学术投稿

IL-2/Fc融合基因真核表达载体的构建和表达

陈红梅;白雪帆;黄长形;洪沙;王平忠;韦三华;王九平

关键词:IL-2/Fc融合基因, 基因表达, 真核细胞
摘要:目的:构建含人IL-2 cDNA基因和免疫球蛋白Fc片段融合基因的真核表达载体pcDNA 3.1 IL-2/Fc,并在真核细胞中表达,以期用于乙型肝炎病毒(HBV)DNA疫苗的研究. 方法:应用重叠延伸剪切技术(SOE)经两次PCR获得嵌合基因片段IL-2/Fc,回收后克隆到中间pGEM-T Easy TA克隆载体,得到合适的酶切位点后,用双粘端连接法转克隆入真核表达载体pcDNA 3.1中,得到真核重组载体pcDNA 3.1 IL-2/Fc.然后用脂质体法转染SP 2/0细胞. 结果:对重组载体进行限制性酶切鉴定及测序分析,证明连接正确;经ELISA检测证实,该重组载体能够在真核细胞中外分泌表达插入的外源性基因编码的融合蛋白. 结论:成功构建了真核表达载体pcDNA 3.1 IL-2/Fc,并在SP2/0细胞中有效表达.
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    作者:彭南海;邹志英;高勇 刊期: 2004年第01期

  • IL-2/Fc融合基因真核表达载体的构建和表达

    目的:构建含人IL-2 cDNA基因和免疫球蛋白Fc片段融合基因的真核表达载体pcDNA 3.1 IL-2/Fc,并在真核细胞中表达,以期用于乙型肝炎病毒(HBV)DNA疫苗的研究. 方法:应用重叠延伸剪切技术(SOE)经两次PCR获得嵌合基因片段IL-2/Fc,回收后克隆到中间pGEM-T Easy TA克隆载体,得到合适的酶切位点后,用双粘端连接法转克隆入真核表达载体pcDNA 3.1中,得到真核重组载体pcDNA 3.1 IL-2/Fc.然后用脂质体法转染SP 2/0细胞. 结果:对重组载体进行限制性酶切鉴定及测序分析,证明连接正确;经ELISA检测证实,该重组载体能够在真核细胞中外分泌表达插入的外源性基因编码的融合蛋白. 结论:成功构建了真核表达载体pcDNA 3.1 IL-2/Fc,并在SP2/0细胞中有效表达.

    作者:陈红梅;白雪帆;黄长形;洪沙;王平忠;韦三华;王九平 刊期: 2004年第01期

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    作者:毛曦;储成林;毛钊;王建军 刊期: 2004年第01期

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    作者:杨霜英;刘玉秀;张丽 刊期: 2004年第01期

  • 地塞米松诱导原代培养的成骨样细胞凋亡的分子细胞学研究

    目的:通过干扰体外培养的成骨样细胞,探索糖皮质激素所致成骨样细胞凋亡的分子细胞机制. 方法:地塞米松诱导原代培养并传代的小鼠成骨样细胞,应用噻唑蓝(MTT)法检测细胞生存能力,流式细胞仪检测细胞凋亡,比色法检测半胱天冬酶Caspase-3的活性以及EMSA检测核因子Kappa B(NF-κB)活性. 结果:地塞米松使成骨样细胞存活数量下降,Caspase-3活性升高,NF-κB活性下降. 结论:地塞米松对原代未转化的成骨细胞有诱导凋亡的作用,并且是Caspase-3依赖性的,但NF-κB似乎不参与该过程.

    作者:赵建宁;包倪荣;王与荣;吴苏稼;周利武;曾晓峰;王骏骅 刊期: 2004年第01期

  • 血清雌二醇、孕激素与乳腺疾病关系的研究

    目的: 探讨性激素含量的变化与乳腺疾病之间可能存在的关系. 方法: 180例女性乳腺疾病患者,年龄20~53岁,月经正常,无内分泌疾病,于术前黄体期内抽取血样本,用放免法测定雌激素﹑孕激素水平,手术后做病理检查.依病理检查结果分组,分析各组乳腺疾病血雌激素﹑孕激素含量的变化. 结果: 乳腺各疾病组血雌激素﹑孕激素含量与对照组比较无显著差异(P﹥0.05),分年龄段后与对照组比较有显著差异,<40岁组血雌二醇含量在乳腺增生症患者中显著升高(P<0.01),孕酮则无明显变化;≥40岁组雌二醇﹑孕酮激素含量在乳腺癌﹑乳腺纤维腺瘤患者中均显著升高. 结论: 血雌激素、孕激素含量对乳腺疾病的诊断有指导意义.

    作者:徐红;王为忠;张新国;陈晓光;杨凯平 刊期: 2004年第01期

  • 胸大肌肌皮瓣转移修复口腔颌面颈部的组织缺损

    目的:探讨胸大肌肌皮瓣转移修复口腔颌面颈部缺损的效果. 方法:对34例应用胸大肌肌皮瓣修复口腔颌面颈部恶性肿瘤切除术后组织缺损的患者进行回顾性研究,分析其修复效果及并发症的发生情况. 结果:随访2~18个月,34例肌皮瓣中31例全部成活,3例小部分皮岛坏死.口腔颌面颈部外形和功能均恢复良好. 结论:胸大肌肌皮瓣是修复口腔颌面颈部缺损较为理想的组织瓣.

    作者:张森林;孟昭业;董震;杨震;曹罡;刘锐;寿柏泉 刊期: 2004年第01期

  • 急性毒鼠强中毒患者血尿酸的变化

    四亚甲基二砜四胺(毒鼠强)为国家禁止生产、销售的剧毒杀鼠药.2002-09-14发生的大批群众误服毒鼠强中毒事件中,我院接诊了大批急性毒鼠强中毒患者.

    作者:阳世宇;钱晓明;吴学豪;唐文杰 刊期: 2004年第01期

  • 南京总医院科研工作再创辉煌

    作者: 刊期: 2004年第01期

  • 1120例小儿经皮肾活检术的并发症预防及护理

    肾活检术是诊断肾脏疾病有价值的方法之一,对明确诊断、指导治疗及判断预后有重要意义.

    作者:彭新惠;徐敏;马红岩 刊期: 2004年第01期

  • 细胞粘附分子与盆腔子宫内膜异位症关系的研究进展

    细胞粘附分子(CAM)是介导细胞与细胞、细胞与细胞外基质相互作用的一类细胞因子,它参与肿瘤的侵袭和转移过程.子宫内膜异位症(EM)是一种良性疾病,但异位内膜具有粘附、侵袭和转移等特征.据研究发现,CAM在异位子宫内膜与腹膜间皮发生粘附及进一步形成异位病灶过程中起着重要作用.CAM在子宫内膜表达的多样性,与EM的不孕、盆腔粘连密切相关.作者对近几年有关CAM在EM发病机制中作用的研究进行简要介绍.

    作者:周秋明;吴元赭;沙金燕 刊期: 2004年第01期

  • 保胆取石术治疗胆囊结石的临床应用

    目的:采用纤维胆道镜行保胆取石手术治疗胆囊结石,与小切口胆囊切除术和开放式胆囊切除术比较,探讨选择性保胆取石术治疗胆囊结石的可行性. 方法:保胆取石组66例,小切口胆囊切除组146例,开放式胆囊切除组92例,分别观察患者的手术时间、住院天数、术后切口感染、饮食恢复时间和体重变化的差异. 结果:保胆取石组61例患者术后随访3~6个月,症状消失或减轻者占81%,B超复查胆囊均未发现结石.手术时间及住院天数缩短,术后切口感染、饮食恢复及体重变化方面均优于小切口胆囊切除组和开放式胆囊切除组. 结论:保胆取石术具有创伤小、安全性高、并发症少等优点,是胆囊结石患者手术治疗的合理方法之一.

    作者:舒越;康建明;王国宏;陈春民;王文忠;焦西征;潘用彬;罗时龙 刊期: 2004年第01期

  • 甲状腺嗜酸细胞肿瘤的研究进展

    对甲状腺嗜酸细胞肿瘤首次报道至今已有一个世纪,对该肿瘤的认识也从细胞水平深入到了分子水平.作者回顾该肿瘤研究的历史和现状,着重介绍肿瘤良恶性的鉴别诊断.

    作者:杨觅;张新华 刊期: 2004年第01期

  • 准分子激光原位角膜磨镶术患者主客观因素与疗效的相关性分析

    目的: 通过对准分子激光原位角膜磨镶术(LASIK)患者主客观因素与疗效的相关性分析,了解临床影响术后视力的主观、客观因素. 方法 : 对2002年间在我院行LASIK的164例患者325只眼(其中3例为单眼)进行连续性临床观察研究,分别进行术前、术后问卷式主客观因素调查,并对患者手术疗效进行相关性统计学分析.结果:患者术前对手术效果的期望值、手术中疼痛程度与手术后视力有显著相关性. 结论 : 解除患者术前忧虑及避免术中疼痛对提高术后疗效有重要意义.

    作者:倪利群;陈穗桦;王理理;姜涛;黄振平 刊期: 2004年第01期

  • 牛蛙核糖核酸酶基因原核表达载体的构建及表达

    目的:克隆牛蛙核糖核酸酶(RC-RNase)基因,构建重组原核表达载体,利用大肠杆菌系统表达RC-RNase蛋白. 方法:采用RT-PCR的方法从牛蛙肝脏中克隆RC-RNase基因,并进行序列测定;将RC-RNase基因插入到6×His表达载体pRSET-A中,构建成表达质粒pRSET-RC-RNase,用异丙基巯基半乳糖(IPTG)在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,并以免疫印迹法对表达蛋白进行鉴定. 结果:扩增出一条约380 bp的基因片段,双酶切鉴定和序列测定的数据与预期结果一致.经IPTG诱导,融合蛋白 (His)6- RC-RNase在大肠杆菌中得到成功表达,SDS-PAGE上出现相对分子质量约为16 000的一条新生蛋白带,经蛋白印迹验证为表达蛋白.薄层扫描显示,表达产物占菌体总蛋白的12.5%,主要以包涵体形式存在. 结论:正确克隆出RC-RNase基因,并在大肠杆菌中得到成功诱导表达,为进一步研究其生物学特性和功能奠定了基础.

    作者:王付勇;刘彦仿;苏勤;赵君;张静梅 刊期: 2004年第01期

医学研究生学报杂志

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主管:南京军区联勤部卫生部

主办:南京军区南京总医院