学术投稿

一种快速简便的SARS冠状病毒RNA提取方法

戴二黑;郭兆彪;王效义;杨瑞馥

关键词:严重急性呼吸综合征, 冠状病毒, 核酸提取
摘要:目的建立快速简便的SARS冠状病毒RNA提取方法.方法采用异硫氰酸胍-玻璃粉法提取病毒RNA,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测SARS冠状病毒RNA.结果24例SARS患者的粪便和痰液标本同时采用异硫氰酸胍-玻璃粉法和QIAGEN公司的试剂盒提取SARS冠状病毒RNA,其粪便标本RT-PCR的阳性率分别为83.3%(20/24)和100-0%(24/24);痰液标本RT-PCR的阳性率分别为16.7%(4/24)和20.8%(5/24).异硫氰酸胍-玻璃粉法RT-PCR的阳性率与洗脱温度有关.结论异硫氰酸胍-玻璃粉法提取SARS冠状病毒RNA简便、快速、经济,可用于临床.
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    HBsAg阴性的HBV感染发生率约占乙型肝炎患者的10%~25%[1].此种HBsAg阴性的HBV感染是临床不明原因慢性肝炎的常见病因[2].为探讨HBsAg阴性慢性乙型肝炎患者病毒血症水平状况及其与临床的关系,重叠HCV感染时的影响,我们对44例HBsAg阴性慢性乙型肝炎患者血清HBV标志物(HBVM)及HBV DNA含量、肝内HBcAg表达进行了检测,并与肝组织病理学结果比较,报告如下.

    作者:刘晓梅;张世兰 刊期: 2004年第05期

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    作者:刘金波;何海明;周宁;王金富 刊期: 2004年第05期

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    作者:胡嘉波;许文荣;毛飞;朱伟;孙晓春;钱晖;许化溪 刊期: 2004年第05期

  • 硫氰酸汞试剂对含有还原型辅酶Ⅱ尿素试剂的交叉污染分析

    全自动生化分析仪存在交叉污染现象的报道较多,但以往报道多见于试剂成分含有高浓度测试物质,通过试剂针携带污染对后面的测试项目造成正误差[1-2].我们在工作中发现硫氰酸汞试剂(测定氯离子)对含有还原型辅酶Ⅱ的尿素试剂存在交叉污染,且对尿素测定造成较大负误差.现将结果报告如下.

    作者:李浩;秦晓燕;刘明琴 刊期: 2004年第05期

  • 人心肌肌钙蛋白Ⅰ化学发光免疫分析方法的建立

    目的建立检测人心肌肌钙蛋白Ⅰ(cTnI)化学发光免疫分析方法.方法用重组cTnI免疫新西兰兔获得抗体,经DEAE-23层析和(NH4)2SO4沉淀纯化后,用碳化二亚胺(EDC)法标记辣根过氧化物酶,Sephadex G-200纯化.优化鲁米诺-H2O2-肉桂酸发光体系,建立了cTnI化学发光免疫分析法.用该法检测138例正常人及病人血清标本,确定正常值参考范围,并与肌ISA法比较.结果所得抗体的滴度为1:8 000.优化后的发光体系为:鲁米诺(4.5 mmol/L),H2O2(7.5 mmol/L),四苯硼钠(0.8 mmol/L),肉桂酸(0.4 mmol/L),比单独用肉桂酸或四苯硼钠作增强剂灵敏度分别增加了1.19和1.05倍.本法检测灵敏度为0.2 ng/ml,线性范围为0.4~50 ng/ml,批内CV平均9.0%,批间CV平均11.8%,回收率为104.2%.Hb浓度在0~50 nmol/L,T-Bil在0~15μmol/L,TG在0~2.0 mmol/L对测定结果无影响.与ELISA比较,两法结果一致(P>0.05),相关系数r=0.9852(P<0.01).用BioCheck标准品为校正物,确定临床诊断参考范围为<2.12 ng/ml,诊断符合率为96.2%.结论建立的cTnI化学发光免疫分析法可常规用于临床检验.

    作者:吴国球;劳心珍;孙宏伟;黄立新;张粉梅;钱娟英;卢惠霞 刊期: 2004年第05期

  • 脑转移瘤患者脑脊液半胱氨酸蛋白酶抑制剂C变化的临床意义

    目的探讨脑脊液半胱氨酸蛋白酶抑制剂(cystatin C)对脑转移瘤的诊断价值.方法采用速率散射比浊法对27例脑转移瘤患者和20例正常对照进行脑脊液中cystatin C、β2-微球蛋白(β2-MG)和白蛋白(Alb)含量测定.结果患者组脑脊液中cystatin C浓度[(1.25±0.43)mg/L]显著低于对照组[(2.81±0.77)mg/L](P<0.05),β2-MG浓度[(3.18±0.67)mg/L]显著高于对照组[(1.01±0.32)mg/L](P<0.05),Alb浓度[(325.7±41.5)mg/L]显著高于对照组[(185.5±25.8)mg/L](P<0.01);三项检测指标的特异性无显著性差异(P>0.05),cystatin C、Alb检测的敏感性均显著高于β2-MG(P<0.05),cystatin C与Alb检测的敏感性无显著性差异(P>0.05).结论脑脊液cystatin C浓度检测对于脑转移瘤的诊断是一个较好的指标.

    作者:马荣红;温小波;崔天盆;吴健民 刊期: 2004年第05期

  • GGT Ⅱ特异膜免疫吸附检测法的建立

    目的使用特异性抗体和植物血凝素(PHA)建立γ-谷氨酰转肽酶同功酶Ⅱ(γ-glutamyltranspeptidase isoenzymesⅡ,GGTⅡ)特异膜免疫吸附检测法,探讨其对肝细胞癌(HCC)的临床价值.方法从HCC患者血清中提取、分离、纯化GGTⅡ,经神经氨酸酶(NMD)消化后,制备GGTⅡ特异性抗体,将纯化的特异性抗体(anti-GGTⅡ)、NMD和PHA吸附并固定到硝酸纤维素膜上,对HCC及其相关疾病患者血清中GGTⅡ进行定性检测.结果本法检测HCC阳性率达86.6%,特异性为95.7%;对直径小于5 cm的HCC检测阳性率达60.6%,对AFP阴性或低浓度的HCC患者检测阳性率为66.2%.结论GGTⅡ特异膜免疫吸附检测法可作为AFP的补充用于HCC的辅助诊断和早期发现.有简便快速、微量灵敏和价格低廉的特点.

    作者:李军;魏曙亚;燕林青;候蓉;原荣;苗爱莲;王香林 刊期: 2004年第05期

  • 生化液体质控品与冻干质控品的应用比较

    2002年初江苏省临床检验中心向全省各级医院检验科推荐Beckman液体生化质控品作为生化室内质量控制品.我室当时使用Randox冻干质控品,我们对两种质控品进行回顾性比较.

    作者:罗浔阳;张葵;顾光煜;王丽 刊期: 2004年第05期

  • 过氧化物酶染色鉴别尿细胞管型

    由于管型中各种细胞常发生不同程度的变性,在光学显微镜下正确鉴别常常比较困难,我们采用过氧化物酶染色方法可较好地鉴别管型中的细胞成分[1-2].

    作者:金浩 刊期: 2004年第05期

  • 生物薄片法对不育患者血清抗精子抗体分析及其临床应用

    目的了解不育患者血清抗精子抗体(AsAb)的类型及其吸附精子部位的分布情况,探讨AsAb定位检测在体外受精筛选中的临床应用.方法采用德国欧蒙公司生产的生物薄片试剂盒(间接免疫荧光法)对来我院就诊的1678例不育患者血清进行AsAB检测.结果AsAb总阳性率为7.63%;其中IgM占42.2%,IgG占46.1%,两者同时存在的占8.6%,IgA占3.1%;抗头部的(包括抗头尾部和抗头体尾部)占62.5%,抗体部的未见,抗尾部的占36.7%,抗体尾部的占0.8%.IgM类抗头部的(包括抗头尾部)占84.6%,IgG类抗尾部的占65.7%,IgA类抗头部的占100%.结论血清AsAb类型以IgM和IgG为主,吸附部位以抗头部为主,IgM以抗头部为主,而IgG以抗尾部为主,AsAb定位检测对体外受精治疗者的筛选有独特的价值.

    作者:夏乾峰;覃西;钱士匀 刊期: 2004年第05期

  • KX-21型血液分析仪试剂的研究与应用

    目的研制适用于KX-21血液分析仪的配套试剂.方法用季铵盐型表面活性剂破坏红细胞,进行白细胞计数与分类;用非氰化物还原法进行血红蛋白的测定;以无机盐为主体组成中性等渗稀释液,建立配套的KX-21血液分析检测试剂.结果用自制的KX-21配套试剂和原装配套试剂分别检测全血样品及末梢血稀释样品各200份,两套试剂所测得的红细胞(RBC)、血红蛋白(Hb)、平均红细胞体积(MCV)、血小板(PLT)、白细胞(WBC)、白细胞分类小、中、大(W-SCR、W-MCR、W-LCR)等相关系数均大于0.95;全血样品的各项检测指标CV值均小于10%.结论自制KX-21配套试剂与原装试剂可比性实验表明,两者结果无显著性差异,自配的KX-21配套试剂完全可以替代原装进口试剂,并不影响检测结果,还可达到节约成本的目的.

    作者:陈佑明;杨恒波;黄敬 刊期: 2004年第05期

  • 从痰标本中分离出1株多重耐药的支气管败血鲍特菌

    2003年10月我们从1例上呼吸道感染患者痰中分离培养出1株多重耐药的支气管败血鲍特菌(Bordetella bronchiseptica),报道如下.1病例摘要患者,女,48岁,2003年9月底曾患支气管感染,从痰中分离培养出肺炎克雷伯菌并对大部分抗生素敏感,因此选用头孢噻肟钠每12 h一次静滴5 d,痊愈,痰培养转为阴性.

    作者:董卫;马雅静;赵海军 刊期: 2004年第05期

  • PCR室间质量控制评价方法研究

    由于聚合酶链反应(PCR)技术的高度敏感性和复杂性,分析标准化和质量保证已迫在眉睫.探索一种专门适用于PCR室间质量评价方案(PCR EQA方案)十分必要.EQA是临床实验室和公共卫生实验室质量保证的重要组成部分.1988年美国临床实验室改进法案修正案(CLIA88)规定所有开展中度复杂和高度复杂检验项目的临床实验室都必须首先获得相关检测项目满意的EQA成绩.近几年,PCR技术已经广泛应用于临床实验室,IFCC已把临床诊断分子扩增方法列入EQA计划并将其作为质量评价的一个重要工具[1].

    作者:奚伟红 刊期: 2004年第05期

  • 重症监护病房感染的病原菌分析

    目的了解ICU感染的病原菌特点及耐药性,为临床经验性用药提供参考依据.方法对本院住ICU的病人标本中检出的病原菌进行统计分析.结果352份阳性标本中革兰阴性杆菌140株占39.8%,其中鲍曼不动杆菌的检出率占首位(28.1%),铜绿假单胞菌次之(9.7%);革兰阳性球菌127株占36.1%,其中金黄色葡萄球菌的检出率占首位(21.9%),表皮葡萄球菌和屎肠球菌次之(均为6.5%);各类真菌85株占24.1%.标本来源以痰为主(86.1%).结论加强ICU感染的病原菌检测非常必要,可指导临床合理用药.

    作者:朱建一;潘宇红 刊期: 2004年第05期

  • 舒巴坦单剂对鲍曼不动杆菌的体外抑菌活性研究

    目的探讨在β-内酰胺类抗生素/舒巴坦联合制剂对鲍曼不动杆菌的抑菌作用中,舒巴坦发挥何种作用.方法将舒巴坦配制成10μg/片和30μg/片2种浓度的纸片,应用K-B法检测舒巴坦单剂纸片以及氨苄西林/舒巴坦、头孢哌酮/舒巴坦对鲍曼不动杆菌的抑菌圈直径,同时增加了舒巴坦分别与哌拉西林、替卡西林、头孢唑林、头孢呋辛、头孢三嗪、头孢噻肟等6种药物组成的复合纸片.并选择菌株进行舒巴坦对鲍曼不动杆菌的低抑菌浓度试验,用革兰染色法和电镜观察鲍曼不动杆菌的菌体及细胞壁的改变.结果无论是氨苄西林/舒巴坦、头孢哌酮/舒巴坦还是另外6种β-内酰胺类药物与舒巴坦的组合制剂的抑菌圈直径与舒巴坦单剂的抑菌圈直径相比均无显著性差异(P>0.05).革兰染色光镜下可见菌体改变为长丝状,电镜下可见在亚抑菌浓度时细胞壁缺失.结论对鲍曼不动杆菌体外的抗菌试验显示,舒巴坦对该菌的细胞壁损伤在复合制剂中起主要作用,和舒巴坦与何种主药组合对β-内酰胺酶的抑制作用无明显相关性.

    作者:褚少朋;邵海枫;李珍大;王卫萍;曹红琴 刊期: 2004年第05期

  • 一种快速简便的SARS冠状病毒RNA提取方法

    目的建立快速简便的SARS冠状病毒RNA提取方法.方法采用异硫氰酸胍-玻璃粉法提取病毒RNA,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测SARS冠状病毒RNA.结果24例SARS患者的粪便和痰液标本同时采用异硫氰酸胍-玻璃粉法和QIAGEN公司的试剂盒提取SARS冠状病毒RNA,其粪便标本RT-PCR的阳性率分别为83.3%(20/24)和100-0%(24/24);痰液标本RT-PCR的阳性率分别为16.7%(4/24)和20.8%(5/24).异硫氰酸胍-玻璃粉法RT-PCR的阳性率与洗脱温度有关.结论异硫氰酸胍-玻璃粉法提取SARS冠状病毒RNA简便、快速、经济,可用于临床.

    作者:戴二黑;郭兆彪;王效义;杨瑞馥 刊期: 2004年第05期

  • 早产儿并发肺炎与5种支原体感染的关系

    目的了解早产儿并发肺炎与支原体(5种)感染的关系.方法收集151例足月产儿和101例早产儿的咽拭子标本,应用套式聚合酶链反应检测解脲脲原体(Uu)、肺炎支原体(Mpn)、人型支原体(Mh)、生殖支原体(Mg)和发酵支原体(Mf)等5种支原体核酸.结果足月产儿Uu、Mpn、Mh、Mg、Mf检出率分别为8.6%,3.3%,2.0%,0%和0%;早产儿分别为41.6%,21.8%,11.9%,4.9%和0%,Uu、Mpn、Mh、Mg 4种支原体检出率显著高于足月产儿(P<0.01).其中49例剖宫早产儿的Uu、Mpn、Mh、Mg检出率也明显高于98例足月剖宫儿.结论新生儿早产与Uu、Mh、Mpn、Mg等支原体感染相关.

    作者:朱云霞;周勤;吴志君 刊期: 2004年第05期

  • SARS流行前无偿献血者SARS冠状病毒抗体阳性2例

    严重急性呼吸综合征(severe acute respiratory syndrome,SARS)是新发生的传染病,2002年11月中旬起在我国流行,迄今还存在许多未解之谜,包括它是否可以通过空气、飞沫、接触、血液等途径传播.国家卫生部和世界卫生组织血液安全和临床技术部(WHO/BCT)分别于2003年4月23日和5月15日下发<关于做好传染性非典型肺炎发生地区血液工作的通知>和提出几点建议[1-2].为探讨是否存在流行前献血者为SARS冠状病毒隐性感染者,我们对163份SARS流行前无偿献血的标本回顾性检测SARS冠状病毒抗体,现报告如下.

    作者:彭道波;赖福才;郭叔珍;王燕军;陈金军;侯金林 刊期: 2004年第05期

  • 尿蛋白SDS-琼脂糖凝胶电泳方法建立及临床应用

    目的建立应用于临床的尿蛋白十二烷基硫酸钠(SDS)-琼脂糖凝胶(AGE)电泳方法.方法分别对Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型4种琼脂糖、不同的缓冲对、电压和电泳时间进行实验,确定佳的分离条件,建立测定方法.结果当Ⅳ型琼脂糖凝胶浓度为40 g/L,SDS含量为1 g/L,在pH 7.0的AMP-咪唑-HCl缓冲体系下进行电泳,可以有效地将尿蛋白按分子量大小进行分离.57份临床尿蛋白阳性标本电泳结果表明,生理性蛋白尿24例,中、高分子蛋白尿5例,小分子蛋白尿11例和混合型蛋白尿17例.结论本法具有分离效果好、操作简便、灵敏度高、成本低廉等优点,可以将尿蛋白按分子量大小分为小分子、中分子以及混合型,对肾脏疾病的受损部位和损伤程度的判断具有较高的价值,适于基层实验室的常规开展.

    作者:吴惠毅;孙召东;刘安定;仇为民;赵绍林;杨新玲 刊期: 2004年第05期

  • 脑脊液中Aβ1-42、tau蛋白及IL-6的检测在阿尔茨海默病诊断中的意义

    阿尔茨海默病(AD)及血管性痴呆(VD)是老年期痴呆常见的两种类型.老年斑(SP)和神经原纤维缠结(NFT)是AD的两大病理改变.其中β淀粉样蛋白(Aβ)是SP的主要成分,NFT与tau蛋白密切相关,而IL-6在AD神经中枢炎症反应中起重要作用.因此,脑脊液中Aβ1-42、tau蛋白及IL-6水平的测定对AD的诊断具有重要意义.

    作者:刘俊恒;潘继承;朱建一;李爱民 刊期: 2004年第05期

临床检验杂志

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