刘丽君；魏钦俊；陈智斌；鲁雅洁；曹新；邢光前
目的:建立稳定转染人宫颈癌癌基因(human cervical cancer oncogene,HCCR)siRNA真核表达质粒的人胰腺癌PANC1细胞株,探讨siRNA干扰HCCR的表达后对人胰腺癌PANC1细胞增殖、凋亡和侵袭的影响.方法:通过脂质体转染法将含HCCRsiRNA的真核表达质粒pGCsi-HCCR稳定转染至人胰腺癌细胞株PANC1,抗生素G418筛选获得稳转细胞株;Western blot检测PANC1细胞中HCCR的表达,同时检测肿瘤相关基因p53蛋白表达的变化;流式细胞仪检测PANC1细胞的细胞周期和凋亡率变化;MTT比色法检测siRNA干扰后对PANC1细胞增殖能力的影响:Transwell侵袭实验观察siRNA干扰后对PANC1细胞侵袭能力的影响.结果:Western blot证实siRNA稳转组的PANC1细胞株和空载体稳转组比较HCCR蛋白表达水平下调,稳转细胞株建立成功.siRNA稳转组p53蛋白表达下降.siRNA稳转组的S期细胞数目减少而G0/G1期细胞数目增加,细胞凋亡增加.MTT结果显示siRNA稳转组1和稳转组2细胞吸光度分别为空载体组细胞的0.65倍和0.68倍,细胞增殖能力下降.Transwell侵袭实验显示siRNA稳转组细胞和空载体组细胞穿膜数分别为24.4±9.9和49.1±15.4(P＜0.01),稳转组细胞侵袭能力下降.结论:siRNA干扰HCCR的表达后能抑制胰腺癌PANC1细胞增殖和侵袭,促进其凋亡.
作者：蒋佳凯；张翼；张国新；苗毅；徐泽宽 刊期： 2009年第05期
目的:研究新型ATP敏感性钾通道开放剂埃他卡林(IPT)对低氧性肺动脉高压(HPH)大鼠内皮素A受体(ETAR)、内皮素B受体(ETBR)mRNA表达的影响.方法:SD大鼠平均分成正常对照组、HPH组、IPT处理组(对每天缺氧饲养的大鼠给予IPT 1.5 mg/kg灌胃),后两组置于常压低氧舱中每天8 h,每周6天,4周后逆转录多聚酶联式反应(RT-PCR)方法检测肺组织ETAR和ETBR mRNA表达.结果:与正常对照组相比,HPH组大鼠ETAR mRNA表达水平明显上升(P＜0.01),ETBR mRNA表达水平明显下降(P＜0.01);与HPH组相比,埃他卡林干预的缺氧大鼠ETAR mRNA表达明显降低(P＜0.01),ETBR mRNA表达明显增加(P＜0.01).结论:HPH模型大鼠肺组织内皮素受体mRNA表达发生异常,而埃他卡林可部分逆转这种异常,有助于抑制HPH血管收缩和平滑肌增殖.
作者：沈红；解卫平；王虹；金宇；蔡健康 刊期： 2009年第05期
目的:探讨甲状旁腺素(PTH)缺乏引起生殖功能降低的机制.方法:使用组织学,免疫组织化学和Western blot的方法比较分析了同窝4个月PTH基因敲除纯合子小鼠和野生型小鼠分别给予正常钙(1%)、低钙(0.01%)及高钙饮食(2%)后生殖能力、卵巢成熟卵泡数量、黄体形成及血管生成的差异.结果:与同窝野生型雌性小鼠(PTH+/+)相比,正常饮食PTH基因敲除纯合子小鼠(PTH-/-)生殖能力下降,成熟卵泡数量及黄体生成减少,卵巢血管发生减少;低钙饮食PTH-/-表现为完全不孕,成熟卵泡数量进一步减少和黄体缺失,卵巢血管发生减少更为明显;而高钙饮食PTH-/-生殖能力、成熟卵泡数量、黄体形成及血管发生均恢复正常.结论:PTH缺乏经细胞外钙介导卵巢血管生成障碍而致生殖能力降低.
作者：郭健；苗登顺 刊期： 2009年第05期
目的:构建针对大鼠ATF3(activating transcription factor 3,ATF3)基因的特异性短发卡RNA(small hairpin RNA,shRNA)真核表达质粒.方法:用DNA重组技术将针对大鼠ATF3基因不同位点所设计的5个shRNA序列克隆到真核表达质粒pGenesil-1中.在酶切分析及序列测定后,用脂质体将5个shRNA分别转染至大鼠肾小球系膜细胞(glomerular mesangial cells,GMC),随后用Western blot检测蛋白的相对表达量来筛选佳沉默效率的shRNA.结果:限制性酶切及核酸序列分析证明重组质粒构建正确.Western blot证实在重组质粒中,shATF3-1具有佳的沉默效率.结论:成功构建了针对ATF3基因的shRNA的真核表达质粒,并且该shRNA可以特异性地降低大鼠肾小球系膜细胞ATF3的蛋白表达.
作者：任琎；姜孝明；夏梅；赵聃；王迎伟 刊期： 2009年第05期
儿童系统性红斑狼疮(SLE)首发表现为消化道症状比较少见,而合并双肾输尿管积水的更加少见,尤其是儿童患者更是鲜见报道,现就本科收治1例儿童狼疮性肾炎报道如下
作者：沙玉根；鲍华英；赵非 刊期： 2009年第05期
目的:研究前列腺素E2(PGE2)对人肝癌细胞HuH7 Survivin表达的影响及其与PI3K/AKT信号转导通路的相关性.方法:用PGE2、EP受体激动剂、EP受体抑制剂、PI3K抑制剂(LY294002)处理HuH7细胞,用Western blot检测Survivin蛋白表达.结果:5 μmol/L PGE2处理HuH7细胞8 h后,Survivin的表达水平与对照组相比上升了63.59%(P＜0.01);5 μmol/L EP1、5μmol/L EP3、5 μmol/L EP4受体激动剂分别处理HuH7细胞8 h后,Survivin的表达水平与对照组相比分别上升了114.76%(P＜0.01),76.68%(P＜0.01),70.01%(P＜0.01),而5 μmol/L EP2受体激动剂处理HuH7细胞8 h后,Survivin的表达水平与对照组相比无明显改变(P＞0.05);10 μmol/L EP1,10 μmol/L EP4受体抑制剂分别处理HuH7细胞8 h后,Survivin的表达水平与PGE2组相比分别下降了32.95%(P＜0.01),28.36%(P＜0.05),而10 μmol/L EP2受体抑制剂处理HuH7细胞8 h后,Survivin的表达水平与PGE2组相比无明显改变(P＞0.05);10 μmol/L PI3K抑制剂(LY294002)处理HuH7细胞8 h后,Survivin的表达水平与PGE2组相比下降了28.05%(P＜0.01).结论:PGE2可能通过EP1、EP3、EP4这3种受体影响HuH7细胞中Survivin的表达,且这种调节作用可能与PI3K/Akt信号转导通路有关.
作者：蒋慧；白小明；冷静 刊期： 2009年第05期
目的:为了检测活性维生素D缺乏及其母乳成分的改变是否影响小鼠下颌骨以及牙齿的发育.方法:通过采用X线摄影、微CT和组织学等方法比较分析25羟维生素D3的1α羟化酶杂合子[1α(OH)ase+/-]和纯合子[1α(OH)ase-/-]母鼠所喂养的纯合子和杂合子小鼠下颌骨以及牙齿的表型差异.结果:母乳中的钙水平在1α(OH)ase-/-母鼠较1α(OH)ase+/-母鼠为低.1α(OH)ase-/-仔鼠的牙量和骨量较同窝1α(OH)ase+/-仔鼠明显下降,而由1α(OH)ase-/-母鼠所喂养仔鼠的牙量和下颌骨骨量比由1α(OH)ase+/-母鼠喂养的仔鼠要低.由1α(OH)ase+/-母鼠所喂养的1α(OH)ase+/-仔鼠牙量和下颌骨量高,而由1α(OH)ase-/-母鼠所喂养的1α(OH)ase-/-仔鼠牙量和下颌骨量低.结论:活性维生素D和高乳钙摄入各自具有刺激下颌骨和牙齿矿化和发育的作用,又具有协同作用.
作者：王骞；苗登顺 刊期： 2009年第05期
剖宫产术是产科领域中处理难产的重要手段之一,近年来,由于受社会因素的干扰,以及部分产妇不能忍受临产时宫缩痛或因产程略长缺乏从阴道分娩的信心,坚决要求剖宫产,从而致近年来剖宫产率居高不下.本科对此类产妇曾采用安定静脉推注、利多卡因宫颈封闭及相应的心理疏导等措施,但可能会增加新生儿窒息发生率[1-3],近年又采用了安定纱布内贴宫颈,取得了一定的效果.
作者：厉叶青；韩菲；文艺 刊期： 2009年第05期
目的:将已制备的抗Met单链抗体基因与人IgG Fc基因片段融合,表达有活性的融合蛋白分子,以增强单链抗体的可溶性.方法:从人淋巴细胞提取总RNA,经RT-PCR扩增并制备人IgG的Fc基因片段,并克隆于已构建好的pBAD-scFv原核表达载体中,转化大肠杆菌Top10,经阿拉伯糖诱导表达融合蛋白scFv-Fc.所表达的可溶性蛋白经亲和层析纯化、SDS-PAGE、Western blot分析鉴定,并用ELISA检测抗体效价.结果:序列分析表明重组质粒pBAD-scFv-Fc基因序列正确;SDS-PAGE分析表明,scFv-Fc融合蛋白分子量为60 ku,且为可溶性蛋白;该蛋白经过His亲和层析纯化、ELISA检测,结果表明,该融合蛋白能够与抗原分子Met特异性结合.结论:改造后的抗体融合蛋白scFv-Fc能与人Met特异性结合,增加了抗体蛋白溶解度,有利于抗体的大量制备.
作者：熊林；张爱霞；李芸茜；张大为；曹伯良；朱进；唐荣才 刊期： 2009年第05期
目的:探讨先天性二叶式主动脉瓣畸形(congenital bicuspid aortic valve,CBAV)的临床特点、诊断和外科治疗.方法:回顾性分析CBAV患者83例的临床资料,总结诊断和外科治疗经验.结果:83例患者术前超声心动图明确诊断61例,术中诊断22例.行主动脉瓣置换术65例,行双瓣置换术(主动脉瓣+二尖瓣)18例.同时行三尖瓣成形术10例,主动脉窦瘤破裂修补术4例,室间隔缺损修补术7例,动脉导管未闭缝扎术5例,升主动脉成形术2例,冠状动脉搭桥术2例.术后早期死亡5例,病死率6.0%.死于低心排综合症2例,多器官功能衰竭1例,急性肾功能衰竭1例,顽固性心律失常1例.结论:CBAV主要表现为主动脉瓣的狭窄和/或关闭不全.二维超声心动图是常用的诊断技术,主动脉瓣置换术是常规有效的外科治疗方法.
作者：王晓伟；吴延虎；陈亦江；张石江；秦建伟；陈广明；陈亮 刊期： 2009年第05期
目的:探讨Rac1、HIF-1α mRNA和蛋白在缺氧的人食管鳞癌Eca109细胞株中的表达及其对细胞增殖水平的影响.方法:应用半定量RT-PCR、Western blot法检测缺氧条件下Eca109细胞株Rac1、HIF-1α的mRNA和蛋白表达水平;应用半定量RT-PCR和MTT法检测常氧和缺氧下Rac1特异性抑制剂NSC23766处理后人食管鳞癌Eca109细胞株HIF-1α的mRNA表达水平和细胞增殖水平.结果:缺氧条件下,人食管鳞癌Eca109细胞株中Rac1、HIF-1α的mRNA和蛋白表达水平均明显增高,约24 h到达高峰.用NSC23766处理人食管鳞癌Eca109细胞株后,HIF-1α mRNA表达水平降低,细胞增殖明显受到抑制.结论:Rac1和HIF-1α在缺氧状态下被激活,且可能均与缺氧诱导的肿瘤增殖相关.
作者：刘梅芳；施瑞华；张国新；郝波；朱宏；周希乔 刊期： 2009年第05期
目的:了解正常结肠干/祖细胞标志Musashi-1mRNA在结肠癌中的表达情况.方法:应用实时荧光相对定量RT-PCR的方法检测25例结肠癌组织和18例远端正常结肠组织中Musashi-1mRNA的表达,用2-△△CT的方法计算相对于远端正常组织结肠癌组织中Musashi-1mRNA的表达倍数.结果:经实时荧光定量RT-PCR法检测,结肠癌组织中Musashi-1mRNA的表达与远端正常结肠组织相比有差异(P＜0.01),且是远端正常结肠组织的4.24倍(1.95～9.23).低分化组织与高、中分化组织相比,Musashi-1mRNA的表达有差异(分别为P＜0.001、P＜0.005).低分化组织中Musashi-1的表达是高分化组织的5.54倍(3.07～9.98).结论:正常肠干/祖细胞标志物Musashi-1在结肠癌组织中尤其是低分化组织中的高表达提示Musashi-1可能在结肠肿瘤的发生发展中起着一定的作用.
作者：朱敬华；周建农 刊期： 2009年第05期
目的:观察二磷酸盐类药物阿仑膦酸钠对人工关节磨损微粒刺激破骨细胞分化形成的影响,探讨二磷酸盐防治人工关节无菌性松动的可能机制.方法:体外用巨噬细胞集落刺激因子(M-CSF)诱导小鼠骨髓造血干细胞分化为破骨前体细胞(osteoclast precursors,OCPs),然后用核因子-κB受体活化因子配体(RANKL)和M-CSF两种细胞因子协同诱导OCPs向成熟破骨细胞分化,同时在培养体系中加入高分子聚乙烯微粒(103/ml)和不同浓度的阿仑膦酸钠(0.4、2.0、10.0、50.0 μg/ml),对获得的各组破骨细胞行抗酒石酸酸性磷酸酶(TRAP)染色计数阳性破骨细胞(核≥3)的数目;提取总RNA用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测TRAP mRNA的表达.结果:高分子聚乙烯微粒组TRAP阳性破骨细胞数目和TRAP mRNA的表达显著高于空白对照组(P＜0.05);阿仑膦酸钠组TRAP阳性破骨细胞数目和TRAP mRNA的表达均显著低于高分子聚乙烯组(P＜0.05),且随着阿仑膦酸钠浓度增高TRAP阳性破骨细胞数目和TRAP mRNA的表达呈递减趋势,组间差异均有统计学意义(P＜0.05).结论:阿仑膦酸钠可以抑制人工关节磨损微粒刺激破骨细胞分化形成.
作者：吴瑞；王青；范卫民；任科伟 刊期： 2009年第05期
目的:探讨兔急性肺血栓栓塞症(APTE)时肺血管内皮、支气管和肺泡上皮等部位内皮素1(ET-1)、血清炎症因子血栓素A2(TXA2)和前列环素(PGI2)、动脉血气的表达状况及尿激酶(UK)溶栓或血必净抗炎治疗对其的影响.方法:30只大耳白兔随机分为对照组、PTE模型组、UK组、血必净组、和UK+血必净组,每组6只.采用自体血栓回输法建立动物模型.常规取造模前、造模后1、2、4、8 h行动脉血气分析、放免法测定TXA2和PGI2、后病理学检查及免疫组化法检测肺血管内皮、支气管和肺泡上皮等部位ET-1的表达水平.结果:①血气分析:模型组栓塞后血氧分压(PO2)、二氧化碳分压(PCO2)与对照组相比均明显下降,血必净组与模型组比较无差异.UK及UK+血必净组后PO2指标较模型组提前好转;②放免法测定结果:TXA2、PGI2栓塞组1 h升高,2 h达高峰,4 h后开始降低,1、2、4 h与对照组比较都有显著性差异(P＜0.01),血必净组、UK组及血必净+UK组均1 h升高,2 h达高峰,2 h后开始下降,且各治疗组高峰值均较栓塞组低.各组术前无显著性差异;1、2、4 h各治疗组与模型组和对照组相比有显著性差异(P＜0.01).且各治疗组组间比较也有显著性差异,其中以血必净+UK组浓度下降快,UK组次之,血必净组较慢.8 h各组无显著性差异;③病理检查显示:PTE组兔肺组织病理损伤明显,血必净、UK组肺组织损伤较PTE组减轻,UK+血必净组肺组织损伤轻;④免疫组化检测显示:PTE组和血必净组ET-1蛋白表达的相对含量显著高于对照组,UK组和UK+血必净组与对照组比较无统计学意义.结论:APTE后溶栓结合抗炎治疗可明显改善动脉血气,降低TXA2、PGI2炎症因子和ET-1介导的急性肺损伤,提示血必净能减轻APTE时的肺损伤,同时对患者开展溶栓治疗时,也要重视必要的抗炎治疗使用.
作者：陈旭锋；黄培培；吴昊；陈彦；张劲松 刊期： 2009年第05期
目的:探讨骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)在正常小鼠体内从皮下向不同器官迁移的能力.方法:从β半乳糖苷酶(β-gal+)转基因小鼠分离骨髓细胞,经贴壁和传代培养获得第3代β-gal+ BM-MSCs,皮下注射给正常6周龄C57BL/6J野生型小鼠.8周后通过LacZ染色示踪β-gal+ BM-MSCs在受体小鼠不同组织器官的分布,并对供体第3代β-gal+ BM-MSCs基质金属蛋白酶(MMPs)的基因表达水平进行检测.结果:β-gal转基因小鼠来源的供体第3代BM-MSCs呈现LacZ染色阳性.第3代的β-gal阳性BM-MSCs皮下注射8周后,在受体小鼠肺、脑、心、肝、肾内检测到LacZ染色阳性的细胞.第3代β-gal+ BM-MSCs表达MMPs基因.结论:皮下注射的BM-MSCs能够在正常小鼠体内经血液循环迁移到不同器官,并可能分化成为不同器官的终末分化细胞,参与正常组织的自我更新.
作者：靳建亮；苗登顺 刊期： 2009年第05期
目的:研究前列腺素E1以及腺苷对离体兔肺的保护作用.方法:将18只新西兰大白兔分为3个实验组,分别为单纯UW液(A组、对照组)、UW液+前列腺素E1(B组)、UW液+腺苷(C组).切取实验兔整体心肺作为离体心肺模型,对心肺模型进行冷灌注、低温保存.分别在2 h末和4 h末,取肺部分标本做电镜分析.于4 h末,结扎右肺门,取右肺检测肺湿/干重比(W/D)、测肺气道压力(Paw).左侧离体心肺接呼吸机模拟移植手术后呼吸,并将自身静脉血用泵从主肺动脉泵入,用负压吸引真空试管取左心房血液做血气分析.结果:B组肺组织气体交换功能的保护作用以及降低供体肺保存过程中含水量的作用明显优于其他组;降低气道压力和C组相当,明显优于对照组.C组肺实质细胞的气体交换功能的保护、降低肺含水量以及降低气道压力明显优于A组.结论:UW液中加入前列腺素E1进行离体肺灌注可以使肺保存时间明显延长、肺气体交换功能保存良好.
作者：戴宁凰；骆金华；张石江；秦建伟；徐骁晗；周悦 刊期： 2009年第05期
目的:研究血清胃泌素水平、T淋巴细胞亚群变化及幽门螺杆菌(Hp)感染与老年慢性萎缩性胃炎(CAG)之间的相互关系,探讨老年人更容易接受的CAG的诊断方法.方法:对经胃镜及病理检查确诊的48例慢性萎缩性胃炎及40例浅表性胃炎(CSG)患者,进行血清胃泌素水平、Hp、T淋巴细胞亚群检测,并对检测结果进行分析.结果:两组病例比较:CAG组血清胃泌素水平较CSG组有显著降低(P＜0.01);CAG Hp阳性组较CSG Hp阳性组也有明显降低(P＜0.05);CAG组CD4、CD4/CD8较CSG组有显著降低,特别在Hp阳性组降低更明显(P＜0.01),CD8也有显著性差异(P＜0.05).根据接受者操作特征(ROC)曲线,血清胃泌素、CD4、CD8、CD4/CD8诊断CAG的佳界值分别为9.2(敏感度0.702,特异性0.974),27.7(敏感度0.787,特异性0.513),28.6(敏感度0.787,特异性0.872)和0.95(敏感度0.617,特异性0.769).结论:血清胃泌素可作为CAG的非侵入性诊断方法,结合T淋巴细胞亚群(CD4、CD8、CD4/CD8)变化及Hp检测,对老年人CAG筛选、病情发展及预后的评估均有一定意义,对难以接受内镜检查的老年人增加了一些辅助诊断手段.
作者：孟云霞；余爱玲；陈力；杨华；俞德彩 刊期： 2009年第05期
目的:研究血清胱抑素C(Cys C)与冠心病的相关性.方法:回顾性分析525例高度怀疑冠心病而行冠脉造影患者的临床资料,从冠心病病情程度、冠脉病变支数和冠脉病变Gensini总积分3方面研究血清Cys C水平与冠心病之间的关系.应用免疫比浊法检测血清Cys C浓度,对Cys C水平与冠心病病情、冠脉病变程度和冠脉病变Gensini总积分进行单因素和多因分析.结果:①随着血清Cys C水平的升高,冠心病患者病情逐渐加重,冠脉病变支数和Gensini总积分增加;在急性心梗时由于急性时相反应血清Cys C水平出现下降;②Logistic回归结果显示Cys C与冠脉有无病变显著相关(OR值5.346,95% CI为2.225～12.846,P＜0.01);③多元逐步回归结果显示在校正了年龄、性别等因素之后,Cys C与冠脉病变Gensini总积分(β=0.149,P＜0.01)仍然独立相关.结论:血清Cys C水平与冠心病有密切关系.随着血清Cys C水平升高,冠心病患者病情逐渐加重,冠脉病变程度也更加严重.
作者：孙磊；杨志健；贾恩志 刊期： 2009年第05期
目的:探讨二维灰阶血流成像技术(B-Flow)在颈动脉狭窄处管腔面积测定中的应用价值.方法:拟诊为颈动脉狭窄病变患者62例,选择二维超声(2D)模式下狭窄处管腔内面清晰的颈动脉共74条,在管腔狭窄处分别记录2D、彩色多普勒血流显像(CDFI)、能量多普勒血流显像(PDI)和B-Flow横切面声像图,用LOGIQ9系统自带软件,分别测定残余管腔面积.结果:病变处的颈动脉B-Flow表现动脉内膜粗糙、局部增厚或有斑块突入管腔,B-Flow血流在斑块处往往呈涡流改变.颈动脉狭窄处残余管腔面积测值,B-Flow与2D间差异无显著的统计学差异(P＞0.05),与CDFI、PDI的测值差异有统计学意义(P＜0.05).结论:B-Flow能以高帧频和高空间分辨力,同时显示血管解剖结构与病变处血流状态,与二维超声相结合,将会使所测量的血管面积更加准确,从而为临床评估颈动脉狭窄程度提供更可靠的依据.
作者：王亚丽；胡建群；胡淑芳；蔡晓峰 刊期： 2009年第05期
目的:研究肌动蛋白磷酸化在溶血磷脂酸(LPA)致乳腺癌细胞(MDA-MB-231)肌动蛋白细胞骨架重构及细胞迁移中的作用.方法:10 μmol/L LPA孵育MDA-MB-231细胞4 h,用Transwell法检测细胞迁移速度;用Western blot及免疫印迹技术检测细胞内骨架组分及胞浆组分中肌动蛋白的分布改变;用二维电泳法分离并比较细胞内骨架组分及胞浆组分中磷酸化和非磷酸化的肌动蛋白含量.结果:10 μmol/L浓度的LPA可明显增加MDA-MB-231细胞迁移速度.LPA处理后细胞内F-肌动蛋白含量明显增加,而肌动蛋白总量并未出现明显变化.此外,LPA处理还可明显升高细胞内胞浆组分中磷酸化的肌动蛋白量;在骨架组分中,肌动蛋白仅以磷酸化的形式存在,且含量在LPA刺激前后无明显差异.结论:LPA可促进乳腺癌细胞的迁移能力及细胞骨架发生聚合,其作用可能与其改变细胞胞浆中肌动蛋白的磷酸化水平有关.
作者：杜军；杨郁；戈应滨；顾洛 刊期： 2009年第05期
南京医科大学学报（自然科学版）杂志
主管:江苏省教育厅
主办：南京医科大学
