学术投稿

人端粒酶逆转录酶启动子调控的真核荧光表达载体的构建与表达

董翠;阴志刚;王纯耀;张旭东

关键词:人端粒酶逆转录酶启动子, 真核荧光表达载体, 构建, 表达
摘要:目的:克隆人端粒酶逆转录酶(hTERT)启动子,构建真核表达载体pEGFP-C3-hTERTp.方法:PCR方法扩增出hTERTp,依次克隆至pGEM-T Easy载体和重组载体pEGFP-C3上.经酶切和测序鉴定后,重组质粒pEGFP-C3-hTERTp转染人胚肾293A细胞,并在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达情况.结果:成功扩增出276 bp的hTERTp,测序结果与GenBank中hTERT启动子DNA序列完全一致.重组载体pEGFP-C3-hTERTp转染293A细胞能观察到荧光表达.结论:成功构建了hTERT启动子调控的真核绿色荧光表达载体pEGFP-C3-hTERTp,其能够在人胚肾293A细胞中表达.
郑州大学学报(医学版)杂志相关文献
  • 粉防己碱对人翼状胬肉成纤维细胞体外增殖及增殖细胞核抗原表达的影响

    目的:观察粉防己碱(Tet)对体外培养人翼状胬肉成纤维细胞(HPF)增殖的影响.方法:用20、40、80和160μmol/L的Tet作用于体外培养的HPF,24、48及72 h后采用MTT法检测细胞生长抑制率,免疫细胞化学法检测HPF增殖细胞核抗原(PCNA)的表达情况.结果:Tet在20、40、80和160 μmol/L浓度下作用24、48及72 h,能够抑制HPF增殖(F时间=235.632、342.039、586.788和584.667,P均<0.001;F组间=372.672、474.734和389.467,P均<0.001).Tet干预后PCNA蛋白表达下降(F=185.623,P=0.009).结论:Tet可抑制翼状胬肉HPF细胞增殖.

    作者:孙广莉;张明昌;蒋丽 刊期: 2010年第03期

  • β-榄香烯乳联合照射对人舌鳞状细胞癌裸鼠移植瘤的影响

    目的:观察β-榄香烯乳联合照射是否能提高人舌鳞癌裸鼠移植瘤的治疗效果及对肿瘤细胞凋亡和外周血白细胞的影响.方法:建立人舌鳞状细胞癌裸鼠移植瘤动物模型(40只),随机分为5组,每组8只:空白组、单纯药物组、单纯照射组、药物(1 h)+照射组和药物(2 h)+照射组.观察肿瘤生长时间、肿瘤细胞凋亡率和外周血白细胞总数.结果:人组40只移植瘤裸鼠实验期间无死亡.空白组、单纯药物组、单纯照射组、药物(1 h)+照射组和药物(2 h)+照射组肿瘤生长时间分别为(8.62±3.81)、(15.13±6.60)、(22.00±6.32)、(29.00±5.68)和(40.00±4.41)d;药物(1h)+照射组:药物和照射无交互作用(F=0.015,P=0.902);药物(2 h)+照射组:药物和照射有交互作用(F=9.002,P=0.006).空白组、单纯药物组、单纯照射组、药物(1 h)+照射组和药物(2 h)+照射组凋亡率分别为(5.00±2.05)%、(11.99±2.47)%、(19.88±2.83)96、(27.11±4.84)%和(34.84±4.62)%;药物(1 h)+照射组:药物和照射无交互作用(F=0.012,P=0.915);药物(2 h)+照射组:药物和照射有交互作用(F=12.837,P=0.001).结论:β-榄香烯乳联合照射能提高人舌鳞状细胞癌裸鼠移植瘤的放射治疗效果,照射前2 h应用能起到放射增敏作用;联合作用能有效诱导细胞凋亡,且对白细胞没有抑制作用.

    作者:吴大鹏;卢红;张洪志 刊期: 2010年第03期

  • 人端粒酶逆转录酶启动子调控的真核荧光表达载体的构建与表达

    目的:克隆人端粒酶逆转录酶(hTERT)启动子,构建真核表达载体pEGFP-C3-hTERTp.方法:PCR方法扩增出hTERTp,依次克隆至pGEM-T Easy载体和重组载体pEGFP-C3上.经酶切和测序鉴定后,重组质粒pEGFP-C3-hTERTp转染人胚肾293A细胞,并在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达情况.结果:成功扩增出276 bp的hTERTp,测序结果与GenBank中hTERT启动子DNA序列完全一致.重组载体pEGFP-C3-hTERTp转染293A细胞能观察到荧光表达.结论:成功构建了hTERT启动子调控的真核绿色荧光表达载体pEGFP-C3-hTERTp,其能够在人胚肾293A细胞中表达.

    作者:董翠;阴志刚;王纯耀;张旭东 刊期: 2010年第03期

  • 卵巢子宫内膜异位囊肿56例治疗体会

    子宫内膜异位症是生育期妇女常见病,也是引起女性不孕的常见原因之一.近年来,其发病率有逐年升高的趋势[1].2002年1月至2004年12月,郑州大学第三附属医院妇产科共收治56例卵巢子宫内膜异位囊肿患者,现将治疗体会总结如下.

    作者:赵倩;边爱平;许雅娟 刊期: 2010年第03期

  • 热化疗对Raji细胞生长、JNK通路及热休克蛋白70表达的影响

    目的:观察热化疗对淋巴瘤Raji细胞生长的影响及其可能机制.方法:Raji细胞随机分为单纯化疗组(采用3.00 mg/L阿霉素处理细胞)、单纯热疗组(采用43℃加热处理细胞)、热化疗组(采用43℃加热联合阿霉素处理细胞)和对照组(细胞不作任何处理).应用MTT法检测各组细胞增殖率的变化,采用Western Blot检测磷酸化JNK(p-JNK)和热休克蛋白70(HSP70)的表达.结果:对照组、单纯化疗组、单纯热疗组及热化疗组细胞增殖率分别为(100.00 ± 0.00)96、(66.19 ± 2.67)%、(63.44 4 ± 2.43)%和(58.93 ± 3.66)%,p-JNK的表达量分别为(0.45 ± 0.05)、(0.49 ± 0.04)、(0.48 ± 0.03)和(0.67 4 ± 0.13),HSP70的表达量分别为(0.55 ± 0.09)、(1.06 ±0.84)、(8.23 ± 2.12)和(6.46 ± 2.22),化疗(a)和热疗(b)及热化疗(a × b)均对以上指标有影响(Fa分别为83.294、17.586和25.176,Fb分别为62.351、14.411和18.553,F(a×b),分别为94.178,25.153和32.189,P均<0.05).结论:热化疗联合可抑制Raji细胞增殖,这种抑制作用可能是通过激活JNK信号转导通路或部分抑制HSP70蛋白的表达完成的.

    作者:刘新奎;王琳;张明智 刊期: 2010年第03期

  • 脊髓型多发性硬化24例MRI表现

    多发性硬化(multiple sclerosis,MS)是中枢神经系统脱髓鞘病变中常见的一种,属自身免疫性疾病,临床表现较为复杂,可以出现视觉障碍、肢体瘫痪和共济失调等症状,病程为反复恶化与缓解,总趋势为进行性加重[1].MS以脊髓损害为唯一或主要表现的称为脊髓型MS[2].作者分析了24例脊髓型MS患者的MRI表现,报道如下.

    作者:张焱;胡瑛;李建灵;王岸飞;荆延平;李荫太 刊期: 2010年第03期

  • 上皮间叶转化的研究进展

    1 上皮间叶转化的概念上皮间叶转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)是指与基底膜连接的具有极性的上皮细胞经过一系列的生物学改变,丧失细胞-细胞之间的连接,转化为具有游走能力的间叶细胞[1].1982年,Greenburg等[2]发现在三维立体胶原胶中培养的角膜上皮细胞可以转化为具有迁移能力的间叶细胞,并首次提出了EMT的概念.但是后来鉴于转化后的间叶细胞也可逆转为上皮细胞,即间叶上皮转化(mesenchymal-epithelial transition,MET),同时transformation一词易和肿瘤的恶性转化(transformation)混淆,2003年第一届EMT国际会议确定将transformation改为transition.

    作者:周庚寅;蔡永萍 刊期: 2010年第03期

  • 河南农村居民肥胖患病率与糖尿病、高血压和血脂异常的关系

    目的:了解河南省农村居民肥胖患病率与糖尿病、高血压和血脂异常的关系.方法:在河南省选择2个农村社区,以村(组)为单位,整群抽取18岁及以上的居民进行问卷调查、体格检查和生化指标检测.结果:研究对象共984人,全身性肥胖和腹型肥胖标化患病率分别为14.49%和42.56%;男性高血压和血脂异常的患病率随着体质指数(BMI)的增加呈升高的趋势(χ2=5.411和5.090,P均<0.05);女性糖尿病、高血压和血脂异常的患病率均随着BMI的增加呈升高趋势(χ2=3.152、5.245和4.968,P均<0.05).男、女性腹型肥胖者糖尿病、高血压和血脂异常的患病率均高于正常对照人群(男性:χ2=5.102、20.863和29.134,P均<0.05;女性:χ2=18.678、30.702和46.145,P均<0.05).结论:农村社区超重、肥胖患病率较高,且与糖尿病、高血压和血脂异常发病密切相关.

    作者:孙献周;郭影;申明慧;庞秋艳;张卫东;张梅喜;郗园林 刊期: 2010年第03期

  • 牛膝多糖对小鼠骨髓来源树突状细胞抗肿瘤能力的影响

    目的:研究牛膝多糖对小鼠骨髓来源树突状细胞(DC)抗肿瘤能力的影响.方法:正常小鼠骨髓来源单个核细胞通过粒细胞-巨噬细胞刺激因子(GM-CSF)和白细胞介素4(IL-4)体外诱导生成DC,细胞培养第3天加入3种质量浓度的牛膝多糖(200、300和400 mg/L),第5天负载EC9706细胞制备的冻融抗原,流式细胞术检测DC表面CD86和CD11a的表达和成熟情况.提取培养第8天的DC和T淋巴细胞再混合培养3 d,流式细胞术检测T淋巴细胞的增殖分化情况及DC诱导的细胞毒T淋巴细胞(CTL)对EC9706细胞的杀伤活性.以上均以生理盐水培养作为对照组,各组均设4个复孔.结果:与生理盐水组相比,低中剂量牛膝多糖在有异源性抗原负载的情况下能够促进小鼠骨髓来源DC的分化、成熟及表面标记CD86(F=9.788,P=0.012)、CD11a(F=10.220,P=0.016)的表达,增加DC致敏的T淋巴细胞增殖指数(F=9.807,P=0.012),DC诱导的CTL对EC9706细胞的杀伤活性增强(F=9.923,P=0.015),且在一定范围内存在量效关系.400 mg/L的牛膝多糖可使这些方面的效应明显降低.结论:适当质量浓度的牛膝多糖能够提高DC的抗原递呈能力,进而提高DC的抗肿瘤作用.

    作者:冯婷;赵明耀;孙丽莎;李沛;马俊芬;黄幼田;董子明 刊期: 2010年第03期

  • 以问题为基础的学习教学法在临床护理教学中的应用

    以问题为基础的学习PBL(problem based learning,PBL)教学法是一种新的教学模式.与传统教学方法不同的是,PBL教学法强调以问题为基础,围绕问题查阅资料,进行思维、推理并讨论,能够充分调动学生的学习积极性,形成学生自主学习的能力[1].因此,PBL教学法在培养学生独立解决实际问题的能力和开发创造性思维等方面具有明显的优势[2].2009年7月到2009年12月,作者在实习护生临床护理教学中引入PBL教学法,效果较好,报道如下.

    作者:张利霞;郑蔚;杨展;李红哲 刊期: 2010年第03期

  • 简易水柱法肾盂内压力测定在肾积水治疗中的应用

    肾积水是小儿泌尿外科常见疾病,大多由肾盂输尿管连接部狭窄所致.肾盂成形术后有吻合口狭窄等并发症,亚甲蓝通畅试验可定性反映吻合口是否通畅.为定量测定吻合口通畅程度,作者应用简易水柱法测定肾盂内压力,现将其临床应用情况报道如下.

    作者:张大;范应中;张谦;李泸平 刊期: 2010年第03期

  • 胃癌组织中MTA1蛋白及微血管密度检测

    目的:研究正常胃黏膜及胃癌组织中MTA1蛋白和微血管密度(MVD)的表达情况及相互关系.方法:采用免疫组织化学法分别检测12例正常胃黏膜及63例胃癌组织中MTA1蛋白及MVD的表达情况.结果:正常胃黏膜及胃癌组织中MTA1蛋白阳性表达率分别为33.3%(4/12)和80.9%(51/63,差异有统计学意义(χ2=9.380,P=0.002);MVD值分别为(18.25±8.35)和(45.38±8.69),差异有统计学意义(t=9.974,P<0.001);胃癌组织中MTA1蛋白的表达与胃癌的浸润深度、分化程度及淋巴结转移有关(χ2分别为8.129、12.770和6.254,P均<0.05);MTA1蛋白表达者MVD值(47.49±7.69)高于MTA1蛋白未表达者(36.77±5.71)(t=5.265,P<0.001).结论:MTA1蛋白过表达可能是胃癌浸润、转移和微血管生成的一个促进因素.

    作者:林存侠;温洪涛;张蕾;张云汉 刊期: 2010年第03期

  • 经颈侧入路颈静脉孔区显微解剖学观察

    目的:研究颈静脉孔区神经、血管的行程及毗邻关系.方法:对10例(20侧)经体积分数为10%甲醛固定及乳胶灌注头颈标本模拟经颈-乳突人路,观测颈静脉孔区神经、血管的位置、走行及毗邻关系.结果:颈静脉球位于颈静脉孔内,是介于乙状窦和颈内静脉之间的移行部分,兼具2者特点;舌咽神经以单独筋膜包绕经颈静脉孔出颅,与其他3对颅神经(迷走神经、副神经和舌下神经)有一定间距.结论:熟悉颈静脉孔区的显微解剖有利于手术中保护重要的神经和血管.

    作者:韩云志;游言文;娄卫华;陈四清 刊期: 2010年第03期

  • 全瓷冠修复52牙体会

    全瓷冠修复体具有良好的生物相容性和美学性能,冠边缘密合性好,已在口腔修复领域广泛运用,深受口腔医师及患者的认可[1].河南大学淮河医院口腔科选择IPS-Empress-2全瓷系统为32例患者制作全瓷冠、桥修复,获得较好的修复效果,报道如下.

    作者:刘艳林 刊期: 2010年第03期

  • DSE指导下PCI治疗冠状动脉临界病变21例

    近年来,冠状动脉临界病变的介入治疗已成为冠心病介入治疗领域的争论焦点和热点.目前一致推崇以压力导丝和血管内超声测定某些指标来指导冠状动脉临界病变治疗方案的选择,然而,上述2项技术价格昂贵,临床尚难普及.有研究[1]表明多巴酚丁胺负荷超声心动图(dobutamine stress echocar-diography,DSE)与冠状动脉狭窄程度具有相关性,可对筛选冠状动脉临界病变患者的治疗策略提供一定帮助.作者在DSE指导下采用经皮冠状动脉成形术(PCI)治疗冠状动脉临界病变,效果满意,报道如下.

    作者:王顺保;刘鹏 刊期: 2010年第03期

  • 香青兰提取物对体外培养乳鼠心肌细胞缺氧/复氧损伤的保护作用

    目的:研究香青兰提取物对心肌细胞缺氧/复氧(H/R)损伤的保护作用及机制.方法:提取香青兰的有效成分,用原代培养的SD大鼠乳鼠心肌细胞建立H/R的损伤模型,实验分6组:正常对照组、H/R组、总提取物组、氯仿组、乙酸乙酯组及正丁醇组.采用MTT法测定细胞的存活率,乳酸脱氢酶试剂盒(LDH)测定培养液中LDH的含量,黄嘌呤氧化酶法测定细胞内超氧化物歧化酶(SOD)的活性以及硫代巴比妥酸显色法测定活细胞丙二醛(MDA)的含量.结果:各组细胞活力、吸光度值以及LDH、MDA和SOD含量伺比较,差异均有统计学意义(F=102.312、51.007、24.136、70.281和14.335,P<0.05).与正常对照组比较,模型组LDH、MDA的含量及细胞活力明显升高,SOD活性降低(P<0.05);与模型组比较,香青兰提取物各组的细胞活力降低,LDH和MDA含量增加;氯仿和乙酸乙酯组的吸光度值升高;氯仿、乙酸乙酯和正丁醇组的SOD含量增加(P均<0.05).结论:香青兰提取物对H/R心肌细胞的损伤具有保护作用,此作用可能与抑制脂质过氧化和减少心肌细胞的凋亡有关.

    作者:赵杰;薛文华;梁淑红 刊期: 2010年第03期

  • 干扰素α对不同基因型乙型肝炎病毒抗病毒疗效比较

    乙型肝炎病毒(HBV)根据其全基因序列的同源性可分为8种基因型[1].感染不同基因型的HBV患者的临床经过与药物疗效有一定的差异.作者应用巢式PCR技术对46例慢性乙型肝炎患者感染的HBV进行分型,比较干扰素α对不同基因型HBV感染者抗病毒的疗效.

    作者:李志勤;余祖江;武淑环;孙长宇;江河清;潘延凤 刊期: 2010年第03期

  • 胃癌组织中Pokemon和半乳糖凝集素-3蛋白的表达

    目的:检测胃癌组织中Pokemon和半乳糖凝集素-3(Galectin-3)蛋白的表达情况.方法:采用免疫组织化学SP法检测76例胃癌组织和16例正常胃黏膜组织中Pokemon和Galectin-3的表达,并分析其与临床病理特征的关系.结果:胃癌组织中Pokemon蛋白阳性表达率为59.2%(45/76),Galectin-3蛋白阳性表达率为82.9%(63/76),均高于正常胃黏膜组织的18.8%(3/16)和12.5%(2/16)(χ2=8.671,P=0.003;χ2=28.284,P<0.001).胃癌组织中Pokemon与Galectin-3的阳性表达与淋巴结转移(χ2分别为10.787和11.626,P均=0.001)、pTNM分期(χ2=12.903,P<0.0010;χ2=6.435,P=0.011)和浸润深度(χ2分别为11.849和11.701,P均=0.003)有关,且Pokemon与Galectin-3表达有关联(χ2=5.253,rP=0.254,P=0.022).结论:Pokemon及Galectin-3与胃癌的侵袭、转移有关.

    作者:李志猛;乔军波;张谢夫;赵春临 刊期: 2010年第03期

  • 宫颈癌组织中TSPAN-1与Ki-67蛋白的表达

    目的:探讨肿瘤相关蛋白TSPAN-1与Ki-67在宫颈癌组织中表达及其关联性.方法:应用免疫组织化学SP法检测正常宫颈、宫颈癌及宫颈内瘤样病变(CIN)组织(各30例)中TSPAN-1及Ki-67蛋白的表达.结果:正常宫颈、CIN和宫颈癌组织中TSPAN-1和Ki-67的阳性表达率分别为0(0/30)、36.7%(11/30)、73.3%(22/30)和13.3%(4/30)、53.3%(16/30)、80.0%(24/30),差异有统计学意义(χ2=34.737和27.036,P均<0.001,宫颈癌和CIN组织高于正常宫颈组织.宫颈癌组织中TSPAN-1表达与淋巴结转移有关(P=0.014).宫颈癌组织中TSPAN-1与Ki-67表达有关联性(χ2=8.960,rP=0.539,P<0.001).结论:TSPAN-1过表达与细胞增殖有关,参与宫颈癌的发生发展.

    作者:南燕;李红雨;许雅娟 刊期: 2010年第03期

  • 结节性硬化16例CT和MRI诊断

    结节性硬化(tuberous sclerosis,TS)是一种常染色体显性遗传病,可累及脑、皮肤、肾脏及心脏等全身多器官组织.作者收集2002年9月至2009年2月济源市人民医院确诊的TS患者16例,分析其头部CT和MRI表现特点,旨在探讨CT和MRI对TS的诊断价值.

    作者:武天奎 刊期: 2010年第03期

郑州大学学报(医学版)杂志

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主办:郑州大学