梁玮；钟世顺；邓万银；王丽珍；高丽影；张咩仔；何利平；李伟华
膝关节表面置换的患者逐年增多,我们搜集了临沂市人民医院骨科2009年6月至2012年4月单膝关节置换的患者,手术及护理方式相同,术后引流的体位不同,总结引流量和血常规内的指标进行相关分析.
作者：杨玉宝；刘省臣；高忠礼；阚金庆 刊期： 2012年第08期
目的 针对大鼠血管内皮细胞(VEC)的磷脂酰肌醇3激酶B亚单位(Pik3cb),构建KDR特异性启动子/增强子真核表达载体,观察其对VEC增殖和凋亡的影响.方法 构建KDR特异性启动子/增强子真核表达载体并转染大鼠VEC.实验分5组,A组:正常VEC；B组:转染特异性KDR质粒,浓度2.0 mg/L；C组:转染非特异性巨细胞病毒(CMV)质粒,浓度2.0mg/L；D组:转染空质粒,浓度2.0 mg/L；E组:阳性对照渥曼青霉素,浓度50 nmol/L.分别于转染24、48、72 h后,实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应(RT-qPCR)法检测各组细胞Pik3cb mRNA相对表达量,细胞计数试剂盒(CCK-8)和流式细胞仪检测各组细胞增殖抑制率和凋亡率.结果 转染24、48、72 h后,RT-qPCR法测得KDR组Pik3cb mRNA相对表达量分别为(54.82 ±2.77)％、(50.54±3.98)％和(35.47±4.83)％,均明显低于正常对照组(P＜0.05)；CCK-8法测得KDR组细胞增殖抑制率分别为(21.98±2.25)％、(24.32±3.04)％和(26.38±5.06)％；流式细胞仪测得KDR组细胞凋亡率分别为(9.9±1.3)％、(31.0±7.4)％和(44.5±8.3)％,细胞增殖抑制率和凋亡率均明显高于正常对照组(P＜0.05).结论 KDR特异性启动子/增强子真核表达载体可通过下调磷脂酰肌醇3激酶(PI3K)信号通路特异性抑制VEC增殖并促使其凋亡.
作者：王倩；邓勇志；徐俊文；陈丽；杨雪峰 刊期： 2012年第08期
目的 观察细菌脂多糖(LPS)对肝细胞株LO2细胞过氧化物酶体增殖物受体γ共激活因子1a(PGC-1a)、线粒体融合蛋白2(Mfn2)基因表达的调节作用以及对线粒体形态和细胞三磷酸腺苷(ATP)、活性氧(ROS)生成的影响.方法 分别以LPS(10 μg/L)、LPS(10μg/L)+罗格列酮(10 μmol/L)、LPS( 10 μg/L)+GW9662( 10 μmol/L)作用LO2细胞株12h,实时定量-聚合酶链反应(Real-time PCR)和Western blot法检测各组细胞PGC -1a、Mfn2 mRNA转录及蛋白表达水平,透射电镜观察线粒体形态变化,荧光素酶二磷酸腺苷( ADP)/ATP发光检测细胞ATP含量,荧光探针2',7'-二氯荧光素乙二酯(DCFH-DA)测定细胞ROS生成水平.结果 经LPS处理LO2细胞后PGC-1a、Mfn2基因的mRNA及蛋白表达水平显著低于空白对照组,差异有统计学意义(1.2314±0.0366比2.5896 ±0.2591；0.7432 ±0.1626比1.6236±0.3058,P＜0.05)；细胞线粒体数量减少、肿胀明显、嵴模糊不清、基质密度低、少数线粒体膜不完整；细胞内ATP浓度显著低于对照组(2.50 ±0.15比5.81 ±0.31,P＜0.05)；而ROS生成水平较对照组明显升高(150.1920±6.3571比55.1920±9.1140,P＜0.05).罗格列酮可通过提高PGC-1a、Mfn2基因表达逆转这一改变；而GW9662抑制PGC-1 a、Mfn2基因表达,进一步加重线粒体损伤.结论 LPS通过抑制肝细胞PGC-1a、Mfn2基因表达诱导线粒体形态改变及功能障碍.
作者：柯文波；张勇；李俊；郑启昌；熊俊 刊期： 2012年第08期
目的 构建Kruppel-like factor 5(KLF5)慢病毒载体并转染人结肠癌RKO细胞中,观察KLF5对结肠癌细胞RKO生物学行为的影响.方法 采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)从人小肠黏膜中扩增出KLF5基因编码区1374 bp的片段,随后将扩增KLF5片段插入慢病毒转移载体pCDH-CMV-KLF5 -Efl -copGFP,构建KLF5-pCDH-CMV-KLF5-EF1-copGFP.在脂质体介导下将构建成功的重组慢病毒转染人胚肾细胞株(293T)包装生产慢病毒,测定病毒滴度,感染结肠癌RKO细胞.RT-PCR和Western blot法分别检测KLF5 mRNA和蛋白的表达.随后将实验分为空白对照组和实验转染组进行实验.细胞计数试剂盒(CCK-8)法检测转染前后RKO细胞增殖的变化以及Transwell实验检测转染前后细胞增殖和侵袭能力的变化.结果 成功合成KLF5-pCDH-CMV-KLF5-EF1 -copGFP并转染入RKO细胞中.RT-PCR以及Western blot结果提示与对照组比较,KLF5-pCDH-CMV-KLF5-EF1 -copGFP成功在RKO细胞中得到合成和表达.同时高表达的KLF5可以明显抑制RKO细胞的增殖(P＜0.05).另外KLF5可以明显抑制RKO细胞的迁移能力(50.26±2.17比25.12 ±2.27,t=17.66,P＜0.05)和侵袭能力(45.48±1.53比22.13 ±2.25,t=3.37,P＜0.05).结论 KLF5可以有效抑制结肠癌RKO细胞的增殖、迁移和侵袭.
作者：赖东明；周泉波；李文滨；褚忠华；曾育杰；陈双；杨一增 刊期： 2012年第08期
目的 探讨胃癌组织和癌旁组织miR-155和miR-30a的表达差异及其临床意义.方法 收集手术切除的胃癌标本52例,采用实时荧光定量逆转录-聚合酶链反应( RT-qPCR)检测癌及癌旁组织标本miR-155和miR-30a的表达水平,分析其与临床病理的关系.结果 miR-155在胃癌组织中表达量(0.84 ±2.27)显著高于其在配对癌旁组织中的表达值(0.28 ±0.56,P＜0.05)；miR-155高表达与淋巴结转移有关(P＜0.05).miR-30a在胃癌组织中表达量(3.16±8.11)显著低于其在配对癌旁组织中的表达值(15.87±35.58,P＜0.05).miR-30a的低表达与肿瘤侵犯层次、淋巴结转移有关(P＜0.05).结论 miR-155和miR-30a与胃癌发生发展密切相关,可能成为胃癌的潜在诊断及治疗靶点.
作者：宋军；王辉；付海啸；孟松；徐溢新；刘浩；王磊；白津；徐为；郑骏年 刊期： 2012年第08期
小细胞肺癌( SCLC)是肺癌中恶性程度高的一种,针对小细胞肺癌靶抗原的基因免疫治疗是其防治的方向.前胃泌素释放肽(PGRP)是SCLC的特异性肿瘤标志物[1].我们从人小细胞肺癌细胞中克隆了PGRP基因,构建具有DC靶向的DNA疫苗,免疫小鼠后得到了较理想的免疫效果.
作者：沈海波；李克强；胡天军；杨峂 刊期： 2012年第08期
目的 观察急性胆道及解除梗阻对豚鼠胆囊鼠胆囊平滑肌的收缩、Cajal间质细胞(ICC)的影响.方法 将雄性豚鼠随机分为假手术对照组( Sham)、胆总管结扎2 d(BDL)和胆总管结扎2d后去结扎2 d(DBDL)3组.苏木素-伊红(HE)染色观察各组胆囊组织炎症,亚甲蓝染色在活组织中观察胆囊ICC的网络结构,c-kit免疫荧光染色观察胆囊ICC数目的改变,张力换能器记录豚鼠离体胆囊平滑肌的张力.结果 HE染色结果可见,Sham组豚鼠胆囊未见明显炎症改变(Sham 2d及4d炎症评分分别为0.40 ±0.04、0.43±0.06),BDL组炎症改变明显(1.68±0.17),而DBDL炎症(0.88±0.0.08)较BDL组轻.亚甲蓝特异性染色后,NC、BDL及DBDL3组豚鼠胆囊ICC网络状结构均存在,差异无统计学意义(P＞0.05)；同NC组比较,BDL及DBDL两组胆囊c-kit免疫阳性细胞均减少；但是,去结扎后,胆囊c-kit免疫阳性细胞有所恢复.Sham、BDL、DBDL豚鼠胆囊平滑肌对1×10-8 mol/L 8肽胆囊收缩素(CCK-8)的效应值分别为(1.675±0.233)、(1.301±0.229)、(1.402±0.234)g,对1×10-6mol/L乙酰胆碱(Ach)的效应值分别为(3.085±0.272)、(2.364±0.238)、(2.612 ±0.278)g.3组豚鼠离体胆囊平滑肌肌条对CCK及Ach的效应均增强,呈浓度依赖性；BDL和DBDL两组振幅效应值同NC组比较小,起作用时间较慢(P＜0.05).结论 急性胆道梗阻导致胆囊收缩功能障碍,ICC的数目减少可能是其中因素之一.
作者：潘志坚；冯加锐；肖勇；余保平 刊期： 2012年第08期
目的 探讨少突胶质细胞肿瘤染色体1p/19q联合缺失及其与p53、10号染色体上磷酸酶及张力蛋白同源物( PTEN)和O6-甲基鸟嘌呤-DNA甲基转移酶(MGMT)蛋白表达的关系.方法 收集少突胶质细胞肿瘤标本68例,其中WHO-Ⅱ级少突胶质细胞瘤42例,WHO-Ⅲ级间变性少突胶质细胞瘤26例.采用荧光原位杂交(FISH)方法分析肿瘤组织中1p/19q缺失状态；采用免疫组织化学方法对肿瘤组织中p53、PTEN和MGMT蛋白表达进行半定量分析,并进一步分析其与1p/19q联合缺失的相关性.结果 68例少突胶质细胞肿瘤中,染色体1 p、19q缺失率及1p/19q联合缺失率分别为67.65％ (46/68)、61.76％( 42/68)、57.35％(39/68).1p/19q联合缺失率在Ⅱ级和Ⅲ级少突胶质细胞肿瘤之间,差异无统计学意义(P＞0.05).1p/19q联合缺失在额叶肿瘤的发生率(76.67％,23/30)明显高于颞叶(45.00％,9/20)及其他部位肿瘤(38.89％,7/18),差异有统计学意义(P＜0.05).tp/19q联合缺失与患者性别及发病年龄无明显相关(P＞0.05).p53和MGMT蛋白表达与肿瘤分级呈正相关,而PTEN表达与肿瘤分级呈负相关,差异均有统计学意义(P＜0.05).1p/19q联合缺失与p53和MGMT蛋白低表达相关(P＜0.05),而与PTEN蛋白表达无明显相关(P＞0.05).结论 在少突胶质细胞肿瘤中,染色体1p/19q联合缺失与p53和MGMT蛋白表达水平呈负相关.
作者：张建国；李玉；刘正国；韩双印 刊期： 2012年第08期
目的 观察酸感受离子通道( ASICs)激活/抑制对氯化锂-匹罗卡品大鼠的癫痫皮层脑电图癫痫放电的影响.方法 制作匹罗卡品大鼠癫痫模型,分别腹腔注射磷酸盐缓冲液(PBS)、阿米洛利、左乙拉西坦或酸性液体,记录脑电图癫痫样发电次数、波幅、放电间期变化.结果 在注射后60 ～ 90 min,与正常对照组比较,ASICs抑制组癫痫样放电次数(0.69±0.08)、波幅(0.70±0.16)均明显下降(P＜0.05),放电间期(1.46±0.18)延长(P＜0.05)；ASICs激活组在注射后30 min内,癫痫样放电次数增高(1.05±0.07)(P＜0.05).结论 阿米洛利能抑制锂-匹罗卡品诱导的癫痫发作,酸性液体可促进癫痫发作,其作用机制可能与抑制或激活ASICs通道有关.
作者：梁静静；冯莹；陈谦学；潘松青；卢祖能；肖哲曼 刊期： 2012年第08期
目的 探讨经气管超声引导内镜穿刺(EBUS-TBNA)纵膈淋巴结穿刺标本中表皮生长因子受体(EGFR)突变检测的可行性.方法 收集2010年2月至2010年7月全部26例经EBUS-TBNA纵膈淋巴结穿刺诊断为肺腺癌的标本.穿刺针为EBUS标准22G针,待涂片快速细胞学病理诊断腺癌后,在同一部位穿刺,将穿刺标本推入生理盐水中.经离心后首先提取组织DNA,采用胸外科优化的突变体富集法检测外显子19及21的突变.首先经过特异性消化野生型EGFR基因的限制性内切酶切割,再进行聚合酶链反应(PCR)扩增.因绝大部分野生型基因已断裂,无法作为PCR反应模板,使得扩增产物中突变型基因的比例大大增加.结果 全部26例患者均成功提取DNA,男16例,女10例,平均年龄62.1岁(34～ 79岁).经EBUS穿刺2组、4组、7组或10组淋巴结,诊断为肺腺癌,涂片标本均显示淋巴细胞背景中可见多量腺癌细胞.经改良突变体富集法检测示其中12例存在EGFR突变,突变率达到46.2％,7例为外显子19突变,5例为外显子21突变,余14例阴性全部标本均进行测序验证,14例阴性者测序也为阴性,12例突变者测序仅7例为阳性,余5例测序为阴性.全部12例EGFR突变患者中4例患者通过新辅助化疗后进行了根治性手术,术后对肿瘤标本再次检测EGFR基因突变,检测结果与术前相同.结论 采用EBUS-TBNA穿刺纵膈淋巴结组织标本来检测EGFR突变是可行的,通过高灵敏度的检测方法可获得更高的检出率.
作者：陈克终；杨帆；赵辉；周足力；姜冠潮；王俊 刊期： 2012年第08期
目的 观察腹腔扩容术对腹腔高压症(IAH)心脏影响.方法 建立失血性休克、门静脉不全阻断复苏后猪IAH模型,随机分腹腔扩容组(n=4)及假手术组(n=4),分别观察心率、平均动脉压(MAP)、缩短分数(FS)和射血分数(EF),测心脏干湿比及苏木素-伊红(HE)染色结果结果 与休克前比,IAH后2 h心率加快(154次/min比123次/min),MAP下降[110.0 mm Hg(1 mm Hg =0.133 kPa)比127.5 mm Hg],FS下降(29.8％比40.4％),EF下降(55.5％比72.0％)(P＜0.05).与IAH后2h比,腹腔扩容组手术后8h及12h较假手术组心率减慢(124次/min比156次/min,120次/min比156次/min)( P＜0.05) 腹腔扩容组22 h后与IAH后2h比,EF上升(P ＜0.05).结论 腹腔扩容术可显著改善本IAH模型的心率及EF.
作者：刘道城；谭浩；张连阳；宗北文；杜文华；王正刚；王翔 刊期： 2012年第08期
目的 观察联合缺氧诱导因子-1α( HIF-1α)和bcl-xL小干扰RNA对肺腺癌A549细胞增殖的影响.方法 体外培养的A549细胞分为4组:A组用生理盐水处理,B组用HIF-1α小干扰RNA处理,C组用bcl-xL小干扰RNA处理,D组用HIF-1α和bcl-xL小干扰RNA联合处理.逆转录-聚合酶链反应( RT-PCR)检测HIF-1α和bcl-xL的mRNA表达,Western-blot检测两种蛋白的表达,噻唑蓝(MTT)比色法检测A549细胞增殖.结果 B组和D组细胞的HIF-1α mRNA表达量分别下降至0.733±0.157、0.766±0.208,蛋白表达量下降至0.372±0.095、0.395±0.077,与A、C组比较差异有统计学意义(P＜0.05)；C组和D细胞的bcl-xL mRNA表达量分别下降至0.514±0.183、0.509±0.168,蛋白表达量下降至0.447±0.097、0.410±0.089,与A、B组比较差异有统计学意义(P＜0.05)；D组的细胞增殖抑制明显,与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05).结论 HIF-1α和bcl-xL小干扰RNA联合应用能够明显抑制A549细胞增殖.
作者：廖洪映；黄邵洪；李昀；蔡松旺；张健；陈惠国；王翠苹；吴伟彬；李小军 刊期： 2012年第08期
目的 观察不同浓度的戊二醛(GA)处理人自体心包后的组织学特点、力学性能及钙化程度.方法 采用不同浓度(0.1％、0.5％、1.0％、5.0％、10.0％)的GA在短时间内(10 min)处理人体心包,以未处理新鲜自体心包组织作为对照.应用噻唑蓝(MTT)比色法检验GA对心包细胞活性的影响,采用单轴拉伸试验评估心包组织的力学性能,并用原子吸收光谱法对钙盐沉积进行定量分析.结果 MTT结果提示GA对心包的活性有明显抑制作用,以0.5％GA为明显,仅为对照组(未用GA处理)的22.0％.力学性能显示心包组织的大抗拉负荷及大应变强度随GA浓度的增加而改善,至0.5％为佳,GA浓度再升高(1.0％～10.0％)则大抗拉负荷及大应变强度下降.原子吸收光谱法发现0.5％ GA钙盐含量多,比对照组(未用GA处理)高31.4倍,而再增加GA浓度(1.0％ ～10.0％)则钙盐含量呈浓度依赖性下降.结论 新鲜的心包组织细胞活性好,钙盐含量少,大抗拉负荷及大应变强度较差；而GA短时间处理心包组织后,细胞活性降低,大抗拉负荷及大应变强度较未经GA处理过的好,但在用GA处理的不同浓度中,钙盐含量均明显增加.
作者：包敏；税朝祥；吴清玉 刊期： 2012年第08期
目的 探讨载粒巨噬细胞-粒细胞集落刺激因子(GM-CSF)基因质粒在小鼠体内扩增肝脏CD11c+树突状细胞(DC)的方法.方法 采用快速尾静脉椎注法将含20 μg GM-CSF基因质粒的生理盐水2.0 ml导入小鼠肝脏内,对照组注射增强型绿色荧光蛋白(EGFP)基因.第7天取肝,胶原酶消化、密度梯度离心、磁珠标记等分选出DC.Giemsa染色作形态学观测,采用流式细胞术分析其免疫表型.结果 实验组小鼠肝脏非实质细胞(NPC)大量增殖,主要分布于门静脉及其周围区域,质粒处理组中CD11c+DC比例较对照组显著增多(29.31％比6.77％,P＜0.05).Giemsa染色显示两组DC细胞核形状不规则,胞质无颗粒,然而实验组DC较对照组有明显凸起.流式细胞仪检测结果显示实验组DC较对照组明显成熟,CD40、CD80、CD86表达显著增高(P＜0.05).结论 经快速尾静脉推注质粒GM-CSF的方法可显著可靠地扩增肝脏CD11c+DC的数量.
作者：姜松耀；施敏敏；闵得金；何美美；陈皓 刊期： 2012年第08期
目的 检测60例胰腺癌患者及60例正常人外周血CD4-CD8-T细胞及白细胞介素(IL)-2、IL-6、IL-7水平,探讨其与胰腺癌的关系.方法 采用流式细胞仪检测60例胰腺癌患者外周血CD4 - CD8 -T细胞水平；酶联免疫吸附试验( ELISA)法检测60例胰腺癌患者外周血清IL-2、IL-6、IL-7水平,并与60名健康人群进行对照比较.结果 胰腺癌患者外周血CD4 - CD8 -T细胞占CD3+T细胞的比例为(3.43±0.88)％,低于正常人群(5.66±1.23)％(P＜0.05)；胰腺癌患者外周血中IL-2水平为(2.00 ±0.42) ng/L,低于正常对照组(5.50 ±0.64) ng/L(P＜0.05)；IL-6水平为(210.68±10.82) ng/L,高于正常对照组(1.77 ±0.22) ng/L(P＜0.05)；IL-7水平为(1.89±0.32) ng/L,低于正常对照组(6.35 ±0.56) ng/L(P ＜0.05).结论 胰腺癌患者外周血中CD4-CD8-T细胞的比例降低,IL-2、IL-7水平降低及IL-6水平升高可能与胰腺癌的发生有关.
作者：耿文茂；张倩；苏忠学；吴亚光；秦成坤；徐健 刊期： 2012年第08期
克罗恩病(CD)是一种不明病因的慢性非特异性、胃肠道肉芽肿性炎症,常累及回肠远端和结肠.其临床表现复杂多样,易误诊、复发率高且预后不良.
作者：压耘；陈建平；蒋敬庭 刊期： 2012年第08期
干细胞技术的应用为解决糖尿病胰岛移植供体不足、扩增β细胞提供了可能[1].我们采用含有促进胰腺、胰岛细胞再生及增殖生长因子的胰腺提取液诱导肌源性干细胞(MDSCs)分化为有功能的胰岛素分泌细胞后,探讨在胰腺发育过程中起重要作用的Notch通路的表达[2].
作者：王滢丽；刘畅；梅晰凡 刊期： 2012年第08期
乳腺癌在早期即可发生转移,严重影响生存质量.肿瘤侵袭转移是一个多步骤的复杂过程,包括肿瘤细胞的黏附和脱黏附,细胞外基质的降解和重建等过程[1].胞外基质降解是肿瘤浸润转移的首要步骤和分子基础,大量的研究资料表明,尿激酶型纤溶酶原激活物( uPA)参与细胞外基质降解,在肿瘤浸润和转移中起到主要作用[2].
作者：董波；舒晓燕 刊期： 2012年第08期
目的 观察消退素E1( RvE1)对急性肺损伤(ALI)小鼠炎症反应的影响.方法 建立小鼠ALI模型,12h后处死,观察RyE1治疗对肺组织形态、湿/干比、肺泡灌洗液(BALF)肿瘤坏死因子-α( TNF-α)含量、组织匀浆核因子-κB( NF-κB)蛋白水平的影响.结果 给予RvE1治疗后,肺组织损伤明显减轻；RYE1治疗组肺湿/干比值(4.637 ±0.125) g/g、TNF-α含量(217.2 ±30.1)ng/L较ALI模型对照组肺湿/干比值(4.906±0.176) g/g和TNF-α含量(372.2±20.6)ng/L均明显降低,差异有统计学意义(P ＜0.05)；RvE1治疗组肺组织匀浆中NF-κB蛋白表达水平较ALI模型对照组明显下降.结论 RvE1能减轻肺部炎症反应,从而减轻肺组织损伤,对ALI具有保护作用.
作者：郭凯文；邱文洪；钟伟；易卉玲；武庆平 刊期： 2012年第08期
目的 观察分析布-加综合征下腔静脉(IVC)病变隔膜的形态学特征,探讨病变隔膜的形成机制.方法 大体观察2007年10 月至2010年l2月根治性切除手术切除的10例布-加综合征下控静脉病变隔膜形态特征,并利用光镜、电镜对比观察病变隔膜与 7例正常肝后段下腔静脉壁的组织结构差异.结果 术中见病变隔膜位于下腔静脉入右心房2.0 cm范围内.隔膜边缘较厚,中央偏薄,表面与IVC内膜相连.9例隔膜下方IVC有附壁血栓,5例病变隔膜局部有钙化.光镜下病变隔膜组织由粗大的均质胶原纤维及成纤维细胞构成,胶原排列紊乱,部分胶原纤维呈透明变性.隔膜边缘为不等程度的纤维结缔组织增生,少量肉芽组织和新生血管等病理改变；正常下腔静脉壁内膜、中膜和外膜3层结构完整.电镜下病变隔膜组织中可见较多的纤维细胞,表面有少量内皮细胞.内皮细胞内线粒体大部分嵴和膜脱落融合、模糊不清或缺失,粗面内质网轻度扩张.偶见凋亡细胞,但体积缩小；正常下腔静脉壁大内皮细胞排列规则,呈条带状分布,内皮细胞内可见线粒体、粗面内质网及吞饮小泡,内皮细胞下为少量排列较稀疏的胶原纤维及弹性纤维.结论 布-加综合征下腔静脉病变隔膜形成以纤维细胞增生为主,肝后段下腔静脉的损伤和炎症反应可能参与了隔膜的形成过程.
作者：乔师师；党晓卫；徐大千；吴阳；李捷；张红新；陈奎生；许培钦；张水军 刊期： 2012年第08期
中华实验外科杂志
主管:中国科学技术协会
主办：中华医学会
