张子峰；王永军；李嗣生；孙军；刘法银；王维军；陈树涛；刘征；孙晓红
目的 构建人Wip1基因的RNA干扰(RNAi)慢病毒载体,有效沉默人胶质瘤U251细胞的Wip1基因并观察其对细胞生长的影响.方法 设计并合成3条Wip1基因特异性RNAi靶序列,构建到慢病毒pFU-GW-iRNA载体中.慢病毒包装转染HEK293T细胞,获得病毒上清并测定其滴度;感染U251细胞,实时定量聚合酶链反应(PCR)及Western blot鉴定RNA干扰效率;筛选出基因沉默效率高的慢病毒感染U251细胞,CCK-8法检测细胞的增殖,Western blot检测RNA干扰后的bcl-2蛋白表达.结果 PCR扩增和测序表明成功构建Wip1慢病毒干扰载体,病毒载体包装获得的病毒上清滴度在3×10~8～8×10~8 TU/ml.可以有效地沉默U251细胞中Wip1基因的表达,构建的RNAi慢病毒载体感染U251细胞后Wip1基因的mRNA表达量同对照组比较分别为36.3%、32.9%、23.8%.稳定Wip1 RNA干扰后的U251细胞4 d后细胞增殖能力下降35.1%.结论 慢病毒介导的RNA干扰可以高效稳定地沉默基因表达,Wip1基因促进了U251细胞的增殖.
作者：王鹏；饶竟；杨海峰；赵洪洋；杨林 刊期： 2010年第04期
同源(异型)框基因Msx(Msx)属于同源(异型)框基因Hox(homeobox)家族成员,Hox基因是一类高度保守的DNA序列,其共同特点是具有180个核苷酸长度的同源区,编码由印个氨基酸折叠成的3个α-螺旋结构~([1]),该结构被称为同源异型域(HD).
作者：宋瑞鹏；杨海彦；赵宝磊；宋宣；刘连新 刊期： 2010年第04期
目的 分离胃癌、胃溃疡、正常人之间的差异蛋白质,检测胃癌的血清学肿瘤标记物.方法 从定量比较蛋白质组分析入手,利用二维胶内差示凝胶电泳技术(2D-DIGE)分离包括胃癌、胃溃疡和正常人共27例血清样本,以基质辅助激光解吸附电离串联质谱对差异蛋白点进行检测,检索Mascot数据库.结果 共检测出14个差异表达蛋白.正常人和胃溃疡比较有3种差异蛋白质,2种被鉴定出;胃溃疡和胃癌比较发现1个下调的蛋白质;胃癌与正常人中发现10个差异表达蛋白质,6个点在胃癌患者血清中上调.结论 2D-DIGE技术是一项有效的筛选胃癌患者血清中差异蛋白的技术手段,检测出的蛋白质有可能成为胃癌诊断的分子标记物.
作者：赵艇；魏东；郑国宝；姜颖；高春芳 刊期： 2010年第04期
目的 观察自组装peptide胶对神经干细胞(NSCs)在大鼠急性期损伤脊髓中的细胞分化的影响.方法 分离、培养和鉴定大鼠NSCs与自组装peptide胶共培养;SD大鼠25只采用NYU-Ⅱ型脊髓打击器制作T10脊髓损伤模型;急性期于损伤脊髓区分别行注射移植,其中联合细胞移植组(n=10)、单纯细胞移植组(n=10)及对照组(n=5).术后第2、4、8周取损伤部位脊髓,免疫组织化学染色检测移植细胞的分化.结果 成功建立大鼠NSCs的体外培养体系;移植的NSCs在大鼠脊髓内存活超过8周,单纯移植组、细胞分化比例较低,分化的NSCs主要为表达胶质纤维酸性蛋白(GFAP)抗原细胞,未见NSCs分化为表达微管相关蛋白(MAP2)标志抗原细胞;联合移植组,细胞分化比例较高;NSCs可分化为表达MAP2、Oligo、GFAP标志抗原细胞.结论 自组装peptide胶能够提高神经干细胞在大鼠急性期损伤脊髓中的分化比率,并有部分细胞可分化为表达神经元特异抗原的细胞.
作者：叶记超；王鹏；吴燕峰；唐勇；黄霖；杨睿；梁新军；陈铿；沈慧勇 刊期： 2010年第04期
进入21世纪以来,随着医学技术和医学基础研究的不断进步和深入,分子外科学也从概念逐渐进入临床实践.同时,随着医学理念的不断更新,胃外科的实验研究也进入一个崭新的时代,胃部疾病的发生、发展和治疗也发生了显著的变化,尤其是个体化治疗的理念越来越深入到临床实际工作.
作者：秦新裕；刘凤林 刊期： 2010年第04期
截短组织因子(tTF)是全长组织因子(TF)的胞外区,tTF通过靶向载体结合于肿瘤血管细胞膜表面后,能选择性诱发肿瘤血管形成血栓,导致肿瘤缺血坏死.CDCRGDCFC(RGD-4C)是一种精氨酸-甘氨酸-天冬氨酸(RGD)小分子多肽,能特异性结合肿瘤新生血管的标志物整合素α_vβ_3.结肠癌肿瘤血管有整合素α_vβ_3的高表达,目前还没有彻底治愈结肠癌的方案~([1-2]).我们以3个串联的RGD-4C作为tTF的载体,表达具有凝血功能的(RGD)_3-tTF融合蛋白,在结肠癌SW480裸鼠上观察该蛋白的体内定位.
作者：黄正接；罗琪；颜江华；王生育 刊期： 2010年第04期
目的 探讨~(99m)Tc-HL91乏氧显像在胃癌血管正常化窗口(NWTV)的监测与判断中的价值.方法 使用~(99m)Tc-HL91对40只裸鼠肿瘤组织行乏氧显像,随机将裸鼠分成治疗组(n=20)按400 μg/每次腹腔注射DC101与对照组(n=20)注射同体积的生理盐水,利用感兴趣区(ROI)技术计算出注射后5 min到8 h的靶和非靶组织放射性比值(T/NT),取大T/NT代表肿瘤乏氧状态,与对照组比较动态监测抗鼠血管内皮细胞生长因子受体2的单克隆抗体(DC101)治疗后1～14 d的胃癌乏氧变化并定位NWTV.结果 对照组开始显影时间和达到大T/NT时间在第1～14天间无明显区别,治疗组第1天肿瘤显影时间为(30.12±0.11)min,T/NT峰值时间为(6.26±0.36)h.第2天起肿瘤显像时间和T/NT峰值时间逐渐减少,至第5天后与对照组间无明显区别.与对照组肿瘤乏氧逐渐缓慢增加不同,治疗组肿瘤乏氧呈波浪式增加.DC101治疗后第2天肿瘤乏氧(6.23±0.26)下降,到第5天肿瘤乏氧(0.24±0.14)几乎消失,在第8天(6.36±0.14)再次开始逐渐增加,NWTV出现在DC101治疗后第2天至第8天.结论 ~(99m)Tc-HL91乏氧显像能无损伤性监测抗血管生成治疗后肿瘤的乏氧变化,精确定位胃癌的NWTV.
作者：童仕伦；郑勇斌；王卫星 刊期： 2010年第04期
目的 观察局部注射不同剂量转化生长因子(TGF)-β1对珊瑚羟基磷灰石(CHA)修复兔桡骨骨缺损的影响.方法 48只兔随机分为A、B、C组,每组16只;构建桡骨骨缺损模型;缺损区均植入CHA;A、B、C组分别每日局部持续注射TGF-β1 0、20、200 ng,连续4周;术后2、4、8、16周切取植入物,苏木素-伊红(HE)染色观察组织学改变,并应用Lane-Sandhu评分标准对各组植入物手术后16周进行组织学和X-线影像评分,并检测各组桡骨生物力学性能.结果 手术后16周,A、B、C组影像学评分分别为(1.50、1.91、4.80)、骨愈合质量评分(0.51、0.88、1.70)、骨皮质重塑及改建评分(0.50、0.82、2.39)、新骨形成评分(0.00、1.22、4.56),各项评分组间比较差异均有统计学意义(P<0.05);手术后16周,生物力学检测:A、B、C组大载荷(N)分别为(180.14、251.17、273.20),各组间比较差异均有统计学意义(P<0.05);刚性(N/mm)(348.83、549.18、689.19),各组间比较差异均有统计学意义(P<0.05).结论 外源性应用TGF-β1可加速CHA修骨缺损的修复,且具有明显剂量依赖性.
作者：董耀武；于绍斌；蔡亚夫；陈建强；戎利民 刊期： 2010年第04期
目的 探讨先天性心脏病(先心病)与弓形虫(TOX)、风疹病毒(RV)、巨细胞病毒(HCMV)和单纯疱疹病毒(HSV)、人微小病毒(HPVB19)感染的关系.方法 实验对象分两组.A组为先心病组80例,B组为风湿性心脏病患者和妊娠高血压综合征引产的死婴共32例.采用聚合酶链反应(PCR)荧光定量方法检测两组心肌组织中的5种病原,比较5种病原体的阳性率.同时对阳性者病原基因进行定量,比较病原体数量上是否有差异.结果 先心病组中TOX、RV、HCMV、HSV、HPVB19病原基因阳性检出率分别为16.2%、18.8%、28.8%、7.5%、17.5%,对照组分别为0、0、18.8%、6.2%、0.TOX、RV、HPVB19在两组中检测差异有统计学意义(P<0.05),HCMV、HSV基因检出率间差异无统计学意义(P>0.05).先心病与对照组心肌组织HCMV阳性者定量检测值分别为(5.50±1.30)、(5.30±0.33)copies/ml,HSV阳性者定量检测值分别为(4.51±0.87)、(4.32±0.17)copies/ml,先心病组数值高于对照组,但差异无统计学意义.结论 先心病的发生与TOX、RV、HCMV、HSV、HPVB19感染存在密切关系.
作者：吴春涛；刘苏；陈立华；王智勇 刊期： 2010年第04期
目的 观察胸腺素β4(Tβ4)基因沉默对膀胱癌细胞上皮间质转化(EMT)的逆转,探讨其在肿瘤侵袭转移中的作用机制.方法 使用针对Tβ4的慢病毒载体(knti-Tβ4)转染膀胱癌细胞株T24.采用定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot法检测Tβ4、整合素连接激酶(ILK)和上皮性标记基因E-cadherin、β-catenin的表达改变;Immunofluorescence法检测ILK、E-cadherin、β-catenin在转染后124细胞中的表达改变;细胞划痕实验、Boyden小室体外侵袭实验、AO/EB荧光染色法反映细胞转移潜能和凋亡的变化.结果 转染后48 h的T24细胞,Tp4、ILK、β-catenin mRNA或蛋白表达开始下降,以转染后96 h明显;而上皮标记基因E-cadherin在转染96h后,表达显著增加(P<0.05);Immunofluorescence显示ILK和β-catenin在细胞质、细胞核中表达减弱,而E-cadherin在胞膜中表达增强,细胞形态向正常上皮细胞转化;转染后的324细胞体外迁移能力与侵袭力下降[(10.4±1.2)%比(73.5±1.4)%],细胞凋亡增多(12.3%比36.6%).结论 肿瘤细胞中的Tβ4表达下调可以逆转肿瘤细胞的间质表型,而向正常上皮表型转化,降低肿瘤转移潜能.
作者：王智宇；曾甫清；朱朝辉；蒋国松；吕磊；邢诗安 刊期： 2010年第04期
目的 探讨伊立替康与亚甲蓝耦合液在大鼠胃癌淋巴结中的靶向示踪作用及其机制.方法 应用Walker-256细胞株建立大鼠胃癌模型,免疫组织化学检测癌组织中伊立替康底物拓扑异构酶Ⅰ(topo Ⅰ)的表达.分别用5、10、20、40 mg伊力替康粉剂耦合2 ml亚甲蓝注射液,另用中华墨汁、纳米活性炭和亚甲蓝作为对照.70只胃癌大鼠分为7组,瘤周4点浆膜下微针分别注射上述7种染色剂.观察各组淋巴结染色、褪色时间、染色淋巴结数等指标.结果 (1)建立大鼠胃癌模型符合实验要求,癌组织中topo Ⅰ的表达显著增强.(2)中华墨汁、纳米活性炭和亚甲蓝到达胃癌第1站淋巴结平均时间依次为20、4 min和14 s;4组耦合剂分别为19、27、41、61 s.染料运行至第2站淋巴结的平均时间与之相似.(3)中华墨汁、纳米活性炭和亚甲蓝组平均染色淋巴结数量分别为2、7和8枚;各耦合剂组淋巴结检出数量逐渐增加,依次为8、8、9和11枚.(4)淋巴结褪色时间中华墨汁>2.4h,亚甲蓝102 min,其余各组介于两者之间.(5)各组动物未见明显不良反应.结论 通过靶向结合癌组织中的topo Ⅰ,适当剂量的伊立替康与亚甲蓝耦合剂可显著延长大鼠胃癌淋巴结染色和褪色时间,提高淋巴结靶向示踪效率.
作者：陈晓鹏；童朝刚；徐龙帅；张帆；王永；王东；王冠男 刊期： 2010年第04期
人类精子表面存在附睾蛋白酶抑制剂(Eppin)、Clusterin和乳铁蛋白(Lf)蛋白质复合体~([1]),调控着精液的凝固和液化过程,人类精浆中以及精子表面均含有丰富的乳铁蛋白(Lf).本研究旨在观察人类精子膜表面是否存在与之相结合的受体(LfR).
作者：王增军；王鹏；贾跃军；牛晓兵；刘边疆；张炜 刊期： 2010年第04期
我们通过建立大鼠胸部钝性伤/肺挫伤动物模型,检测肺创伤后毛细血管通透性及血清中肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β,观察应用沐舒坦后的变化.
作者：陈渊；张鹏 刊期： 2010年第04期
目的 利用RNA干扰(RNAi)技术观察增殖诱导配体(APRIL)siRNA(pGC-shAPRIL重组干扰质粒)对裸鼠SW480移植瘤的影响.方法 建立裸鼠人结直肠癌移植瘤模型,待皮下瘤块长到一定体积,全部裸鼠分为APRIL siRNA组、空载体组和磷酸盐缓冲液(PBS)组,分别进行瘤块内注射.逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测移植瘤APRIL mRNA水平;瘤块和裸鼠肝肺苏木素-伊红(HE)染色病理检测;免疫组织化学法检测APRIL、核增殖抗原(Ki-67)、基质金属蛋白酶(MMP)-2蛋白表达.结果 APRIL siRNA组,与空载体组和PBS组比较,APRIL mRNA[(1.36±0.03)×10~7、(1.05±0.02)×10~8、(1.04±0.01)×10~8 copy/ml]和蛋白表达得分(2.00±0.40、7.00±0.45、8.00±0.40)明显降低(P<0.05);瘤块体积显著减小[(0.78±0.04)、(1.60±0.07)、(1.66±0.06)cm~3](P<0.05);与之相应Ki-67(2.00±0.45、8.00±0.54、7.00±0.44)和MMP-2(3.00±0.44、7.00±0.45、7.00±0.55)蛋白表达显著减弱(P<0.05).结论 RNAi敲低APRIL基因表达,抑制了裸鼠SW480移植瘤的生长和转移,打靶APRIL基因的RNAi技术有望成为人结直肠癌的治疗途径.
作者：王敬春；王惠民；丁伟峰；黄华；孙宝兰；景蓉蓉 刊期： 2010年第04期
目的 探讨人脐血内皮祖细胞(EPCs)移植治疗裸鼠心肌梗死的可行性.方法 采用淋巴细胞分离液提取人脐血单个核细胞(MNCs),应用添加诱导因子的培养基于体外诱导分化并于培养7 d后进行鉴定.采用20只裸鼠建立心肌梗死模型后,将体外诱导分化7 d并摄取CM-Dil的内皮祖细胞通过尾静脉注射进行细胞移植到实验组,对照组注射培养基.2周后计数心梗区域新生毛细m管密度及心梗面积并于荧光显微镜下观察新生血管的荧光.结果 体外诱导7 d后贴壁细胞CD34阳性率达(50.48±5.17)%,CDl33阳性率达(19.12±4.37)%.实验组平均梗死面积为(8.27±1.64)%,对照组为(14.30±2.84)%(t=-4.78,P<0.05);实验组每高倍视野平均新生血管密度为14.29±1.38,对照组为10.17±1.72(t=4.71,P<0.01);行荧光显微镜下观察实验组新生血管有红色荧光.讨论人脐血单个核细胞在体外诱导分化为内皮祖细胞,进行细胞移植到建立心梗模型的裸鼠后可在心梗区域形成新生血管,从而并改善梗死部位心脏功能.
作者：董永强；徐家行；张晓明；朱水波；刘高利；殷桂林 刊期： 2010年第04期
目的 观察转化生长因子-β1(TGF-β1)的表达,探讨其对糖尿病骨折延迟愈合的影响.方法 70只大鼠随机分为对照组和链脲佐菌素按60 mg/kg诱导的糖尿病组,血糖>11.2mmol/L为诱导成功.均造成左侧胫骨骨折,于1、2、3、4、6、8周摄X片,取骨痂苏木素-伊红(HE)染色,免疫组织化学和酶联免疫吸附试验(ELISA)检测骨痂及血清TGF-β1.结果 X片和HE染色均示实验组较对照组骨形成滞后;实验组4周TGF-β1表达达高峰,迟于对照组3周,3周灰度值:实验组189.59±2.76,对照组166.74±1.33(P<0.05),3周血清含量:实验组(12.05±1.56) μg/L,对照组(17.48±0.56)μg/L(P<0.05).结论 糖尿病大鼠骨折后血清及骨痂TGF-β1减少是致其延迟愈合的原因之一.
作者：赵锡武；宫明智；刘中浩；武士清；邢德国；吴建军 刊期： 2010年第04期
目的 观察蓝舌病毒湖北株(BTV-HbC_3)对人肾癌ACHN细胞的感染特性,探讨其杀伤肾癌细胞作用及其机制.方法 BTV-HbC_3感染肾癌ACHN细胞,观察细胞病变效应及显微电镜变化,噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞存活率,RNA凝胶电泳检测BTV-HbC_3在ACHN细胞内的增殖,DNA ladder法检测感染后凋亡并用流式细胞仪检测感染后细胞凋亡指数.结果 BTV-HbC_3感染细胞后有明显的细胞病变效应,细胞胞质内出现病毒颗粒,细胞肿胀破裂,1 MOI的BTV-HbC_3感染ACHN细胞24、36、48 h的存活率分别为68.14±5.13、57.14±2.68、42.21±5.63.RNA电泳出现L1-L3、M4-M6和S7-S10特征性病毒dsRNA,DNA ladder显示非特异凋亡表现,流式细胞仪检测1 MOI的BTV-HbC_3感染ACHN细胞24、36、48 h后可见低亚二倍体峰,比例分别为13.7%、18.5%和24.2%.结论 BTV-HbC_3能有效地杀伤人肾癌ACHN细胞.
作者：杜贤进；周峰；董长垣；郭应禄；张杰 刊期： 2010年第04期
目的 探讨人胸腺素β4(Tβ4)与膀胱移行细胞癌(BTCC)上皮-间质转化的相关性,以及与临床病理特征之间的关系.方法 选用膀胱移行细胞癌手术切除标本60例,每例标本均选用癌组织中心、癌旁组织及其远端正常黏膜对照.采用定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot和免疫组织化学技术检测切除标本中的Tβ4、整合素连接激酶(ILK)、E-cadherin和β-catenin的表达,并分析与各临床病理因素之间的关系.结果 Tβ4在BTCC组织中的表达明显高于正常黏膜(91.7%比15.0%,P<0.05),其在深层浸润组中的表达高于浅层浸润组(97.4%比81.00,P<0.05);ILK在BTCC组织中的表达明显高于正常黏膜(80.0%比18.3%,P<0.05);β-catenin在BTCC组织中的表达高于正常黏膜(76.7%比26.7%,P<0.05);E-cadherin在BTCC组织中的表达明显低于正常黏膜(30.0%比90.0%,P<0.05);Tβ4与E-cadherin表达呈负相关,与ILK、β-catenin表达呈正相关.结论 胸腺索β4与膀胱移行上皮癌分化和转移有关,可能通过调控上皮-间质转化从而在膀胱移行上皮癌的侵袭转移过程中发挥作用.
作者：朱朝辉；曾甫清；王智宇；吕磊；万锋；邢诗安 刊期： 2010年第04期
目的 观察重组人生长激素(rhGH)在体外对生长激素受体(GHR)表达不同的人胃癌细胞株增殖及胰岛素样生长因子-1(IGF-1)表达的影响.方法 选取GHR高表达细胞株SGC-7901和低表达细胞株MKN-45.分组:空白对照组、rhGH组1～3(分别予50、150、250 μg/L rhGH).噻唑蓝(MTT)比色法及流式细胞术分析rhGH对胃癌细胞株增殖的影响,酶联免疫吸附试验(ELISA)法分析细胞上清液的IGF-1蛋白浓度.结果 SGC-7901细胞株rhGH组1～3和空白对照组的生长率分别为126.5%、128.7%、128.0%、100.0%;增殖指数(PI)分别为52.49±0.20、54.27±0.45、57.13±0.21、48.37±0.42;IGF-1浓度分别为228.67±17.01、226.88±30.31、229.03±30.31、200.46±21.33;与空白对照组比较,各浓度rhGH组细胞显著增殖,IGF-1浓度显著升高(P均<0.05),各浓度组间差异无统计学意义(P>0.05).rhGH干预对MKN-45细胞株的生长增殖和IGF-1浓度无明显影响(P>0.05),各浓度组间差异无统计学意义(P>0.05).结论 rhGH在体外促进高表达GHR的胃癌细胞增殖及表达IGF-1,对低表达GHR的胃癌细胞增殖和IGF-1表达无明显影响.
作者：侍方方；李苏宜 刊期： 2010年第04期
很多研究已经证明实体瘤中存在肿瘤干细胞(ICSC),它们具有极强的自我更新、增殖分化的能力,在肿瘤的发生、发展和转移过程中具有决定性的作用~([1-2]).
作者：曹亮；胡祥；张怡 刊期： 2010年第04期
中华实验外科杂志
主管:中国科学技术协会
主办：中华医学会
