学术投稿

丹参转基因毛状根离体培养体系的建立及分析

张夏楠;崔光红;蒋喜红;黄璐琦

关键词:丹参, 毛状根, 转基因, 离体培养
摘要:目的:建立起丹参的转基因毛状根诱导及离体培养体系.方法:考察了不同外植体、不同农杆菌侵染时间和共培养时间诱导丹参毛状根的效率,共培养外植体用400g·L-1Cef水除菌5 min,接种在MS+400g·L-1Cef+2.5 g·L-1Hyg的固体培养基上,完全除菌后转接入6,7-V +2.5 g·L-1Hyg液体培养基继代培养,GFP荧光检测阳性毛状根,PCR检测农杆菌特征基因rolC,并测定不同生长时期的毛状根干重和二氢丹参酮Ⅰ的积累.结果:用丹参叶片基部诱导毛状根,成功率可达到93.3%;农杆菌侵染10 min诱导效率高为63.3%;共培养2~3d诱导效果好;PCR结合GFP荧光检测的方法鉴定阳性转基因材料具有较高的可信性;丹参毛状根生物量变化与次生代谢物积累之间有着紧密联系.结论:成功建立起丹参转基因毛状根离体培养体系,为进一步的基因工程应用打下基础.
中国中药杂志相关文献
  • 长柄链格孢菌对熊果酸的生物转化工艺优化

    目的:以熊果酸为底物,用长柄链格孢菌AS3.2875对熊果酸进行生物转化,并对培养基和转化条件进行优化.方法:以熊果酸的消耗率和28-O-β-D-吡喃葡萄糖熊果酸酯苷的生成率为指标,考察不同起始pH,磷酸盐,不同种类金属离子,孢子浓度,底物加入量,温度,转速,培养时间对熊果酸在长柄链格孢菌培养液中转化的影响,得到长柄链格孢菌对熊果酸的佳转化条件.结果:优化后的培养条件为初始pH 5.0,0.25 g·L-1MgSO4,1.0 g·L- K2 HPO4,0.083 g· L-1FeSO4,孢子浓度为4%,底物加入量0.3g·L-1,转速140 r·min-1,28 ℃,培养3d.结论:长柄链格孢菌转化熊果酸生成28-O-β-D-吡喃葡萄糖熊果酸酯苷的生成率稳定在5%左右.

    作者:延慧君;王炫;高颖;刘岱琳 刊期: 2012年第15期

  • 略论中药斗谱的合理设置

    合理设置中药斗谱,是保证中药调剂质量的重要内容之一.作者就中药药斗的设置、斗谱的编排原则、斗谱的编排程序以及临床常用散装饮片斗谱设计4个关键环节作简要说明,期许得到同道们的重视与赐教.

    作者:翟华强;王燕平;今世元;王永炎 刊期: 2012年第15期

  • 山豆根不同组分抗炎及伴随毒副作用研究

    目的:考察并比较山豆根不同组分发挥抗炎药效剂量下的伴随毒副作用及其机制进行研究,阐释有毒中药“毒性-药效”相关性.方法:运用小鼠耳肿胀和肉芽肿模型,给小鼠灌胃不同剂量的山豆根水提和醇提组分,观察其在发挥药效作用时的伴随毒副作用,同时检测血清ALT,AST的活性,SOD,MDA,PEG2,NO,NOS,Cr,BUN,GSH,TG,Gn含量的变化及脏器指数.结果:药效剂量的山豆根水提和醇提组分对巴豆油小鼠耳肿胀和琼脂肉芽肿均有一定的肿胀抑制作用,水提组分和醇提组分药后3d和药后8d山豆根可使血清ALT,AST活性升高,SOD,MDA,PEG2,NO,NOS,GSH,TG,Gn等指标均有明显变化.结论:药效剂量的山豆根水提和醇提组分具有较强的抗炎作用,同时会产生伴随副作用和肝毒性,不同组分之间作用强度有异.不同组分抗炎作用机制与其减少炎性介质释放、抑制过氧化损伤有关;山豆根抗炎同时产生一定的肝毒性,过氧化损伤可能是其损伤机制之一.

    作者:李晓宇;栾永福;李晓骄阳;孙蓉 刊期: 2012年第15期

  • 药用植物GAP生产的病害绿色防控发展策略

    药用植物的GAP生产要求其栽培过程中病害的绿色防控.作者总结了病害农业防治和生物防治的研究成果,结合药用植物的特殊性提出药用植物病害绿色防控的概念,指出药用植物病害绿色防控要结合农业防治、现代植病研究方法、生物防治和科学用药协同进行,并作了展望,以期为药用植物GAP生产中病害绿色防控研究提供参考.

    作者:姚入宇;陈兴福;孟杰;李志飞;杨兴旺 刊期: 2012年第15期

  • UV-B辐射对药用植物次生代谢的影响研究进展

    平流层臭氧稀薄导致到达地面的中波紫外辐射( UV-B,280 ~ 320 nm)增加.受UV-B辐射影响,药用植物的基因表达、酶活性及次生代谢发生改变,导致多种药用活性成分含量变化从而影响临床疗效.该文综述了近10年来国内外学者对UV-B辐射与植物次生代谢产物积累方面的研究成果,为药用植物的栽培和开发提供参考.

    作者:吴洋;房敏峰;岳明;柴永福;王慧;李易非 刊期: 2012年第15期

  • 苍术炮制前后水提物药效学研究

    目的:探讨苍术炮制前后水提物药效变化,从药效变化的角度探讨苍术的炮制机制.方法:以湿阻中焦证大鼠为模型,测定不同组别大鼠小肠推进率、血清胃泌素水平、尿量、尿液AQP2含量.结果:各给药组大鼠小肠推进率、血清胃泌素水平增强,麸品较阴性组有显著差异;生品高剂量组能增加模型大鼠尿量、降低尿液AQP2含量,较阴性组有差异.结论:麸品水提物明显增强模型大鼠小肠推进率、提高血清胃泌素水平,提示苍术麸炒以后能增强健脾和胃作用;药物对模型大鼠尿量及尿液AQP2含量的影响,提示苍术麸炒后燥性得以缓和.

    作者:刘艳菊;陈雯雯;曾敏;许康 刊期: 2012年第15期

  • 滇杠柳中的一个新强心苷

    目的:研究滇杠柳中的化学成分.方法:利用硅胶,RP-18硅胶,MCI,Sephadex LH-20等柱色谱进行分离,波谱分析等方法鉴定化合物结构.结果:从滇杠柳氯仿萃取部分分离鉴定了10个单体化合物:滇杠柳苷元A-3-O-β-洋地黄毒吡喃糖苷(1),β-谷甾醇(2),滇杠柳苷Ⅰ(3),熊果酸(4),杠柳苷元(5),杠柳苷(6),北五加皮苷E(7),periplocoside M(8),胡萝卜苷(9),2α,3α,23-三羟基-乌苏-12-烯-28-羧酸(10).结论:化合物1为一新的强心苷,化合物8为首次从滇杠柳中分离鉴定.

    作者:徐冉;杜娟;邓璐璐;杨付梅;张建新;王道平;张援虎 刊期: 2012年第15期

  • 苍耳子4种提取物小鼠急性毒性比较研究

    目的:研究苍耳子生品和炒品的水提、醇提4种提取物对小鼠的急性毒性.方法:观察小鼠灌胃给药后的毒性反应,并计算半数致死量( LD50).结果:苍耳子水提取物组毒性反应为静卧、竖毛、尾足发绀、震颤、呼吸抑制、间歇性惊厥、翻正反射消失、后腿抽搐等,乙醇提取物组则表现为静卧、腹式呼吸、部分竖毛、震颤、严重间歇性惊厥、跳跃、后腿抽搐,部分动物出现大小便失禁等.苍耳子炒品水提取物、炒品乙醇提取物、生品水提取物、生品乙醇提取物的小鼠灌胃给药的LD50分别为生药155.93,317.80,167.60,275.41g·kg-1.结论:苍耳子水提取物的急性毒性明显大于乙醇提取物,而炒品和生品的毒性差异不明显.

    作者:鄢良春;张婷婷;赵军宁;宋军;华桦;李莉 刊期: 2012年第15期

  • 西洋参果实及种子生长发育初步研究

    目的:研究西洋参果实及种子的生长发育,揭示种胚在形态发育的停滞过程.方法:田间观察西洋参开花习性,定期取样测定果实及种子大小和干鲜重;徒手解剖、石蜡切片法观察种胚形态发育.结果:西洋参植株于首次开花后5~8 d达到大开花数;果实及种子的形态大小和干鲜重均在果实成熟期达到大;种胚在植株上历经球形胚、三角形胚、心形胚和鱼雷形胚期4个阶段,于开花后70 d左右发育停滞.结论:西洋参种子胚滞育始于鱼雷形胚期,这为西洋参种子形态后熟研究提供了一定依据.

    作者:代晓蕾;李先恩;郭巧生 刊期: 2012年第15期

  • MicroRNAs作为生物标志物的研究进展

    MicroRNAs (miRNAs)是一类新型的、细胞内源性的单链非编码小RNA,在细胞增殖凋亡、器官发育分化、肿瘤形成等病理生理过程中发挥重要调控作用.在血清或血浆等体液中存存的循环miRNAs由于稳定性好和特异性强等优点,提示可作为一种用于评价药物毒性致靶器官损伤的新型无创生物标志物,对药物毒性的早期监测具有重要作用.

    作者:乔靖怡;金若敏 刊期: 2012年第15期

  • 黄蜀葵花制剂治疗慢性肾脏病的机制和疗效

    黄蜀葵花Abelmoschus manihot( AM)中分离出20余种生物活性成分,包括黄酮类、多糖类、鞣酸类以及长链烃类等化合物.其中,主要化学成分是AM总黄酮(total flavones of A.manihot,TFA).AM制剂——“黄葵胶囊”治疗慢性肾脏病(chronic kidney disease,CKD)的机制主要包括抑制免疫反应、减轻炎症反应、改善肾纤维化、保护肾小管上皮细胞等.在临床上,黄葵胶囊可以治疗肾病综合征、糖尿病肾病、紫癜性肾炎、IgA肾病、膜性肾病等常见CKD.其临床疗效主要表现在改善CKD患者临床症状,减少蛋白尿和血尿,提高肾功能等方面.

    作者:陈萍;万毅刚;王朝俊;赵青;魏晴雪;涂玥;尹雪皎 刊期: 2012年第15期

  • 附子配伍甘草对CYP3A4体内活性的影响研究

    目的:建立测定血浆中盐酸丁螺环酮的超高效液相色谱(UPLC)方法:考察附子配伍甘草对CYP3A4体内活性的影响.方法:ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱(2.1mm×10 mm,1.7 μm);2.0 mmol·L-1醋酸铵(pH 7.4,A)-乙腈(B)梯度洗脱,0~2.2 min,10% ~60%B,2.2~2.5 min,60%B,2.5~3.0 min,60% ~75%B,3.0~3.5 min,75%B,3.5~4.0 min,75% ~ 10%B;检测波长243 nm;流速0.3 mL·min-1.结果:方法的线性范围0.078 125 ~ 20.0μg(r=0.9975);平均回收率85.62% (RSD 6.8%,n=6).本方法专属性好,重复性好,可用于血浆中盐酸丁螺环酮的测定.大鼠口服附子水煎液后口服盐酸丁螺环酮,盐酸丁螺环酮的AUC0-2h比生理盐水组下降了52.8% (P <0.05),CL/F是生理盐水组的2.22倍(P<0.05).附子配伍甘草组与生理盐水组比较无明显变化.结论:附子水煎液对大鼠CYP3A4酶有诱导作用,附子配伍甘草对大鼠CYP3A4则无明显影响,提示甘草可纠正附子对CYP3A4活性的诱导作用.

    作者:张广平;朱丽君;周娟;唐斓;刘中秋;叶祖光 刊期: 2012年第15期

  • 传统中药毒性分级理论的科学内涵与《中国药典》(一部)标注修订建议

    中药毒性分级理论是我国传统医药对人类认识药物毒性和科学应用的特有发明和贡献,中药毒性分级问题已经成为关系人民群众的用药安全、我国民族医药产业健康持续发展和中医药国际化的重大科学问题.该文对传统中药毒性分级理论的形成历史和嬗变过程进行了分析总结,并基于新形势下中药产业化、现代化、国际化的发展需求,对中医药行业亟待解决的中药毒性分级本质、科学内涵及风险控制等问题进行了分析,并对《中国药典》(一部)收载中药材毒性分级标注提出修订建议.一方面,从科学研究的角度,针对现有小鼠/大鼠急性毒性分级不适合中药毒性特点,发展新的生物毒性测试技术方法(如Microtox,ADME/Tox等),制定有毒中药分级研究技术指导原则,建立既能体现中医药优势和特色,又与国际接轨的中药毒性分级的评价方法体系与技术方案标准操作规程(SOP);另一方面,从药品监督管理角度,鉴于传统中药“毒性”与现代医学“毒性”并不等同,有必要进一步完善和拟定有毒中药风险分级管理名单,建议取消《中国药典》(一部)正文[性味与归经]项下对“有大毒”、“有毒”、“有小毒”的表述,有利于国际接轨和提高中药产业的国际国内竞争力.为了传统中医药理论继承和体现中医药特色,在正文[注意]项下,保留根据历代本草记载标注“有大毒”、“有毒”、“有小毒”的表述,同时在该项下根据现代研究成果加注中药毒性的具体表现、量效关系、毒性机制、毒性物质等描述,共同作为临床用药的警示性参考,有利于人民群众的用药安全和中药的现代化、国际化.

    作者:赵军宁;叶祖光 刊期: 2012年第15期

  • 中药处方脚注的继承与发展

    处方脚注是中药处方管理的重要内容之一,历代医药学家非常重视中药脚注.《皇帝黄帝内经》半夏秫米汤强调的炮制法、煎法、服法,是关于中药脚注的早记载;《伤寒论》丰富了中药脚注的内容,有脚注的中药36味,累计数315次;《备急千金要方》日趋成熟,由单纯的“脚注”发展到规范化阶段.2010年版《中国药典》关于中药饮片用法、用量做出了新的修改要求,中医药工作者需要加强处方脚注的研究,医药结合、合理调剂,重塑具有整体特征的诊疗人才.

    作者:翟华强;王燕平;今世元;王永炎 刊期: 2012年第15期

  • 磨盘草与其易淆品苘麻的叶形态-脉序图谱的鉴别特征

    目的:寻找磨盘草与其易淆品苘麻的鉴别特征,建立有效的鉴别方法.方法:LMVP(叶形态-脉序图谱鉴别法),QAERM(定量分析评价鉴别中药品种真伪方法的可靠性的方法).结果:主要区别点为磨盘草叶的睫毛短(75 ~ 200μm)、不易察见,叶柄上端具较长的展开毛(长达1.0~1.2 cm),中脉下部的三级脉或间脉的夹角多为宽锐角,少近直角;苘麻叶的睫毛较长(200 ~ 500 μm)、易察见,叶柄上端具较短的展开毛(多长0.1~0.5 mm),中脉下部的三级脉或间脉的夹角多为近直角,少宽锐角.同时以上述3组区别点为指标,鉴别结果的正确性(Ac)97.5% ~ 99.6%;重复性为符合率(ARO) 97.1%,一致性强度(Kappa)0.94.结论:建立的“叶形态-脉序图谱鉴别法”可准确鉴别磨盘草及易淆品苘麻.操作简便、快速、价廉、可靠性强.

    作者:何报作;朱意麟;廖月葵;黎理;周媛;袁正伟;曾静 刊期: 2012年第15期

  • 白茅根的化学成分研究

    应用色谱法对白茅根的化学成分进行研究,应用波谱法结合文献报道的波谱数据鉴定化合物结构.结果分离鉴定了13个化合物,其中3个苯丙素类成分,1-(3,4,5-三甲氧基苯基)-1,2,3-丙三醇(1),1-O-对香豆酰基甘油酯(2),4-甲氧基-5-甲基香豆素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷(3);4个有机酸类成分,对羟基苯甲酸(4),3,4-二羟基苯甲酸(5),香草酸(6),3,4-二羟基丁酸(7);1个酚类成分,水杨苷(8);以及5个三萜类成分,芦竹素(9),白茅素(10),羊齿烯醇(11),西米杜鹃醇(12),粘霉酮(13).其中1~8为首次从白茅属植物中分离得到.

    作者:刘轩;张彬锋;侴桂新;杨莉;王峥涛 刊期: 2012年第15期

  • 中药毒性分级概况与研究思路探讨

    中药的毒性是中药药性理论的重要组成部分.在临床应用中,毒性的有无或大小是确定用药剂量、使用久暂、配伍等的主要依据之一.目前,对于中药毒性的评价尚无统一标准,采用客观的可量化的指标体系对中药毒生进行科学分级与评价具有重要意义.该文总结了中药毒性分级的现状,并在此基础上探讨了其研究思路.

    作者:孙文燕;侯秀娟;王斌;朱跃兰;张硕峰;畅洪昇;孙建宁 刊期: 2012年第15期

  • 刺五加钙调蛋白基因的克隆及内生真菌对其表达的影响

    目的:克隆刺五加的钙调蛋白( calmodulin,CaM)基因,并分析内生真菌对其表达的影响.方法:采用cDNA末端快速扩增(rapid amplification of cDNA ends,RACE)技术克隆刺五加CaM基因的全长cDNA序列.通过RT-PCR法检测可显著提高刺五加皂苷含量的内生真菌菌株P116-1a,P116-1b,P109-4,P312-1对CaM表达的影响.结果:刺五加CaM基因的cDNA全长为856 bp,开放阅读框长450 bp,编码149个氨基酸的蛋白,与人参Panax ginseng和胡萝卜Daucus carota等物种的CaM同源性均高达100%.RT-PCR的结果显示,内生真菌可显著提高刺五加CaM基因的表达量(P<0.05),大表达量出现在菌株P109-4回接90 d时,达对照的2.96倍.结论:首次克隆并报道了刺五加CaM的cDNA全长序列,并证实内生真菌可显著提高刺五加CaM基因的表达量,为阐明内生真菌提高刺五加三萜皂苷含量的机制奠定了基础.

    作者:邢朝斌;龙月红;李宝财;朱金丽;何闪 刊期: 2012年第15期

  • 附子与甘草不同配伍比例配伍减毒的实验研究

    目的:通过平行比较附子及附子与甘草不同配伍比例对附子毒性的影响,观察甘草对附子的解毒作用,并对减毒机制进行探索性的研究.方法:平行比较了附子和附子配伍不同比例甘草对附子小鼠急性毒性,测定其半数致死剂量LD50;平行比较附子和附子配伍甘草对大鼠的心脏毒性,测定其半数中毒剂量TD50;以无血清DMEM将附子、附子-甘草3∶1、附子-甘草1∶1、附子-甘草1∶3的含药血清分别按5%,10%,20%稀释成3个浓度,观察各给药组不同浓度的含药血清对原代乳大鼠心肌细胞搏动节律、细胞存活率以及细胞内乳酸脱氢酶(LDH)含量的影响.结果:附子配伍甘草后能够提高附子的LD50和TD50.同空白血清对照组比较附子含药血清能够明显增加心肌细胞搏动节律和LDH的含量(P<0.05),附子配伍不同比例甘草含药血清能够明显降低附子导致心机搏动节律的加快,降低LDH含量.随着甘草比例的增加,作用加强.但不同浓度的附子以及附子配伍甘草含药血清对细胞存活没有明显影响.结论:甘草能够通过提高附子中毒剂量,从而达到减毒作用.甘草对于附子减毒作用是通过抑制心肌细胞节律的增加,保护心肌细胞从而达到减毒作用.

    作者:解素花;张广平;孙桂波;朱晓光;陈荣昌;张思玉;何玲;叶祖光 刊期: 2012年第15期

  • HPLC测定贵州不同产地的七叶一枝花中9种甾体皂苷的含量

    目的:通过比较贵州不同产地七叶一枝花中的主要活性成分甾体皂苷的种类和含量,为进一步探讨贵州地区作为七叶一枝花药材种植基地提供参考依据.方法:采用HPLC-UV测定来源于贵州省8个不同产地的七叶一枝花中9种甾体皂苷重楼皂苷Ⅶ,偏诺皂苷-3-O-α-L-rha(1→2)[α-L-rha(1→4)] -β-D-glc (PGRR),重楼皂苷H,重楼皂苷Ⅵ,重楼皂苷Ⅱ,薯蓣皂苷,纤细薯蓣皂苷,重楼皂苷Ⅰ及重楼皂苷V的含量.结果:重楼皂苷Ⅶ,PGRR,重楼皂苷H,重楼皂苷Ⅵ及纤细薯蓣皂苷5个甾体皂苷均可检测到,这可为增加鉴别重楼药材提供依据;独山产地的七叶一枝花中甾体皂苷含量高(9.62%),其次为铜仁产地(6.39%),含量低的为遵义产地的药材(0.99%).结论:贵州不同产地的皂苷种类和含量差别很大,适宜作为种植基地的为独山地区.

    作者:梁玉勇;刘振;高文远;满淑丽 刊期: 2012年第15期

中国中药杂志

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