王荣平；肖颖彬
目的 探讨Sipal基因rs931127和rs746429多态性与乳腺癌外周血循环肿瘤细胞的关系.方法 采用基因测序的方法,对124例原发性乳腺癌患者以及120例健康人进行Sipal基因rs931127和rs746429多态性分析.实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测其中92例患者外周血循环肿瘤细胞,比较Sipal基因rs931127和rs746429多态性与外周血循环肿瘤细胞之间的关系.采用Fisher精确检验及非条件Logisitic同归法计算各组P值及相对危险度比(OR)及95％可信区间(95％ CI).结果 Sipal基因rs931127和rs746429多态性与乳腺癌患者外周血循环肿瘤细胞无明显相关(P＞0.05).Sipal基因rs931127和rs746429多态性与乳腺癌患者的年龄、肿块大小、雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、C-erb-B2蛋白的表达以及乳腺癌分子分型均无明显相关(P＞0.05).但Sipal rs931127野生型GG淋巴转移率22.6％,低于杂合型GA 48.3％和突变型AA71.0％(P＜0.01),Sipal rs746429野生型CC的淋巴结转移率为31.4％,也低于杂合型CT 64.2％及突变型TT44.4％(P＜0.01).结论 Sipal基因rs931127多态性和rs746429多态性与乳腺癌患者外周血循环肿瘤细胞无明显相关,但与淋巴结转移有关.提示rs931127 GA或AA以及rs746429 CT或TT基因型可能与乳腺癌淋巴转移有关.
作者：缪苏宇；凌立君；崇梅红；王水 刊期： 2012年第08期
目的 构建大鼠胸腺素β4 (Tβ4)基因的重组慢病毒载体,转染293T细胞并观察Tβ4的表达.方法 从Genbank获取大鼠Tβ4基因序列,化学合成后连接入线性化慢病毒载体pGC-FU,得到重组慢病毒载体pGC-FU-Tβ4,将其转化细菌感受态细胞后行菌落聚合酶链反应(PCR)鉴定,对PCR鉴定阳性的克隆进行测序鉴定. pGC-FU- Tβ4、pHeIper 1.0、pHelper 2.0共转293T细胞,收集上清液浓缩后使用实时定量PCR(Real-time PCR)进行滴度检测.用所得病毒感染293T细胞后,Western blot检测Tβ4表达.结果 目的基因质粒酶切后琼脂糖凝胶电泳图谱示酶切片段大小为143 bp；菌落PCR结果示阴性转化子得到198 bp片段,阳性转化子得到333 bp片段；测序结果与预期相符合；Real-time PCR示所得病毒滴度约为2×109TU:Western blot示Tβ4转染组在33 KD处有特征条带.结论 成功构建大鼠Tβ4基因慢病毒载体pGC-FU- Tβ4,并建立慢病毒过表达系统.
作者：刘德胜；肖诗亮；陈洁；魏战杰；王博；周诚 刊期： 2012年第08期
凝血异常在恶性肿瘤中有较高发生率,有报道95％肿瘤患者拥有一项或多项凝血异常,并且凝血因子同肿瘤的发展转移相关[1].我们通过检测2002年8月至2007年2月行食管鳞癌根治术的60例患者术前血浆中的血浆纤维蛋白原(FIB)、D-二聚体、抗凝血酶Ⅲ(AT-Ⅲ)、凝血酶原时间(PT)和活化部分凝血活酶时间(APTT),探讨其临床意义.
作者：刘瑜；谢德耀；池闯；林晓铭 刊期： 2012年第08期
随着临床肺移植的发展,需要对包括供肺保存、缺血-再灌注(I/R)损伤等相关领域进行更广泛深入的研究.大鼠是目前在肺移植研究中广泛使用的实验动物[1].但相对于大鼠,家兔是手术操作接近临床实际且经济性较好的异体原位肺移植实验动物,在肺移植研究中有着广泛前景.
作者：朱辉；姜涛；马嵋；苗玉清；伊力亚尔·夏合丁 刊期： 2012年第08期
目的 检测小干扰RNA(siRNA)对肝癌耐药细胞株HepG2/阿霉素(ADM)多药耐药相关蛋白基因2(MRP2)及其蛋白产物的抑制作用,观察对多药耐药性的影响.方法 使用浓度梯度法制作HepG2耐ADM细胞株(HepG2/ADM),ADM浓度从0.1～2.0 m/L:设计合成针对MRP2的siRNA小片段,转染HepG2/ADM耐药细胞,24 h后通过实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-qPCR)和Western blot检测siRNA对MRP2基因mRNA和蛋白的抑制效果；噻唑蓝(MTT)比色法观察抑制MRP2基因表达后,HepG2/ADM细胞对化疗药物的敏感性变化,并计算各药物的半数抑制浓度(IC50).结果 HepG2/ADM对ADM、5-氟尿嘧啶(5-Fu)、长春新碱和奥沙利铂的IC50值分别为0.3204、3.8002、0.2014和0.1221；siRNA明显抑制了HepG2/ADM细胞MRP2基因mRNA和蛋白的表达(P＜0.05)；转染MRP2-siRNA后,HepG2/ADM细胞对ADM、5-Fu、长春新碱和奥沙利铂的IC50值明显减小,分别为0.1023、1.4417、0.0452和0.0268.结论 用siRNA沉默MRP2基因能够逆转HepG2/ADM细胞对化疗药物的耐药性,MRP2基因与HepG2/ADM肝癌细胞的多药耐药性相关,可通过沉默MRP2基因提高耐药细胞对化疗药物的敏感性.
作者：褚忠华；张大伟；刘建平；韦金星；苏正；陕基德 刊期： 2012年第08期
目的 观察RNA结合基序蛋白6-RNA结合基序蛋白5(RBM6-RBM5)融合基因的存在及其在乳腺肿瘤细胞中的表达.方法 采用巢式聚合酶链反应(PCR)法对RBM6-RBM5融合基因进行检测,分析RBM6-RBM5融合基因在肿瘤细胞及正常组织中的表达.结果 4例乳腺肿瘤组织RBM6-RBM5融合基因的表达为阳性,相对表达量分别为:0.52±0.02、0.61 ±0.04、0.58 ±0.05、0.65±0.03;2例乳腺肿瘤组织RBM6-RBM5融合基因的表达为阴性,相对表达量为0;6例正常乳腺组织RBM6-RBM5融合基因的表达为阴性,相对表达量为0.结论 RBM6-RBM5融合基因存在于乳腺肿瘤组织中,RBM6-RBM5融合基因的表达与乳腺肿瘤的发生明显相关.同时,该融合基因在不同乳腺癌患者提供的乳腺癌肿瘤组织中的表达结果也不尽相同.
作者：巴玉峰；黄涛；李印；程金华；何山宏；秦子敏 刊期： 2012年第08期
目的 探讨Notch信号通路在鱼藤酮诱导PC12细胞凋亡中的作用机制.方法 用鱼藤酮(5 μmol/L)处理PC12细胞,检测PC12细胞的凋亡和Notch信号通路的活化状态.同时以Notch信号抑制剂(2S)-N-N-(3,5-二氟苯乙酰基)-L-丙氨酰-2-苯基甘氨酸叔丁酯(DAPT,10 μmol/L)处理上述PC12细胞,观察Notch信号通路抑制后PC12细胞对鱼藤酮处理的凋亡反应,分析Notch信号通路与鱼藤酮诱导PC12细胞凋亡之间的关系.结果 鱼藤酮显著诱导PC12细胞凋亡[(35.6±5.4)％,P＜0.05]和半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3(Caspase-3)活性升高(0.52±0.15,P＜0.05),并活化其Notch/Jagged1信号通路.DAPT显著抑制鱼藤酮诱导的Notch/Jagged1信号通路活化并降低PC12细胞凋亡率[(9.8±3.1)％,P＜0.05]和Caspase-3活性(0.16 ±0.06,P＜0.05).结论 Notch信号通路活化是鱼藤酮诱导PC12细胞凋亡的主要机制之一.
作者：张媚；何亮；李俊；张临洪 刊期： 2012年第08期
目的 应用高通量长链非编码RNA (lncRNA)芯片检测肺腺癌组织和癌旁组织中差异表达的lncRNA,并对其进行初步分析.方法 分别提取6例肺腺癌患者的肺腺癌组织和癌旁组织中的RNA,体外逆转录制备并标记为双链cDNA(ds-cDNA),与含有22 000条IncRNA芯片进行杂交,计算机扫描并分析芯片荧光信号图像,筛选差异表达的lncRNA.结果 在肺腺癌组织中差异表达的lncRNA达1025条,其中在肿瘤组织中高表达的lncRNA 464条,低表达的lncRNA 561条(变化＞2倍且P ＜0.05).结论 肺腺癌的发生过程中lncRNA的表达谱发生明显变化,lncRNA与肺腺癌的发生密切相关.
作者：周雪峰；但攀；朱明林；张力；杨泽天；马麒；赵金平 刊期： 2012年第08期
目的 针对大鼠血管内皮细胞(VEC)的磷脂酰肌醇3激酶B亚单位(Pik3cb),构建KDR特异性启动子/增强子真核表达载体,观察其对VEC增殖和凋亡的影响.方法 构建KDR特异性启动子/增强子真核表达载体并转染大鼠VEC.实验分5组,A组:正常VEC；B组:转染特异性KDR质粒,浓度2.0 mg/L；C组:转染非特异性巨细胞病毒(CMV)质粒,浓度2.0mg/L；D组:转染空质粒,浓度2.0 mg/L；E组:阳性对照渥曼青霉素,浓度50 nmol/L.分别于转染24、48、72 h后,实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测各组细胞Pik3cb mRNA相对表达量,细胞计数试剂盒(CCK-8)和流式细胞仪检测各组细胞增殖抑制率和凋亡率.结果 转染24、48、72 h后,RT-qPCR法测得KDR组Pik3cb mRNA相对表达量分别为(54.82 ±2.77)％、(50.54±3.98)％和(35.47±4.83)％,均明显低于正常对照组(P＜0.05)；CCK-8法测得KDR组细胞增殖抑制率分别为(21.98±2.25)％、(24.32±3.04)％和(26.38±5.06)％；流式细胞仪测得KDR组细胞凋亡率分别为(9.9±1.3)％、(31.0±7.4)％和(44.5±8.3)％,细胞增殖抑制率和凋亡率均明显高于正常对照组(P＜0.05).结论 KDR特异性启动子/增强子真核表达载体可通过下调磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)信号通路特异性抑制VEC增殖并促使其凋亡.
作者：王倩；邓勇志；徐俊文；陈丽；杨雪峰 刊期： 2012年第08期
目的 观察原花青素处理去细胞牛颈静脉带瓣管道的生物学特性.方法 分别比较去细胞处理、原花青素去细胞联合处理、戊二醛处理和新鲜未处理带瓣牛颈静脉管道管壁、瓣膜的厚度、大体形态、组织学特点、含水量、热皱缩温度及断裂强度,并进行可溶性蛋白含量的测定.结果 原花青素去细胞联合处理组牛颈静脉带瓣管道较未处理组的管壁、瓣膜厚度[管壁:(0.81±0.17) mm比(0.79 ±0.14) mm,瓣膜:(0.23±0.07) mm比(0.21 ±0.05) mm,P＞0.05]、组织含水量[管壁:(85.30 ±2.13)％比(88.10±2.93)％,瓣膜:(87.30±2.67)％比(91.40±3.41)％,P＞0.05]无明显变化；管壁、瓣膜断裂强度[管壁:(10.32±1.07)N比(6.83±1.03)N,瓣膜:(7.49±0.81)N比(3.21 ±0.57)N,P＜0.05]和热皱缩温度[管壁:(85.30±1.21)℃比(70.40 ±0.32)℃,瓣膜:(87.30±2.67)℃比(70.70±0.61)℃,P＜0.05]明显提高,与戊二醛处理组比较差异无统计学意义(P＞0.05)原花青素去细胞联合处理组可溶性蛋白的含量较未处理组明显减少[管壁:(0.041 ±0.011)％比(0.178 ±0.037)％；瓣膜:(0.096±0.017)％比(0.311 ±0.063)％；P ＜0.05].结论 原花青素去细胞联合处理牛颈静脉带瓣管道材料具有较好的生物学特性.
作者：刘洋；刘珊珊；朱海龙；孙国成；金振晓；刘维永；易定华 刊期： 2012年第08期
目的 探讨胃癌组织和癌旁组织miR-155和miR-30a的表达差异及其临床意义.方法 收集手术切除的胃癌标本52例,采用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应( RT-qPCR)检测癌及癌旁组织标本miR-155和miR-30a的表达水平,分析其与临床病理的关系.结果 miR-155在胃癌组织中表达量(0.84 ±2.27)显著高于其在配对癌旁组织中的表达值(0.28 ±0.56,P＜0.05)；miR-155高表达与淋巴结转移有关(P＜0.05).miR-30a在胃癌组织中表达量(3.16±8.11)显著低于其在配对癌旁组织中的表达值(15.87±35.58,P＜0.05).miR-30a的低表达与肿瘤侵犯层次、淋巴结转移有关(P＜0.05).结论 miR-155和miR-30a与胃癌发生发展密切相关,可能成为胃癌的潜在诊断及治疗靶点.
作者：宋军；王辉；付海啸；孟松；徐溢新；刘浩；王磊；白津；徐为；郑骏年 刊期： 2012年第08期
小细胞肺癌( SCLC)是肺癌中恶性程度高的一种,针对小细胞肺癌靶抗原的基因免疫治疗是其防治的方向.前胃泌素释放肽(PGRP)是SCLC的特异性肿瘤标志物[1].我们从人小细胞肺癌细胞中克隆了PGRP基因,构建具有DC靶向的DNA疫苗,免疫小鼠后得到了较理想的免疫效果.
作者：沈海波；李克强；胡天军；杨峂 刊期： 2012年第08期
目的 检测3种不同治疗方法下低位直肠癌经肛内外括约肌间切除术(ISR)患者术后肛肠动力学指标,观察不同治疗方法对排便功能的影响.方法将113例低位直肠癌ISR患者分为3组,分别为新辅助化疗联合腹腔镜直肠前切除ISR组(A组,n=32):腹腔镜直肠前切除ISR组(B组,n=43):开腹直肠前切除ISR组(C组,n=38),采用肛肠压力监测仪分别检测3组术前、术后3、6、9、12个月肛管动力学、结肠末端动力学、肛管结肠末端动力学相关指标,观察并对比其变化趋势.结果 肛管静息压A、B、C组术后3个月[(33.53±6.58)、(24.69 ±5.62)、(14.86±5.54) mm Hg(1 mm Hg =0.133 kPa)]均分别低于术前[(49.37±14.32)、(47.32±7.87)、(46.50±10.02) mm Hg] (P ＜0.05),且A组[(33.53±6.58) mm Hg]比同期B、C组[(24.69±5.62)、(14.86±5.54) mm Hg]降低幅度小(P＜0.05).3组直肠肛管抑制反射阳性率于术后3个月均降低(P＜0.05),且A组比同期B、C组高(P＜0.05).球囊排出试验时间、初始排便容量阈值及大耐受容量A组均较B组提前3个月恢复至术前水平(P＜0.05),较C组提前6个月恢复至术前水平(P＜0.05).结论新辅助化疗联合腹腔镜直肠前切除对排便动力学影响小.
作者：张剑锋；魏东；赵艇；蔡建；张远耀；高春芳 刊期： 2012年第08期
目的 探讨同源异型盒基因EN-2在不同前列腺癌细胞及人正常前列腺上皮细胞中的表达差异及意义.方法 采用逆转录-聚合酶链反应( RT-PCR)和免疫荧光法检测前列腺癌PC3、DU145和LNCAP细胞以及人正常前列腺上皮细胞RWPE-1中EN2mRNA和蛋白的表达,采用酶联免疫吸附试验( ELISA)法检测上述细胞培养液中EN2蛋白的含量变化.结果 RT-PCR和ELISA检测结果显示:EN2 mRNA和蛋白水平在激素依赖性前列腺癌细胞LNCAP(1.65±0.19、8.74±0.34)和激素非依赖性前列腺癌细胞PC3中(1.08±0.12、3.07±0.24)及DU145 (1.15 ±0.53、2.86±0.26)均高于人正常前列腺上皮细胞(0.42 ±0.11、0.86 ±0.99) (P ＜0.05),其中LNCAP细胞中EN2mRNA和蛋白表达水平高于其余两种前列腺癌细胞(P＜0.05).结论 EN2在前列腺上皮细胞中呈低表达,在各前列腺癌细胞株中表达增高,并为前列腺癌细胞所分泌.EN2的表达可能与前列腺癌发生发展有关.
作者：刘玉峰；苏泽轩；赖彩永；袁道彰；唐晖；罗云；程云华；丁泓文；陈洁；都兴华；石利平 刊期： 2012年第08期
目的 观察小型猪肝硬化门脉高压症动物模型建立远端脾静脉-肝总动脉分流术(下称脾肝分流术)后降低胃脾区静脉压力的效果.方法 对照组和实验组猪各15头分别建立脾肝分流术,对照组猪术后处死不饲养,实验组猪术后饲养30d处死.结果 脾肝分流术后胃脾区静脉血入肝亚甲蓝肝脏染色良好.维持静脉血入肝的脾静脉压力对照组为(20.51±0.74) cm H2O(1cm H2O=0.098 kPa),实验组为(23.09±1.36) cm H2O(P＜0.05) 脾肝分流术建立后静脉和动脉两端形成压力差,对照组为(7.17±1.02) cm H2O,实验组为(9.55±1.32) cm H2O(P＜0.05).术后实验猪无肝坏死及肝性脑病发生,脾肿大消失,肝功能等生化代谢指标术后7d波动大,14 d逐渐恢复,30 d恢复到成模时状态. 结论 压力差是维持静脉血入肝降低胃脾区静脉压力的原始动力.术后肝功能等生化代谢指标紊乱需要进一步治疗.
作者：廖清华；林伟箭；陆云飞；田磊；张海添；吴向华 刊期： 2012年第08期
目的 观察塞来昔布对SKBR3细胞增殖与凋亡及核干细胞因子(NS)基因表达的影响.方法 体外培养人乳腺癌SKBR3细胞株高表达[人表皮生长因子受体(Her)-2/neu],应用噻唑蓝(MTT)、细胞形态学观察、免疫印迹、半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3(Caspase-3)酶活性测定、流式细胞术等,观察塞来昔布对 SKBR3细胞增殖与凋亡的影响,并检测NS基因在肿瘤细胞中的定位与表达变化.结果 MTT代谢率测定结果显示塞来昔布能显著抑制SKBR3细胞的增殖,并且呈浓度依赖性,与对照组比较,细胞形态学观察到塞来昔布加药组SKBR3细胞出现典型的凋亡细胞特征.免疫荧光与免疫印迹结果显示NS蛋白和p53蛋白的表达水平随着塞来昔布浓度的增加而逐渐增加(在塞来昔布为1 5、30、60、120 μmol/L时,NS蛋白分别为0.460±0.094、0.695±0.124、0.820±0.161、1.058 ±0.196,p53蛋白分别为0.898±0.166、1.231±0.254、1.518±0.309、1.828±0.362),而环氧合酶-2(COX-2)蛋白(分别为0.252±0.053、0.184±0.032、0.131 ±0.028、0.099±0.019)和细胞周期蛋白D1(Cyclin D1)蛋白(分别为0.829±0.178、0.661±10.112、0.524 ±0.108、0.378±0.075)则相反.流式细胞仪检测结果显示塞来昔布使SKBR3细胞周期阻滞在G0/G1期结论 塞来昔布以浓度依赖的方式抑制SKBR3细胞增殖并诱导其凋亡,其机制可能与NS表达上调有关.
作者：王妍心；张凯；陈胜阳；付庆林；闫争强 刊期： 2012年第08期
间充质干细胞( MSC)能够自我增殖,多向分化[1-2],且具有免疫调节等功能,在人类白细胞抗原( HLA)并不匹配的情况下输注同种异体MSC,一般不会引起宿主的免疫反应[3-4],使MSC作为临床治疗的一种手段成为可能.
作者：卢兆桐；李福泉；王玉波 刊期： 2012年第08期
临床上,肝硬化是全球十大致死病因之一[1],其突出的表现是门静脉高压症,主要包括脾大、脾功能亢进、腹水及曲张静脉破裂、消化道出血等.国内对肝硬化门脉高压症的外科治疗主要包括各种断流术、分流术联合手术以及肝脏移植等手段[2].
作者：乔师师；党晓卫；许培钦 刊期： 2012年第08期
目的 探讨供体特异性输注(DST)联合共刺激阻断(DST/抗CD154)诱导肺移植后闭塞性细支气管炎(OB)免疫耐受机制.方法 建立小鼠DST/抗CD154方案诱导的免疫耐受模型术后15、25、100 d取出移植气道检测形态学改变,利用CSME-80鼠cDNA芯片检测15d耐受组和同种异体移植组移植物内基因表达差异,分析差异有统计学意义的基因表达与排斥和耐受之间的关系.选择部分差异表达基因行实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应( RT-qPCR),鉴定验证基因芯片的可靠性.结果 免疫耐受组OB前期存在大量显著表达差异基因,Rapl信号通路、CD40/CD40L相关及其他T细胞表面分子相关基因、细胞周期、细胞生长等促进纤维增殖的部分基因显著下调表达.部分促炎因子同同种异体移植组一样上调表达.结论 Rap1信号通路、CD40/CD40L相关及其他T细胞表面分子相关基因、细胞周期、细胞生长等促进纤维增殖下调表达的部分基因等可能与肺移植慢性排斥反应耐受相关.
作者：王光锁；王正；武延格；杨林；孙学峰；钱有辉；林少霖 刊期： 2012年第08期
核糖体失活蛋白(RIP)广泛存在于高等植物中,具有抗肿瘤、抗病毒和抗生育等多种生物学活性.南瓜蛋白(CUS)是本课题组从南瓜瓜瓤中提取的新的Ⅰ型核糖体失活蛋白,相对分子质量约2.7 ×104,为碱性单肽链糖蛋白[1].
作者：许春森；黄鹤光；陈明晃；谢捷明 刊期： 2012年第08期
中华实验外科杂志
主管:中国科学技术协会
主办：中华医学会
