ml,管璧厚度1 mm.见图1a.
作者：蔡美珠；王开正；邓正华 刊期： 2004年第05期
CRP是一种急性期反应蛋白,初因其能与肺炎链球菌细胞壁中一种非型特异的多糖(C-多糖)发生沉淀反应而得名.我们发现一些CRP含量高(≥20mg/L)的血清,在与细菌混合可使细菌发生凝集.为了了解CRP是否参与细菌凝集过程,我们收集了一批CRP含量高的血清进行了研究.
作者：段兴同；马玉娇；张新民；郭晓静 刊期： 2004年第05期
目的纯化卡波济肉瘤相关疱疹病毒(KSHV)潜伏相关核抗原(LANA)羧基端编码基因ORF73C原核表达蛋白并分析其免疫原性.方法含重组质粒pGEX-6p-1+ORF73C(pORF73C)的宿主菌BL21经异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导表达.用glutathione Sepharose 4B亲和层析柱纯化表达产物后,以重组3C蛋白酶对融合蛋白进行解离,SDS-PAGE对表达及纯化产物进行鉴定.以纯化的ORF73C蛋白免疫小鼠获得抗血清,建立ELISA检测其免疫原性.结果SDS-PAGE显示蛋白条带大小分别为49 000和23 000,与预期的ORF73C融合蛋白及ORF73C蛋白分子量大小一致;ELISA检测显示,抗ORF73C多抗免疫反应性高于未免疫小鼠血清2倍以上.结论成功获得了纯化的ORF73C蛋白,经ELISA显示其有较强免疫原性.
作者：汤巧；卢春；黄丽；钱超；曾怡；张玲 刊期： 2004年第05期
目的探讨脑脊液半胱氨酸蛋白酶抑制剂(cystatin C)对脑转移瘤的诊断价值.方法采用速率散射比浊法对27例脑转移瘤患者和20例正常对照进行脑脊液中cystatin C、β2-微球蛋白(β2-MG)和白蛋白(Alb)含量测定.结果患者组脑脊液中cystatin C浓度[(1.25±0.43)mg/L]显著低于对照组[(2.81±0.77)mg/L](P＜0.05),β2-MG浓度[(3.18±0.67)mg/L]显著高于对照组[(1.01±0.32)mg/L](P＜0.05),Alb浓度[(325.7±41.5)mg/L]显著高于对照组[(185.5±25.8)mg/L](P＜0.01);三项检测指标的特异性无显著性差异(P＞0.05),cystatin C、Alb检测的敏感性均显著高于β2-MG(P＜0.05),cystatin C与Alb检测的敏感性无显著性差异(P＞0.05).结论脑脊液cystatin C浓度检测对于脑转移瘤的诊断是一个较好的指标.
作者：马荣红；温小波；崔天盆；吴健民 刊期： 2004年第05期
目的使用特异性抗体和植物血凝素(PHA)建立γ-谷氨酰转肽酶同功酶Ⅱ(γ-glutamyltranspeptidase isoenzymesⅡ,GGTⅡ)特异膜免疫吸附检测法,探讨其对肝细胞癌(HCC)的临床价值.方法从HCC患者血清中提取、分离、纯化GGTⅡ,经神经氨酸酶(NMD)消化后,制备GGTⅡ特异性抗体,将纯化的特异性抗体(anti-GGTⅡ)、NMD和PHA吸附并固定到硝酸纤维素膜上,对HCC及其相关疾病患者血清中GGTⅡ进行定性检测.结果本法检测HCC阳性率达86.6%,特异性为95.7%;对直径小于5 cm的HCC检测阳性率达60.6%,对AFP阴性或低浓度的HCC患者检测阳性率为66.2%.结论GGTⅡ特异膜免疫吸附检测法可作为AFP的补充用于HCC的辅助诊断和早期发现.有简便快速、微量灵敏和价格低廉的特点.
作者：李军；魏曙亚；燕林青；候蓉；原荣；苗爱莲；王香林 刊期： 2004年第05期
目的建立全自动测定腺苷脱氨酶(ADA)的酶偶联分光光度法.方法用酶联比色法对pH值、腺苷浓度等反应条件及各种实验参数进行研究.用该法测定了90例健康者的血清样本及99例胸腹水的ADA活性.结果该法低检出限为1.7 U/L,线性范围可达220 U/L(r=0.9989),批内CV为2.9%～5.4%,批间CV为4.7%～6.4%,回收率为99.7%.胆红素＜136.8μmol/L,血红蛋白＜3.5g/L,抗坏血酸＜284μmol/L和三酰甘油＜9.03mmol/L的情况下,对测定结果无显著性影响.结论本法灵敏度高,线性、精密度好,结果准确,干扰少,且操作简便快速,适用于全自动生化分析仪分析.
作者：周美霞；管茶英；陈肖燕 刊期： 2004年第05期
阿尔茨海默病(AD)及血管性痴呆(VD)是老年期痴呆常见的两种类型.老年斑(SP)和神经原纤维缠结(NFT)是AD的两大病理改变.其中β淀粉样蛋白(Aβ)是SP的主要成分,NFT与tau蛋白密切相关,而IL-6在AD神经中枢炎症反应中起重要作用.因此,脑脊液中Aβ1-42、tau蛋白及IL-6水平的测定对AD的诊断具有重要意义.
作者：刘俊恒；潘继承；朱建一；李爱民 刊期： 2004年第05期
目的了解早产儿并发肺炎与支原体(5种)感染的关系.方法收集151例足月产儿和101例早产儿的咽拭子标本,应用套式聚合酶链反应检测解脲脲原体(Uu)、肺炎支原体(Mpn)、人型支原体(Mh)、生殖支原体(Mg)和发酵支原体(Mf)等5种支原体核酸.结果足月产儿Uu、Mpn、Mh、Mg、Mf检出率分别为8.6%,3.3%,2.0%,0%和0%;早产儿分别为41.6%,21.8%,11.9%,4.9%和0%,Uu、Mpn、Mh、Mg 4种支原体检出率显著高于足月产儿(P＜0.01).其中49例剖宫早产儿的Uu、Mpn、Mh、Mg检出率也明显高于98例足月剖宫儿.结论新生儿早产与Uu、Mh、Mpn、Mg等支原体感染相关.
作者：朱云霞；周勤；吴志君 刊期： 2004年第05期
目的建立应用于临床的尿蛋白十二烷基硫酸钠(SDS)-琼脂糖凝胶(AGE)电泳方法.方法分别对Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型4种琼脂糖、不同的缓冲对、电压和电泳时间进行实验,确定佳的分离条件,建立测定方法.结果当Ⅳ型琼脂糖凝胶浓度为40 g/L,SDS含量为1 g/L,在pH 7.0的AMP-咪唑-HCl缓冲体系下进行电泳,可以有效地将尿蛋白按分子量大小进行分离.57份临床尿蛋白阳性标本电泳结果表明,生理性蛋白尿24例,中、高分子蛋白尿5例,小分子蛋白尿11例和混合型蛋白尿17例.结论本法具有分离效果好、操作简便、灵敏度高、成本低廉等优点,可以将尿蛋白按分子量大小分为小分子、中分子以及混合型,对肾脏疾病的受损部位和损伤程度的判断具有较高的价值,适于基层实验室的常规开展.
作者：吴惠毅；孙召东；刘安定；仇为民；赵绍林；杨新玲 刊期： 2004年第05期
目的探讨少数白血病患儿骨髓中两群不同幼稚细胞的免疫表型特点及其性质.方法采用多参数流式细胞术(multiparameter flow cytometry,MCF)及CD45/SSC双对数散点图设门技术分析10例白血病患儿骨髓样本中各群细胞的抗原表达情况.结果10例样本中均检测到两群幼稚细胞群体,一群构成比较高(优势群体,8.5%～76.9%),其中有7例样本存在抗原的异常表达,包括早期、晚期抗原的非同步性表达、错位表达及抗原的缺失;另一群构成比较低(0.7%～13.9%),所有样本均表达B淋巴细胞抗原,为正常的幼稚B淋巴细胞,其中有3例存在抗原的非同步性表达.有7例样本流式细胞术检测的白血病细胞(优势群体)构成比低于形态学结果(P＜0.01).结论少数白血病患儿的骨髓除存在白血病细胞之外也可存在数量不等的正常幼稚B淋巴细胞,有时可伴有抗原的异常表达,需与混合白血病相鉴别.在白血病免疫分型中,流式细胞术对幼稚细胞的定性分析比定量分析更具有临床意义.
作者：巩文玉；刘怡；李志刚；吴敏媛 刊期： 2004年第05期
目的建立一种实时荧光逆转录多聚酶链反应(RT-PCR),检测喉鳞状细胞癌组织人端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA表达水平,并与传统的RT-PCR进行比较.方法采用TriZOL提取总RNA并将mRNA逆转录成cDNA,然后利用TaqMan技术定量检测喉鳞状细胞癌组织hTERT mRNA.结果实时荧光RT-PCR检测癌组织的阳性率为97.06%,癌旁组织的阳性率为38.24%,差异显著(x2=24.25,P＜0.005),与癌旁组织比较,喉鳞状细胞癌组织hTERT mRNA表达水平平均上升17.88倍;传统的RT-PCR检测喉鳞状细胞癌组织和癌旁组织的阳性率分别为73.53%和11.77%,均显著低于实时荧光RT-PCR的阳性率(P＜0.01).结论实时荧光RT-PCR是检测喉癌组织hTERT mRNA水平的一种快速有效、灵敏度和特异性更高的方法,hTERT mRNA表达的上调可能是导致喉鳞状细胞癌发生的重要因素.
作者：李一荣；吴健民；黄翔；陈凤花；时杰；胡丽华 刊期： 2004年第05期
目的获得人线粒体肌酸激酶广泛型亚型(uMtCK)的全长基因,在大肠埃希菌中表达,研制抗uMtCK多克隆抗体.方法采用逆转录PCR从培养的肿瘤细胞(Hela细胞)中成功扩增出1 062 bp的uMtCK的基因片段,插入到质粒pMD18-T中,经酶切和测序证实为uMtCK的基因编码序列,再插入到质粒pQE30,转化大肠埃希菌,诱导重组质粒pQE30-uMtCK表达酶融合蛋白.经亲和层析纯化,并进行SDS-PAGE、western blot鉴定及酶活性测定.纯化的uMtCK蛋白免疫家兔制备抗uMtCK多抗.结果RT-PCR扩增出的片段经酶切鉴定和测序证实为uMtCK的基因;在大肠埃希菌M15中实现了高效、可溶性的融合表达,表达量约17%.重组uMtCK具有CK样催化活性,表明原核表达的uMtCK具有类似于天然蛋白质的生物学活性.经免疫印迹分析,制备的抗uMtCK多抗适合作uMtCK的进一步分析之用.结论人uMtCK在大肠埃希菌中实现了高效表达,制备了针对uMtCK的抗体.
作者：张建；王爱华；顾鹏飞；于嘉屏 刊期： 2004年第05期
目的体外试验人-鼠嵌合抗人组织蛋白酶B(抗Cat B)抗体对Cat B的抑制作用.方法培养1株分泌人-鼠嵌合抗人Cat B抗体细胞,收集细胞培养上清,分离纯化人-鼠嵌合抗人Cat B抗体,用于体外抑制Cat B活性试验.结果该抗体在体外能抑制Cat B活性.结论抗Cat B抗体能特异结合Cat B并抑制其酶活性,将可能用于Cat B过度表达的癌症治疗.
作者：樊晓晖；Kopitar-Jerala Natasa；Premzl Ales；Kos Janko 刊期： 2004年第05期
2002年初江苏省临床检验中心向全省各级医院检验科推荐Beckman液体生化质控品作为生化室内质量控制品.我室当时使用Randox冻干质控品,我们对两种质控品进行回顾性比较.
作者：罗浔阳；张葵；顾光煜；王丽 刊期： 2004年第05期
临床检验杂志
主管:江苏省卫生厅
主办：江苏省医学会
