胡占良；张新宇；姜明山；韩德恩
目的 利用逆转录病毒作为载体将小鼠白细胞介素(IL)-23基因转染小鼠乳腺癌细胞(MA-891),建立分泌IL-23的肿瘤细胞株(IL-23/MA-891),观察对其生长特点及体内成瘤情况.方法 应用逆转录病毒载体(LXSN)将IL-23基因质粒经ψ2(ecotropic)和PA317(amphotropic)两种包装细胞包装后,转染MA-891细胞,经G418筛选后获得表达IL-23的IL-23/MA-891细胞.采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)鉴定转染细胞mRNA的表达;激光共聚焦显微镜(LSCM)观察其蛋白表达;用ELISA法检测IL-23/MA-891细胞培养上清诱导脾细胞分泌IFN-γ的能力;用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞体外增殖能力;用流式细胞仪检测细胞周期与凋亡.小鼠皮下接种转染IL-23的IL-23/MA-891细胞观察其体内致瘤性的变化,小鼠实体瘤模型研究基因转染对肿瘤的生长抑制作用.结果 IL-23转染MA-891细胞后,在mRNA水平水平可获得稳定表达;LSCM可观察到其细胞内表达.IL-23基因转染MA-891细胞后,与对照组比较,其体外增殖能力不受影响,致瘤率也无改变,但IL-23基因转染组肿瘤生长明显受到抑制(P＜0.05).结论 成功建立表达小鼠IL-23基因的小鼠乳腺癌细胞系(IL-23/MA-891);在体内,IL-23转染组具有明显的抗肿瘤作用.
作者：刘爽；陈砚凝；冯永路；单保恩 刊期： 2007年第09期
目的 探讨分级阻断大鼠胰组织肾素-血管紧张素系统对急性胰腺炎的影响及其机制.方法 用雨蛙肽诱导大鼠急性胰腺炎模型,观察卡托普利、沙拉新及洛沙坦对大鼠胰湿重比、病理学评分、血浆AMY、MPO、MDA、NO、SOD、TNF-α及Ang-Ⅱ,胰组织MPO、MDA、NO、SOD、TNF-α及Ang-Ⅱ,免疫组织化学ABC法染色胰组织AT1、AT2的影响.结果 单用卡托普利、沙拉新、洛沙坦能降低急性胰腺炎血浆AMY、MPO、MDA、NO、TNF-α及Ang-Ⅱ,水平,升高SOD水平;降低胰组织MPO、MDA、NO、TNF-α、Ang-Ⅱ及AT1、AT2水平,升高SOD水平;但联合给药并没有进一步改善急性胰腺炎的所有指标.结论 ACE抑制剂、非选择性Ang-Ⅱ受体拮抗剂及特异性AT1阻断剂能改善急性胰腺炎时胰组织损伤程度,但联合应用无协同效果,其可能机制是阻断RAS对胰组织的胰酶过度释放、微循环障碍、氧自由基损伤、炎症介质瀑布样效应有关.
作者：胡占良；张新宇；姜明山；韩德恩 刊期： 2007年第09期
目的 观察核因子(NF)-κB、细胞间黏附分子(ICAM)-1和炎症细胞因子在急性胰腺炎(AP)肝损伤中的作用.方法 36只SD大鼠随机分为AP组、假手术组(SO组),通过胰胆管逆行注射3.5%牛磺胆酸钠溶液制作大鼠AP模型.术后3、6、12 h胰腺组织光镜检查;肝组织光镜、电镜观察;检测血清丙氨酸氨基转移酶(ALT);放射免疫法(RIA)测定血清肿瘤坏死因子(TNF)-α、白细胞介素(IL)-1β、IL-6;酶联免疫吸附法(ELISA)检测IL-10;实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测肝组织TNF-α mRNA、IL-6 mRNA;肝组织Envision法免疫组织化学测定NF-κB、ICAM-1.结果 病理学证实建立AP组,出现肝损伤的病理形态变化;与SO组比较,AP组的血清ALT以及TNF-α、IL-6、IL-1β、IL-10水平显著增高(P＜0.05),其中血TNF-α水平在3 h升高、6 h达高水平,血IL-6在AP 3 h明显升高,下降缓慢.AP 6、12 h组肝NF-κB活化,AP各组间肝NF-κB活性表达差异均有统计学意义(x2=15.048,P＜0.05),ICAM-1无表达.AP 3～12 h内,AP组肝TNF-α mRNA在3 h明显升高、6 h高表达;AP组的肝IL-6 mRNA则在3 h已增加、3 h后缓慢下降,均显著高于各自时段的SO组(P＜0.05).结论 AP发生后,肝脏NF-κB活化,可能介导肝TNF-αmRNA、IL-6 mRNA的表达来参与肝损伤,ICAM-1对AP早期肝损伤无明显作用.
作者：万涛；卓阳；贺亚东；滕龙；方周溪；朱冠保 刊期： 2007年第09期
目的 探讨P-gP、GST-π、Topo Ⅱ在脑胶质瘤中表达的相互关系以及其临床意义.方法 采用免疫组织化学技术链霉卵白素-过氧化物酶连结法(SP法)检测101例原发性脑胶质瘤组织中P-gP、GST-π和Topo Ⅱ在不同病理分级间(WHO Ⅰ级24例;Ⅱ级34例;Ⅲ级28例;Ⅳ级15例)的表达水平,评估三者间关系和临床意义.结果 P-gP、GST-π和Topo Ⅱ阳性表达率分别为62.4%、64.3%、59.4%.P-gP及GST-π表达水平在高级别(Ⅲ-Ⅳ级)胶质瘤显著高于低级别(Ⅰ～Ⅱ级)(P＜0.05);Topo Ⅱ表达水平在高级别胶质瘤则显著低于低级别(P＜0.05).各多药耐药因子共表达的比率分别为:P-gp+GST-π:44.6%,P-gp+Topo Ⅱ:19.8%,GST-π+Topo Ⅱ:17.8%;P-gp+Topo Ⅱ+GST-π:4.95%,两个或以上MDR基因产物共表达率为87.2%,显著高于单一基因产物表达率:P-gp(5.9%),GST-π(0.9%)及Topo Ⅱ(1.9%)(P＜0.05).Topo Ⅱ阳性表达与P-gp、GST-π阳性表达呈显著负相关(P＜0.01).P-gp阳性表达与GST-π阳性表达呈显著正相关(P＜0.01).结论 原发性脑胶质瘤的多药耐药现象是由多个耐药因子共同参与作用的结果,多药耐药的发生在肿瘤细胞的病理分级间差异有统计学意义;同时检测三种耐药因子有助于优化临床化疗方案,提高化疗效果.
作者：梅文忠；何理盛；陈锦峰 刊期： 2007年第09期
目的 研究细胞因子对肾癌细胞特异性抗原G250表达的影响.方法 单独或联合应用不同浓度的白细胞介素(IL)-2、干扰素(IFN)-α、IFN-γ刺激肾癌786-0细胞系,刺激24、48、96 h后,运用免疫组织化学、Western blot和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)技术检测G250抗原在肾癌786-0细胞上的表达.结果 IL-2、IFN-α、IFN-均能上调786-0细胞G250抗原表达,以IFN-γ作用强,上调作用具有浓度及时间依赖性.细胞因子联用能明显增强G250抗原表达的上调作用.结论 IL-2、IFN-α、IFN-γ能上调肾癌786-0细胞G250抗原表达,联合应用效果更大.提示细胞因子联合以G250抗原为靶点的免疫治疗有望成为晚期肾癌新的治疗途径.
作者：温儒民；郑骏年；武艺；刘俊杰；毛立军；薛松；李望；王军起；孔德领 刊期： 2007年第09期
目的 研究合成短肽S247对呼吸机相关性肺损伤凋亡的影响,探索其在肺损伤中的防护作用.方法 30只清洁级雄性SD大鼠随机分为3组:对照组(C组)、肺损伤组(Ⅰ组)和S247治疗组(S组),每组10只,大潮气量损伤性通气4 h建立呼吸机相关性肺损伤模型(呼吸参数:Vt=40 ml/kg体重,呼吸频率=80次/min,FiO2=21%),光镜下观察肺病理改变,测定肺湿/干比;收集肺泡灌洗液(BALF),考马思亮兰法测BALF中总蛋白含量,光境下行WBC计数,免疫组织化学检查肺组织Fas、Caspase-3蛋白的表达水平,TUNEL法检测肺组织细胞凋亡情况.结果 Ⅰ组肺病理改变明显,各组肺湿/干比、BALF中总蛋白含量、WBC计数差异都有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01),Ⅰ组Fas、Caspase-3蛋白的表达水平(0.359±0.055;0.152±0.007)显著增高(P＜0.01),凋亡指数(60.000±7.461)明显增加(P＜0.01);在用S247后,Fas、Caspase-3蛋白的表达水平(0.240±0.062;0.146±0.004)显著下降(P＜0.05),凋亡指数(47.857±3.716)有所减少(P＜0.05).结论 S247能通过抑制细胞凋亡,有效降低呼吸机相关性肺损伤的程度.
作者：武庆平；王立奎；姚尚龙 刊期： 2007年第09期
我们通过检测良恶性胆道疾病患者胆汁中糖蛋白糖链结构的差异和胆道恶性肿瘤组织中糖基转移酶活力的改变,探讨这些变化在良恶性胆道病变中的鉴别诊断价值.
作者：刘厚宝；王炳生；陈惠黎；童赛雄；赵家宏 刊期： 2007年第09期
目的 观察亚低温条件下离体大鼠肝细胞悬浮培养后的完整性和功能.方法 离体肝细胞悬浮于添加有葡萄糖和牛血清白蛋白(BSA)的碳酸氢盐缓冲介质内30℃下孵育48 h,期间及其后测定细胞的完整性和功能指标.结果 30℃条件下离体0、24及48 h内白蛋白合成及Ⅰ相药物生物转化能力差异无统计学意义(P＞0.05),流式细胞仪活细胞计数和台盼蓝清除率显示细胞完整性差异无统计学意义(P＞0.05).结论 肝细胞混悬液内的离体肝细胞在亚低温条件下能够保持较高活力,为制备应用于生物人工肝的离体肝细胞混悬液提供了可行性.
作者：叶启发；袁金忠；明英姿；熊力；牛英 刊期： 2007年第09期
目的 观察大剂量甲波尼松龙对脊髓空洞前状态蛋白激酶C(PKC)活性变化的影响.方法 用新西兰兔96只制作模型,随机分为Kaolin组、MP干预组,其中后者用大剂量甲波尼松龙(30 mg/kg体重)干预.术后1、3、7、14、21 d用光镜、干湿重法和底物磷酸化法观察两组动物上颈髓病理学演变、脊髓含水量以及胞膜、胞质PKC活性.结果 与Kaolin组比较,MP干预组动物上颈髓水肿程度减轻,高峰延迟,脊髓含水量显著降低,以3 d的含水量(68.66±0.37)%和Tarlov评分(5.00±0.00)改善为明显,同时胞膜和胞质PKC活性明显下降,以7 d[(5.76±0.45)/(3.41±0.54)pmol·mg-1·min-1]和14 d[(6.21±0.40)/(3.77±0.31)pmol·mg-1·min-1]为显著,下降达50%.结论 大剂量甲波尼松龙通过抑制脊髓空洞前状态PKC移位激活、降低PKC活性发挥对空洞前状态脊髓缺血、水肿的保护作用.
作者：孙国柱；张庆俊；赵宗茂；张更申；靳洪波 刊期： 2007年第09期
目的 将高磷酰胆碱基团接枝的壳聚糖(PC-Chi)涂在微弹簧圈(MC)上,研究评价应用多孔复合膜微弹簧圈骨架系统(PC-Chi-MC)栓塞动脉瘤的治疗效果.方法 体外研究PC-Chi与人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的细胞相容性,以平行板流动装置使切应力分别为5和40 Pa,流动作用时间24 h,测定流体切应力对PC-Chi的HUVEC黏附性的影响;将Chi、PC-Chi分别涂层在MC的表面,以强力拉伸机测定多孔复合膜MC骨架系统的拉伸强度和弹性模量.将MC和PC-Chi-MC分别栓塞在侧壁型动脉瘤腔中,3个月后观察内皮细胞覆盖动脉瘤颈的情况.结果 PC-Chi与HUVEC的细胞相容性很好,细胞增殖超过了普通细胞培养板的性能(67.43%);在40 Pa切应力条件下PC-Chi表面培养内皮细胞24 h,细胞的形态尚未发生明显改变,20 mm以下位移时PC-Chi-MC与MC的应力变化差异无统计学意义(P＞0.05);以Pc-Chi-MC栓塞的动脉瘤瘤颈处有较多的内皮细胞覆盖,表现出良好的治疗效果.结论 应用PC-Chi-MC栓塞AN可以使内皮细胞尽早在瘤颈部位生长、愈合,这种情况有可能减少栓塞后动脉瘤的再通、复发,从而增强动脉瘤栓塞后的长期疗效.
作者：徐锋；王启弘；朱剑虹；周良辅 刊期： 2007年第09期
目的 观察紧密连接蛋白ZO-1在实验性兔脊髓空洞前状态中的表达及变化规律.方法 通过Kaolin枕大池注射,建立兔脊髓空洞模型,分别在术后第1、3、7、14、21天,应用Evansblue法、免疫组织化学和Western blot测定60只(实验组40只,对照组20只)中国白兔血脊髓屏障功能、上颈髓中ZO-1表达含量,并探讨其内在相关性.结果 与对照组比较,实验组动物脊髓组织中Evansblue含量在术后第3天开始增高(2.79±0.42)mg/L,7 d达到高峰(3.53±0.45)mg/L,持续到14 d(3.45±0.35)mg/L,21 d好转(3.36±0.27)mg/L.Western blot结果显示,ZO-1表达含量在第3天开始减弱(195.32±23.50),第7天(126.28±27.40)、14 d(119.36±18.70)表达弱,21 d(165.70±21.20)部分恢复.同时免疫组织化学测定ZO-1表达变化趋势和Western blot结果一致.统计学分析表明,ZO-1表达与Evansblue含量在空洞前状态中的时相变化具有明显相关性(r=-0.9502,P＜0.01).结论 ZO-1的表达强度变化趋势与实验性兔脊髓空洞前状态中的血脊髓屏障功能破坏程度变化相一致,ZO-1表达下降是形成实验性脊髓空洞前状态病理改变的重要因素.
作者：李建峰；孙国柱；张庆俊 刊期： 2007年第09期
目的 建立一种不开颅的光化学诱导兔脑皮层梗死模型,以期为脑梗死疾病提供更为为仿真的实验研究手段.方法 兔30只,制备去除外板和板障而保留内板、直径为5 mm的颅骨骨洞,耳缘静脉注射荧光剂后应用LG-150B冷光源照射骨洞处30 min,24 h后进行5分制临床评价,48 h后处死取脑,常规病理切片.结果 模型制作成功率96.3%,病理切片显示梗死灶典型,可见组织片状坏死.结论 此模型建立方法方便可行,损伤小,维持了模型动物颅内环境的稳定,能更好地体现临床上脑梗死疾病的真实情况.
作者：游宇；赵振伟；王梁；白卉；马钰；董秀珍；高国栋 刊期： 2007年第09期
严重的半月板损伤需要进行半月板的移植,防止膝关节的退行性变.我们以猪小肠黏膜下层(SIS)作为支架材料,通过观察兔半月板纤维软骨细胞在此载体中的生长、增殖情况,评价SIS的生物相容性,为应用SIS作为支架材料构建组织工程半月板提供实验依据.
作者：王洪；赵玉鑫；杨述华；袁文旗；李艳军；朱长谋 刊期： 2007年第09期
有研究表明,转染野生型p53基因可以提高恶性胶质瘤的放射治疗敏感性,p53联合伽玛刀(单次大剂量)治疗胶质瘤的研究报道尚少,本实验对此进行了研究.
作者：李彦和；徐德生；浦佩玉；康春生；董伦；贾强；张志远；王广秀；刘晓民 刊期： 2007年第09期
目的 探讨载基因仿生基质材料能否调控骨髓基质干细胞(BMSCs)向成骨细胞定向分化.方法 将非病毒载体K16GRGDSPC共价接枝于新型骨基质材料聚丙交酯/乙交酯/天冬氨酸/聚乙二醇(PLGA-[ASP-PEG])构建非病毒基因转染体系.该体系与转化生长因子(TGF)-β1基因复合制备成载基因仿生基质材料pcDNA3-TGF-β1/K16GRGDSPC/PLGA-[ASP-PEG],并将兔BMSCs与其复合培养,以pcDNA3/K16GRGDSPC/PLGA-[ASP-PEG]作为对照.通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、Western blot和酶联免疫吸附测定(ELISA)检测TGF-β1基因的表达;应用碱性磷酸酶(ALP)试剂盒检测BMSCs的ALP活性,并通过RT-PCR检测细胞ALP、骨钙素(OCN)、骨桥蛋白(OPN)和Ⅰ型胶原的表达,通过免疫荧光染色检测核心结合因子a1(Cbfa1)表达,观察BMSCs向成骨细胞方向分化的情况.结果 XPS图谱证实K16GRGDSPC被成功地接枝到PLGA-[ASP-PEG]表面.载基因仿生基质材料复合BMSCs培养结果表明,TGF-β1基因被成功地导入细胞内并表达,而且其成骨标志物(ALP、OCN、OPN、Ⅰ型胶原和Cfba1)的表达均显著高于对照组(P＜0.05).结论 这种载基因基质材料既可以作为骨组织工程支架材料,又可介导外源TGF-β1基因转染BMSCs并定向调控BMSCs成骨分化.
作者：潘海涛；郑启新；郭晓东；宋玉林；袁泉 刊期： 2007年第09期
目的 观察雪旺细胞(SCs)和人胚神经干细胞(NSCs)共移植治疗帕金森病(PD)猴模型的疗效.方法 采用恒河猴自体SCs和人胚NSCs共同移植治疗PD猴,3只成年恒河猴偏侧部分损伤性PD模型采用3种不同的移植物,对照猴移植磷酸缓冲液(PBS),干细胞猴移植人胚NSCs,共移植猴移植SCs+NSCs.结果 猴行为学评分:在移植术后1个月,共移植猴中的各项指标有不同程度的恢复,而干细胞猴及对照猴无明显变化;2个月后,干细胞猴及共移植猴,恢复程度都在2分以上,术后4个月,共移植猴和干细胞猴已接近正常.PET示DAT的显像剂18F-FP-β-CIT在移植后2个月,共移植猴在正常侧(左侧)纹状体区呈明显的放射性浓聚,而在毁损侧(右侧)纹状体区放射性摄取也出现明显浓聚,干细胞猴毁损侧(右侧)纹状体区放射性摄取仍不明显;在移植后6个月,共移植猴和干细胞猴,DAT的显像剂在毁损侧(右侧)纹状体区放射性摄取都出现明显的浓聚,而对照猴仍无明显变化.移植区脑组织TH染色显示,对照猴中未见到TH阳性细胞,干细胞可见到有TH染色阳性细胞从移植区向周围迁移;而共移植猴可见到TH染色阳性细胞从移植区向周围迁移的数量明显增多,且细胞体积也较饱满.结论 SCs和NSCs共移植能有效的治疗PD猴模型,SCs可来源于患者自体的周围神经,能避免排异反应及伦理问题,可望在临床上推广应用.
作者：夏鹰；江澄川；丁忠良；汪洋；徐斌；管一晖 刊期： 2007年第09期
急性脊髓损伤(ASCI)后,神经细胞死亡的方式不仅仅是坏死,同时细胞凋亡广泛存在[1,2].本研究旨在探讨Fas、Caspase-3基因与细胞凋亡的关系及在脊髓损伤发生发展中的作用.
作者：高万旭；程爱国；王相利 刊期： 2007年第09期
目的 探讨外伤性癫痫的血清白细胞介素(IL)-2、IL-6、肿瘤坏死因子(TNF)-α的水平及意义.方法 应用放射免疫法检测56例外伤性癫痫患者的血清IL-2、IL-6、TNF-α水平,同时检测对照组45例.结果 外伤性癫痫血清IL-2、IL-6、TNF-α水平明显高于对照组(P＜0.01).结论 IL-2、IL-6、TNF-α水平升高可能为外伤性癫痫的发病机制之一.
作者：陈海；唐洲平；林志雄 刊期： 2007年第09期
乳腺癌是女性常见恶性肿瘤,但是其详细分子生物学机制还有待研究.研究结果显示STATs(STATs)通路在多种人类恶性肿瘤中起重要作用[1].我们通过本研究检测56例乳腺浸润性导管癌标本中STATs主要成员的表达,探讨STATs通路成员持续活化在乳腺癌发生发展中的作用.
作者：王冰涛；马向涛；余力伟 刊期： 2007年第09期
目的 探讨应用聚合酶链反应(PCR)检测慢性非细菌性前列腺炎(CPPS)患者前列腺液(EPS)中细菌基因,并与CPPS患者的临床治疗效果做相关性分析.方法 以16SrRNA基因为靶序列,设计引物及寡核苷酸探针,采用PCR法检测标准菌株及135例CPPS患者前列腺液中细菌基因.所有CPPS患者均应用抗生素和中成药规范治疗,每2周为1疗程,每2周复查EPS常规1次,必要时适当调整药物.治疗3个月时,进行疗效评估.结果 135例CPPS患者中16SrRNA检测结果阳性为78例,阳性率为57.78%.16SrRNA阳性组患者有效率84.6%,阴性组有效率52.6%;16SrRNA阳性组患者疗效明显优于阴性组.结论 大部分CPPS患者的前列腺液中可以检测到细菌的16SrRNA基因,提示细菌感染在CPPS的发病中有重要作用.
作者：陈修德；赵勇；金讯波；夏庆华；蒋绍博；熊晖 刊期： 2007年第09期
中华实验外科杂志
主管:中国科学技术协会
主办：中华医学会
