张明；吴凤鹏；石金苓；李庆霞；高献书；王娟
目的 探讨黄岑苷对人肺腺癌A549细胞株增殖影响的分子机制.方法 体外培养人肺腺癌细胞株A549,加入0.000、0.625、1.250、2.500、5.000、10.000 mg/L黄芩苷,分别孵育24、48、72 h,噻唑蓝(MTT)法检测药物对A549细胞的抑制率；1.22 mg/L黄芩苷孵育A549细胞24 h后,收集细胞,逆转录-聚合酶链反应( RT-PCR)测定增殖细胞核抗原(PCNA)、细胞周期蛋白 1(Cyclin D1) 、p21 mRNA的表达水平；Western blot法检测PCNA、Cyclin D1、p21蛋白表达水平.结果 MTT结果显示黄芩苷对人肺腺癌A549细胞株增殖具有明显的抑制作用.1.22 mg/L黄芩苷作用细胞24 h后,与对照组(0.68±0.16、0.48±0.05、0.27±0.06)比较,PCNA mRNA表达(0.22±0.03)、Cvclin D1 mRNA表达(0.08±0.02)显著下降(P＜0.01),p21 mRNA表达(0.47±0.07)显著升高(P＜0 01) 与对照组(1.75±0.05,1.59 ±0.24,0.59±0.02)比较,黄芩苷组PCNA蛋白表达(0.34±0.02)、Cvclin D1蛋白表达(0.50±0.02)显著下降(P＜0.01),p21蛋白表达(1.39±0.05)显著升高(P＜0.01).结论 黄芩苷可通过下调PCNA、Cyclin D1表达,上调p21表达,发挥其抑制A549肺腺癌细胞增殖的作用.
作者：郑海峰；王英妹；武铁军；李庆祥；张健；段国辰 刊期： 2012年第08期
目的 观察肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对人肺腺癌细胞株A549/DDP耐顺铂(DDP)的逆转作用,探讨其逆转耐药的机制.方法 以噻唑蓝(MTT)法检测TNF-α 250、1000 U/ml与DDP联用对A549/DDP细胞的细胞毒性作用,以膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(Annexin V-FITC)/碘化丙锭(PI)双染法检测TNF-α 250、1000 U/ml与DDP联用对A549/DDP细胞的凋亡.结果 250、1000 U/ml TNF-α可使DDP对A549/DDP细胞的半数抑制浓度(IC50)从7.12 mg/L分别降至5.02、4.28 mg/L,能够逆转A549/DDP对DDP的耐药,逆转倍数分别为1.418、1.663(P＜0.01).细胞凋亡试验中250、1000 U/ml TNF-α+DDP(7.12 mg/L)两组细胞凋亡率同无药组和DDP组比较,明显增高,差异有统计学意义(P＜0.01).结论 TNF-α能够逆转A549/DDP对DDP的耐药,其机制可能与诱导肿瘤细胞凋亡有关.
作者：齐咏；李玉光；刘青锋；张罗献；马利军；韩双印 刊期： 2012年第08期
目的 观察转染胰岛素样生长因子-1( IGF-1)基因对原代培养的阴茎海绵体平滑肌细胞(CCSMCs)增殖的影响,探讨IGF-1基因治疗勃起功能障碍(ED)的可能机制.方法 构建pcDNA3.1-IGF-1,体外原代培养大鼠CCSMCs并免疫组织化学染色鉴定；CCSMCs分3组:转染pcDNA3.1-IGF-1组、pcDNA3.1组和对照组,转染后不同时间段(3、5、7、9d)噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖,同时不同时间段( 24、48、96 h)酶免疫分析法(EIA)定量检测CCSMCs分泌IGF-1含量的变化.结果 成功克隆pcDNA3.1-IGF-1载体,成功原代培养CCSMCs;转染pcDNA3.1-IGF-1组细胞在转染后5、7、9d(分别为0.72±0.08、0.80±0.06、0.82 ±0.07)较转染pcDNA3.1组(分别为0.58±0.07、0.63±0.05、0.61 ±0.08)和对照组(0.59 ±0.06、0.61 ±0.07、0.62 ±0.03)增殖明显增加,呈时间依赖性,差异有统计学意义(P＜0.05).与转染pcDNA3.1组[分别为(46±7)、(48±9)、(50±11) μg/L]和对照组[分别为(47±11)、(52±10)、(51±10) μg/L]比较,转染pcDNA3.1-IGF-1组细胞在转染后24、48、96 h CCSMCs分泌的IGF-1含量[分别为(58±8)、(69±11)、(71 ±8) μg/L]增加,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 转染IGF-1基因可提高CCSMCs的增殖能力和增加IGF-1的分泌,可能是IGF-1基因治疗ED的基础.
作者：蒲小勇；闻安民；刘久敏；郑祥光；王怀鹏；徐战平；张仁礼；周香雪 刊期： 2012年第08期
125Ⅰ粒子近距离治疗是一种适形放疗,计算机三维治疗计划系统(TPS)的应用使得125Ⅰ粒子准确定位、高度适形、靶区剂量高、正常组织受量低、并发症少[1].迄今我国约有1000家医疗单位开展,但其中90％无TPS指导,仅靠医生经验[2-3]或遵循125Ⅰ经验公式估算粒子数[4-5],肿瘤靶区剂量学要求难以达到.
作者：李庆霞；吴立丽；张宏涛；任菊娜；唐富龙；赵静；高贞；李健敏；王娟 刊期： 2012年第08期
随着临床肺移植的发展,需要对包括供肺保存、缺血-再灌注(I/R)损伤等相关领域进行更广泛深入的研究.大鼠是目前在肺移植研究中广泛使用的实验动物[1].但相对于大鼠,家兔是手术操作接近临床实际且经济性较好的异体原位肺移植实验动物,在肺移植研究中有着广泛前景.
作者：朱辉；姜涛；马嵋；苗玉清；伊力亚尔·夏合丁 刊期： 2012年第08期
目的 观察骨巨细胞瘤组织中人端粒酶逆转录酶(hTERT)基因的表达,并探讨其临床意义.方法 选择我院2008年1月至2011年12月病理科保存的标本,标本中骨巨细胞瘤84例、骨质增生骨组织32例、异位骨化组织28例,对照组为正常骨组织20例；采用原位分子杂交技术检测和定位标本中的端粒酶hTERT基因,并用图像分析系统分析其表达水平.、结果 端粒酶hTERT基因在骨巨细胞瘤组织中的表达阳性率为46.4％(39/84),表达强度与骨巨细胞瘤的分化程度明显相关(P＜0.05),表达水平与肿瘤细胞的分布定位一致；端粒酶hTERT基因在骨质增生、异位骨化和正常骨组织中的表达均为阴性.结论 骨巨细胞瘤组织的恶化可能与端粒酶hTERT基因相关.
作者：朱宇；马希峰；来秋山；张明生；巴玉峰；黄涛；陈清汉 刊期： 2012年第08期
目的 观察骨形态发生蛋白-2(BMP-2)基因转染人脐带间充质干细胞(hUCMSC)对其成骨分化和体内异位成骨的影响.方法 实验分为3组,空白组:10％胎牛血清+ DMEM培养基,对照组:10％胎牛血清+DMEM培养基+空慢病毒载体转染,实验组:10％胎牛血清+DMEM培养基+BMP-2+增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因转染,检测3组不同培养基培养后人脐带间充质细胞的碱性磷酸酶(ALP)活性变化,蛋白印迹法检测骨桥蛋白(OPN)、Ⅰ型胶原蛋白(COL1)、BMP-2的蛋白表达变化.yon kossa染色观察hUCMSC钙结节形成.大鼠肌袋内植入BMP-2转染hUCMSC/COL1,通过CT三维重建及苏木素-伊红(HE)染色观察其体内成骨能力.结果 hUCMSC BMP-2转染良好,转染率可达到(90.95±4.35)％,实验组细胞在第5天,ALP活性就由(26.492 ±7.105) U/g·蛋白增加至(38.625±11.592) U/g·蛋白,在第14天,实验组的ALP的活性可以高达(49.732±13.068) U/g·蛋白,对比空白组和对照组都有明显增加(P＜0.05).对比空白组和对照组,实验组COL1、BMP-2和OPN蛋白呈现高表达(P＜0.05).转染BMP-2基因后,hUCMSC培养28 d可形成大量的钙结节.BMP-2转染hUCMSC/COL1在大鼠肌袋内可异位成骨.结论 转染BMP2基因可促进hUCMSC细胞成骨能力.
作者：杨大志；罗惠莉；易伟宏；王尔天；王敏；刘东宁 刊期： 2012年第08期
目的 探讨供体特异性输注(DST)联合共刺激阻断(DST/抗CD154)诱导肺移植后闭塞性细支气管炎(OB)免疫耐受机制.方法 建立小鼠DST/抗CD154方案诱导的免疫耐受模型术后15、25、100 d取出移植气道检测形态学改变,利用CSME-80鼠cDNA芯片检测15d耐受组和同种异体移植组移植物内基因表达差异,分析差异有统计学意义的基因表达与排斥和耐受之间的关系.选择部分差异表达基因行实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应( RT-qPCR),鉴定验证基因芯片的可靠性.结果 免疫耐受组OB前期存在大量显著表达差异基因,Rapl信号通路、CD40/CD40L相关及其他T细胞表面分子相关基因、细胞周期、细胞生长等促进纤维增殖的部分基因显著下调表达.部分促炎因子同同种异体移植组一样上调表达.结论 Rap1信号通路、CD40/CD40L相关及其他T细胞表面分子相关基因、细胞周期、细胞生长等促进纤维增殖下调表达的部分基因等可能与肺移植慢性排斥反应耐受相关.
作者：王光锁；王正；武延格；杨林；孙学峰；钱有辉；林少霖 刊期： 2012年第08期
目的 探讨自体心包条带制作肺动脉狭窄动物模型的可行性.方法 8头小型猪分别接受左侧第3肋间开胸,取自体心包条,用生理盐水浸泡30 min后,环缩左肺动脉至原始直径的30％ ～ 40％,术后1个月正中开胸,应用心导管及造影检查测量左肺动脉环缩术后跨狭窄段收缩压差及狭窄处肺动脉内径,行肺动脉支架置入术,3个月后取材行组织病理检查.结果 左肺动脉环缩后即刻,左肺动脉内径从(16.0±0.4) mm减少到(6.4±0.2)mm(P＜0.01),而术中环缩后跨狭窄段压差为35(18 ～52) mm Hg(中位数,极值,1mm Hg=0.133 kPa),环缩术后1个月与环缩后即时结果比较,动脉内径及跨狭窄段压差,差异均无统计学意义(P＞0.05).环缩术后8只小型猪均存活,未出现环缩带松脱、断裂等并发症,也未出现左肺动脉发育不良或动脉闭锁.病理结果显示环缩处肺动脉未见钙化灶,周围肺动脉壁组织大致正常.结论 在动物肺动脉狭窄模型制作中,应用自体心包环缩带是切实可行的.
作者：陈泽锐；王德；吴信；潘湘斌；洪亮；李守军 刊期： 2012年第08期
目的 观察辛伐他汀是否能在体外促进缺氧复氧损伤后肺泡Ⅱ型上皮细胞向Ⅰ型细胞转分化,并探讨其作用机制.方法 体外培养小鼠肺泡上皮细胞MLE-12,建立缺氧复氧损伤模型,分为空白对照组(Blank)、辛伐他汀组(Sim)及缺氧复氧组(H/R),分别于缺氧2h后复氧0h、1d、3d和7d共4个时间点获取细胞,流式细胞仪检测肺泡Ⅰ型/Ⅱ型细胞表面特异性标志Caveolin- 1/Pro-SP-C 阳性细胞数百分比,Western blot法测定各组Pro-SP-C和Caveolin-1蛋白水平,后行甲羟戊酸通路竞争实验观察左旋甲羟戊酸( L-meva)对辛伐他汀作用的影响.结果 流式细胞术结果显示:在缺氧复氧早期(d0及d1),Sim组较H/R组Caveolin-1/Pro-SP-C百分比显著降低；至d3和d7百分比则显著升高；Western blot结果显示:与H/R组比较,Sim组Pro-SP-C蛋白水平在d0及d1高,至d3和d7则显著下降,Caveolin-1蛋白水平在d1低,至d3和d7则逐渐升高,两者比较均有显著统计学差异(P＜0.01).L-meva竞争试验显示:与Sim组比较,Sim+ L-meva组在各个时间点Pro-SP-C和Caveolin-1蛋白水平差异无统计学意义(P＞0.05).结论 辛伐他汀可以促进缺氧复氧损伤后肺泡Ⅱ型上皮细胞向Ⅰ型细胞的转分化,但其作用机制不依赖于甲羟戊酸通路.
作者：武雅琴；冯冬杰；蒋峰；张治；黄建峰；张帅；尹荣；许林 刊期： 2012年第08期
目的 观察环孢素预处理在同种带瓣管道移植的作用.方法 将1个月龄的中国白兔50只(取其带瓣主动脉)作为供体,体质量0.25 ～0.35 kg;将成年中国白兔50只,体质量2.50～3.50 kg,随机分2组作为受体,25只(移植时供体带瓣主动脉接受环孢素预处理)为实验组,25只(移植时供体带瓣主动脉不接受环孢素预处理)为对照组,移植前后应用葡萄糖代谢法检测带瓣血管的代谢,分别于第2、4周取出移植主动脉,观察血管是否通畅,苏木素-伊红(HE)染色组织病理图片观察,普通聚合酶链反应(PCR)鉴定MGP基因,荧光定量PCR 2-△△Cr方法检测实验组4周、8周时血管平滑肌细胞中的MGP mRNA的相对表达量.结果 (1)实验组通畅率为86.96％,明显高于对照组通畅率(59.09％),两组均数比较差异有统计学意义(P＜0.05)；实验组(25例)葡萄糖代谢率均数±标准差值为(4.3950 ±0.5642) mmol/(L·24 h),对照组(25例)葡萄糖代谢为(4.4720±0 7213) mmol/(L·24 h),两组均数比较差异无统计学意义(P＞0.05).(2)组织病理学观察,对照组明显出现内膜增生、中膜坏死和外膜浸润,随时间推移细胞成分明显减少,瓣膜正常分层状结构和结缔组织不断丧失；(3)MGP基因在实验组中表达,而在对照组中不表达；实验组中术后4周的MGP mRNA表达量(14.564±0.243)明显高于术后8周的表达量(6.492±0.962).结论 环孢素预处理的同种带瓣主动脉可提高移植血管通畅率,降低血栓形成,血管内皮细胞改变较轻；MGP mRNA水平的动态变化可能与环孢素抑制血管平滑肌细胞的表型转化及增殖有关.
作者：罗程；郑宝石；何巍；冯旭；雷宾峰；彭俊 刊期： 2012年第08期
阿片类药物广泛用于治疗各种急慢性疼痛,长时间使用停药将发生戒断综合征.脊髓是介导吗啡依赖戒断反应的一个重要部位,ERK信号通路的激活在吗啡依赖及戒断过程中发挥重要作用[1].右旋美托咪啶(DEX)具有镇静、镇痛及抗焦虑等作用,可抑制脊髓感受伤害性反应[2].
作者：刘海林；张阳；钱燕宁 刊期： 2012年第08期
条件复制腺病毒指在正常细胞内无复制或杀伤作用,而在同一机体内的肿瘤细胞中可选择性复制和溶解之,细胞裂解后释放的子代病毒颗粒又感染邻近的肿瘤细胞,如此不断循环反复增殖从而达到杀灭癌细胞的肿瘤特异性增殖型病毒[1].
作者：张明；吴凤鹏；石金苓；李庆霞；高献书；王娟 刊期： 2012年第08期
我们采用pAD/CMV/V5-DEST Gate-way Vector腺病毒载体系统构建尿激酶型纤溶酶原激活剂( uPA)腺病毒载体,并将腺病毒介导的uPA基因体外转染人脐静脉内皮细胞,检测其纤溶活性及表达,为uPA的体内基因治疗奠定基础.
作者：周为民；吴浩荣 刊期： 2012年第08期
乳腺癌在早期即可发生转移,严重影响生存质量.肿瘤侵袭转移是一个多步骤的复杂过程,包括肿瘤细胞的黏附和脱黏附,细胞外基质的降解和重建等过程[1].胞外基质降解是肿瘤浸润转移的首要步骤和分子基础,大量的研究资料表明,尿激酶型纤溶酶原激活物( uPA)参与细胞外基质降解,在肿瘤浸润和转移中起到主要作用[2].
作者：董波；舒晓燕 刊期： 2012年第08期
目的 探讨非小细胞肺癌( NSCLC)患者外周血中中期因子(MK)mRNA的表达及其临床意义.方法 采用定量聚合酶链反应(PCR)法检测87例NSCLC患者、35例肺良性疾病患者及30例健康志愿者外周血中MK mRNA的表达.结果 NSCLC患者外周血中MK mRNA的相对表达(6.749±1.117)与良性疾病患者(7.988 ±0.633)和健康志愿者(8.156±0.525)比较,差异有统计学意义(P＜0.05),而后两者比较差异无统计学意义(P ＞0.05)NSCLC患者外周血中MK mRNA表达水平与其临床TNM分期,细胞分化程度及淋巴结转移密切相关(P＜0.05),而与年龄、性别、吸烟与否和病理类型无明显相关(P＞0.05).结论 外周血MK mRNA有望成为NSCLC微转移检测的有效标志物.
作者：马志红；闵丽姗；沈琦斌；李鸿伟；王斌；戴利成 刊期： 2012年第08期
目的 观察腹腔扩容术对腹腔高压症(IAH)心脏影响.方法 建立失血性休克、门静脉不全阻断复苏后猪IAH模型,随机分腹腔扩容组(n=4)及假手术组(n=4),分别观察心率、平均动脉压(MAP)、缩短分数(FS)和射血分数(EF),测心脏干湿比及苏木素-伊红(HE)染色结果结果 与休克前比,IAH后2 h心率加快(154次/min比123次/min),MAP下降[110.0 mm Hg(1 mm Hg =0.133 kPa)比127.5 mm Hg],FS下降(29.8％比40.4％),EF下降(55.5％比72.0％)(P＜0.05).与IAH后2h比,腹腔扩容组手术后8h及12h较假手术组心率减慢(124次/min比156次/min,120次/min比156次/min)( P＜0.05) 腹腔扩容组22 h后与IAH后2h比,EF上升(P ＜0.05).结论 腹腔扩容术可显著改善本IAH模型的心率及EF.
作者：刘道城；谭浩；张连阳；宗北文；杜文华；王正刚；王翔 刊期： 2012年第08期
目的 探讨少突胶质细胞肿瘤染色体1p/19q联合缺失及其与p53、10号染色体上磷酸酶及张力蛋白同源物( PTEN)和O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)蛋白表达的关系.方法 收集少突胶质细胞肿瘤标本68例,其中WHO-Ⅱ级少突胶质细胞瘤42例,WHO-Ⅲ级间变性少突胶质细胞瘤26例.采用荧光原位杂交(FISH)方法分析肿瘤组织中1p/19q缺失状态；采用免疫组织化学方法对肿瘤组织中p53、PTEN和MGMT蛋白表达进行半定量分析,并进一步分析其与1p/19q联合缺失的相关性.结果 68例少突胶质细胞肿瘤中,染色体1 p、19q缺失率及1p/19q联合缺失率分别为67.65％ (46/68)、61.76％( 42/68)、57.35％(39/68).1p/19q联合缺失率在Ⅱ级和Ⅲ级少突胶质细胞肿瘤之间,差异无统计学意义(P＞0.05).1p/19q联合缺失在额叶肿瘤的发生率(76.67％,23/30)明显高于颞叶(45.00％,9/20)及其他部位肿瘤(38.89％,7/18),差异有统计学意义(P＜0.05).tp/19q联合缺失与患者性别及发病年龄无明显相关(P＞0.05).p53和MGMT蛋白表达与肿瘤分级呈正相关,而PTEN表达与肿瘤分级呈负相关,差异均有统计学意义(P＜0.05).1p/19q联合缺失与p53和MGMT蛋白低表达相关(P＜0.05),而与PTEN蛋白表达无明显相关(P＞0.05).结论 在少突胶质细胞肿瘤中,染色体1p/19q联合缺失与p53和MGMT蛋白表达水平呈负相关.
作者：张建国；李玉；刘正国；韩双印 刊期： 2012年第08期
目的 构建反义B7-1质粒载体,为研究阻断B7-1/CD28共刺激分子通路提供基础.方法 设计含有Xho Ⅰ和BamH Ⅰ酶切位点的1对引物,通过聚合酶链反应(PCR)技术扩增获取质粒载体pcDNA3-B7-1上的目的片段B7-1( 118～ 530 nt,426 bp),克隆入PMD18-T中间载体.PMD18-T-B7-1经Xho Ⅰ和BamH Ⅰ双酶切后,B7-1片段与pcDNA3B(-)连接,pcDNA3B(-)的Xho Ⅰ和BamH Ⅰ酶切位点与B7-1全基因序列所含酶切位点相反,构建反义B7-1表达载体.结果 反义基因重组体经过酶切和PCR检测,得到426 bp左右的目的基因片段.测序证明插入的目的片段碱基序列与Genebank报道的B7-1基因序列(G1:111038144)中的B7-1片段100％同源,且反方向插入载体.结论 成功构建大鼠B7-1反义真核表达载体,为阻断B7-1/CD28共刺激通路抑制排斥反应奠定了基础.
作者：李蕊；米曰堂；杨玉秀；张颖慧 刊期： 2012年第08期
目的 探讨转化生长因子-β1 (TGF-β1)诱导胃癌细胞的凋亡作用及机制.方法 利用TGF-β1诱导胃癌细胞SGC7901凋亡,小干扰RNA(siRNA)封闭半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-8的表达,Western blot检测诱导及封闭前后各Caspases表达随时间的变化,流式细胞术分析细胞的凋亡率.结果 TGF-β1作用后,各组细胞的凋亡率明显增加,0、24、48 h凋亡率分别为1.13％、14.88％、37.32％；Caspase-8 12 h后激活,Caspase-9 24 h后激活；白RNA干扰(RNAi)后Caspase-8表达明显下降,24 h后Caspase-8表达量为对照组的11.2％,48～ 72 h未测到表达,96 h后Caspase-8表达重新出现,为对照组的9.2％.结论 TGF-β1通过Caspase途径诱导胃癌细胞发生凋亡,由Caspase-8开始启动；抑制Caspase-8表达可以在一定程度上阻断TGF-β1/Caspases信号的转导,进而抑制细胞凋亡.
作者：解刚强；刘德纯；陈登庭；邓淼；汪建光；刘起鹏 刊期： 2012年第08期
中华实验外科杂志
主管:中国科学技术协会
主办：中华医学会
