闫竞一；陈笑雷；黄颖鹏；沈贤；章圣辉
目的 检测黑色素瘤抗原(MAGE) -D4基因在非小细胞肺癌(NSCLC)组织及正常组织中mRNA的表达水平差异.方法 对54例NSCLC患者按年龄、性别、吸烟史、肿瘤大小、病理类型、细胞分化程度、淋巴结有否转移等进行分组,并检测其MAGE-D4的表达.结果 MAGE-D4在NSCLC组织的表达(1.74)高于其在正常组织中的表达(0.55,P＜0.05).MAGE-D4的表达与患者年龄、性别、烟龄、肿瘤大小无关；其在鳞癌中的表达(1.99)高于腺癌(1.27,P＜0.05)；在细胞分化差的组织中表达(2.96)高于细胞分化较好的组织(1.01,P＜0.05)；在淋巴结转移者中的表达(2.07)高于无淋巴结转移者(1.42,P＜0.05).结论 MAGE-D4基因在NSCLC组织中有较高的表达水平,并存在一定的表达规律,可作为NSCLC的特异性抗原.
作者：马勤运；陈志明；庞烈文；朱勇俊；陈刚；陈佶 刊期： 2012年第03期
目的 探讨精索静脉曲张大鼠干细胞因子(SCF)的变化和意义.方法 将清洁级雄性SD大鼠20只喂养1周后,随机取10只应用左肾静脉部分结扎法进行造模,设为模型组；另外10只行左肾静脉分离后不结扎,设为假手术组.两组均于60d后处死大鼠,检测血清SCF、睾丸组织SCF及附睾精子的密度和活率.结果 模型组睾丸组织SCF为(654.6±30.5)ng/L,与假手术组(382.8±25.6) ng/L比较明显升高(P＜0.05)；两组血清SCF比较差异无统计学意义(P＞0.05).模型组大鼠附睾精子密度为(2.36±1.58),与假手术组(4.07±1.40)比较明显降低(P＜0.05),两组大鼠精子活率比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 检测睾丸组织SCF有助于判断生精细胞损伤.
作者：张轶乐；韩兆峰；刘建荣 刊期： 2012年第03期
本研究旨在探讨胸骨横断切口中三维固定的应用,现报道如下.一、材料和方法1.一般资料:选取我科于2005年1月至2009年12月行横断胸骨切口胸腺切除手术的重症肌无力患者共249例,年龄13～82岁.所有患者均采用同种手术方式:第二肋间横断胸骨并行胸腺和/或胸腺瘤(≤3 cm)切除(对于＞3 cm的胸腺瘤我们采用纵行全程劈开胸骨,未列入本研究).其中2007年6月至2009年12月使用钛板固定胸骨的129例病例中男50例,女79例,年龄:(41.64±14.71)岁.
作者：朱勇俊；马勤运；陈志明；庞烈文；陈刚；陈佶 刊期： 2012年第03期
目的 观察经皮椎体成形术(PVP)和椎体后凸成形术(PKP)治疗骨质疏松性椎体Kummell'8病的效果.方法 采用经皮PVP和PKP治疗骨质疏松性Kummell's病63例65个椎体,分为经皮PVP组35例次,PKP组30个节段.分别于手术前1d,手术后1d、1周、4周、12周、24周和术后1年测定疼痛视觉模拟评分；测定后凸矫正比率,观察骨水泥渗漏率.结果 VAS评分:手术前PVP组和PKP组分别为(9.6±0.3)分和(9.8±0.2)分,2组间差异无统计学意义(P＞0.05),手术后1年分别为(2.3±1.2)分和(2.5±1.1)分,2组疼痛视觉模拟评分评分均较手术前明显下降(P＜0.01),至末次随访,两组间VAS评分差异无统计学意义(P＞0.05).后凸畸形矫正率,PVP组和PKP组分别为(45.50±3.15)％和(47.83±4.24)％(P＞0.05).骨水泥渗漏率PVP组5例14.29％,PKP组4例渗漏(13.33％),两者差异无统计学意义(P＞0.05).结论 Kummell'8病是一种特殊类型的骨折,PVP和PKP技术治疗均可获得明显的止疼效果.并可获得部分的后凸矫正效果；由于病变椎体内由裂隙、上下的硬化面和前方的前纵韧带形成了一个封闭的空间,骨水泥异常渗漏发生率较低.
作者：陈书连；王义生；刘宏建；王振；卢义峰；韩松辉；王海蛟；朱卉敏；刘世敬 刊期： 2012年第03期
目的 观察血管紧张素(Ang)Ⅱ1型(AT1)和2型(AT2)受体在烧伤创面愈合过程中的表达及其与细胞增殖和凋亡的关系.方法 在大鼠深Ⅱ度烧伤后即刻、3、7、14和21 d取创面皮肤标本,采用免疫荧光组织化学染色法检测AT1和AT2的表达；采用增殖细胞核抗原(PcNA)标记和原位末端转移酶标记技术(TUNEL)染色法观察细胞增殖和凋亡.结果 在正常皮肤,AT1和AT2表达强度较弱.但伤后第7天表达达高峰,14 d降低,AT1的表达下调更明显.烧伤后7 dPCNA阳性细胞数多,14 d后降低.烧伤后7～14 d TUNEL阳性细胞数维持在较高水平,随后下降.结论 烧伤愈合过程中AT1和AT2的表达具时空特性,这种变化与创面修复细胞增殖和凋亡密切相关.
作者：谢光辉；刘宏伟；程飚；李升红；邱建勇；曹荣 刊期： 2012年第03期
目的 观察Zn2+改性羧甲基纤维素( Zn2+ -SCMC)对术后腹腔粘连的预防作用.方法 将90只大鼠随机分为A、B、C3组,每组各30只.先行均制作肠粘连模型,取A组腹腔内不放药物,B、C组于腹腔内损伤部位分别置入3ml、浓度3％的羧甲基纤维素(SCMC)及3ml、浓度3％的Zn2+ -SCMC,术后10d处死大鼠,观察各组腹腔粘连情况.结果 大鼠肠壁组织病理:A组纤维细胞增生明显,胶原纤维排列致密；B组纤维细胞增生较明显,胶原纤维排列略密；C组纤维细胞增生较轻,胶原纤维排列较疏松.术后10d腹腔内粘连情况:C组腹腔内轻微粘连,粘连发生率44.8％,B组中度粘连,粘连发生率80.0％,A组广泛粘连,致密,粘连发生率100.0％.A组Ⅲ～Ⅳ级粘连多为17只,B组Ⅱ级粘连多12只,C组0级粘连多16只,C组粘连分级较B组、A组明显减轻,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 Zn2+ -SCMC能明显减轻术后腹腔粘连程度,其作用优于SCMC.
作者：刘国辉；刘莉；伦志军；王广义 刊期： 2012年第03期
胃肠道间质肿瘤(GIST)是位于胃肠道或腹腔内的表达KIT(CD117)蛋白的间叶源性肿瘤,大多数存在KIT和血小板源性生长因子受体α-多肽(PDGFRA)基因的突变[1].伊马替尼(Imatinib)是一种口服的ATP的竞争性抑制剂,能竞争性地结合于KIT酪氨酸激酶功能区的ATP结合位点,从而阻断了失控的信号传导通路,因此目前已成为治疗GIST的标准药物.然而一般在Imatinib平均治疗24个月后,将产生继发性耐药.关于Imatinib耐药(包括原发和继发)的机制还不是很清楚.目前认为Imatinib发生耐药的大可能是由于KIT和PDGFRA基因的继发突变导致Imatinib耐药性克隆的出现.我们通过建立Imatinib耐药的胃肠道间质瘤细胞系,并对其进行生物学特征的初步探讨,明确其耐药的可能机制,探讨GIST发生耐药后的分子改变事件,为GIST的靶向治疗寻找新的分子靶点.
作者：郑松；王昊；冷建杭；童文娟；陶德友；潘月龙 刊期： 2012年第03期
目的 探讨容积调控性氯离子通道(VRACs)阻断剂DCPIB对小胶质细胞BV-2细胞增殖的影响及作用机制.方法 不同浓度的DCPIB(10、20、40 μmol/L)作用于BV-2细胞相应的时间后,用噻唑蓝(MTT)比色法检测DCPIB对细胞增殖的抑制率；流式细胞术检测药物处理后BV-2细胞周期的分布；Western blot检测细胞周期相关蛋白Cyclin D1的表达.结果 VRACs阻断剂DCPIB可使细胞生长曲线下移,呈时间和浓度依赖性；DCPIB抑制细胞增殖,作用细胞48 h后的抑制率分别为(29.20±3.99)％、(38.93±2.36)％、(68.52±2.16)％,与正常对照组比较均有明显增高(P＜0.01).细胞周期阻滞在G0/G1期,G2/M期和S期细胞明显减少.DCPIB作用BV-2细胞72 h后,与对照组比较,Cyclin D1蛋白表达明显降低.结论 VRACs阻断剂DCPIB可以抑制BV-2细胞增殖,其作用机制可能与阻滞细胞周期和下调Cyclin D1蛋白的表达有关.
作者：李正伟；陈劲草；颜青；张华楸 刊期： 2012年第03期
我们以往研究结果显示骨髓间充质干细胞(MSCs)具有向恶性胶质瘤趋向性迁移的特性,并可能成为恶性胶质瘤基因治疗的理想载体[ 1-2].目前对MSCs向胶质瘤趋向性迁移的机制还不十分清楚,胶质瘤细胞分泌的可溶性因子包括趋化因子或生长因子可能介导MSCs的胶质瘤趋向性.体内外实验均证实,胶质瘤细胞分泌多种趋化因子,包括单核细胞趋化蛋白-1( MCP-1)[3]、基质细胞衍生因子-1α( SDF-1α)[4]等.我们通过体外实验观察趋化因子MCP-1和SDF-1α对MSCs的趋化迁移作用,探讨上述因子在MSCs的胶质瘤趋向性中的作用.
作者：张鹏；吴惺；徐锋 刊期： 2012年第03期
目的 观察骨形成蛋白-2(BMP-2)基因转染兔骨髓基质细胞(MSCs)复合藻酸钙修复兔膝关节软骨缺损的效果.方法 取4周龄的新西兰兔骨髓细胞,体外培养得到MSCs.选用24只成年新西兰兔,在两侧股骨髁非负重区造成全层软骨缺损模型,A组(实验组)植入BMP-2转染的MSCs+藻酸钙,B组(对照组Ⅰ)植入空质粒转染的MSCs+藻酸钙,C组(对照组Ⅱ)植入不含MSCs的藻酸钙,D组(对照组Ⅲ)旷置.12周后,观察软骨缺损修复情况及组织学评价.结果 实验组修复组织基本光滑,有大量Ⅱ型胶原蛋白表达,3个对照组修复组织Ⅱ型胶原蛋白表达量少,仍有明显缺损.实验组和3个对照组组织学评分差异有统计学意义(P＜0.05).结论 BMP-2转染兔MSCs修复软骨缺损效果优于其他对照组.
作者：殷力；娄超举；韩奇财；杜振宁；李树山；徐晨阳；李弘帅；赵国强 刊期： 2012年第03期
目的 检测胃癌组织及胃癌细胞中微小RNA (miRNA)表达谱,并测定胃癌组织及胃癌细胞中miR-429的表达水平.方法 采用基因芯片技术检测胃癌组织、癌旁正常胃组织标本及胃癌细胞株( SGC-7901)、正常人胃上皮细胞(GES-1)中miRNAs的表达.挑选基因芯片结果中胃癌组织表达显著下调的miR-429,并采用实时定量聚合酶链反应(qRT-PCR)检测7例正常胃组织、52例胃癌组织、胃癌细胞SGC-7901、GES-1中miR-429的表达.结果 基因芯片结果表明,胃癌组织中有23个miRNA上调,如miR-21、miR-30b等,31个下调如miR-429、miR-200等.qRT-PCR检测显示,miR-429在胃癌组织中下降约63.4％ (P＜0.01),在胃癌细胞株SGC7901中下降约76.2％(P＜0.01).结论 miR-429在胃癌组织中表达显著下调,可能作为胃癌特异性miRNA,在胃癌的发生发展过程中有重要作用.
作者：孙铁为；陈晓宁；刘军；吕彦东；吴德全 刊期： 2012年第03期
目的 探讨核转录因子Spl与血管内皮生长因子(VEGF)在进展期肾细胞癌(RCC)组织中的表达及临床意义.方法 应用免疫组织化学PV-9000法检测Spl和VEGF蛋白在73例进展期RCC组织中的表达.结果 Spl和VEGF在进展期RCC组织中均高表达,其阳性率分别为75.3％ (55/73)和83.6％ (61/73),两者之间呈正相关.结论 Spl和VEGF在RCC的恶性进展中发挥重要作用,联合检测两者的表达对评估RCC预后有较高价值.
作者：任选义；魏金星；李华强；侯俊清 刊期： 2012年第03期
目的 构建和筛选靶向阿片受体(MOR)基因外显子7(exon-7)的有效干扰的mRNA质粒载体.方法 构建方法:针对阿片受体基因外显子7的目标序列,设计并分别合成短发夹RNA(shRNA)寡核苷酸序列4条(exon-71、exon-72、exon-73、exon-74),退火形成双链DNA,稀释退火片段分别与线性化pGenesil-1.1质粒表达载体的连接,取连接产物转化感受态细胞DH5α,培养过夜后提取质粒,并分别用Sac I作酶切鉴定,同时送转化菌液去测序.筛选方法:提取质粒与含阿片受体基因的CHO-K1细胞在细胞培养箱中培养24、48、72 h后分别收集各细胞样品作RNA的逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测.结果 质粒酶切鉴定结果,在插入的目的基因片段里,我们分别设计了1个Sac I的酶切位点,面质粒pGenesil-1.1有1个Sac I的酶切位点,如若插入正确,质粒就能被Sac I酶切出1条约916 bp的DNA小带.经酶切鉴定分析:质粒exon-71、exon-72、exon-73、exon-74均可切出1条约916bp的DNA小带.测序结果显示与设计片段相符.4组shRNA在与CHO-K1细胞培养72 h后的MOR-1 C1 mRNA相对含量为94％、33％、88％、91％,仅exon-72组的MOR-1C1 mRNA相对含量小于50％,对exon-7 mRNA的表达有明显抑制作用.结论 成功构建1条阿片受体基因外显子7的mRNA的载体.
作者：陈锋；郑文忠；张宗泽；彭勉；王焱林 刊期： 2012年第03期
CD28-B7和CD40-CD40L共刺激分子系统是T细胞依赖的免疫反应启动和维持所必不可少的基本信号系统.缺乏或阻断共刺激信号,将会引起T细胞的无反应性或细胞凋亡.我们用CTLA4Ig和CD40Ig双基因局部转染大鼠肾脏后进行异种移植,观察双基因局部共转染能否诱导移植肾免疫耐受.
作者：蔡曼波；吴艳平；罗志刚；李建军 刊期： 2012年第03期
目的 观察抑制信号转导和转录激活因子-3( STAT3)的活化对调控人恶性胶质瘤LN229细胞运动能力的影响.方法 应用JAK/STAT3信号通路抑制剂AG490处理LN229细胞株,Westem blot检测STAT3、磷酸化STAT3( p-STAT3)的表达.噻唑蓝(MTr)比色法筛选能够阻断LN229细胞STAT3活化的适AG490浓度；划痕实验和趋化实验检测AG490给药后,LN229细胞运动能力的变化；F-肌动蛋白( F-actin)实验检测AG490对LN229细胞肌动蛋白聚合能力的影响.结果 AG490可有效抑制LN229细胞STAT3的持续活化.50 μmol/L浓度的AG490在不影响LN229细胞存活时(t=1.862,P＞0.05),能够有效抑制STAT3的磷酸化,对照组和50μmol/L AG490处理组的p-STAT3/STAT3的密度比值分别为0.530±0.040和0.291±0.036(t =4.821,P＜0.01).伤口愈合实验可见50μmol/L AG490处理的LN229细胞非定向运动能力降低,24h时对照组运动的距离为(0.290±0.049) mm；实验组为(0.150±0.054) mm(P ＜0.05).体外趋化实验显示50 μmol/LAG490处理的LN229细胞定向运动能力降低(P＜0.01),表皮细胞生长因子(EGF)浓度为10 μg/L时对照组穿过膜的细胞数为93.92±9.52；实验组为24.52±3.04.50μmol/L浓度的AG490抑制LN229细胞肌动蛋白聚合能力(P＜0.05).结论 STAT3信号转导通路参与调控胶质母细胞瘤LN229的细胞运动过程,阻断STAT3的活化可以抑制恶性胶质瘤的运动能力.
作者：张姣；李文良；刘晓丽；谷峰；马勇杰 刊期： 2012年第03期
目的 构建人肠凝集素-1( ITLN-1)基因的真核表达载体,观察其在胃癌细胞中的表达.方法 采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法扩增ITLN-1 cDNA,定向克隆至真核表达载体pEGFP-N1,测序鉴定；在脂质体的介导下,重组质粒瞬时转染人胃癌细胞株SGC-7901 72 h后,Western blot法检测细胞培养上清中ITLN-1表达,四甲基偶氮唑盐比色(MTT)法、Transwell小室实验检测癌细胞增殖、侵袭活性.结果 真核表达载体pEGFP-ITLN-1转染SGC-7901细胞72 h后,ITLN-1 蛋白表达上调5.72倍(P＜0.01),细胞增殖活性降低52.8％ (P＜ 0.01),细胞侵袭能力下调58.1％ (P＜0.01).结论 成功构建人ITLN-1真核表达载体,转染胃癌细胞过表达后,能抑制癌细胞的增殖和侵袭活性.
作者：齐盟；张桓瑜；郑丽端；戚腾；童强松 刊期： 2012年第03期
目的 观察重度烧伤患者中后期全身和创面局部肉芽组织中的微量元素Fe、Cu、Zn、Se、Mn的含量变化,探讨微量元素对创面愈合的影响.方法 收集38例重度烧伤患者伤后4～9周未愈创面肉芽组织及全血标本,利用等离子体发射法测定其Fe、Cu、Zn、Se、Mn的含量,并与正常人体皮肤和血标本进行对照.结果 伤后4～9周血液和创面肉芽组织中的Zn、Se、Mn含量均逐渐下降；Cu在血液中的含量接近正常,在肉芽组织中的含量逐渐上升,伤后8～9周时Cu含量为(1.31±0.21) μg/g湿重,高于人体正常皮肤中的含量,差异有统计学意义(P＜0.05).创面局部Zn和Se的含量变化与血液中的变化显著相关(rzn =0.747,P＜0.05；rse=0.852,P＜0.05).结论 微量元素Fe、Cu、Zn、Se、Mn在全身和创面局部肉芽组织中的变化不尽相同,局部Zn、Se含量的变化受全身含量的影响,不同微量元素的不同变化可能是导致创面愈合延迟的重要因素.
作者：韩兆峰；王甲汉；李志清；杨磊；易朝晖；周健 刊期： 2012年第03期
目的 建立SYBR Green荧光定量聚合酶链反应(PCR) TLR4检测方法,构建标准曲线,并测定小干扰RNA( siRNA)沉默TLR4的效率.方法 设计TLR4 qPCR扩增引物,以SYBRGreen qPCR master mix,95℃15min,95℃15s,60℃ 1min 50个循环进行扩增,同时1:4稀释阳性对照,构建标准曲线.以65℃为起点,0.5℃为阶梯逐步增加至95℃,于每个温度点测定荧光强度,获得熔解曲线.LipofectamineTM 2000介导不同浓度的siRNA(60、80、100 nmol/L)转染SW480细胞6h后撤除.分别于24、48 h后,使用qPCR检测TLR4 mRNA水平表达变化.结果 (1)SYBR Green定量检测TLR4扩增曲线呈典型S型动力学曲线,扩增效率为100.9％,熔解曲线成单峰,熔解温度为81.5℃.(2) siRNA在24h、80 nmol/L时,TLR4 Ct值为27.72,较未干扰组(25.96)明显增加.(3)琼脂糖凝胶电泳显示转染组(24h、80 nmol/L)在PCR扩增28个循环时不能被检出,而阳性对照则扩增条带清晰.结论 (1) qPCR检测TLR4方法稳定,结果可靠.(2) siRNA浓度80 nmol/L,可对肠癌SW480细胞的TLR4 24 h时的表达水平明显抑制.
作者：张燕；江波；张婷；茆勇；高翔；华东 刊期： 2012年第03期
目的 探讨新的长链非编码RNA(lncRNA) UC001 kfo在肝癌中的表达及与肝癌侵袭、转移的关系.方法 收集肝脏组织60例,分为肝硬化组、肝癌组、癌旁组、门静脉转移肝癌组.原位杂交检测UC001 kfo和ACTA2(α-平滑肌肌动蛋白的基因)在肝癌组织的表达.结果 UC001kfo在肝硬化组不表达或低表达,在其他3组均为阳性表达,以上4组的表达值分别为113.30±11.79、137.59±6.23、148.78±8.23、160.28 ±9.47,方差分析显示UC001kfo表达差异有统计学意义(P＜0.01),4组间的差异有统计学意义(P＜0.01),分别为肝硬化组＜癌旁组织＜肝癌组＜门脉癌栓组.ACTA2的表达分别为109.89±9.74、125.22±32.16、149.06±8.43、156.57±8.86,ACTA2表达差异有统计学意义(P＜0.01),4组间差异有统计学意义(P＜0.05),表达分别为肝硬化组＜癌旁组织＜肝癌组＜门脉癌栓组.结论 UC001 kfo和ACTA2在肝癌中表达明显增加,特别是门静脉癌栓组,UC001kfo可能通过调控ACTA2的表达促进肝癌的侵袭转移.
作者：潘延凤；娄海山；余祖江；张贤强；冯磊；梁红霞 刊期： 2012年第03期
目的 探讨蛋白质谱技术对大鼠心脏移植后急性排斥反应的预测.方法 建立颈部异位异种大鼠心脏移植模型.(1)急性排斥A和B组,供受体不作预处理.(2)治疗A和B组,受体术前1d腹腔注射环孢素A(CsA) 20 mg/kg,术后每天10 mg/kg.A和B组分别在术后5d和7d取血液标本及移植物(供心)标本.(3)空白组,取大鼠移植前血液及心肌组织作标本.应用蛋白质谱技术对各组的血清及心肌组织蛋白质样本进行质谱测定,统计分析各组之间的差异蛋白质,并比较分析差异蛋白质的峰强度.结果 与空白组血清比较,急性排斥A组与之存在7个差异蛋白质峰,急性排斥B组与之存在11个差异蛋白质峰.急性排斥A组与治疗A组比较,有4个差异蛋白质峰,急性排斥B组与治疗B组比较,有6个差异蛋白质峰.与空白组心肌组织蛋白质比较,急性排斥A和B组与之分别存在7个和13个差异蛋白质峰.以上比较差异均有统计学意义(P＜0.01).结论 正常与急性排斥反应后不同时相点血清及心肌组织中的蛋白存在明显差异,这种差异蛋白可能与急性排斥反应相关.
作者：王广阔；林峰；叶韵斌；陈慧菁；黄雪珊；陈道中 刊期： 2012年第03期
中华实验外科杂志
主管:中国科学技术协会
主办：中华医学会
