学术投稿

重组腺相关病毒Ⅰ型/大鼠肿瘤坏死因子受体:Fc(rAAVⅠ/ratTNFR:Fc)的构建和在大鼠体内表达的初步研究

高凯;赵爱志;吴小兵;药力波;张英起;王军志

关键词:腺相关病毒, 因治疗, 瘤坏死因子, 风湿关节炎
摘要:目的构建携带大鼠肿瘤坏死因子Ⅱ型受体胞外区和大鼠免疫球蛋白IgG1 Fc段融合基因的重组Ⅰ型腺相关病毒(rAAVⅠ/ratTNFR:Fc),并对该病毒在Lewis大鼠体内的表达和生物学活性进行初步研究,探讨以该重组腺相关病毒载体应用于类风湿关节炎基因治疗的可行性.方法首先以RT-PCR分别从大鼠脾细胞和大鼠淋巴细胞总RNA中扩增出大鼠肿瘤坏死因子Ⅱ型受体胞外区和大鼠免疫球蛋白IgG1 Fc段基因,并以重叠延伸PCR的方法将二者融合后克隆入pSNAVⅠ载体质粒进行重组病毒生产.在获得重组病毒后于Lewis大鼠肌肉注射,于不同时间ELISA测定血清ratTNFR:Fc表达,并以TNF-α细胞毒中和实验测定重组病毒表达产物的生物学活性.结果所构建的重组病毒rAAVⅠ/ratTNFR:Fc基因结构与预期一致;病毒于Lewis大鼠肌肉注射后可表达ratTNFR:Fc蛋白,含有ratTNFR:Fc蛋白的血清可以有效中和大鼠TNF-α对L929细胞的杀伤作用.结论本研究所构建的携带大鼠肿瘤坏死因子Ⅱ型受体胞外区和大鼠免疫球蛋白IgG1 Fc段融合基因的重组Ⅰ型腺相关病毒(rAAVⅠ/ratTNFR:Fc)可以用来作为阻断TNF-α的手段于大鼠类风湿关节炎模型上进行基因治疗研究.
苏州大学学报(医学版)杂志相关文献
  • 人结肠癌裸鼠原位移植瘤模型的建立

    目的建立人结肠癌裸鼠原位移植瘤模型.方法使用对数生长期的人结肠癌细胞(HT-29)在裸鼠皮下接种4周形成稳定的皮下移植瘤,再将皮下移植瘤组织块原位接种于24只裸鼠盲肠浆膜下,以完成原位移植瘤模型的制备.术后随机分四组,对照组(C组)、塞来昔布(celecoxib)高、中、低剂量组(H、M、L组),分别给予纯水及含有不同浓度(1500 ppm、1000 ppm和500 ppm)的塞来昔布的饮水,饲养42 d后处死裸鼠,观察各组原位移植瘤的成瘤率、瘤体积、重量以及裸鼠实验前后的体重变化,计算抑瘤率.结果 24只裸鼠实验期间无一只死亡,成瘤率为100%,荷瘤鼠实验前后体重变化比较在统计学上无显著差异(P>0.05),各组原位移植瘤体积P<0.05和瘤重P<0.01比较差异有显著性, L组、M组和H组的抑瘤率分别为25.30%、38.80%、76.92%,与对照组比较差异有显著性(P<0.05).结论本实验成功建立了人结肠癌裸鼠原位移植瘤模型,为研究人结肠癌发病机制和干预策略提供了较为理想的动物模型,塞来昔布对人结肠癌原位移植瘤生长具有明显的抑制作用,且有一定的量效关系.

    作者:王磊;陈卫昌;陈桂林;马文雄;谢学顺 刊期: 2005年第02期

  • 经胼胝体侧脑室入路的相关解剖因素的实验研究

    目的探索经胼胝体侧脑室入路的相关解剖因素在手术暴露中的作用.方法尸头模拟经胼胝体侧脑室入路手术,对相关解剖因素进行解剖学观测,以矢状位手术角和冠状位手术角为评价指标对数据统计分析.结果与矢状位手术角显著相关的因素有骨窗长度(r=0.462)、骨窗-胼胝体切口间距(r=-0.300)和相对位置角(r=0.263)、胼胝体切口位置角(r=-0.320),同侧/对侧骨窗(r=0.212)等;冠状位手术角的相关因素有骨窗-胼胝体切口间距(r=0.523)、胼胝体切口位置角(r=-0.197)、同侧/对侧骨窗(r=0.168).逐步循环回归分析获得矢状位手术角和冠状位手术角回归方程.结论经胼胝体侧脑室入路的暴露水平是受多因素共同作用的;矢状位手术角和冠状位手术角可客观地评价经胼胝体侧脑室入路的暴露水平;矢状位手术角和冠状位手术角回归方程为经胼胝体侧脑室入路的设计和应用提供了理论指导.

    作者:朱玉辐;兰青 刊期: 2005年第02期

  • 金克(槐耳清膏)抑制胰腺癌细胞Panc-1生长转移的实验研究

    目的探讨金克(槐耳清膏)在胰腺癌细胞Panc-1生长转移过程中的影响及可能机制.方法不同浓度的金克及5-FU分别与人胰腺癌细胞Panc-1共同培养.MTT法观察生长抑制曲线,FCM观察细胞周期变化及凋亡发生,TUNEL法观察凋亡发生情况并计算凋亡率,细胞免疫组化检测凋亡基因Caspase-3的表达,ELISA法检测细胞培养上清VEGF的分泌变化.结果金克抑制Panc-1的生长,主要阻滞在G1期,促进凋亡发生、Caspase-3的表达并抑制VEGF的分泌.结论金克对于胰腺癌细胞Panc-1有确切杀伤抑制疗效.

    作者:周进;李德春;匡玉庭 刊期: 2005年第02期

  • 中等剂量强的松联合霉酚酸酯治疗浸润性突眼的2例体会

    2例根据甲亢症状及眼部表现诊断为浸润性突眼的患者,在中等剂量的强的松(0.8 mg/kg/d)及MMF(1.5 g/d)治疗后观察眼部症状和体征,探讨霉酚酸酯(MMF)联合中等剂量的强的松治疗浸润性突眼的疗效.结果:2例患者治疗后眼部症状改善,眼球回缩,随访一年病情无反复.MMF联合中等剂量的强的松治疗浸润性突眼取得良好疗效.

    作者:宗海军;董吉祥 刊期: 2005年第02期

  • 血同型半胱氨酸水平与动脉粥样硬化性脑梗死的关系

    目的观察脑梗死患者血同型半胱氨酸(Hcy)水平与颈动脉粥样硬化(CAAs)程度的关系,探讨Hcy在动脉粥样硬化性脑梗死中的作用.方法对108名脑梗死患者以血管超声检查双侧颈总动脉、颈内动脉,按照颈动脉斑块大小分为A、B、C三组;取空腹静脉血,测定胆固醇、甘油三酯、血糖、纤维蛋白原、叶酸、VitB12及Hcy水平,对Hcy水平与 CAAs、叶酸、VitB12及其他因素进行相关分析.结果随着CAAs程度的加重,Hcy水平升高,A组和C组之间存在统计学差异(P<0.05);叶酸在A组和C组之间存在统计学差异.男性和高龄患者Hcy水平增高.统计学分析表明Hcy与叶酸、VitB12水平呈负相关,叶酸、VitB12水平随CCAs的加重而降低.结论高Hcy血症是CAAs的一个重要的危险因素,其水平与CAAs的程度密切相关.

    作者:吴青;刘春风 刊期: 2005年第02期

  • 兔脊髓缺血再灌注损伤中二次瘫痪现象与HSP70表达的研究

    目的探讨兔脊髓缺血再灌注损伤中二次瘫痪与HSP70表达的关系.方法采用肾下腹主动脉阻断法,建立脊髓缺血再灌注模型.缺血组阻断腹主动脉35 min后开放灌注,术后观察脊髓标本的病理学改变,细胞凋亡情况及HSP70表达情况.结果缺血组中二次瘫痪兔24 h内病理学改变明显好于瘫痪兔,细胞凋亡数明显少于瘫痪兔,HSP70表达明显高于瘫痪兔(P<0.05).结论兔脊髓缺血再灌注损伤中二次瘫痪现象与HSP70表达存在一定关系,HSP70对兔脊髓具有保护作用.

    作者:徐浩;杨惠林;唐天驷;管华清 刊期: 2005年第02期

  • 大鼠全脑照射后海马组织中GFAPmRNA表达的研究

    目的通过观察大鼠全脑照射后海马组织中胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)mRNA表达的变化,探讨GFAP在放射性脑损伤中的作用.方法大鼠全脑单次2 Gy、10 Gy和30 Gy照射后1 d、30 d,用逆转录聚合酶链技术(RT-PCR)观察海马组织中GFAPmRNA的表达变化,并分析照射剂量和照射后时间对其表达的影响.结果 10 Gy和30 Gy组照后1 d GFAPmRNA水平开始升高,分别为正常组的2.5倍、3倍(P<0.001),并持续到照后30 d,2 Gy组未见明显升高.结论随着照射剂量的加大和观测时间的延长,大鼠大脑海马内 GFAPmRNA表达增高,其终产物GFAP在放射性脑损伤保护和修复机制中有重要作用.

    作者:杨枢;田野;章国芬;何军;陈列松 刊期: 2005年第02期

  • SYBR Green I染料real-time RT-PCR检测RbAp46基因表达条件的优化

    目的通过优化反应体系,建立SYBR Green I染料real-time RT-PCR检测RbAp46基因表达的方法.方法构建pUCm-T vector-RbAp46阳性模板,根据分子量及阿佛加德罗常数(6.023×1023分子数/mol)换算为分子拷贝数,10倍倍比稀释后做标准曲线.根据标准曲线的斜率、相关系数、荧光强度及熔解曲线优化反应体系中各组分的量及反应条件.结果 25 μl的反应体系中10×PCR缓冲液2.5 μl,25 mmol/L MgCl2 2.2 μl,10 mmol/L dNTPs0.5 μl,20×SYBR Green I 0.5 μl,12.5 umol/L引物各0.5 μl,5 U/μlTaq DNA聚合酶0.3 μl, cDNA1 μl(相当于50 ng RNA),双蒸水17 μl.反应条件为:94℃ 5 min预变性, 96℃ 20 s变性,58℃30 s退火,72℃ 45 s延伸,40个循环,80℃时采集荧光信号,可以获得好的扩增效率.结论优化后的SYBR Green I real-time PCR适合于检测RbAp46基因表达,具有比较好的重复性,灵敏度高,特异性强.

    作者:胡绍燕;陈子兴;岑建农;顾伟英;赵晔 刊期: 2005年第02期

  • 产后出血142例临床分析

    对产后出血142例病例进行回顾性分析,探讨产后出血的原因,为合理防治提供依据.结果:产后出血的原因依次为宫缩乏力、软产道损伤、胎盘因素、凝血机制障碍.流产和多次妊娠增加产后出血的发生率.同时提示介入治疗在治疗难治性产后出血中有显著的止血效果.产后出血治疗中要正确估计产后出血量,及时采取抢救措施.

    作者:陶晓敏;钱志红 刊期: 2005年第02期

  • 氢化可的松治疗重症急性胰腺炎的实验研究

    目的探讨氢化可的松对重症急性胰腺炎(SAP)的治疗作用及作用机制.方法 54只健康SD大鼠随机分为3组:假手术(SO)组、SAP组及氢化可的松治疗组.采用经十二指肠胰胆管逆行注射5%牛磺胆酸钠诱导大鼠SAP模型.氢化可的松治疗组于模型制作成功后10 min给予舌下静脉注射氢化可的松(10 mg/kg).各组于术后3 h、6 h和12 h分批处死动物,观察各组大鼠血浆淀粉酶、TNF-α、IL-6、血栓素B2(TXB2)、6-酮前列腺素F1α(6-Keto-PGF1α)、TXB2/6-Keto-PGF1α比值、胰腺及肺组织病理变化、组织髓过氧化物酶(MPO)及肺湿干比值的变化.结果 SAP组血浆淀粉酶、TNF-α、IL-6、TXB2、TXB2/6-Keto-PGF1α比值、胰腺及肺组织MPO均较SO组明显升高(P<0.05),6 h、12 h肺湿干比值较SO组明显升高(P<0.05),氢化可的松治疗组血浆淀粉酶、TNF-α、IL-6、TXB2、TXB2/6-Keto-PGF1α比值、肺组织MPO均较SAP组显著降低(P<0.05),6 h、12 h肺湿干比值较SAP组明显降低(P<0.05),肺组织病理损伤较SAP组明显减轻.结论氢化可的松可减少TXA2、TNF-α、IL-6等炎症因子的产生等从而对SAP具有重要的治疗保护作用.

    作者:蔡笃雄;陈卫昌;朱树养;何扬 刊期: 2005年第02期

  • 交通伤致多发性骨折的治疗

    回顾性分析了152例多发性骨折脱位的临床资料,探讨其诊治原则.结果:本组152例患者中,17例死亡(死亡率为11.2%),其中7例死于出血性休克,4例死于严重脑外伤,4例死于多器官功能衰竭,2例死于急性呼吸窘迫综合征.手术治疗多发骨折脱位147例,优良率达 92%.认为交通伤的院前急救十分重要,首先应处理危及生命的严重合并伤与并发症,在全身情况稳定的情况下,积极处理开放性损伤与骨折.

    作者:朱建炜;董启榕;成红兵 刊期: 2005年第02期

  • 肝硬化合并胆石症23例手术治疗体会

    回顾性分析23例肝硬化合并胆石症外科治疗的疗效,探讨肝硬化合并胆石症外科治疗的经验.结果:治愈20例,治愈率87%,死亡3例(13%),发生并发症8例(35%).提示要充分认识肝硬化合并胆石症手术的危险性,积极做好围手术期处理,才能提高治愈率,减少并发症和降低病死率.

    作者:刘秋华;李德春;周进;吴清 刊期: 2005年第02期

  • 用于临床标本的无细胞非同源末端连接检测体系的建立

    目的建立一个用于临床标本的体外非同源末端连接的检测体系.方法从白血病细胞株和正常骨髓及外周血细胞中提取的核蛋白在体外与线性质粒pUC18 DNA一起作用,通过琼脂糖凝胶电泳分离和SYBR greenⅠ染色观察其连接能力.结果白血病细胞株NB4、U937、K562、SHI-1、Jurkat的连接能力为10.6%~32.9%,正常骨髓或外周血细胞的连接能力为5.2%~20.0%.结论无细胞的非同源末端连接检测体系的建立是研究人类白血病细胞DNA修复机制的实验基础.

    作者:傅琤琤;王之敏;岑建农;胡绍燕;何军;邱桥成;陈子兴 刊期: 2005年第02期

  • 手术治疗急性肠套叠63例临床分析

    回顾性分析63例手术治疗的肠套叠患儿的临床资料,总结肠套叠的手术治疗.结果:63例全部治愈,其中行肠切除11例,无死亡病例.分析提示,手术治疗肠套叠要加强围手术期处理,并注意观察肠管生机恢复情况,必要时行肠切除.

    作者:甄允方;孙庆林 刊期: 2005年第02期

  • ADAMTS-13活性水平检测在SLE中的临床意义

    目的探讨vWF裂解蛋白酶(ADAMTS-13,vWF-cp)活性水平的检测在系统性红斑狼疮(SLE)中的临床意义.方法采用残余胶原结合实验(residual-collagen binding assay)对38例SLE患者血浆ADAMTS-13活性水平进行检测,同时以6例血栓性血小板减少性紫癜(TTP)患者为阳性对照,以32例健康人为正常对照.结果 SLE及TTP患者血浆ADAMTS-13活性水平[(71.34 ±12.85)% 、(12.54±11.69)%]显著低于正常人[(78.60±10.03)%](P<0.01),SLE血浆ADAMTS-13活性水平明显高于TTP患者(P<0.01),SLE血浆ADAMTS-13活性水平阳性率[18.42% (7/38)]明显低于TTP患者[100%(6/6)](P<0.01).结论 ADAMTS-13活性水平检测对研究SLE血栓形成过程具有重要意义,也可能有助于SLE与TTP的鉴别诊断.

    作者:崔宇杰;刘芳;白霞;阮长耿 刊期: 2005年第02期

  • 自发性脑出血患者心电图缺血样改变与预后分析

    目的观察急性脑出血患者心电图改变及其与出血部位的关系. 方法 260例自发性脑出血患者入院后24 h内常规描记12导联ECG,并对其与临床关系进行分析.结果 260例中142例出现心电图缺血样改变,异常率为54.62%.ECG中有心电图缺血样改变者死亡75例(92.59%),无此改变者死亡6例(7.41%).两组比较预后有统计学意义(P<0.01). 结论脑源性心脏缺血样改变与出血有直接关系,且与脑部病变部位及预后密切相关.心脏缺血样改变可作为急性出血性脑血管病判定预后的主要指标之一.

    作者:陈应柱;吴冠会;包仕尧;李树平 刊期: 2005年第02期

  • 多囊卵巢综合征患者血纤溶酶原激活抑制物-1水平的研究

    目的探讨PCOS患者的血纤溶能力是否较正常对照者下降.方法对照组20例、PCOS患者30例,分别取血检查组织纤溶酶原激活物(t-PA)、纤溶酶原激活抑制物(PAI-1)的活性,了解PCOS患者的血纤溶能力.结果 PCOS组的胰岛素(INS)、t-PA、PAI-1分别为24±12 mU/L、0.17±0.06 KU/Ll、0.88±0.05 AU/L.结论 PCOS患者的血纤溶能力较正常对照者有所下降.

    作者:邹琴燕;李红 刊期: 2005年第02期

  • 胎盘间充质干细胞样细胞的培养及生物学特性的实验研究

    目的本研究拟从胎盘组织中分离培养获得间充质干细胞(placenta derived mesenchymal stem cells, PMSCs),研究其生物学特性,探讨其在移植治疗方面的可行性.方法将胎盘组织经胶原酶消化和贴壁培养获得的基质细胞,用免疫荧光标记和免疫细胞化学检测细胞表型,用活细胞记数和碘化丙啶(propidium iodide,PI)检测其增殖能力,用叔丁对甲氧酚(butylated hydroxyanisole ,BHA)、N2培养基等对培养的细胞分别向神经和脂肪方向诱导分化,继而采用免疫细胞化学等方法对分化的细胞进行鉴定.结果由胎盘组织中分离获得了一群具有与骨髓间充质干细胞(bone marrow mesenchymal stem cells,BMSCs)相似的形态和细胞表面标志的细胞:该群细胞增殖能力强;表达CD29、 CD44、CD105 (SH2)、ASMA、Ⅰ型和Ⅲ型胶原以及免疫应答负性调控分子PDL-1,但不表达CD11b、 CD34、CD45、CD19、CD106 (VCAM-1)、CD117、HLA-DR、vWF、MySM、HLA-DR,以及免疫应答正性调控分子CD40、CD40L、CD28、CD80和CD86;可诱导表达神经元标志神经微丝(neurofilament,NF)和星型胶质细胞标志胶质纤维酸性蛋白(glial fibrilament acidic protein,GFAP),并且这些细胞表达神经干细胞标志巢蛋白(nestin),向脂肪分化的细胞苏丹Ⅲ染色阳性.结论本实验中获得的胎盘基质细胞具有与骨髓间充质干细胞相似的细胞形态、表面标志和多向分化潜能的特点,它增殖能力强、来源方便、丰富,无伦理学限制,是良好的细胞移植来源.

    作者:薛群;张学光;苗宗宁;华军;曲静;王明元;施勤;陈永井;方振羊 刊期: 2005年第02期

  • 神经元特异性烯醇化酶、癌胚抗原、乳酸脱氢酶在小细胞肺癌中的预后价值比较

    目的评价神经元特异性烯醇化酶(NSE)、癌胚抗原(CEA)、乳酸脱氢酶(LDH)在小细胞肺癌(SCLC)患者中的预后价值.方法收集苏州大学附属第二医院1997年12月至2003年11月确诊的46例非手术治疗的SCLC患者,在治疗前检测NSE、CEA、LDH及其它实验室指标,进行预后单因素和多因素分析.结果 NSE、CEA、LDH的升高率分别为48.3%、42.9%、30.4%,三者水平在广泛期均高于局限期,其中LDH、CEA有显著统计学意义(P<0.05).单因素分析NSE>12 ng/ml,、LDH>1(与上限比值)均是提示预后较差的指标.多因素分析时,NSE是独立的预后因子,LDH、CEA的影响不明显.结论 NSE、CEA、LDH中,NSE与预后的相关性强,是提示预后的独立指标.

    作者:刘丽诗;胡华成 刊期: 2005年第02期

  • 锁骨骨折内固定术后并发症的原因分析及其对策

    对430例锁骨骨折患者行不同方法内固定手术,探讨锁骨骨折内固定手术并发症的成因及防治.结果:随访408例,时间平均13.5个月, 46例发现并发症,其中包括克氏针滑移至钉尾处皮肤破溃18例,克氏针误入胸锁关节2例,内固定断裂12例,骨不愈合5例等.结果证明合适的适应症,恰当的内固定,规范的术中操作是减少并发症的必要条件.

    作者:李欢;沈忆新;张志霖;朱亚平 刊期: 2005年第02期

苏州大学学报(医学版)杂志

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主管:江苏省教育厅

主办:苏州大学