葛丽丽；朴军颜；杨小昂；尹艳慧；张毓
目的：探讨河南省青少年吸烟行为的影响因素，为有针对性地预防和控制青少年吸烟提供科学依据。方法：采用多阶段分层整群随机抽样方法，全省抽取16个调查点48所初中共7789名学生进行问卷调查。结果：河南省青少年尝试吸烟率和现在吸烟率分别为20．87％和5．87％。单因素分析结果显示青少年的尝试吸烟率和现在吸烟率均为男生高于女生，且随着年龄的增长，每周零花钱的增多，烟草广告暴露程度、父母吸烟和好朋友吸烟比例、看到老师吸烟频率的增高而增高（P＜0．001）。多因素logistic回归分析显示青少年尝试吸烟和现在吸烟行为的危险因素均包括男生、每周零花钱21～元组和＞40元组、好朋友吸烟、看到老师在学校吸烟及认为在社交场合吸烟使人更舒服，好朋友吸烟是重要的影响因素；保护因素包括认为吸烟能使年轻人减少吸引力及在社交场合吸烟使人更不舒服[OR（95％CI）＝0．762（0．651～0．900）、0．661（0．552～0．798）和0．710（0．527～0．953）、0．421（0．321～0．560）]。结论：青少年吸烟受多方面因素的影响，好朋友吸烟是重要的影响因素，在开展青少年吸烟防控工作时尤其应注重同伴控烟教育。
作者：孙盼盼；王卫峰；周刚；李建彬 刊期： 2015年第06期
促红细胞生成素（erythropoietin，EPO）是由肾脏分泌的一种活性糖蛋白，作用于骨髓中红系造血祖细胞，能促进其增殖、分化。1977年从再生障碍性贫血患者的尿液中分离提纯得到EPO后［1］，人们第一次能够用重组人EPO治疗慢性肾脏病贫血和化疗导致的非髓性恶性肿瘤相关的贫血。近年来研究［2-3］发现其不仅具有促进骨髓造血作用，还有一系列非造血作用，如抗炎、抗凋亡、抗氧化应激等。作者针对EPO研究的新进展及其在临床的应用综述如下。
作者：文建国；冯锦锦 刊期： 2015年第06期
目的：研究Notch1和HES1基因在骨肉瘤组织及骨肉瘤细胞系U2OS中的表达及其对U2OS侵袭能力的影响。方法：组织学水平研究中，配对选取23例骨肉瘤及临近瘤旁正常骨骼肌组织标本；细胞学水平研究中，选取骨肉瘤细胞系U2OS及人正常成骨细胞系hFOB1．19；采用免疫组化法检测组织学水平Notch1及HES1蛋白的表达，采用Western blot及Real-time PCR法检测组织学及细胞学水平Notch1、HES1蛋白及mRNA的表达。用Notch1-siRNA沉默U2OS细胞中Notch1基因后，应用Western blot及Real-time PCR法检测U2OS细胞中Notch1及HES1的表达，Transwell法检测U2OS侵袭能力的变化。结果：相比于正常组织，骨肉瘤组织中Notch1、HES1 mRNA和蛋白呈高表达（t配对＝22．567，14．830和8．439，7．100，P＜0．001）。 U2OS细胞中Notch1、HES1 mRNA和蛋白表达强于hFOB1．19细胞（t＝11．053，20．482和28．845，34．681，P＜0．001）。沉默Notch1基因后，U2OS细胞Notch1、HES1 mRNA和蛋白表达下降（t＝6．294，9．209和9．151，13．953，P＜0．05），侵袭能力下降（t＝71．387，P＜0．001）。结论：Notch1和HES1在骨肉瘤组织及骨肉瘤细胞系中呈高表达，沉默Notch1基因可降低U2OS细胞侵袭能力。
作者：王勇；赵伟；马骥 刊期： 2015年第06期
目的：获取结核分枝杆菌mpt59和esxA基因编码的原核表达融合蛋白，并将该蛋白初步用于结核患者的快速诊断。方法：PCR扩增含有柔性链接肽段的esxA核苷酸序列，并将其连接至原核表达载体pET28a上，再将mpt59连接至pET28a-esxA上。该融合蛋白在大肠杆菌BL21中原核表达后，用镍珠子进行亲和纯化。采用垂直电泳和免疫印迹分析重组蛋白，并用于结核患者的诊断。结果：成功构建了原核表达载体pET28a-esxA-mpt59，转化大肠杆菌BL21后经诱导产生了高水平的表达产物。用该纯化蛋白进行ELISA检测，结果表明其诊断结核的灵敏度为97．8％，特异度为100％。结论：构建了含mpt59和esxA融合抗原基因的原核表达载体，并诱导表达了融合蛋白，为进一步研究结核分枝杆菌疫苗或诊断试剂奠定了基础。
作者：石洁；朱岩昆；郑丹薇；马晓光；王少华；李辉；邢进；吴彩霞 刊期： 2015年第06期
目的：提高郑州市校外青少年艾滋病相关知识知晓水平。方法：采用整群抽样的方法于2014年5月至6月抽取郑州市校外青少年372人为研究对象。先对其艾滋病知识进行基线调查，之后在该人群中开展艾滋病知识健康教育、发放艾滋病宣传材料和提供咨询服务等干预活动，干预活动结束后对该部分人群再次进行艾滋病知识调查。结果：干预前的艾滋病知识知晓率为39．2％，干预后提高到98．9％，差异有统计学意义（χ2配对＝222．001，P＜0．001）。结论：郑州市校外青少年艾滋病知识知晓率干预后得以明显提高。
作者：楚子君 刊期： 2015年第06期
目的：探讨中国阿尔茨海默病（ AD）患者血清促甲状腺激素（ TSH ）水平的变化。方法：利用计算机及手工检索，全面检索AD患者血清TSH变化的病例对照研究，采用Stata 12．0进行meta分析。结果：共有16篇文献纳入分析，获得样本1760例，其中病例组918例，对照组842例。 Meta分析结果显示，AD患者血清TSH水平低于对照组（Z＝1．987，P＝0．046）；失安全系数Nfs0．05为895；平均年龄为异质性因素，进一步对病例组平均年龄进行亚组分析，发现随着年龄增高，病例组和对照组之间的TSH水平差异更为明显（Z＝2．110，P＝0．003），采用随机效应模型合并分析的结果可靠。结论：中国AD患者TSH水平低于正常人群，低水平的血清TSH可能与AD发生、发展有关。
作者：张亚峰；孙桂香；王炳花 刊期： 2015年第06期
目的：观察LBH589对上皮性卵巢癌OVCAR-3细胞增殖、侵袭和VEGF表达的影响。方法：采用MTT法和Transwell实验分别检测1、5、10μmol／L的LBH589对OVCAR-3细胞活性和侵袭细胞数的影响，采用Western blot法检测Ki67、MMP-2、VEGF、p-PI3K、p-Akt蛋白的表达水平。采用MTT和Western blot法分别检测PI3K抑制剂LY294002对细胞活性以及MMP-2、VEGF表达水平的影响。结果：LBH589降低OVCAR-3细胞活性（ F＝5．324， P＜0．001），减少穿过Transwell基质膜的细胞数量（F＝84．325，P＜0．001），Ki67、MMP-2、VEGF、p-PI3K、p-Akt蛋白的表达水平亦降低（F＝9．191、7．623、6．340、6．221、4．690，P均＜0．001）。与对照组相比，LY294002抑制MMP-2和VEGF蛋白的表达，并降低OVCAR-3细胞活性（ P均＜0．05）。结论：LBH589可能通过调控PI3K／Akt信号通路下调MMP-2和VEGF表达水平，继而抑制上皮性卵巢癌OVCAR-3细胞增殖、侵袭和血管生成。
作者：晁宏图；李晓凤；寇馨歆；李雷；杨晓霞；王莉英；王莉 刊期： 2015年第06期
作者： 刊期： 2015年第06期
目的：通过构建pCAT3启动子陷阱载体筛选甲型副伤寒沙门菌噬菌体LSPA1启动子。方法：PCR无义突变去除pCAT2载体骨架上CalⅠ酶切位点，并在CAT片段的5’端引入CalⅠ的酶切位点，构建启动子陷阱载体pCAT3。 TaqⅠ酶切噬菌体LSPA1基因组，插入pCAT3载体中，转化至大肠杆菌DH5α，通过氯霉素抗性平板筛选获得噬菌体LSPA1基因文库菌；随机挑取1株提取质粒，测序及比对分析插入序列；根据分析结果设计引物，扩增可能的启动子序列，并插入验证载体p-3lysm-egfp，转化DH5α，荧光显微镜观察。结果：成功构建pCAT3启动子陷阱载体，获得约100启动子文库菌，其中1株文库菌质粒中随机插入片段可能对应噬菌体LSPA1的 ORF4启动子；插入待验证DNA片段的p-3lysm-egfp载体重组菌在荧光显微镜下能见到明显绿色荧光。结论：该启动子文库可有效筛选噬菌体LSPA1启动子，为进一步深入研究噬菌体LSPA1提供帮助。
作者：曾韦锟；毛普加；洪愉；冯梦蝶；许泽仰；宋武战；杨洪文；赵继华；王纪爱；黄芬；井申荣 刊期： 2015年第06期
目的：研究FATE／BJ-HCC-2基因表达与肝癌细胞迁移及侵袭的关系。方法：体外合成FATE／BJ-HCC-2基因序列特异性小干扰RNA（siRNA），转染肝癌细胞系克隆株5B4，并设非特异性siRNA转染和空白对照组。采用RT-PCR及Western blot方法检测各组细胞中 FATE／BJ-HCC-2 mRNA和蛋白的表达；通过Transwell小室模型检测各组细胞体外迁移及侵袭的能力；激光共聚焦显微镜下观察5B4及空质粒转染的对照细胞（ Mock）的骨架结构。结果：各组细胞中FATE／BJ-HCC-2 mRNA和蛋白表达差异有统计学意义（F＝15．321，P＝0．020），特异性siRNA转染组细胞低于其他2组（ P＜0．05）。抑制FATE／BJ-HCC-2基因表达后，细胞体外迁移及侵袭的能力降低（ F＝6．171和10．109，P＜0．05）。5B4细胞形态拉长，蝌蚪状，呈现迁移、游走的状态；微丝丰富，形态规则，平行贯穿于细胞全长，细胞膜周围有较多丝状伪足伸出；微管减少，分布不规则。结论：FATE／BJ-HCC-2基因表达促进肝癌细胞的迁移及侵袭。
作者：葛丽丽；朴军颜；杨小昂；尹艳慧；张毓 刊期： 2015年第06期
脊髓小脑共济失调（ spinocerebellar ataxia ，SCA）是一组具有临床和遗传异质性的神经系统遗传疾病［1-2］，多呈常染色体显性遗传，主要表现为慢性进行性加重的肢体共济失调、构音障碍及眼球运动障碍，影像学研究［1-4］表明病变主要累及大脑、小脑、脑干及脊髓。目前报道［1，5-6］的SCA亚型多达40种，其发病年龄及临床症状多数相互重叠，因此仅仅依据临床表型特征及影像学评估对患者诊断分型较为困难，而基因检测则有助于明确诊断。该研究主要对临床诊断为SCA的一家系9例患者及有血缘关系、临床表现正常的27例家系成员进行基因检测，以确定基因型，同时对患者的临床特点进行总结分析，为临床诊断提供相关资料。
作者：夏明荣；黄月；张杰文；李书剑 刊期： 2015年第06期
目的：研究枸杞多糖及其硫酸酯体外免疫和抗肿瘤活性。方法：分别采用水提一步醇沉法和分步醇沉法提取不同的多糖LBPS30、LBPS70和LBPSt，纯化后用氯磺酸-吡啶法修饰得到3种硫酸化枸杞多糖sLBPS30、sLB-PS70和sLBPSt。采用MTT法检测多糖对小鼠脾淋巴细胞增殖和食管癌EC109细胞抑制的影响，ELISA法检测细胞上清液中TNF-α、IL-2、IFN-γ和IL-24的含量，划痕法检测细胞迁移情况。结果：sLBPSt和 sLBPS30的淋巴细胞增殖率和不同时间点对EC109细胞的抑制率都较高； sLBPSt组细胞上清液中4种淋巴细胞因子含量均显著高于细胞对照组（P＜0．05）；sLBPSt组细胞迁移数显著低于其余各组（P＜0．05）。结论：硫酸化修饰能显著增强体外脾淋巴细胞增殖，促进淋巴细胞四种细胞因子的分泌，并能抑制EC109细胞生长，降低EC109细胞迁移速率，且与硫酸基含量有一定的关系。 sLBPSt和sLBPS30总体效果较好。
作者：王君敏；薛敬礼；葛蓓蕾；庄玉伟；杜春燕；薛昆 刊期： 2015年第06期
目的：制备人微管蛋白抗体，并用其观察大鼠死亡后肾脏组织中微管蛋白的降解规律与死亡时间的关系。方法：通过分子生物学方法制备小鼠抗人微管蛋白多克隆抗体。取48只大鼠，分为断颈致死组和溺死组，每组24只，采用Western blot观察死亡后24、48、72和96 h大鼠肾脏组织中微管蛋白的降解规律。结果：制备的小鼠抗人微管蛋白多克隆抗体效价超过1砄8000；2组大鼠死亡后，肾脏组织中微管蛋白均呈逐步降解的趋势；断颈致死组大鼠死后96 h肾脏组织检测不到微管蛋白；溺死组大鼠死后72 h肾脏组织检测不到微管蛋白。结论：大鼠死亡后，肾脏组织中微管蛋白呈逐步降解的趋势；溺死和断颈大鼠死亡后肾脏组织中微管蛋白的降解速度存在差异。
作者：齐麟；李伟 刊期： 2015年第06期
目的：探索脑动静脉畸形（CAVM）与脑血管内皮生长因子（VEGF）之间的关系。方法：对30例CAVM病变血管及病变周围血管组织标本行HE染色，观察血管的组织学改变。采用免疫组化法和Western blot法检测血管中VEGF蛋白的表达，采用荧光定量PCR法检测血管中VEGF mRNA的表达。以32例正常脑组织血管标本作对照。结果：CAVM病变血管和病变周围血管较正常脑血管发生明显改变。荧光定量PCR和Western blot 检测结果显示，CAVM病变血管和病变周围血管组织中VEGF mRNA和蛋白表达水平均高于正常脑血管（P均＜0．05）， CAVM病变血管中VEGF mRNA和蛋白表达水平高于病变周围血管（t配对＝19．095，3．216，P＜0．05）。结论：VEGF可能对CAVM的发生和发展起着重要作用。
作者：田甜；孙雅菲；于淼；张继伟；呼铁民；王维兴；王广 刊期： 2015年第06期
目的：探讨大黄素对急性主动脉夹层动物模型全身炎性反应的干预作用。方法：健康成年犬12只，主动脉夹层模型成功建立后，分为对照组（术后即刻生理盐水20 mL保留灌肠）和干预组（术后即刻大黄素200 mg／kg加入20 mL生理盐水中保留灌肠），每组6只。采集两组模型制作前，模型制作结束即刻，模型制作结束后2、4、6 h犬静脉血标本行内毒素、细胞因子TNF-α、IL-6的检测。结果：干预组内毒素、TNF-α、IL-6含量较对照组降低（内毒素：F组间＝4721．572， F时间＝449．164， F交互＝3135．754，P均＜0．001；TNF-α：F组间＝2257．284，F时间＝3563．186， F交互＝1183．482，P均＜0．001；IL-6：F组间＝1504．231，F时间＝378．196，F交互＝125．869，P均＜0．001）。结论：大黄素能够对急性主动脉夹层全身炎性反应产生良好的抑制作用，其原因可能为减轻内毒素及细胞因子的释放，从而减轻了SIRS。
作者：李明；法宪恩；王宏山；杨景学；赵根尚 刊期： 2015年第06期
目的：探讨CK19、Galectin-3及CD56在良恶性卵巢甲状腺肿鉴别诊断中的应用价值。方法：采用免疫组化法检测6例卵巢甲状腺癌和10例卵巢甲状腺肿组织中CK19、Galectin-3及CD56蛋白表达情况。结果：卵巢甲状腺癌组织中CK19、Galectin-3蛋白的表达高于卵巢甲状腺肿组织（t＝4．807，3．835，P均＜0．05），CD56蛋白的表达低于卵巢甲状腺肿组织（t＝3．105，P均＜0．05）。分别利用CK19、Galectin-3及CD56蛋白表达水平绘制ROC曲线，曲线下面积（AUC）分别为0．983、0．933和0．867；以其中1个指标恶性即判定为恶性，则3者联合检测对良恶性卵巢甲状腺肿鉴别诊断的灵敏度可达100％。结论：CK19、Galectin-3及CD56对卵巢甲状腺肿良恶性的鉴别有很好的应用价值。
作者：邵世清；杨少琴；黄贵；田君；张红霞；王社莲 刊期： 2015年第06期
目的：对豫医卷毛大鼠的Krt71基因进行比较生物学分析。方法：采用PCR方法对豫医卷毛大鼠Krt71的cDNA序列进行克隆、测序，并与BN大鼠、小家鼠、家牛、家绵羊、家猫、苏门答腊猩猩和人的Krt71 cDNA序列及其编码产物的氨基酸序列进行同源性比较和系统遗传学分析。结果：获得了豫医卷毛大鼠Krt71基因全长1573 bp的cDNA序列（ GenBank登录号：KF303588）。豫医卷毛大鼠与BN大鼠、小家鼠、家牛、家绵羊、家猫、苏门答腊猩猩和人的同源性分别为99．9％、95．2％、88．5％、87．5％、88．0％、88．1％、88．1％，氨基酸序列的同源性分别为99．9％、98．9％、92．4％、91．2％、91．4％、92．3％、92．1％。结论：Krt71基因在哺乳动物进化过程中具有较高的保守性，是一个具有重要功能的“持家基因”。
作者：张明昊；章金涛 刊期： 2015年第06期
目的：建立黄曲霉菌感染小鼠角膜动物模型，并观察病变后不同时期角膜组织病理学变化。方法：用培养接种棒对40只C57 BL／6小鼠进行仿真临床角膜划痕导致真菌感染。在第1、3、5、7和14天行裂隙灯显微镜检查评分，随后处死小鼠制作角膜铺片，免疫荧光染色后进行激光扫描共聚焦显微镜观察。结果：术后第1、3和5天，接种眼临床评分升高迅速，在第5天达到峰值，随后第7和14天临床评分逐渐降低；术后第1天接种眼角膜缘组织已有中性粒细胞浸润、角膜巩膜缘血管扩张充血等明显急性炎症变化，第3天角膜巩膜缘出现新生血管芽，中性粒细胞向角膜中央溃疡灶浸润、聚集，第5天中性粒细胞浸润进一步加重，见侵入角膜基质层放射状生长的新生血管，第7天中性粒细胞浸润仍较严重，新生血管向角膜中央溃疡灶生长明显，管腔增粗，第14天中性粒细胞明显减少，新生血管萎缩、减少。结论：成功建立黄曲霉菌角膜炎小鼠动物模型；感染第5天可能是角膜炎症过程中的关键时间窗。
作者：张伟宏；蒋莉莉；汪晓凯；赵秋民；杨东斌；黄贯峰；张焕云；杨阳；梁芳；韩雷；吴细丕 刊期： 2015年第06期
目的：观察重复经颅磁刺激（rTMS）对抑郁大鼠学习记忆功能及海马CA3区突触素（SYP）表达的影响。方法：SD雄性大鼠40只，随机分为对照组、抑郁组、rTMS组和伪刺激组，每组10只，后3组采用为期21 d的孤养结合慢性不可预见轻度应激制备抑郁模型。造模成功后，rTMS组给予3个疗程15 Hz的rTMS治疗；伪刺激组只施予同样次数的声音刺激而无电流脉冲。采用Morris水迷宫的定位航行实验及空间探索实验评定大鼠学习记忆功能。应用免疫组织化学方法检测大鼠海马CA3区SYP蛋白的表达情况。结果：4组大鼠逃避潜伏期、原平台象限游泳时间及原平台象限游泳路程占总路程的百分比及海马CA3区SYP蛋白表达水平比较，差异均有统计学意义（ F＝39．608、646．088、198．940、388．673，P＜0．001）。与对照组比较，抑郁组、伪刺激组大鼠逃避潜伏期延长，原平台象限游泳时间缩短，原平台象限游泳路程占总路程的百分比减小，SYP蛋白表达水平降低（P＜0．05）；与抑郁组、伪刺激组比较，rTMS组上述指标均明显改善（P＜0．05）。结论：rTMS干预可以改善抑郁模型大鼠的学习记忆功能，其机制可能与rTMS增加大鼠海马CA3区SYP的表达有关。
作者：欧阳华；白冰；赵琳；任慧聪；张朝辉 刊期： 2015年第06期
目的：研究不同粒径羟基磷灰石（ HA）对人工早期龋的再矿化作用。方法：应用离体人恒前磨牙制备早期釉质龋标本50个，随机分为5组（n＝10）：阳性对照组（NaF溶液）、阴性对照组（去离子水）、30 nm HA组、60 nm HA组和12μm HA组，用显微硬度计检测标本脱矿前后表面显微硬度，并用扫描电镜观察各组样本脱矿前后的形态；按照分组进行早期龋体外循环实验12 d，同法测定体外循环后各组样本的表面显微硬度，并观察其形态。结果：与阴性对照组相比，各HA组均能提高标本的表面显微硬度，且随着粒径的减小，其表面显微硬度增大（ F＝86．272，P＜0．001）。扫描电镜下观察，30 nm HA组和60 nm HA组的脱矿区有针状或短棒状晶体颗粒沉积，表面变得均匀、平整，且以30 nm HA组的再矿化效果更佳，12μm HA组的再矿化效果不明显。结论：HA能有效促进早期釉质龋的再矿化；纳米级HA优于微米级HA，且随着粒径的减小，其再矿化效果更佳。
作者：刘成霞；申晓青；徐平平 刊期： 2015年第06期
郑州大学学报（医学版）杂志
主管:河南省教育厅
主办：郑州大学
