赵中辛；刘妍芳；周主青；张圣祥；杨永康；朱哲
目的 观察蛋白酪氨酸激酶Pyk2在胃癌组织中的表达,探讨Pyk2在胃癌中的作用机制.方法 应用Western blot和荧光定量PCR方法检测正常胃黏膜组织和胃癌组织中Pyk2表达的差异.应用质粒转染的方法,将质粒PKH3-Pyk2和PKH3-PKM(PKM,dominant-negative Pyk2 mutant)转染胃癌细胞系BGC-803,观察凋亡相关蛋白bcl-2和bax的变化,探讨Pyk2在胃癌中作用机制.结果 Western blot结果显示Pyk2蛋白在28例正常胃黏膜组织中均有表达,在胃癌组织中表达水平很低或几乎无表达,差异有统计学意义(t=3.53,P＜0.05).荧光定量PCR结果显示:胃癌组织中Pyk2 mRNA表达水平明显低于正常胃黏膜组织,差异有统计学意义(t=8.02,P＜0.05).转染PKH3-Pyrk2质粒后,对凋亡抑制蛋白bcl-2影响不明显,而促凋亡蛋白bax的表达升高.结论 Pyk2在正常胃黏膜组织中高表达,在胃癌组织中低表达.Pylc2可能通过上调bax蛋白的表达而促进胃癌细胞凋亡.
作者：武颖超；郭宏杰；汪欣；刘玉村；万远廉；朱静 刊期： 2008年第04期
目的 观察微囊化罗非鱼肝细胞移植对急性肝衰大鼠的治疗作用.方法 D-氨基半乳糖制备的肝衰大鼠随机分为4组:微囊化组,裸肝细胞组、空微囊组及生理盐水组,腹腔内分别植入微囊化罗非鱼肝细胞、裸肝细胞、空微囊及生理盐水.比较各组间1周死亡率.移植后动态检测各组大鼠总胆红素,比较其差异,动态观察移植物的病理变化.结果 移植后1周内微囊化组的存活率较高(57.9%),与其他各组比较差异有统计学意义(P＜0.05).移植后48 h,微囊化组总胆红素(6.21±0.86)μmol/L明显较低,与其他各组差异有统计学意义(P＜0.01).移植后1周,微囊化组可以收集到形态完整,没有粘连的微囊,其内的肝细胞尚部分保持存活.结论 微囊化罗非鱼肝细胞移植能改善肝衰大鼠的肝功能、提高存活率.
作者：赵中辛；刘妍芳；周主青；张圣祥；杨永康；朱哲 刊期： 2008年第04期
本研究旨在探讨是否经脾脏移植微囊化胰岛素分泌细胞能够纠正糖尿病小鼠的高血糖状态,从而为糖尿病的细胞治疗选择新的移植部位奠定实验基础.一、材料和方法
作者：刘锐；代文杰；宋春芳；孙景云；周毅 刊期： 2008年第04期
目的 探讨Sema6D及其受体PlexinA1在胃癌中的表达及它们与肿瘤细胞增殖和血管生成的关系.方法 应用逆转录.聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot方法检测20例胃癌患者的癌组织及相应胃切缘正常胃黏膜Sema6D及其受体PlexinA1的mRNA和蛋白表达;免疫组织化学方法检测50例胃癌组织和20例胃正常黏膜中Sema6D、PlexinA1、肿瘤细胞增殖指数(Ki-67)和第Ⅷ因子(微血管密度MVD)的表达.结果 PT-PCR和Western blot示胃癌组织中的Sema6D mRNA和蛋白的表达明显高于胃正常黏膜[(0.24±0.06)比(0.19±0.07),P＜0.05,和(0.45±0.16)比(0.29±0.08),P＜0.01];同时PlexinA1 mRNA和蛋白的表达亦明显高于胃正常黏膜[(0.71±0.37)比(0.60±0.25),P＜0.05,和(0.47±0.16)比(0.21±0.08),P＜0.01].肿瘤细胞增殖指数(Ki-67)随着Sema6D和PlexinA1表达的增高而增高(r=0.5996,P＜0.01和r=0.5024,P＜0.05);胃癌组织中MVD与Sema6D和PlexinA1存在明显正相关(r=0.5759,P＜0.01和r=0.7286,P＜0.01).结论 Sema6D及其受体PlexinA1在胃癌发生发展中发挥重要作用,与促进肿瘤细胞增殖和调节血管生成有关.
作者：赵向阳；陈凛；许倩；李玉红；徐迎新 刊期： 2008年第04期
目的 探讨丁酸钠(Sodium Butyrate,NaB)抑制人肝癌细胞株SMMC-7721细胞生长、诱导其凋亡的分子机制.方法 采用噻唑蓝(MTT)比色法、倒置显微镜观察药物对细胞生长的影响并绘制细胞增殖抑制曲线;透射电镜观察细胞凋亡的形态变化;流式细胞术分析细胞周期;半定量RT-PCR方法检测细胞p21WAF1基因mRNA的表达水平;Western blot检测细胞p21WAF1蛋白的表达变化.结果 NaB对人肝癌细胞生长的抑制呈剂量依赖和时间依赖关系.将细胞周期阻滞于G0/G1期,NaB上调p21WAF1 mRNA及蛋白的表达.结论 NaB具有抑制人肝癌SMMC-7721细胞增殖、诱导其凋亡的作用,这种作用可能是通过上调p21WAF1 mRNA及蛋白完成的.
作者：王波涌；钱群；雷道雄；艾中立；张中林；黄梅 刊期： 2008年第04期
目的 观察抗原致敏树突细胞(DC)与细胞因子诱导的杀伤细胞(CIK)共培养体内外抗胃癌(SCC-7901)的效应.方法 取健康供者外周血体外诱导培养DC和CIK,应用噻唑蓝(MTT)法测定比较(每组n=3)单纯CIK(CIK组)、DC诱导CIK(DC-CIK组)和经胃癌抗原致敏的DC诱导CIK(抗原-DC-CIK组)体外对SGC-7901的杀伤活性,并利用SGC-7901建立胃癌裸鼠模型,设立PBS对照组,比较各组(每组n=5)瘤体体积、抑瘤率和肿瘤坏死面积评分.结果 成熟DC与CIK共培养第7天时,DC-CIK扩增倍数为17.8±2.0,约为单纯CIK扩增倍数(10.9±1.8)的1.63倍(P＜0.05);抗原-DC-CIK组、DC-CIK组、CIK组,体外实验中效靶比为20:1时对SGC-7901的杀伤活性分别为:(72.3±0.5)%、(53.9±0.7)%、(46.4±0.4)%(P均＜0.01);体内动物实验中抑瘤率分别为30.02%、18.11%、15.94%(P均＜0.01).结论 SGC-7901抗原致敏DC能增加CIK的扩增数量,增强CIK对SGC-7901的杀伤作用.
作者：安岗；毛伟征；代震波；牛兆建；刘希春；解西河；赵宝成 刊期： 2008年第04期
缺氧诱导因子-1(HIF-1)是缺氧条件下广泛存在于哺乳动物和人体内的一种转录因子,它通过对下游靶基因的调控,使细胞对缺氧产生适应性反应[1].有研究结果显示,脑组织缺血缺氧可导致脑缺血半暗带HIF-1α的表达增加,并诱导血管内皮生长因子(VEGF)过量表达,刺激血管新生,改善局部血供,减轻缺血后的脑损伤[2]1.本研究旨在观察去骨瓣减压术对局灶性脑缺血大鼠梗死灶周HIF-1α、VEGF表达的影响,探讨该手术脑保护作用的可能机制.
作者：冀建文；吴建梁；李彤；于利洁；扈玉华；邵恩得 刊期： 2008年第04期
目的 观察RNA干扰技术沉默Cyr61基因表达对人脑胶质瘤U251细胞生物学行为的影响.方法 针对Cyr61 mRNA的序列设计合成小干扰RNA(siRNA)的DNA模板,构建pRNAT-Cyr61重组质粒,转染人脑胶质瘤U251细胞;RT-PCR和Western blot检测其对U251细胞内源性Cyr61表达的影响;用噻唑蓝(MTT)比色法观察U251细胞体外增殖活性的变化;用Transwell 小室法检测U251细胞体外侵袭能力的改变;流式细胞仪检测U251细胞凋亡并用透射电镜观察凋亡后的细胞形态学变化.结果 pRNAT-Cyr61重组质粒在mRNA及蛋白水平分别显著抑制Cyi61基因表达,抑制率分别高达到74.87%和78.23%;U251细胞的体外生长抑制率高达68.15%,侵袭细胞数下降至(46.00±2.82)个;U251细胞凋亡率高达53.16%.结论 pRNAT-Cyt61可抑制Cyr61在人脑胶质瘤U251细胞中的表达,并抑制细胞的增殖活性和侵袭能力,促进细胞凋亡.
作者：付锴；袁先厚；江普查；文志华 刊期： 2008年第04期
目的 建立并鉴定表达人乳头瘤病毒16型(HPV 16)E7蛋白的实体瘤模型.方法 携带有野生型HPV 16 E7基因的重组质粒pcDNA3.1-E7用限制性内切酶及序列测定进行鉴定.采用脂质体将重组质粒pcDNA3.1-E7转染小鼠淋巴瘤细胞RMA,经G418筛选获得稳定转染细胞单克隆,并用RT-PCR方法检测稳定转染细胞HPV 16 E7 mRNA.将转染细胞接种于C57BL/6小鼠,肿瘤形成后,用Western blot分析检测E7蛋白在小鼠肿瘤组织中的表达.结果 酶切及测序证实目的 基因DNA序列、插入位点及方向均正确.RT-PCR检测显示HPV 16 E7能在RMA转染细胞中稳定表达.RMA转染细胞可在小鼠体内成瘤,且Western blot分析表明E7蛋白在小鼠肿瘤组织中的表达较体外高.结论 2.5 X 104 个RMA-E7细胞可在小鼠体内成瘤,并且体内E7蛋白表达比体外高,可能导致免疫耐受.
作者：郑启昌；胡少勃；宋自芳；汪谢丹 刊期： 2008年第04期
目的 观察端粒酶抑制剂与化疗药物阿霉素联用抑制小鼠膀胱癌的协同作用.方法 AZT(端粒酶抑制剂齐夫多啶)4.5 mg、阿霉素0.1 mg、AZT 4.5 mg+阿霉素0.1 mg分组治疗T24膀胱癌荷瘤小鼠,观察肿瘤生长、细胞凋亡情况.结果 治疗后15 d,AZT、阿霉素、AZT+阿霉素各治疗组抑瘤率分别为35.6%、18.5%和43.2%.TUNEL法检测各组肿瘤细胞凋亡指数为(18.16±0.78)、(9.23±0.22)和(25.15±1.65).肿瘤端粒酶活性检测示各组端粒酶阳性率分别为24.5%、47.2%和12.3%,AZT、阿霉素均有减少肿瘤端粒酶活性的作用,且联用效果明显优于两者单独应用(P＜0.05).结论 AZT及阿霉素均能抑制小鼠膀胱癌T24细胞的生长及降低其端粒酶活性、诱导细胞凋亡,两者联用有相加作用.
作者：郑巍；李怀富；韩丛辉；董秉政；吴媛；桂西青 刊期： 2008年第04期
目的 观察大鼠骨髓来源的树突状细胞(DC)对同种异体肝移植大鼠免疫耐受的影响.方法 用不同细胞因子诱导培养大鼠骨髓来源的成熟DC(mDC)和不成熟DC(imDC),采用形态学观察、表型分析和功能学实验对培养细胞进行鉴定,构建Wistar大鼠和SD大鼠肝移植模型,并于移植前5 d注射到受体大鼠内,研究它们对移植后大鼠肝脏病理及存活时间的影响情况.结果 DC细胞形态不规则,大多数细胞表面有细长树枝状突起,mDC和imDC表面均表达表面分子OX62,而表面分子CD86在imDC表面低表达,在mDC表面高表达.imDC和mDC与淋巴细胞相互作用,发现imDC对淋巴细胞的增殖无明显作用,相反mDC对淋巴细胞的增殖有明显的促进作用.注射imDC的受体大鼠的存活时间显著长于注射mDC的受体大鼠,注射mDC的肝移植大鼠在移植后较早且出现较强的急性排斥反应,而注射mDC的大鼠在移植后16 d才开始出现轻度急性排斥反应.结论 建立了在体外大量扩增大鼠骨髓来源DC的方法,imDC能显著延长受体大鼠肝移植的存活时间.
作者：陈丽红；刘景丰；邱明链；方航荣；黄爱民 刊期： 2008年第04期
有研究证实,静脉尿路造影显示一侧梗阻性肾积水不显影,并非说明患肾无功能[1],即使敏感的核素肾动态显像技术,此时也很难反映患肾实时的功能状态[2].我们采用99mTc-DTPA肾动态显像技术,时序性比较了完全性单侧输尿管梗咀(CUUO)后患肾肾小球滤过率(GFR)与肾盂压力.
作者：谭大清；张杰；姚颐；陈辉霖；谢梅；李京涛；李又空 刊期： 2008年第04期
心肌内心电图(IMEG)已经被证实是一项无创、安全、简便易行的监测心脏移植急性排斥反应的方法.本实验旨在观察IMEG于体液排斥反应发生时的变化.一、资料与方法以雄性杂种犬为实验对象,供体体重在10 kg左右,受体体重为20 kg左右.
作者：贾一新；孟旭；韩杰；史加海 刊期： 2008年第04期
目的 建立人胆汁蛋白质组双向荧光差异凝胶电泳分析流程用于胆汁比较蛋白质组学研究.方法 实验组与对照组样本各6例,分别取自于胆管癌及胆总管结石病例.样本经纯化处理及定量后,分别标记不同的荧光染料后进行双向电泳与差异分析.结果 两组样本均获得高分辨力的双向电泳图谱;各标记蛋白质点的荧光强度与蛋白表达量呈线性关系;实验组与对照组间共筛选出55个差异表达蛋白,其表达量两组间相差1.5倍以上,t检验有统计学意义(P＜0.05).结论 建立了基于双向荧光差异凝胶电泳基础上的胆汁比较蛋白质组学的分析流程.
作者：陈波；刘小方；邹声泉；鲁艳军；汪昕 刊期： 2008年第04期
我们应用人工合成的生物可降解性单纯型尿道内支架修复战伤性尿道狭窄,证实该材料及方法是可行的[1].本实验旨在将自体的尿道上皮细胞体外培养后,种植于单纯尿道内支架上,制备成附有自体尿道上皮细胞的复合型尿道内支架,为修复尿道损伤提供较实用有效的治疗方法.
作者：张秉鸿；符伟军；张旭；高江平；洪宝发；孟波；朱宁；崔福斋 刊期： 2008年第04期
我们通过复制大鼠被动吸烟模型,探讨香烟烟雾与大鼠附睾组织细胞凋亡的关系.一、材料与方法1.材料:8周龄健康雄性SD大鼠24只,体重200～250 g,随机分为3组:空白对照A组8只,被动吸烟B组8只,被动吸烟后加用还原型谷胱甘肽C组8只.
作者：吴天鹏；欧阳海；农谦 刊期： 2008年第04期
目的 构建癌胚抗原(CEA)启动子正调控人白细胞介素-15(IL-15)真核表达质粒载体,观察其在肿瘤细胞内的靶向性表达.方法 基因克隆技术构建巨细胞病毒(CMV)启动子正调控质粒pHi2-IL-15-CMV-TAT和CEA启动子正调控质粒pHi2-IL-15-CEA-TAT;再以IL-2信号肽(SP)置换IL-15SP构建质粒pHi2-IL-2SP-IL-15-CMV-TAT和pHi2-IL-2SP-IL-15-CEA-TAT;阳离子脂质体介导法体外转染CEA阳性结肠癌SW480细胞和CEA阴性乳腺癌MCF-7细胞,酶联免疫吸附方法(ELISA)检测转染后48h细胞培养上清液中IL-15表达.结果 质粒均成功构建.ELISA检测结果:(1)以IL-2SP置换IL-15SP可提高转染细胞的IL-15表达4.8～5.9倍(P＜0.01);(2)转染SW480细胞后,CEA启动子正调控的两质粒(pHi2-IL-15-CEA-TAT和pHi2-IL-2SP-IL-15-CEA-TAT)与相对应的CMV启动子正调控质粒(pHi2-IL-15-CMV-TAT和pHi2-IL-2SP-IL-15-CMV-TAT)之间的IL-15表达无统计学意义(P＞0.05),其效应等同于CMV启动子正调控质粒;(3)转染MCF-7细胞后,CEA启动子正调控的两质粒IL-15表达显著低于CMV启动子正调控质粒(P＜0.01).结论 CEA启动子正调控IL-15质粒,尤其是质粒pHi2-IL-2SP-IL-15-CEA-TAT在CEA阳性细胞中高表达IL-15,CEA阴性细胞中低表达IL-15,实现了IL-15基因高效、靶向性表达.
作者：李卫东；何向辉；赵娜；邱宇杰；朱理玮 刊期： 2008年第04期
目的 探讨手术后败血症患者肝功能损害与一氧化氮产生的关系.方法 将20例接受腹部手术并在术后发生败血症的患者分成两组:存活组、死亡组.在发生败血症之前取血样.并在发生败血症后每隔3 d取1次血样,直到患者死亡或出院.分析稳定的NO基团代谢终产物(NOx)和动脉内KBR(AKBR)的关系.结果 术后发生败血症的患者中,7例死亡患者的血浆NOx水平比13例存活患者显著增高.死亡组患者的AKBR水平比存活组显著降低,这表明死亡组患者的肝功能受到损害.与之比较,死亡组血浆NOX水平比存活组显著增高.当AKBR的水平降到0.7以下时,NOX的水平开始升高.此外,血浆AKBR水平的变化程度受NOX水平的影响,这表明NO与肝脏细胞的线粒体功能障碍有一定关系.结论 NO的过量产生可能是导致术后败血症患者出现致命性代谢功能紊乱的原因之一.
作者：涂巍；胡松；赵嫚；曲文志；于作夫 刊期： 2008年第04期
目的 探讨二种分别携带神经元型一氧化氮合酶(nNOS)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)反义RNA重组腺相关病毒载体(rAAV-AsnNOS和rAAV-AsiNOS)在脑缺血时抑制神经细胞凋亡的作用机制.方法 运用MACO法建立脑缺血模型,闭塞1 h后分别经右侧颈内动脉缓慢注入重组病毒载体(rAAV-AsnNOS、rAAV-AsiNOS和rAAV-LacZ),继续闭塞大脑中动脉,每只转染病毒滴度为1×1010个病毒颗粒/ml,并于分别缺血早期(缺血5 h)和缺血晚期(缺血25 h)时处死模型,流式细胞术(FCM)检测硝基酪氨酸(NT)阳性细胞百分比和细胞凋亡率,逆转录反应系统(RTPCR)分析nNOS、iNOS,p38MAPK,Caspase-3 mRNA的表达.结果 在脑缺血早期,rAAV-AsnNOS组的NT阳性百分比、凋亡率以及nNOS、p38MAPK、Caspase-3 mRNA表达量较对照组、rAAV-LacZ组和rAAV-AsiNOS组的低均降低,差异有统计学意义;在脑缺血晚期,rAAV-AsiNOS组的NT阳性百分率、凋亡率以及nNOS、p38MAPK、Caspase-3 mRNA表达量较对照组、rAAV-LaeZ组和rAAV-AsiNOS组低,差异有统计学意义.结论 在体内缺血动物模型中,rAAV-AsnNOS和rAAV-AsiNOS重组病毒载体能够分别在缺血早期和晚期通过抑制NOS表达,从而抑制p38MAPK和Caspase-3基因的表达,抑制缺血后神经细胞凋亡的发生.
作者：石松生；杨卫忠；陈春美；王春华；易海波；陈晓斌；蔡冬生；杨意堃 刊期： 2008年第04期
目的 通过生存分析探讨染色体杂合性缺失(LOH)在肝细胞癌(HCC)患者根治术后预后预测中的价值.方法 选取1 p、8p、17p、4q、13q及16q共6条染色体上24个具有高度多态性的微卫星标记,对1999年1月至2000年5月225例行根治术的HCC石蜡标本应用微切割技术,获取纯净肿瘤DNA进行LOH检测,并分析LOH与HCC患者根治术后5年总体生存(OS)、无瘤生存(DFS)的关系.结果 LOH在检测的染色体位点上发生明显.在单因素分析中,D8S298位点LOH的患者根治术后5年OS、DFS率皆明显低于无LOH的患者[(39±6)比(54±5),P＜0.05;(36±7)比(60±6),P＜0.01].同样,在D1S199基因位点,LOH患者术后5年OS、DFS率亦显著低于无LOH者[(28±7)比(55±5),P＜0.01;(29±8)比(53±5),P＜0.05].在其他22个检测位点,未发现LOH与HCC术后生存相关.在多因素分析中,Cox比例风险模型显示D8S298、D1S199位点LOH分别是HCC患者根治术后DFS、OS较差的独立因素(P均＜0.05).结论 D8S298、D1S199位点LOH有可能分别成为HCC患者根治术后预测转移复发及总体生存的分子标记.
作者：逄锦忠；钦伦秀；王强庆；李雯；任宁；叶青海；刘银坤；汤钊猷 刊期： 2008年第04期
中华实验外科杂志
主管:中国科学技术协会
主办：中华医学会
