乔师师；党晓卫；徐大千；吴阳；李捷；张红新；陈奎生；许培钦；张水军
目的 探讨建立长期存活的人造二尖瓣植入模型的方法.方法 选用健康绵羊16只,雌雄各半,预实验6只,正式实验10只.麻醉成功后建立体外循环,经降主动脉插动脉灌注管,右心耳至右心房插静脉引流管,升主动脉根部置冷灌管,经左心耳显露二尖瓣,采用间断缝合方法植入人造二尖瓣.术后常规抗生素预防感染,口服华法林抗凝.结果 正式实验中成功8例并长期成活达5个月以上,术后未出现并发症,实验结束行病理检查各脏器未见异常,2例死亡.结论 绵羊作为长期存活人造二尖瓣植入模型的实验动物可行可靠、存活率高、术后易于管理.
作者：王常田；张利东；张晓华；钱雅君；王军；黄楠；李德闽 刊期： 2012年第08期
目的 探讨Omi/HtrA2与食管鳞状细胞癌(ESCC)临床病理生理特征的关系.方法 采用免疫组织化学En Vinsion system法检测40例食管鳞癌组织、40例癌旁组织及13例食管良性病变黏膜组织中Omi/HtrA2的表达.结果 Omi/HtrA2的阳性表达率在食管癌组织中为70.00％,癌旁组织Omi/HtrA2为27.50％,食管良性病组织为23.08％ (P ＜0.05)；在中高分化癌中表达阳性率为83.33％,低分化癌中表达阳性率50.00％ (P ＜0.05)；无淋巴结转移组的阳性表达率为88.23％,有淋巴结转移组为56.52％ (P＜0.05) Omi/HtrA2阳性表达组5年生存率为47.8％,阴性表达组为15.0％(P＜0.05). 结论 Omi/HtrA2可能作为促癌基因参与了食管癌的发生发展.
作者：王洪琰；张忠强；孟宪利；王小祥；何旭；牛新强 刊期： 2012年第08期
有研究结果证实,缺血预适应(IPC)作为一种内源性保护手段,在肾脏等脏器的保护中发挥了重要作用[1-2],它包括早期IPC和晚期IPC,不同的IPC阶段发生的具体机制不同.Patschan等[3]发现,内皮祖细胞( EPCs)可能参与了IPC的上述的脏器保护效应.
作者：薄成佳；陈波；贾瑞鹏；刘昊；吴然；葛余正；朱佳庚；李文成；吴剑平 刊期： 2012年第08期
间充质干细胞( MSC)能够自我增殖,多向分化[1-2],且具有免疫调节等功能,在人类白细胞抗原( HLA)并不匹配的情况下输注同种异体MSC,一般不会引起宿主的免疫反应[3-4],使MSC作为临床治疗的一种手段成为可能.
作者：卢兆桐；李福泉；王玉波 刊期： 2012年第08期
目的 探讨非小细胞肺癌( NSCLC)患者外周血中中期因子(MK)mRNA的表达及其临床意义.方法 采用定量聚合酶链反应(PCR)法检测87例NSCLC患者、35例肺良性疾病患者及30例健康志愿者外周血中MK mRNA的表达.结果 NSCLC患者外周血中MK mRNA的相对表达(6.749±1.117)与良性疾病患者(7.988 ±0.633)和健康志愿者(8.156±0.525)比较,差异有统计学意义(P＜0.05),而后两者比较差异无统计学意义(P ＞0.05)NSCLC患者外周血中MK mRNA表达水平与其临床TNM分期,细胞分化程度及淋巴结转移密切相关(P＜0.05),而与年龄、性别、吸烟与否和病理类型无明显相关(P＞0.05).结论 外周血MK mRNA有望成为NSCLC微转移检测的有效标志物.
作者：马志红；闵丽姗；沈琦斌；李鸿伟；王斌；戴利成 刊期： 2012年第08期
目的 观察酸感受离子通道( ASICs)激活/抑制对氯化锂-匹罗卡品大鼠的癫痫皮层脑电图癫痫放电的影响.方法 制作匹罗卡品大鼠癫痫模型,分别腹腔注射磷酸盐缓冲液(PBS)、阿米洛利、左乙拉西坦或酸性液体,记录脑电图癫痫样发电次数、波幅、放电间期变化.结果 在注射后60 ～ 90 min,与正常对照组比较,ASICs抑制组癫痫样放电次数(0.69±0.08)、波幅(0.70±0.16)均明显下降(P＜0.05),放电间期(1.46±0.18)延长(P＜0.05)；ASICs激活组在注射后30 min内,癫痫样放电次数增高(1.05±0.07)(P＜0.05).结论 阿米洛利能抑制锂-匹罗卡品诱导的癫痫发作,酸性液体可促进癫痫发作,其作用机制可能与抑制或激活ASICs通道有关.
作者：梁静静；冯莹；陈谦学；潘松青；卢祖能；肖哲曼 刊期： 2012年第08期
目的 针对大鼠血管内皮细胞(VEC)的磷脂酰肌醇3激酶B亚单位(Pik3cb),构建KDR特异性启动子/增强子真核表达载体,观察其对VEC增殖和凋亡的影响.方法 构建KDR特异性启动子/增强子真核表达载体并转染大鼠VEC.实验分5组,A组:正常VEC；B组:转染特异性KDR质粒,浓度2.0 mg/L；C组:转染非特异性巨细胞病毒(CMV)质粒,浓度2.0mg/L；D组:转染空质粒,浓度2.0 mg/L；E组:阳性对照渥曼青霉素,浓度50 nmol/L.分别于转染24、48、72 h后,实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测各组细胞Pik3cb mRNA相对表达量,细胞计数试剂盒(CCK-8)和流式细胞仪检测各组细胞增殖抑制率和凋亡率.结果 转染24、48、72 h后,RT-qPCR法测得KDR组Pik3cb mRNA相对表达量分别为(54.82 ±2.77)％、(50.54±3.98)％和(35.47±4.83)％,均明显低于正常对照组(P＜0.05)；CCK-8法测得KDR组细胞增殖抑制率分别为(21.98±2.25)％、(24.32±3.04)％和(26.38±5.06)％；流式细胞仪测得KDR组细胞凋亡率分别为(9.9±1.3)％、(31.0±7.4)％和(44.5±8.3)％,细胞增殖抑制率和凋亡率均明显高于正常对照组(P＜0.05).结论 KDR特异性启动子/增强子真核表达载体可通过下调磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)信号通路特异性抑制VEC增殖并促使其凋亡.
作者：王倩；邓勇志；徐俊文；陈丽；杨雪峰 刊期： 2012年第08期
目的 探讨转化生长因子-β1 (TGF-β1)诱导胃癌细胞的凋亡作用及机制.方法 利用TGF-β1诱导胃癌细胞SGC7901凋亡,小干扰RNA(siRNA)封闭半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶(Caspase)-8的表达,Western blot检测诱导及封闭前后各Caspases表达随时间的变化,流式细胞术分析细胞的凋亡率.结果 TGF-β1作用后,各组细胞的凋亡率明显增加,0、24、48 h凋亡率分别为1.13％、14.88％、37.32％；Caspase-8 12 h后激活,Caspase-9 24 h后激活；白RNA干扰(RNAi)后Caspase-8表达明显下降,24 h后Caspase-8表达量为对照组的11.2％,48～ 72 h未测到表达,96 h后Caspase-8表达重新出现,为对照组的9.2％.结论 TGF-β1通过Caspase途径诱导胃癌细胞发生凋亡,由Caspase-8开始启动；抑制Caspase-8表达可以在一定程度上阻断TGF-β1/Caspases信号的转导,进而抑制细胞凋亡.
作者：解刚强；刘德纯；陈登庭；邓淼；汪建光；刘起鹏 刊期： 2012年第08期
目的 观察脂肪干细胞( ADSCs)体外诱导分化成神经细胞的潜能,为恢复阴茎海绵体神经受损导致勃起功能障碍的研究建立基础.方法 取SD雄性大鼠脂肪组织进行原代培养.流式细胞仪检测ADSCs,体外诱导成脂肪细胞和神经细胞并进行鉴定.结果 ADSCs表面分子阳性率:CD44(+)96.4％、CD45(-)1.7％、CD34(-)0.9％.成脂细胞油红O染色脂滴染成红色.神经细胞荧光染色胶原纤维酸性蛋白(GFAP)、β-微管蛋白(β-tubulin)Ⅲ蛋白表达阳性,方法1[表皮生长因子(EGF)、碱性成纤维细胞生长因子(bFGF)、脑源性神经营养因子(BDNF)+吲哚美辛、胰岛素、3-异丁基-1-甲基黄嘌呤(IBMX)]和方法2(EGF、bFGF+吲哚美辛、胰岛素、IBMX)诱导率分别为(74.0±3.3)％、(65.3±2.1)％和(51.0±1.2)％、(41.0±1.1)％,且阳性细胞数差异有统计学意义(P＜0.01).结论 ADSCs在方法1作用下向神经细胞分化诱导率高,时间短；ADSCs可能成为治疗神经性勃起功能障碍的较理想干细胞.
作者：应诚诚；胡万里；郑新民；李世文；孙江阳 刊期： 2012年第08期
目的 探讨Notch信号通路在鱼藤酮诱导PC12细胞凋亡中的作用机制.方法 用鱼藤酮(5 μmol/L)处理PC12细胞,检测PC12细胞的凋亡和Notch信号通路的活化状态.同时以Notch信号抑制剂(2S)-N-N-(3,5-二氟苯乙酰基)-L-丙氨酰-2-苯基甘氨酸叔丁酯(DAPT,10 μmol/L)处理上述PC12细胞,观察Notch信号通路抑制后PC12细胞对鱼藤酮处理的凋亡反应,分析Notch信号通路与鱼藤酮诱导PC12细胞凋亡之间的关系.结果 鱼藤酮显著诱导PC12细胞凋亡[(35.6±5.4)％,P＜0.05]和半胱氨酰天冬氨酸特异性蛋白酶-3(Caspase-3)活性升高(0.52±0.15,P＜0.05),并活化其Notch/Jagged1信号通路.DAPT显著抑制鱼藤酮诱导的Notch/Jagged1信号通路活化并降低PC12细胞凋亡率[(9.8±3.1)％,P＜0.05]和Caspase-3活性(0.16 ±0.06,P＜0.05).结论 Notch信号通路活化是鱼藤酮诱导PC12细胞凋亡的主要机制之一.
作者：张媚；何亮；李俊；张临洪 刊期： 2012年第08期
目的 观察转染FasL基因在心脏移植中是否可以诱导出一定程度的免疫耐受.方法 取SD大白鼠为受体,Wistar大白鼠为供体,各68只,分成3组,Ⅰ组:20只,心脏直接进行移植；Ⅱ组:20只,单用多聚乙烯亚胺(PEI)转染心脏后移植；Ⅲ组:28只,供心移植前用PEI介导克隆大鼠FasL(rFasL)基因转染,质粒DNA(μg)∶PEI(μl)=20∶40.分别检测移植心脏存活时间、心肌组织的苏木素-伊红(HE)染色、FasL的表达、原位末端转移酶标记(TUNEL)法检测心肌组织的原位细胞凋亡、Western blot法检测FasL蛋白水平.结果 (1)Ⅲ组移植心脏的存活时间为(17.8 ±0.6)d,较另2组明显延长(P＜0.01).(2)Ⅰ组和Ⅱ组心肌组织的FasL水平渐升高,但前3d均未超过40％,Ⅲ组FasL水平在移植后3 d即达较高水平(63.65 ±3.31)η％ (P ＜0.01).(3)随着移植时间的延长,Ⅲ组心肌组织细胞凋亡指数由(13.40 ±3.46)细胞数/mm2终升至(48.90±6.91)细胞数/mm2(P＜0.05),凋亡细胞大多为浸润的炎性细胞,但Ⅰ组和Ⅱ组有大量的心肌细胞凋亡.(4)Ⅲ组FasL mRNA的转录强度和蛋白表达均比Ⅰ、Ⅱ组明显升高.结论 适当浓度的FasL基因转染移植心脏,可以诱导出一定程度的免疫耐受.
作者：廖东山；廖崇先；陈良万；陈昆；余毅；黄庆；李增棋 刊期： 2012年第08期
目的 观察乙酰肝素酶(Hpa)在乳腺癌的表达,探讨它们的表达与乳腺癌浸润、转移的关系及临床意义.方法 对60例未行任何化疗、放疗和内分泌治疗的原发性乳腺癌病理标本进行分析,应用苏木素-伊红(HE)染色观察乳腺癌的组织形态和病理学变化；应用免疫组织化学法检测乳腺癌患者癌组织、癌旁2 cm乳腺组织及距癌组织5 cm以上的正常乳腺组织中Hpa的表达.结果 60例乳腺癌病理标本免疫组织化学结果显示,乳腺癌组织Hpa阳性表达率为68.33％ (41/60),癌旁组织(癌旁2 cm)Hpa阳性表达率40.00％(24/60),正常组织Hpa阳性表达率0.00％ (0/60).统计分析结果显示,与正常对照组织比较,Hpa在癌组织和癌旁组织表达升高且差异有统计学意义(P＜0.01).Hpa的表达与乳腺癌临床病理标志的相互关系分析结果显示:Hpa的表达与乳腺癌患者体内瘤块直径、组织学分级、腋下淋巴结状况及临床分期明显相关(P＜ 0.05),与患者年龄无明显相关(P＞0.05).而且具有腋下淋巴结转移的患者Hpa阳性表达率显著高于无腋下淋巴结转移组(P＜0.01).结论 Hpa在乳腺癌中的表达均较高,明显高于癌旁组织及正常乳腺组织；Hpa的表达与乳腺癌肿瘤大小、组织学分级、临床分期、淋巴结转移密切相关,与患者的年龄无明显相关.
作者：王学军；王献魁；刘国希；李超；程春宇 刊期： 2012年第08期
目的 观察小型猪肝硬化门脉高压症动物模型建立远端脾静脉-肝总动脉分流术(下称脾肝分流术)后降低胃脾区静脉压力的效果.方法 对照组和实验组猪各15头分别建立脾肝分流术,对照组猪术后处死不饲养,实验组猪术后饲养30d处死.结果 脾肝分流术后胃脾区静脉血入肝亚甲蓝肝脏染色良好.维持静脉血入肝的脾静脉压力对照组为(20.51±0.74) cm H2O(1cm H2O=0.098 kPa),实验组为(23.09±1.36) cm H2O(P＜0.05) 脾肝分流术建立后静脉和动脉两端形成压力差,对照组为(7.17±1.02) cm H2O,实验组为(9.55±1.32) cm H2O(P＜0.05).术后实验猪无肝坏死及肝性脑病发生,脾肿大消失,肝功能等生化代谢指标术后7d波动大,14 d逐渐恢复,30 d恢复到成模时状态. 结论 压力差是维持静脉血入肝降低胃脾区静脉压力的原始动力.术后肝功能等生化代谢指标紊乱需要进一步治疗.
作者：廖清华；林伟箭；陆云飞；田磊；张海添；吴向华 刊期： 2012年第08期
目的 检测小干扰RNA(siRNA)对肝癌耐药细胞株HepG2/阿霉素(ADM)多药耐药相关蛋白基因2(MRP2)及其蛋白产物的抑制作用,观察对多药耐药性的影响.方法 使用浓度梯度法制作HepG2耐ADM细胞株(HepG2/ADM),ADM浓度从0.1～2.0 m/L:设计合成针对MRP2的siRNA小片段,转染HepG2/ADM耐药细胞,24 h后通过实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-qPCR)和Western blot检测siRNA对MRP2基因mRNA和蛋白的抑制效果；噻唑蓝(MTT)比色法观察抑制MRP2基因表达后,HepG2/ADM细胞对化疗药物的敏感性变化,并计算各药物的半数抑制浓度(IC50).结果 HepG2/ADM对ADM、5-氟尿嘧啶(5-Fu)、长春新碱和奥沙利铂的IC50值分别为0.3204、3.8002、0.2014和0.1221；siRNA明显抑制了HepG2/ADM细胞MRP2基因mRNA和蛋白的表达(P＜0.05)；转染MRP2-siRNA后,HepG2/ADM细胞对ADM、5-Fu、长春新碱和奥沙利铂的IC50值明显减小,分别为0.1023、1.4417、0.0452和0.0268.结论 用siRNA沉默MRP2基因能够逆转HepG2/ADM细胞对化疗药物的耐药性,MRP2基因与HepG2/ADM肝癌细胞的多药耐药性相关,可通过沉默MRP2基因提高耐药细胞对化疗药物的敏感性.
作者：褚忠华；张大伟；刘建平；韦金星；苏正；陕基德 刊期： 2012年第08期
核糖体失活蛋白(RIP)广泛存在于高等植物中,具有抗肿瘤、抗病毒和抗生育等多种生物学活性.南瓜蛋白(CUS)是本课题组从南瓜瓜瓤中提取的新的Ⅰ型核糖体失活蛋白,相对分子质量约2.7 ×104,为碱性单肽链糖蛋白[1].
作者：许春森；黄鹤光；陈明晃；谢捷明 刊期： 2012年第08期
目的 观察骨形态发生蛋白-2(BMP-2)基因转染人脐带间充质干细胞(hUCMSC)对其成骨分化和体内异位成骨的影响.方法 实验分为3组,空白组:10％胎牛血清+ DMEM培养基,对照组:10％胎牛血清+DMEM培养基+空慢病毒载体转染,实验组:10％胎牛血清+DMEM培养基+BMP-2+增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因转染,检测3组不同培养基培养后人脐带间充质细胞的碱性磷酸酶(ALP)活性变化,蛋白印迹法检测骨桥蛋白(OPN)、Ⅰ型胶原蛋白(COL1)、BMP-2的蛋白表达变化.yon kossa染色观察hUCMSC钙结节形成.大鼠肌袋内植入BMP-2转染hUCMSC/COL1,通过CT三维重建及苏木素-伊红(HE)染色观察其体内成骨能力.结果 hUCMSC BMP-2转染良好,转染率可达到(90.95±4.35)％,实验组细胞在第5天,ALP活性就由(26.492 ±7.105) U/g·蛋白增加至(38.625±11.592) U/g·蛋白,在第14天,实验组的ALP的活性可以高达(49.732±13.068) U/g·蛋白,对比空白组和对照组都有明显增加(P＜0.05).对比空白组和对照组,实验组COL1、BMP-2和OPN蛋白呈现高表达(P＜0.05).转染BMP-2基因后,hUCMSC培养28 d可形成大量的钙结节.BMP-2转染hUCMSC/COL1在大鼠肌袋内可异位成骨.结论 转染BMP2基因可促进hUCMSC细胞成骨能力.
作者：杨大志；罗惠莉；易伟宏；王尔天；王敏；刘东宁 刊期： 2012年第08期
目的 探讨Sipal基因rs931127和rs746429多态性与乳腺癌外周血循环肿瘤细胞的关系.方法 采用基因测序的方法,对124例原发性乳腺癌患者以及120例健康人进行Sipal基因rs931127和rs746429多态性分析.实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测其中92例患者外周血循环肿瘤细胞,比较Sipal基因rs931127和rs746429多态性与外周血循环肿瘤细胞之间的关系.采用Fisher精确检验及非条件Logisitic同归法计算各组P值及相对危险度比(OR)及95％可信区间(95％ CI).结果 Sipal基因rs931127和rs746429多态性与乳腺癌患者外周血循环肿瘤细胞无明显相关(P＞0.05).Sipal基因rs931127和rs746429多态性与乳腺癌患者的年龄、肿块大小、雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)、C-erb-B2蛋白的表达以及乳腺癌分子分型均无明显相关(P＞0.05).但Sipal rs931127野生型GG淋巴转移率22.6％,低于杂合型GA 48.3％和突变型AA71.0％(P＜0.01),Sipal rs746429野生型CC的淋巴结转移率为31.4％,也低于杂合型CT 64.2％及突变型TT44.4％(P＜0.01).结论 Sipal基因rs931127多态性和rs746429多态性与乳腺癌患者外周血循环肿瘤细胞无明显相关,但与淋巴结转移有关.提示rs931127 GA或AA以及rs746429 CT或TT基因型可能与乳腺癌淋巴转移有关.
作者：缪苏宇；凌立君；崇梅红；王水 刊期： 2012年第08期
目的 观察转染胰岛素样生长因子-1( IGF-1)基因对原代培养的阴茎海绵体平滑肌细胞(CCSMCs)增殖的影响,探讨IGF-1基因治疗勃起功能障碍(ED)的可能机制.方法 构建pcDNA3.1-IGF-1,体外原代培养大鼠CCSMCs并免疫组织化学染色鉴定；CCSMCs分3组:转染pcDNA3.1-IGF-1组、pcDNA3.1组和对照组,转染后不同时间段(3、5、7、9d)噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖,同时不同时间段( 24、48、96 h)酶免疫分析法(EIA)定量检测CCSMCs分泌IGF-1含量的变化.结果 成功克隆pcDNA3.1-IGF-1载体,成功原代培养CCSMCs;转染pcDNA3.1-IGF-1组细胞在转染后5、7、9d(分别为0.72±0.08、0.80±0.06、0.82 ±0.07)较转染pcDNA3.1组(分别为0.58±0.07、0.63±0.05、0.61 ±0.08)和对照组(0.59 ±0.06、0.61 ±0.07、0.62 ±0.03)增殖明显增加,呈时间依赖性,差异有统计学意义(P＜0.05).与转染pcDNA3.1组[分别为(46±7)、(48±9)、(50±11) μg/L]和对照组[分别为(47±11)、(52±10)、(51±10) μg/L]比较,转染pcDNA3.1-IGF-1组细胞在转染后24、48、96 h CCSMCs分泌的IGF-1含量[分别为(58±8)、(69±11)、(71 ±8) μg/L]增加,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 转染IGF-1基因可提高CCSMCs的增殖能力和增加IGF-1的分泌,可能是IGF-1基因治疗ED的基础.
作者：蒲小勇；闻安民；刘久敏；郑祥光；王怀鹏；徐战平；张仁礼；周香雪 刊期： 2012年第08期
目的 构建双调控溶瘤腺病毒,携带小鼠内皮抑素基因(mE),研究其对裸鼠肝癌移植瘤的抗瘤活性.方法 以人端粒酶逆转录酶启动子(hTERT)和缺氧调控元件序列(HRE)调控腺病毒E1a和E1b基因,基因组插入mE基因,构建双调控溶瘤腺病毒CNHK500-mE；在裸鼠模型中观察CNHK500-mE对肝癌移植瘤模型的疗效.结果 CNHK500能够在hTERT阳性的肝癌细胞中增殖[24 h:(16.67±4.04)％；48 h:(65.33 ±7.02)％;P＜0.01],并介导mE高效表达；与空白对照组( 1895.80±323.37) mm3比较,CNHK500-mE和Ad-mE的抑瘤率分别为50.95％[(929.80±211.10) mm3,P＜0.01]和29.99％[(1327.23 ±319.36) mm3,p＜0.05]；CNHK500-mE对癌组织间质血管的抑制作用明显强于Ad -mE(P ＜0.05).结论 将mE与溶瘤腺病毒结合,发挥病毒增殖的溶瘤作用和基因产物的血管抑制作用,表现出明显的协同抗瘤作用.
作者：孙立臣；潘旭波；周先亭；宋占文；苏长青 刊期： 2012年第08期
阿片类药物广泛用于治疗各种急慢性疼痛,长时间使用停药将发生戒断综合征.脊髓是介导吗啡依赖戒断反应的一个重要部位,ERK信号通路的激活在吗啡依赖及戒断过程中发挥重要作用[1].右旋美托咪啶(DEX)具有镇静、镇痛及抗焦虑等作用,可抑制脊髓感受伤害性反应[2].
作者：刘海林；张阳；钱燕宁 刊期： 2012年第08期
中华实验外科杂志
主管:中国科学技术协会
主办：中华医学会
