刘凤林；秦新裕
我们通过实验观察不同纯度大鼠胰岛样本中干细胞标志物细胞角质蛋白(CK)-19的表达,探讨不同纯度胰岛样本中所携带的干细胞.一、材料与方法
作者：杨闯；王济明；杜成友；黄艳君；薛栋 刊期： 2008年第04期
目的 探讨臭氧氧化预处理通过诱导热休克蛋白70(HSP70)的合成,保护大鼠肾脏缺血再灌注损伤的作用与机制.方法 建立原位大鼠单侧肾缺血再灌注动物模型,I/R前15 d经直肠吹人氧气和臭氧的混合气体5.0～5.5 ml(臭氧浓度50 mg/L,1 mg/kg体重,每日1次).全自动生化分析仪检测尿素氮(BUN)、肌酐(Cr),比色法测定血清的脂质过氧化产物丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD).Western blot检测HSP70蛋白的含量;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测HSPT0的表达.结果 肾缺血再灌注24 h后,血清中BUN、Cr、MDA明显增高,肾组织内HSP70表达明显增强(P＜0.05),经臭氧氧化预处理后,血清中的BUN、Cr、MDA均降低,SOD升高;HSP70表达升高更加明显(P＜0.05).结论 臭氧氧化预处理可以诱导大鼠肾缺血再灌注组织中HSP70表达,减轻大鼠肾脏缺血再灌注损伤.
作者：陈志远；陈晖；刘修恒；詹炳炎；周江桥；祝恒成 刊期： 2008年第04期
目的 探讨二种分别携带神经元型一氧化氮合酶(nNOS)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)反义RNA重组腺相关病毒载体(rAAV-AsnNOS和rAAV-AsiNOS)在脑缺血时抑制神经细胞凋亡的作用机制.方法 运用MACO法建立脑缺血模型,闭塞1 h后分别经右侧颈内动脉缓慢注入重组病毒载体(rAAV-AsnNOS、rAAV-AsiNOS和rAAV-LacZ),继续闭塞大脑中动脉,每只转染病毒滴度为1×1010个病毒颗粒/ml,并于分别缺血早期(缺血5 h)和缺血晚期(缺血25 h)时处死模型,流式细胞术(FCM)检测硝基酪氨酸(NT)阳性细胞百分比和细胞凋亡率,逆转录反应系统(RTPCR)分析nNOS、iNOS,p38MAPK,Caspase-3 mRNA的表达.结果 在脑缺血早期,rAAV-AsnNOS组的NT阳性百分比、凋亡率以及nNOS、p38MAPK、Caspase-3 mRNA表达量较对照组、rAAV-LacZ组和rAAV-AsiNOS组的低均降低,差异有统计学意义;在脑缺血晚期,rAAV-AsiNOS组的NT阳性百分率、凋亡率以及nNOS、p38MAPK、Caspase-3 mRNA表达量较对照组、rAAV-LaeZ组和rAAV-AsiNOS组低,差异有统计学意义.结论 在体内缺血动物模型中,rAAV-AsnNOS和rAAV-AsiNOS重组病毒载体能够分别在缺血早期和晚期通过抑制NOS表达,从而抑制p38MAPK和Caspase-3基因的表达,抑制缺血后神经细胞凋亡的发生.
作者：石松生；杨卫忠；陈春美；王春华；易海波；陈晓斌；蔡冬生；杨意堃 刊期： 2008年第04期
目的 建立并鉴定表达人乳头瘤病毒16型(HPV 16)E7蛋白的实体瘤模型.方法 携带有野生型HPV 16 E7基因的重组质粒pcDNA3.1-E7用限制性内切酶及序列测定进行鉴定.采用脂质体将重组质粒pcDNA3.1-E7转染小鼠淋巴瘤细胞RMA,经G418筛选获得稳定转染细胞单克隆,并用RT-PCR方法检测稳定转染细胞HPV 16 E7 mRNA.将转染细胞接种于C57BL/6小鼠,肿瘤形成后,用Western blot分析检测E7蛋白在小鼠肿瘤组织中的表达.结果 酶切及测序证实目的 基因DNA序列、插入位点及方向均正确.RT-PCR检测显示HPV 16 E7能在RMA转染细胞中稳定表达.RMA转染细胞可在小鼠体内成瘤,且Western blot分析表明E7蛋白在小鼠肿瘤组织中的表达较体外高.结论 2.5 X 104 个RMA-E7细胞可在小鼠体内成瘤,并且体内E7蛋白表达比体外高,可能导致免疫耐受.
作者：郑启昌；胡少勃；宋自芳；汪谢丹 刊期： 2008年第04期
目的 观察胰岛素样生长因子(IGF)-1基因转染的脂肪间充质干细胞(ADSCs)向软骨细胞分化的效果.方法 原代培养兔ADSCs,免疫荧光法检测细胞表面抗原CD44、CIM9;脂质体介导人IGF-1基因转染兔ADSCs联合低浓度血清培养基向软骨细胞分化诱导,RT-PCR及Western blot方法检测IGF-1的表达,MMT法绘制细胞增殖曲线、甲苯胺蓝染色软骨结节、免疫组织化学检测Ⅱ型胶原的表达.结果 脂肪间充质干细胞CD44、CD109表达阳性,基因转染后细胞IGF-1表达阳性,细胞增殖速度增快,出现软骨结节,Ⅱ型胶原表达增高.结论 从脂肪组织中能够分离出增殖旺盛的ADSCs,IGF-1在ADSCs内获得稳定表达,细胞增殖能力增强,促进其向软骨细胞分化.
作者：原泉；程扬；李建军；安春厚 刊期： 2008年第04期
我们应用人工合成的生物可降解性单纯型尿道内支架修复战伤性尿道狭窄,证实该材料及方法是可行的[1].本实验旨在将自体的尿道上皮细胞体外培养后,种植于单纯尿道内支架上,制备成附有自体尿道上皮细胞的复合型尿道内支架,为修复尿道损伤提供较实用有效的治疗方法.
作者：张秉鸿；符伟军；张旭；高江平；洪宝发；孟波；朱宁；崔福斋 刊期： 2008年第04期
目的 建立人胆汁蛋白质组双向荧光差异凝胶电泳分析流程用于胆汁比较蛋白质组学研究.方法 实验组与对照组样本各6例,分别取自于胆管癌及胆总管结石病例.样本经纯化处理及定量后,分别标记不同的荧光染料后进行双向电泳与差异分析.结果 两组样本均获得高分辨力的双向电泳图谱;各标记蛋白质点的荧光强度与蛋白表达量呈线性关系;实验组与对照组间共筛选出55个差异表达蛋白,其表达量两组间相差1.5倍以上,t检验有统计学意义(P＜0.05).结论 建立了基于双向荧光差异凝胶电泳基础上的胆汁比较蛋白质组学的分析流程.
作者：陈波；刘小方；邹声泉；鲁艳军；汪昕 刊期： 2008年第04期
目的 观察PRL-3在人胃癌SGC7901细胞增殖中的作用.方法 构建表达人工PRL-3 miRNA的慢病毒载体,转染SGC7901细胞,并检测其沉默PRL-3表达的效果;MTT试验评价沉默PRL-3表达对SGC7901细胞增殖的抑制作用.结果 成功构建表达PRL-3慢病毒载体.PRL-3慢病毒转染组,可沉默SGC7901细胞PRL-3的表达.MTT试验结果,沉默PRL-3的表达后,与空载体组比较,SGC7901细胞数下降了30.4%;生长曲线比较,SGC7901细胞的增殖受到明显抑制(P＜0.05).结论 PRL-3在胃癌生长中起着重要作用,可作为胃癌潜在的治疗靶点.
作者：蔡世荣；陈创奇；王昭；崔冀；张常华；何裕隆；詹文华 刊期： 2008年第04期
我们通过体外对C6胶质瘤细胞和人脐静脉内皮细胞(HUVEC)进行共培养,模拟体内肿瘤细胞与血管内皮细胞相互作用的环境,检测整合素β1在这两种细胞上转录和表达的变化,观察局部环境因素对整合素β1表达的影响.
作者：张金锋；郭赛雄；陈凤珍 刊期： 2008年第04期
目的 探讨Sema6D及其受体PlexinA1在胃癌中的表达及它们与肿瘤细胞增殖和血管生成的关系.方法 应用逆转录.聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot方法检测20例胃癌患者的癌组织及相应胃切缘正常胃黏膜Sema6D及其受体PlexinA1的mRNA和蛋白表达;免疫组织化学方法检测50例胃癌组织和20例胃正常黏膜中Sema6D、PlexinA1、肿瘤细胞增殖指数(Ki-67)和第Ⅷ因子(微血管密度MVD)的表达.结果 PT-PCR和Western blot示胃癌组织中的Sema6D mRNA和蛋白的表达明显高于胃正常黏膜[(0.24±0.06)比(0.19±0.07),P＜0.05,和(0.45±0.16)比(0.29±0.08),P＜0.01];同时PlexinA1 mRNA和蛋白的表达亦明显高于胃正常黏膜[(0.71±0.37)比(0.60±0.25),P＜0.05,和(0.47±0.16)比(0.21±0.08),P＜0.01].肿瘤细胞增殖指数(Ki-67)随着Sema6D和PlexinA1表达的增高而增高(r=0.5996,P＜0.01和r=0.5024,P＜0.05);胃癌组织中MVD与Sema6D和PlexinA1存在明显正相关(r=0.5759,P＜0.01和r=0.7286,P＜0.01).结论 Sema6D及其受体PlexinA1在胃癌发生发展中发挥重要作用,与促进肿瘤细胞增殖和调节血管生成有关.
作者：赵向阳；陈凛；许倩；李玉红；徐迎新 刊期： 2008年第04期
目的 构建癌胚抗原(CEA)启动子正调控人白细胞介素-15(IL-15)真核表达质粒载体,观察其在肿瘤细胞内的靶向性表达.方法 基因克隆技术构建巨细胞病毒(CMV)启动子正调控质粒pHi2-IL-15-CMV-TAT和CEA启动子正调控质粒pHi2-IL-15-CEA-TAT;再以IL-2信号肽(SP)置换IL-15SP构建质粒pHi2-IL-2SP-IL-15-CMV-TAT和pHi2-IL-2SP-IL-15-CEA-TAT;阳离子脂质体介导法体外转染CEA阳性结肠癌SW480细胞和CEA阴性乳腺癌MCF-7细胞,酶联免疫吸附方法(ELISA)检测转染后48h细胞培养上清液中IL-15表达.结果 质粒均成功构建.ELISA检测结果:(1)以IL-2SP置换IL-15SP可提高转染细胞的IL-15表达4.8～5.9倍(P＜0.01);(2)转染SW480细胞后,CEA启动子正调控的两质粒(pHi2-IL-15-CEA-TAT和pHi2-IL-2SP-IL-15-CEA-TAT)与相对应的CMV启动子正调控质粒(pHi2-IL-15-CMV-TAT和pHi2-IL-2SP-IL-15-CMV-TAT)之间的IL-15表达无统计学意义(P＞0.05),其效应等同于CMV启动子正调控质粒;(3)转染MCF-7细胞后,CEA启动子正调控的两质粒IL-15表达显著低于CMV启动子正调控质粒(P＜0.01).结论 CEA启动子正调控IL-15质粒,尤其是质粒pHi2-IL-2SP-IL-15-CEA-TAT在CEA阳性细胞中高表达IL-15,CEA阴性细胞中低表达IL-15,实现了IL-15基因高效、靶向性表达.
作者：李卫东；何向辉；赵娜；邱宇杰；朱理玮 刊期： 2008年第04期
目的 观察微囊化罗非鱼肝细胞移植对急性肝衰大鼠的治疗作用.方法 D-氨基半乳糖制备的肝衰大鼠随机分为4组:微囊化组,裸肝细胞组、空微囊组及生理盐水组,腹腔内分别植入微囊化罗非鱼肝细胞、裸肝细胞、空微囊及生理盐水.比较各组间1周死亡率.移植后动态检测各组大鼠总胆红素,比较其差异,动态观察移植物的病理变化.结果 移植后1周内微囊化组的存活率较高(57.9%),与其他各组比较差异有统计学意义(P＜0.05).移植后48 h,微囊化组总胆红素(6.21±0.86)μmol/L明显较低,与其他各组差异有统计学意义(P＜0.01).移植后1周,微囊化组可以收集到形态完整,没有粘连的微囊,其内的肝细胞尚部分保持存活.结论 微囊化罗非鱼肝细胞移植能改善肝衰大鼠的肝功能、提高存活率.
作者：赵中辛；刘妍芳；周主青；张圣祥；杨永康；朱哲 刊期： 2008年第04期
本实验旨在观察不同食管癌患者对药物的敏感性,为食管癌的临床化疗提供个体化用药的实验依据.一、材料与方法1.材料:选择济南军区总医院经手术切除的食管癌患者共58例,其中男35例,女23例,年龄(56.2±4.6)岁.
作者：卢兆桐；李明；邹志强；付质杰；李山成 刊期： 2008年第04期
目的 建立稳定表达红色或绿色荧光的人肝癌裸鼠转移模型.方法 用带红色或绿色荧光蛋白基因的假慢病毒感染人高转移潜能肝癌细胞HCCLM3,获得稳定表达红色或绿色荧光的新细胞系HCCLM3-R和HCCLM3-G.1×107细胞皮下接种、2 mm3组织块原位移植裸鼠,建立稳定表达荧光的人肝癌裸鼠转移模型.结果 皮下接种5只裸鼠和肝脏原位移植10只裸鼠肿瘤全部生长,经180 d裸鼠体内连续6次传代肿瘤荧光表达稳定,肝内播散、肺转移和腹腔转移检出率分别为100%、100%和90%.结论 采用HCCLM3-R、HCCLM3-G细胞所建立的荧光表达人肝癌裸鼠转移模型,是一个较理想的研究肝癌生长和转移的动物模型.
作者：杨毕伟；夏景林；吴伟忠；梁英；孙惠川；王鲁；张巨波；肖春丽；刘康达；汤钊猷 刊期： 2008年第04期
目的 比较浅表性和浸润性膀胱移行细胞癌上皮钙黏素基因启动子近侧-160位点C/A单核苷酸多态性.方法 浅表性和浸润性膀胱移行细胞癌各33例17例.从血液中提取人基因组DNA,PCR扩增包含E-cad基因启动子近侧序列-160位点的DNA片段,长约190 bp.分别用限制性内切酶HphⅠ和AflⅢ将PCR产物消化过夜,行4%琼脂糖凝胶电泳,根据酶切产物的电泳结果判断基因型.结果 浅表膀胱移行细胞癌的CC、CA、AA基因型分别有9、14和10例;浸润膀胱移行细胞癌的CC、CA、AA基因型分别有2、3和12例.浸润性膀胱移行细胞癌A等位基因频率0.79(27/7)高于浅表性膀胱移行细胞癌0.52(34/32),差异有统计学意义(P＜0.05).结论 E-cad基因启动子近侧序列-160位点A等位基因与膀胱移行细胞癌的侵袭能力密切相关.
作者：朱庆国；李娟；何延瑜 刊期： 2008年第04期
目的 观察RNA干扰技术沉默Cyr61基因表达对人脑胶质瘤U251细胞生物学行为的影响.方法 针对Cyr61 mRNA的序列设计合成小干扰RNA(siRNA)的DNA模板,构建pRNAT-Cyr61重组质粒,转染人脑胶质瘤U251细胞;RT-PCR和Western blot检测其对U251细胞内源性Cyr61表达的影响;用噻唑蓝(MTT)比色法观察U251细胞体外增殖活性的变化;用Transwell 小室法检测U251细胞体外侵袭能力的改变;流式细胞仪检测U251细胞凋亡并用透射电镜观察凋亡后的细胞形态学变化.结果 pRNAT-Cyr61重组质粒在mRNA及蛋白水平分别显著抑制Cyi61基因表达,抑制率分别高达到74.87%和78.23%;U251细胞的体外生长抑制率高达68.15%,侵袭细胞数下降至(46.00±2.82)个;U251细胞凋亡率高达53.16%.结论 pRNAT-Cyt61可抑制Cyr61在人脑胶质瘤U251细胞中的表达,并抑制细胞的增殖活性和侵袭能力,促进细胞凋亡.
作者：付锴；袁先厚；江普查；文志华 刊期： 2008年第04期
目的 研究6种肿瘤.睾丸抗原(CT)基因在肾透明细胞癌中的表达及其临床意义.方法 采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测42例肾透明细胞癌患者癌组织(新鲜标本,T1期16例,12期12例,T3期10例,T4期4例;G1 10例,G2 18例,G3 14例)及其中14例患者癌旁组织的cTAGE-1、cTAGE-2、MAGE-A1、MAGE-A3、MAGE-A12及NY-ESO-1基因mRNA的表达.结果 42例肾透明细胞癌组织中100%(42/42)至少表达6种CT基因中一种,14例癌旁组织表达均阴性.肾透明细胞癌组织中MAGE-A12表达高,其次为MAGE-A3,MAGE-A1,cTAGE-1,cTAGE-2及NY-ESO-1,分别为71%(30/42),69%(29/42),67%(28/42),64%(27/42),60%(25/42)及48%(20/42).肿瘤不同分期、不同分级之间6种CT基因表达的差异均无统计学意义(Pearson x2检验法,P＞0.05).结论 CT基因在肾透明细胞癌中有较高表达,可望成为肾透明细胞癌特异性免疫治疗的靶基因.
作者：殷波；孔垂泽；张辉；许学文；宋永胜 刊期： 2008年第04期
目的 运用基因芯片技术获取正常成人脑组织与人脑胶质瘤中差异表达的基因,并对其中1条基因进行初步研究.方法 抽提正常成人脑组织与人脑胶质瘤组织中的mRNA来制备探针,经杂交、洗涤后,通过计算机观察两者表达谱的差异情况,对681F05克隆子进行Northern blot,原位杂交和生物信息学分析.结果 通过4次基因芯片筛选,获得15条与胶质瘤相关的新基因,经northern blot证实681F05基因在人正常脑组织中低表达,而在人脑胶质瘤中高表达.原位杂交得到相同的结果.BLASTn和BLASTx分析显示,它们编码蛋白与线虫Cyp-10蛋白同源性分别为52%和72%.cDNA序列分析发现这两上克隆是同一个基因(命名为cyclophilin-like gene (PPll3))的两个不同的剪切体(PPIL3a和PPll3b).结论 基因芯片筛选正常脑组织与人脑胶质瘤差异表达的基因具有样品用量少,高质量,高速度,高敏感等特性.681F05基因可能是与人脑胶质瘤形成有关的一条全长新基因.
作者：祁震宇；惠国桢；李瑶；顾少华；谢毅 刊期： 2008年第04期
肝细胞癌(HCC)的恶性生物学特征使得手术切除为主的综合治疗效果仍不理想,对其侵袭转移机制的研究显得尤为重要[1].凝血酶敏感蛋白-1(TSP-1)在调节肿瘤细胞的多种生物学行为中发挥重要作用[2].本研究旨在探讨TSP-1对肝癌细胞株体外侵袭的作用及其可能的作用途径.
作者：薛建锋；刘颖斌；李江涛；王建伟；彭淑牖 刊期： 2008年第04期
Burne-Taney等[1]研究表明造成肾脏缺血组织损伤的T淋巴细胞功能减退起到了类似缺血预处理样作用,提出T淋巴细胞中可能存在对肾脏缺血再灌注损伤(IRI)起保护作用的亚群,其中造成缺血组织损伤的免疫细胞主要是表达CD28+的CD4+T细胞、NKT细胞等,而起保护作用的T细胞亚群尚不清楚.我们在建立大鼠肾脏热IRI模型的基础上通过对外周血免疫抑制性细胞CD8+CD28-T的检测探讨其在肾脏缺血预处理(IP)中的作用.
作者：李令勋；苏泽轩；梁忠平；陈厚名 刊期： 2008年第04期
中华实验外科杂志
主管:中国科学技术协会
主办：中华医学会
