学术投稿

人端粒酶逆转录酶启动子调控的真核荧光表达载体的构建与表达

董翠;阴志刚;王纯耀;张旭东

关键词:人端粒酶逆转录酶启动子, 真核荧光表达载体, 构建, 表达
摘要:目的:克隆人端粒酶逆转录酶(hTERT)启动子,构建真核表达载体pEGFP-C3-hTERTp.方法:PCR方法扩增出hTERTp,依次克隆至pGEM-T Easy载体和重组载体pEGFP-C3上.经酶切和测序鉴定后,重组质粒pEGFP-C3-hTERTp转染人胚肾293A细胞,并在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达情况.结果:成功扩增出276 bp的hTERTp,测序结果与GenBank中hTERT启动子DNA序列完全一致.重组载体pEGFP-C3-hTERTp转染293A细胞能观察到荧光表达.结论:成功构建了hTERT启动子调控的真核绿色荧光表达载体pEGFP-C3-hTERTp,其能够在人胚肾293A细胞中表达.
郑州大学学报(医学版)杂志相关文献
  • 干扰素α对不同基因型乙型肝炎病毒抗病毒疗效比较

    乙型肝炎病毒(HBV)根据其全基因序列的同源性可分为8种基因型[1].感染不同基因型的HBV患者的临床经过与药物疗效有一定的差异.作者应用巢式PCR技术对46例慢性乙型肝炎患者感染的HBV进行分型,比较干扰素α对不同基因型HBV感染者抗病毒的疗效.

    作者:李志勤;余祖江;武淑环;孙长宇;江河清;潘延凤 刊期: 2010年第03期

  • 热化疗对Raji细胞生长、JNK通路及热休克蛋白70表达的影响

    目的:观察热化疗对淋巴瘤Raji细胞生长的影响及其可能机制.方法:Raji细胞随机分为单纯化疗组(采用3.00 mg/L阿霉素处理细胞)、单纯热疗组(采用43℃加热处理细胞)、热化疗组(采用43℃加热联合阿霉素处理细胞)和对照组(细胞不作任何处理).应用MTT法检测各组细胞增殖率的变化,采用Western Blot检测磷酸化JNK(p-JNK)和热休克蛋白70(HSP70)的表达.结果:对照组、单纯化疗组、单纯热疗组及热化疗组细胞增殖率分别为(100.00 ± 0.00)96、(66.19 ± 2.67)%、(63.44 4 ± 2.43)%和(58.93 ± 3.66)%,p-JNK的表达量分别为(0.45 ± 0.05)、(0.49 ± 0.04)、(0.48 ± 0.03)和(0.67 4 ± 0.13),HSP70的表达量分别为(0.55 ± 0.09)、(1.06 ±0.84)、(8.23 ± 2.12)和(6.46 ± 2.22),化疗(a)和热疗(b)及热化疗(a × b)均对以上指标有影响(Fa分别为83.294、17.586和25.176,Fb分别为62.351、14.411和18.553,F(a×b),分别为94.178,25.153和32.189,P均<0.05).结论:热化疗联合可抑制Raji细胞增殖,这种抑制作用可能是通过激活JNK信号转导通路或部分抑制HSP70蛋白的表达完成的.

    作者:刘新奎;王琳;张明智 刊期: 2010年第03期

  • 氯化锰对大鼠睾丸间质细胞睾酮合成及去势大鼠生殖内分泌的影响

    目的:观察氯化锰对大鼠睾丸间质细胞睾酮合成及去势大鼠生殖内分泌的影响,探讨氯化锰的抗雄激素样作用.方法:①Percoll梯度离心分离、纯化大鼠睾丸间质细胞,根据氯化锰染毒剂量分为对照(0 mol/L氯化锰)和1.0 × 10-6、2.5 × 10-6、5.0 × 10-6、1.0 × 10-5、2.5 × 10-5、5.0 × 10-5 及1.0 × 10-4 mol/L氯化锰组,培养24 h后,采用台盼蓝染色法测定大鼠睾丸间质细胞存活率.②同法分组,观察氯化锰对基础状态和人绒毛膜促性腺激素(HCG)刺激下睾丸间质细胞睾酮合成的影响.③将行睾丸摘除术的大鼠随机分为6组(n=10):溶剂对照组皮下注射玉米油0.2 mL,阴性对照组皮下注射丙酸睾酮(TP)1.0 μs,氯化锰低、中、高剂量组皮下注射1.0μg TP后分别注射氯化锰7.5、15.0和30.0 mg/kg,阳性对照组皮下注射1.0 μg TP后注射氟他胺(100.0 mg/kg),1次/d,连续7 d.7 d后,用放射免疫法测定各组去势大鼠血清睾酮水平和前列腺特异抗原(PSA)含量,分离雄激素依赖组织,称量,计算脏器系数.结果:①随氯化锰染毒剂量的升高,大鼠睾丸间质细胞存活率逐渐下降(F=15.297,P=0.023).②基础状态和HCG刺激下各组大鼠睾丸间质细胞睾酮水平差异均有统计学意义(F=32.639和25.187,P均<0.001);基础状态下氯化锰剂量≥5.0 × 10-6 mol/L时睾酮水平均低于对照组(P<0.05),HCG刺激状态下氯化锰剂量≥1.0×10-5 mol/L时睾酮水平低于对照组(P<0.05).③各组去势大鼠血清睾酮、PSA含量、腹侧前列腺及精囊腺脏器系数相比,差异均有统计学意义(F=39.920,25.403,15.562和9.476,P均<0.05),但氯化锰低、中和高剂量组去势大鼠血清睾酮和PSA水平与阴性对照组比较,差异均无统计学意义(P均>0.05).氯化锰高剂量组腹侧前列腺和精囊腺脏器系数均低于阴性对照组(P<0.05).结论:氯化锰可能有抗雄激素样作用.

    作者:高慧艳;李春阳;苏晓东;尚平平;陈小玉 刊期: 2010年第03期

  • 全瓷冠修复52牙体会

    全瓷冠修复体具有良好的生物相容性和美学性能,冠边缘密合性好,已在口腔修复领域广泛运用,深受口腔医师及患者的认可[1].河南大学淮河医院口腔科选择IPS-Empress-2全瓷系统为32例患者制作全瓷冠、桥修复,获得较好的修复效果,报道如下.

    作者:刘艳林 刊期: 2010年第03期

  • 急性脑梗死患者血清高敏C反应蛋白水平测定

    目的:测定急性脑梗死患者血清高敏C反应蛋白(hs-CRP)水平.方法:急性脑梗死患者115例,其中轻度、中度及重度血栓性脑梗死分别为15、56和39例,腔隙性脑梗死5例.选择80例门诊体检健康者为正常对照.采用免疫透射比浊法测定血清hs-CRP水平.结果:①随脑梗死程度的加重,hs-CRP水平及异常率升高(F=551.000,χ2=166.510,P均<0.001).②血清hs-CRP水平异常者脑梗死预后不良(χ2=24.880,P<0.001).结论:hs-CRP水平是判断急性脑梗死患者病情和预后的良好指标.

    作者:夏昱;殷亚楠 刊期: 2010年第03期

  • DSE指导下PCI治疗冠状动脉临界病变21例

    近年来,冠状动脉临界病变的介入治疗已成为冠心病介入治疗领域的争论焦点和热点.目前一致推崇以压力导丝和血管内超声测定某些指标来指导冠状动脉临界病变治疗方案的选择,然而,上述2项技术价格昂贵,临床尚难普及.有研究[1]表明多巴酚丁胺负荷超声心动图(dobutamine stress echocar-diography,DSE)与冠状动脉狭窄程度具有相关性,可对筛选冠状动脉临界病变患者的治疗策略提供一定帮助.作者在DSE指导下采用经皮冠状动脉成形术(PCI)治疗冠状动脉临界病变,效果满意,报道如下.

    作者:王顺保;刘鹏 刊期: 2010年第03期

  • 人型支原体对人绒毛蜕膜组织TNF-α、IL-10及PGE2的影响

    目的:观察人型支原体(Mh)对人绒毛蜕膜组织的致炎作用.方法:分别用PPLO培养基(阴性对照组)、终浓度为102、104、106CCU/mL的Mh浓缩悬浮液(Mh低、中及高浓度组)及5 g/L脂多糖(阳性对照组)刺激人绒毛蜕膜组织0、6、24、36和48 h后,ELISA法检测TNF-α、IL-10及前列腺素2(PGE2)的产生情况.结果:刺激6~48 h,5组同一时间点及同一组不同时间点人绒毛蜕膜组织TNF-α、IL-10及PGE2生成量差异均有统计学意义(P均<0.001,Mh高浓度组能明显诱导上述3种介质的产生,但PGE2的产生晚于TNF-α和IL-10,与脂多糖效应基本一致.结论:蜕膜组织抗炎效应是非特异性的,低剂量Mh并不能诱导人绒毛蜕膜组织明显的炎症反应.

    作者:张群锋;黄余良;刘珏;李梅清;周建斌 刊期: 2010年第03期

  • 槐定碱的电化学反应机制与分析

    目的:探讨槐定碱在玻碳电极上的电化学反应机制及分析方法.方法:在硼酸-氯化钾-碳酸钠(A-P)缓冲溶液(pH 7.4)中,采用循环伏安、计时电量、恒电位电解并结合紫外光谱法研究槐定碱在玻碳电极上的电化学反应机制,利用差示脉冲伏安法建立槐定碱的电化学分析方法.结果:槐定碱在玻碳电极上产生一不可逆的氧化峰,峰电位为0.875 V,是两电子两质子的不可逆扩散氧化波,电荷转移系数为0.44,电极表观电子传递速率常数为7.12 × 10-3s-1;扩散系数为2.16 × 10-5 cm2/s;其峰电流与槐定碱浓度在8.0 × 10-6~3.0 × 10-4 mol/L范围内呈线性关系,检出限为2.0 × 10-6mol/L.结论:推导出了槐定碱的电极反应机制,可用于模拟生物样品中槐定碱的含量测定,结果满意.

    作者:刘辉;吴卫平;朱效华;冶保献 刊期: 2010年第03期

  • 隐神经营养血管蒂逆行岛状皮瓣修复足踝部软组织缺损17例

    因外伤等原因造成足踝部较大面积软组织缺损,常伴有肌腱、骨骼外露,修复较困难.随着显微外科的不断深入发展,Masquelet等[1]提出了皮神经皮辦的概念,并设计皮神经皮辦成功应用于临床,为上述部位提供了良好的修复方法.2005年6月以来,作者采用隐神经营养血管皮辦逆行转移修复足踝部软组织缺损17例,效果良好,报道如下.

    作者:李中锋;崔红旺;王俊波;张全英;朱玉花 刊期: 2010年第03期

  • 顺铂联合葛根素纯品和葛根粗提物对H446细胞增殖及Bax、Bcl-2蛋白表达的影响

    目的:观察顺铂(DDP)单独及联合葛根素纯品(sP)和(或)葛根粗提物(CP)对小细胞肺癌H446细胞增殖及Bax、Bcl-2蛋白表达的影响.方法:取对数生长期的H446细胞,随机分为16组,运用噻唑蓝法测定不同质量浓度DDP(1.0、2.0、4.0和8.0 mg/L)单独及联合80 mg/L SP和(或)CP对H446细胞的增殖抑制率,运用免疫细胞化学染色法测定16组细胞中Bcl-2和Bax蛋白的表达,运用析因设计方差分析法分析检测结果.结果:析因设计方差分析结果显示:不同质量浓度DDP(F=3 973.386,P<0.001)、SP(F=468.017.P<0.001)和CP(F=789.757,P<0.001)对H446细胞的增殖抑制不同,随着DDP质量浓度的增高,联合80 mg/L SP和80 mg/L CP对H446细胞的抑制越明显;DDP联合SP(F=70.686,P<0.001)、DDP联合CP(F=87.191,P<0.001)及DDP联合SP和CP(F=28.471,P<0.001)对H446细胞增殖抑制作用增强.DDP、SP和CP上调Bax蛋白的表达,下调Bcl-2蛋白的表达.结论:联合应用SP、CP能增强DDP对H446细胞的增殖抑制作用,该作用可能与上调Bax蛋白表达、下调Bcl-2蛋白表达有关.

    作者:韩萍;赵妍娟;裴兰英;朱明君;王旗;时宝庆 刊期: 2010年第03期

  • 高个体识别力通用单核苷酸多态性位点筛选及检测

    目的:在全基因组中查找能够在世界各大人群中通用的高个体识别力单核苷酸多态性(SNPs)位点,以期为SNPs应用于法医学个体识别奠定基础.方法:从国际人类基因组单体型图计划(HapMap)数据库下载270名个体各约4 000 000个全基因组SNPs分型数据,运用自主编写的计算机程序,按照较小等位基因频率(MAF)≥0.45的原则提取在中国北京汉族人群、日本东京人群、尼日利亚约鲁巴人群以及美国白人人群中同时存在的SNPs,以焦磷酸测序技术对其中的rs4607417和n749305在河南汉族人群(n=144)中进行群体遗传学调查,计算Hardy-Weinberg平衡概率(HWP)、杂合度(Het)、多态信息含量(PIC)和个体识别力(DP),并与HapMap的数据(n=45)进行比较.结果:共找到1 439个通用的SNPs.在河南汉族人群中,rs4607417和rs749305的HWP分别为0.872和0.423,Het分别为0.476和0.524,PIC分别为0.384和0.388,DP分别为0.616和0.612.与4个人群相比,仅在rs4607417上其等位基因频率与日本东京人群差异有统计学意义(χ2=5.068,P=0.024).结论:rs4607417和rs749305是通用的高个体识别力SNPs;前述筛选获得的1 439个SNPs具有高度可靠性和可信度,可用作在世界各人群中通用的个体识别核心SNPs.

    作者:曾昭书;王黎;方宇;张书红;张广政;郭克民 刊期: 2010年第03期

  • 野菊花中绿原酸的不同提取工艺比较

    目的:以绿原酸含量和浸膏率为考察指标,探讨从野菊花中提取该成分的新工艺.方法:采用加热回流提取法、组织破碎提取法及超声波提取法3种提取工艺,利用反相高效液相色谱法,以甲醇:冰醋酸:水(体积比为18:1:81)为流动相(流速为1.0 mL/min),测定3种提取方法的绿原酸含量及浸膏率.结果:绿原酸在0.015 18~0.151 80 g/L范围内线性关系良好(r=0.999 9).加热回流提取法绿原酸含量为(0.421 1±0.013 7)%,超声波提取法为(0.336 1±0.010 7)%,组织破碎提取法为(0.406 6±0.006 5)%,3者相比差异有统计学意义(F=28.061,P=0.001).加热回流提取法的浸膏率为(32.48±0.68)%,超声波提取法为(22.53±1.16)%,组织破碎提取法为(26.79±0.55)%,3者相比差异有统计学意义(F=52.413,P<0.001).结论:组织破碎提取法具有简便迅速和节能高效的优点,是一种值得推广的提取新工艺.

    作者:符玲;毕跃峰;田新慧;王普菊;乐运香;张雁冰 刊期: 2010年第03期

  • 人端粒酶逆转录酶启动子调控的真核荧光表达载体的构建与表达

    目的:克隆人端粒酶逆转录酶(hTERT)启动子,构建真核表达载体pEGFP-C3-hTERTp.方法:PCR方法扩增出hTERTp,依次克隆至pGEM-T Easy载体和重组载体pEGFP-C3上.经酶切和测序鉴定后,重组质粒pEGFP-C3-hTERTp转染人胚肾293A细胞,并在荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白的表达情况.结果:成功扩增出276 bp的hTERTp,测序结果与GenBank中hTERT启动子DNA序列完全一致.重组载体pEGFP-C3-hTERTp转染293A细胞能观察到荧光表达.结论:成功构建了hTERT启动子调控的真核绿色荧光表达载体pEGFP-C3-hTERTp,其能够在人胚肾293A细胞中表达.

    作者:董翠;阴志刚;王纯耀;张旭东 刊期: 2010年第03期

  • 上皮性卵巢癌组织中泛素与细胞周期蛋白B1的表达

    目的:检测上皮性卵巢癌组织中泛素(Ub)与细胞周期蛋白B1(Cyclin B1)的表达情况.方法:应用免疫组织化学SP法检测20例正常卵巢组织、20例卵巢良性肿瘤组织及50例上皮性卵巢癌组织中Ub和Cyclin B1蛋白的表达.结果:上皮性卵巢癌组织中Ub和Cyclin B1蛋白的阳性表达率分别为34.0%(17/50)和42.0%(21/50),与正常卵巢组织的5.0%(1/20)、5.0%(1/20)和卵巢良性肿瘤组织的10.0%(2/20)、15.0%(3/20)相比,差异有统计学意义(P=0.014;χ2=11.841,P=0.003).上皮性卵巢癌组织中Ub和Cyclin B1蛋白的表达与FIGO分期(χ2=4.529,P=0.033;χ2=5.520,P=0.019)、分化程度(χ2=5.451,P=0.020;χ2=5.889,P=0.015)和淋巴结转移(χ2=6.269,P=0.012;χ2=6.226,P=0.013)有关.上皮性卵巢癌组织中Ub和Cyclin B1蛋白的表达有关联(χ2=5.451,rP=0.314,P=0.020).结论:Ub和Cyclin B1可能协同参与上皮性卵巢癌的恶性进展和转移,可用于评估上皮性卵巢癌的恶性程度及预后.

    作者:史惠蓉;卫玲;张瑞涛 刊期: 2010年第03期

  • 食管鳞状细胞癌组织中Survivin与Caspase-3蛋白的表达

    目的:检测人食管鳞状细胞癌组织中Survivin与Caspase-3蛋白的表达情况.方法:采用免疫组织化学SP法检测60例食管鳞状细胞癌及60例正常食管黏膜组织中Survivin及Caspase-3蛋白的表达情况,分析其与食管鳞状细胞癌临床病理特征的关系及2者表达的关联性.结果:食管鳞状细胞癌组织中Survivin蛋白的阳性表达率为51.7%(31/60),高于正常食管黏膜组织的8.3%(5/60)(χ2=26.825,P<0.001);且食管鳞状细胞癌组织中Survivin蛋白的阳性表达率与浸润深度(χ2=8.721,P=0.003)和淋巴结转移情况(χ2=13.158,P<0.001)有关.食管鳞状细胞癌组织中Caspase-3蛋白的阳性表达率为40.0%(24/60),低于正常食管黏膜组织的81.7%(49/60)(χ2=21.860,P<0.001);且食管鳞状细胞癌组织中Caspase-3蛋白的阳性表达率与浸润深度(χ2=6.123,P=0.013)和淋巴结转移情况(χ2=5.884,P=0.015)有关.食管鳞状细胞癌组织中Survivin与Caspase-3蛋白的表达有关联(χ2=5.384,rP=0.300,P=0.020).结论:Survivin蛋白高表达、Caspase-3蛋白低表达可能参与食管鳞状细胞癌的发生发展.

    作者:王涛;侯桂琴 刊期: 2010年第03期

  • 河南某县中学生预防艾滋病健康教育效果

    目的:评价中学生艾滋病(AIDS)健康教育的效果.方法:2009年3月至5月在河南省某县1所高中和1所初中中开展以AIDS预防为主题的健康教育活动,并用封闭式问卷在开展健康教育前、后对学生进行AIDS知识、态度评价.结果:健康教育活动前中学生AIDS相关知识正确认识率为51.14%(3.58/7.00),传播途径知识正确认识率为54.14%(3.25/6.00),预防措施知识正确认识率为71.20%(3.56/5.00),对待AIDS患者正向态度持有率为53.20%(2.66/5.00);健康教育后AIDS相关知识正确认识率为79.71%(5.58/7.00),传播途径知识正确认识率为90.28%(5.42/6.00),预防措施知识正确认识率为94.40%(4.72/5.00),对待AIDS患者正向态度持有率为71.40%(3.57/5.00),4项指标均较健康教育前提高,差异有统计学意义(χ2=94.144、167.965、10.445和35.783,P均<0.001).结论:以预防AIDS为主题的健康教育可以显著提高中学生AIDS知识认识水平,改善对待AIDS的态度,增强抵御AIDS的能力,利于中学生的健康成长.

    作者:吴昊;朱伟 刊期: 2010年第03期

  • 亲属活体肾移植171例分析

    目前肾移植供肾紧缺的问题日益突出,亲属活体供肾已成为缓解供肾来源紧张的重要途径[1-2].我国亲属活体肾移植起步较晚,但近年来增加趋势明显[3-4].2005年11月至2009年4月,郑州大学第一附属医院共进行亲属活体肾移植171例,效果良好,报道如下.

    作者:丰贵文;尚文俊;王跃;庞新路;郭文治;乔保平;刘磊 刊期: 2010年第03期

  • β-榄香烯乳联合照射对人舌鳞状细胞癌裸鼠移植瘤的影响

    目的:观察β-榄香烯乳联合照射是否能提高人舌鳞癌裸鼠移植瘤的治疗效果及对肿瘤细胞凋亡和外周血白细胞的影响.方法:建立人舌鳞状细胞癌裸鼠移植瘤动物模型(40只),随机分为5组,每组8只:空白组、单纯药物组、单纯照射组、药物(1 h)+照射组和药物(2 h)+照射组.观察肿瘤生长时间、肿瘤细胞凋亡率和外周血白细胞总数.结果:人组40只移植瘤裸鼠实验期间无死亡.空白组、单纯药物组、单纯照射组、药物(1 h)+照射组和药物(2 h)+照射组肿瘤生长时间分别为(8.62±3.81)、(15.13±6.60)、(22.00±6.32)、(29.00±5.68)和(40.00±4.41)d;药物(1h)+照射组:药物和照射无交互作用(F=0.015,P=0.902);药物(2 h)+照射组:药物和照射有交互作用(F=9.002,P=0.006).空白组、单纯药物组、单纯照射组、药物(1 h)+照射组和药物(2 h)+照射组凋亡率分别为(5.00±2.05)%、(11.99±2.47)%、(19.88±2.83)96、(27.11±4.84)%和(34.84±4.62)%;药物(1 h)+照射组:药物和照射无交互作用(F=0.012,P=0.915);药物(2 h)+照射组:药物和照射有交互作用(F=12.837,P=0.001).结论:β-榄香烯乳联合照射能提高人舌鳞状细胞癌裸鼠移植瘤的放射治疗效果,照射前2 h应用能起到放射增敏作用;联合作用能有效诱导细胞凋亡,且对白细胞没有抑制作用.

    作者:吴大鹏;卢红;张洪志 刊期: 2010年第03期

  • 宫颈癌组织中TSPAN-1与Ki-67蛋白的表达

    目的:探讨肿瘤相关蛋白TSPAN-1与Ki-67在宫颈癌组织中表达及其关联性.方法:应用免疫组织化学SP法检测正常宫颈、宫颈癌及宫颈内瘤样病变(CIN)组织(各30例)中TSPAN-1及Ki-67蛋白的表达.结果:正常宫颈、CIN和宫颈癌组织中TSPAN-1和Ki-67的阳性表达率分别为0(0/30)、36.7%(11/30)、73.3%(22/30)和13.3%(4/30)、53.3%(16/30)、80.0%(24/30),差异有统计学意义(χ2=34.737和27.036,P均<0.001,宫颈癌和CIN组织高于正常宫颈组织.宫颈癌组织中TSPAN-1表达与淋巴结转移有关(P=0.014).宫颈癌组织中TSPAN-1与Ki-67表达有关联性(χ2=8.960,rP=0.539,P<0.001).结论:TSPAN-1过表达与细胞增殖有关,参与宫颈癌的发生发展.

    作者:南燕;李红雨;许雅娟 刊期: 2010年第03期

  • 艾滋病对个人及其家庭影响的模糊评价

    目的:应用模糊评价方法评价艾滋病(AIDS)对个人及其家庭的影响.方法:采用多阶段随机整群抽样的方法选择河南省AIDS高发地区1 146例HIV/AIDS患者和1 115名健康人为研究对象.运用层次分析法建立AIDS对个人及其家庭影响的评价体系,通过delphi和层次分析法确定指标权重.应用模糊评价方法评价AIDS对个人及其家庭的影响.结果:健康人的模糊评价得分J=54.4,HIV/AIDS的模糊评价得分J=8.1,模糊控制量排在前3位的分别是3代内因AIDS失去亲人数、与邻居交往及日常消费支出.结论:AIDS对个人及家庭均带来了较大的影响,主要体现在家庭结构、社交和消费支出方面;政府部门在对AIDS患者及其家庭进行物质帮助的同时,还应特别重视对他们心灵上的关怀.

    作者:葛晓燕;杨永利;施学忠 刊期: 2010年第03期

郑州大学学报(医学版)杂志

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主管:河南省教育厅

主办:郑州大学