陈筠；王银全；陈孝平
目的探讨凋亡相关基因bcl-2、bax、p53和c-myc在不同形成时期的增生性瘢痕中的基因转录变化.方法提取16例不同发生时期的增生性瘢痕和8例正常皮肤的总RNA后,分离mRNA,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测bcl-2、bax、p53和c-myc基因在不同组织中的表达.结果在增殖期的瘢痕中,凋亡促进基因bax、c-myc和p53的表达量分别是正常皮肤的(62.8±14.7)%、(78.0±17.0)%和(49.8±4.3)%,基因表达明显降低(P<0.05),而在成熟期的瘢痕中,这3种基因的表达量都明显高于增殖期的瘢痕,恢复到正常皮肤水平.在正常皮肤中,bcl-2基因表达水平较低,而在增殖期和成熟期的增生性瘢痕中表达量都显著升高(P<0.05).结论 bax、c-myc和p53基因表达降低,bcl-2基因表达增强可能是瘢痕中细胞凋亡减少,形成增生性瘢痕的机制之一,而bax、c-myc和p53基因表达增强可能与瘢痕达到成熟状态有关.
作者：陈伟；付小兵；王海滨；周岗；韩冰；李海红；孙同柱；盛志勇 刊期： 2005年第02期
目的研究胰高血糖素样肽-2(GLP-2)对短肠大鼠残留小肠代偿的影响及机制.方法 75%小肠切除大鼠随机分成空白(SB)组、生长激素(GH)组和GLP-2组.术后6 d行残留回肠黏膜形态学检测、细胞增殖核心抗原(PCNA)测定及原位末端标记(INST法)染色.结果 GLP-2组回肠黏膜形态学指标显著高于SB组(P＜0.05),并且其黏膜厚度显著高于GH组(P＜0.05).GLP-2组PCNA指数显著高于SB组(0.51±0.09与0.40±0.06比较,P＜0.05),但和GH组比较差异无统计学意义(P>0.05).GLP-2组细胞凋亡显著低于SB组(67.7±10.1与81.7±12.9比较,P＜0.05),但和GH组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 GLP-2能刺激小肠黏膜上皮增生,抑制凋亡,显著促进短肠大鼠残留小肠黏膜的形态代偿.
作者：陈吉；李杭；吴国豪 刊期： 2005年第02期
目的研究门静脉高压症时肠系膜血管热休克蛋白90(HSP90)的表达,并对其表达定位.方法 SD大鼠分为实验组和假手术组,用门静脉部分结扎法制作门静脉高压模型.4周后取肠系膜血管组织,采用免疫组织化学技术、免疫印迹(Western blot)、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法在蛋白及mRNA水平测定门静脉高压大鼠肠系膜血管HSP90的表达.结果门静脉高压大鼠肠系膜血管HSP90的表达增强,且保持在蛋白及mRNA水平上的一致.HSP90不仅在血管内膜而且还在血管平滑肌层有明显的表达.结论 HSP90可能参与了门静脉高压内脏血管病变的形成,从而为进一步揭示门静脉高压内脏血管病变的发病机制提供了新的思路.
作者：艾建华；杨镇 刊期： 2005年第02期
目的探讨三氧化二砷(As2O3)对大鼠肝癌肝移植后肿瘤复发的预防作用.方法选用雄性Wistar大鼠以质量分数为0.05% 2-乙酰氨基芴的颗粒饲料饲喂12周,第21周剖腹取肝脏结节进行组织学检查确认建立大鼠原发性肝癌模型,按不同的组别进行原位肝移植.结果 A组大鼠术后平均生存(19.83±2.89) d.B组大鼠术后平均生存(75.40±5.76) d.C组大鼠术后平均生存(88.00±5.60) d.B组大鼠术后生存时间和A组大鼠术后生存时间比较,差异有统计学意义(P＜0.001),C组大鼠术后生存时间和实验B组大鼠术后生存时间比较,差异有统计学意义(P＜0.001).结论大鼠原位肝移植对大鼠原发性肝癌具有治疗作用.As2O3对大鼠肝癌肝移植后减少肿瘤复发具有一定的预防作用.
作者：曾兆林；韩德恩；韩丽姝；汪鹰扬；王志东；张新宇 刊期： 2005年第02期
目的观察生长抑素(SST)对Bel7402肝癌细胞株增殖侵袭黏附能力和对裸鼠种植瘤生长的影响,并对SST抑瘤机制进行一定的探索.方法以噻唑蓝(MTT)法测量SST对Bel7402细胞增殖的影响,光镜下观察细胞形态的变化.以细胞迁移实验和黏附实验观察细胞侵袭和黏附能力的影响.以流式细胞仪检测细胞表面肝细胞生长因子受体Cmet和生长抑素受体2(SSTR2)的表达和细胞周期的影响.以裸鼠人肝癌转移模型为材料,观察SST对种植瘤生长的影响,以免疫组织化学观察SSTR2和Cmet的表达影响.结果 SST处理的7402细胞增殖能力和细胞形态无明显改变,细胞的侵袭和黏附能力明显下降,细胞生长静止期(G0/G1)的比例显著增加,但未见凋亡峰,细胞表面Cmet的表达明显受抑,但SSTR2的表达增加,裸鼠人肝癌种植瘤在SST治疗后生长受到明显抑制,免疫组织化学也可见种植瘤内SSTR2 表达增加,而Cmet的表达明显受抑制.结论 SST通过与SSTR起作用抑制肝癌的生长,减少Cmet的表达是SST起作用的重要方式.此外,长期的SST治疗可以上调SSTR2的表达,加大SST抑制肝癌的效果,但短期的处理反而诱导SSTR2的脱敏和抑瘤效果下降.
作者：梁力建；华赟鹏；赖佳明；梁惠珍；李绍强；黄洁夫 刊期： 2005年第02期
目的探讨提取人脾脏巨噬细胞总RNA的方法并测算其产率.方法收集5例门静脉高压症脾亢患者的手术切除脾脏,经贴壁培养法分离纯化出巨噬细胞(Mφ)后,采用TRIzol试剂一步法提取5例脾脏Mφ样本的总RNA.分光光度法和琼脂糖凝胶电泳检测总RNA的产量和质量.后计算出每108个Mφ总RNA的产率.结果 5例样本Mφ总RNA的A260 nm与A280 nm比值平均为1.83±0.13,提示总RNA纯度较高,电泳结果提示总RNA无降解.每108个Mφ平均可抽提(41.58±23.13) μg总RNA.结论采用TRIzol试剂一步法提取脾脏Mφ总RNA是可行的,收获的人脾脏Mφ总RNA纯度高、完整性好、量较多,可满足后续实验要求.
作者：闫峰；李宗芳；苏清华；马双余；曹罡；张澍 刊期： 2005年第02期
目的探讨LRIG1基因抑制恶性胶质瘤细胞侵袭、浸润的分子机制.方法应用脂质体介导的基因转染技术将p3XFLAG-CMV9-LRIG1质粒转染入人神经胶质瘤H4细胞系,通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot方法检测转染前、后LRIG1和表皮生长因子受体(EGFR)基因mRNA和蛋白表达水平,用Boyden小室体外侵袭试验观察H4细胞通过人工重组基底膜能力的变化.结果转染p3XFLAG-CMV9-LRIG1质粒后,H4神经胶质瘤细胞的LRIG1 mRNA和蛋白表达均较对照组明显增强(P<0.01);而EGFR mRNA和蛋白表达均较对照组明显减弱(P<0.01).LRIG1质粒转染的H4细胞穿过人工重组基底膜的相对百分率为(13.3±1.8)%,明显低于未处理组和转染空载体组的穿膜细胞百分率(24.7±1.8)%,(24.0±1.5)%(P=0.008和P=0.010).结论 EGFR的过表达促进了胶质瘤的侵袭、浸润;LRIG1通过抑制EGFR逆转了恶性胶质瘤侵袭、浸润.
作者：叶飞；郭东升；易伟；牛洪泉；舒凯；万锋；卢运萍；雷霆 刊期： 2005年第02期
目的观察神经生长因子(NGF)对6-羟基多巴胺(6-OHDA)引起的大鼠去交感神经保护作用.方法经腹腔为大鼠注射6-OHDA(80 mg/kg体重),制作化学性交感神经末梢损伤模型后,立即肌肉注射NGF 200～1 600 BU/kg体重×10 d,每天1次.采用高效液相色谱-电化学检测器(HPLC-ECD)法测定两侧颌下腺中去甲肾上腺素(NE)的含量.结果 6-OHDA可使大鼠颌下腺中的NE的含量下降36.6%(P<0.05),NGF可防止神经损伤大鼠颌下腺NE的含量下降,并有较好的剂量-效应关系,400 BU/kg体重即可使NE维持至正常水平.结论 NGF肌肉注射对6-OHDA引起的大鼠化学性交感神经末梢损伤有良好的保护作用.
作者：刘振旗；孙辉生；高成杰；贾锐；杨静 刊期： 2005年第02期
目的将生长抑素受体2(SST2R)基因转染至胰腺癌细胞株PC-3细胞,探索奥曲肽对转染SST2R基因前后PC-3细胞凋亡抑制因子(Survivin)表达量的调节作用.方法采用脂质体将SST2R基因转染至PC-3细胞,免疫细胞化学检测其转染效果.逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法半定量检测不同浓度(0.10、0.20、0.40、0.80 mg/L)奥曲肽对PC-3细胞转染SST2R基因前后Survivin表达量的调节.结果转染SST2R基因PC-3细胞Survivin的表达量在不同浓度奥曲肽(0.20、0.40、0.80 mg/L)作用下分别为0.552±0.059、0.465±0.050、0.396±0.068,未转染SST2R基因PC-3细胞Survivin的表达量在不同浓度奥曲肽(0.20、0.40、0.80 mg/L)作用下分别为0.745±0.093、0.667±0.066、0.637±0.080,相同剂量奥曲肽对转染组PC-3细胞Survivin表达量的下调作用更为明显(P<0.05).结论生长抑素用于PC-3细胞其效果不佳可能与其SST2R下调有关,转染SST2R基因后可增加胰腺癌细胞SST2R的表达量,同时下调了Survivin表达量,它可增强生长抑素对胰腺癌细胞株杀伤力.
作者：刘正人；吴高松；秦仁义；邹声泉；裘法祖 刊期： 2005年第02期
目的研究化疗药物阿霉素(ADM)对肿瘤细胞Fas凋亡基因的调控,并探讨其致凋亡机制.方法逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)比较经ADM处理前后肿瘤细胞胃癌ADM细胞系SGC-7901、MGC-803和肺癌细胞系A-549的Fas mRNA的表达水平,同时观察其对抗Fas抗体的敏感性,并用流式细胞术检测肿瘤细胞凋亡率.结果所有3种肿瘤细胞在ADM作用下Fas表达水平显著增强,差异有统计学意义(P<0.05),同时肿瘤细胞凋亡率明显增加(凋亡率分别为40.3%、43.6%、54.4%).ADM能增加肿瘤细胞对Fas抗体的敏感性.结论 ADM上调肿瘤细胞Fas的表达,ADM与Fas抗体联合应用将增强肿瘤细胞的凋亡率,有一定的抗肿瘤临床应用前景.
作者：郑世营；张晓膺；赵军；葛锦峰；王志刚 刊期： 2005年第02期
目的探讨断流术与分流术对门静脉高压性胃病(PHG)的影响.方法实验分对照组9例、断流术组14例和分流术组12例,采用术前及术后3个月胃镜检查,原位末端标记(TUNEL)染色测凋亡指数(AI)和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法测定Caspase-3 mRNA表达量.结果对照组AI值为(2.31±0.11)%,Caspase-3 mRNA表达量为0.51±0.03,其他组与对照组比较,AI值增加差异有统计学意义(P＜0.01),Caspase-3 mRNA表达量显著增加(P＜0.05).断流术后AI值由术前的(12.83±1.54)%增加到(16.24±1.68)%(P＜0.05),PHG患者2例由轻转重,PHG病变程度加重(P＜0.05);相反,分流术后AI值从术前的(12.18±1.32)%回降至(8.58±0.72)%(P＜0.05),术后PHG患者1例由重转轻,4例痊愈,PHG病变程度得到缓解(P＜0.05).Caspcse-3 mRNA表达量与AI值有类似改变两者间呈正相关(r=0.86,P＜0.05).结论 PHG胃黏膜细胞凋亡增加,断流术后凋亡加剧,PHG病变程度加重;分流术后凋亡改善,PHG病变程度缓解.
作者：段进东；练涛峰；黄华容；张育明；杨清绪 刊期： 2005年第02期
目的评价转染血管内皮生长因子(VEGF)基因的神经干细胞脑内移植后在宿主缺血区的神经血管保护作用.方法建立大鼠暂时性大脑中动脉梗死模型(tMCAO)并将其随机分成:(1)对照组;(2)细胞悬液磷酸盐缓冲液(PBS)移植组;(3)神经干细胞移植组;(4)转基因神经干细胞移植组,每组10例.立体定向法将BrdU标记的转基因神经干细胞移植到tMCAO大鼠的纹状体缺血半暗区.移植后2～12周进行神经损害严重程度评分(NSS)并与其他3组比较.移植后12周,免疫荧光染色观察转基因神经干细胞在脑内的分化、迁徙情况;免疫组织化学染色观察各组移植区毛细血管结构,并计每例动物以移植点为中心的一个100倍视野下内皮细胞数.结果移植后2～12周(4)组NSS评分均数分别为5.8、5.0、4.6、4.0、4.0、3.8,均低于其他3组.其中第8周显著低于(1)、(2)组(P=0.008),第12周显著低于(1)、(2)、(3)组(P=0.000).移植后12周,转基因神经干细胞在宿主脑内存活、迁徙,部分分化成神经元.转基因神经干细胞移植组移植区毛细血管结构相对完整,血管内皮细胞数显著多于其他3组.结论转染VEGF基因的神经干细胞移植后对宿主局部血管和神经结构具有保护作用.
作者：朱巍；毛颖；周良辅；汪洋；江永；朱剑虹 刊期： 2005年第02期
目的制备单抗BDI-1导向的三氧化二砷免疫蛋白微球[As2O3-(BSA-NS)-BDI-1]并检测其特异性结合膀胱肿瘤细胞的活性.方法通过蛋白交联固化及N-羟基琥珀酰亚胺基-3-(2-吡基二硫)-丙酸脂(SPDP)交联的方法制备蛋白免疫微球.还原电泳、光镜和电镜的方法鉴定As2O3免疫微球的共价连接与活性.吖啶橙染色检测肿瘤细胞凋亡.结果还原电泳可见免疫微球被还原后在远端形成两条蛋白条带.光镜下可见蛋白微球在肿瘤细胞周围并随细胞移动.电镜下可见蛋白微球与肿瘤细胞紧密连接且形态完整.吖啶橙染色可见免疫微球处理的膀胱肿瘤细胞表现出凋亡特征.结论制备的As2O3-(BSA-NS)-BDI-1由共价键连接且能特异性的结合膀胱肿瘤细胞BIU-87而发挥诱导凋亡的作用.
作者：周洁；曾甫清；谢蜀生 刊期： 2005年第02期
本实验旨在观察超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)对骨肉瘤荷瘤鼠免疫功能的影响及抑瘤效应,并分析其作用机制,以期为成骨肉瘤的免疫治疗寻求一种新方法.
作者：刘明；陈庄洪；范清宇；郝新保 刊期： 2005年第02期
目的探索从心室肌组织中纯化心肌细胞的方法.方法用胰蛋白酶消化大鼠乳鼠心室肌组织,获得细胞悬液经Percoll分离,通过光镜和免疫组织化学方法对获得的每层细胞进行分析,采用免疫组织化学和激光共聚焦方法鉴定心肌细胞.结果 Percoll分离后,细胞分为6层,每层细胞培养3 d时,通过光镜和免疫组织化学观察发现心肌细胞富集在第4、5两层.富集的心肌细胞第3天形成细胞簇或细胞单层,收缩明显而有力.心肌细胞可维持良好的形态和活力达2～3个月.结论使用Percoll分离法可以从大鼠乳鼠心室肌组织中纯化心肌细胞.
作者：鄂玲玲；陈新；王常勇；赵云山；郭希民；段翠密；董灵芝；江红；李晶 刊期： 2005年第02期
目的改进鼠肌卫星细胞体外培养方法,得到更高纯度的肌卫星细胞.方法采用成年Wistar大鼠,将两步消化法加以改进,采用Ficoll分离和差速贴壁法两步纯化得到更高纯度的肌卫星细胞.所得细胞采用免疫组织化学方法加以鉴定.结果此方法肌卫星细胞纯化率可达到98%.细胞增殖快,生长良好.结论本实验成功建立了卫星细胞纯化方法,适用于心外科及相关科室开展细胞移植和基因治疗方面的研究.
作者：夏家红；谢艾妮；徐磊；张凯伦 刊期： 2005年第02期
目的选择和克隆人前列腺癌(PCa)和前列腺增生(BPH)的相关基因.方法根据当前前列腺癌与前列腺增生临床常规使用的肿瘤标记物和国内外基因表达谱的研究成果,选定了7个PCa上调表达,2个PCa下调表达基因和1个内参基因,采用聚合酶链反应 (PCR)从正常人外周血DNA中扩增出上述10个基因的探针片段,并克隆至pGEM-T质粒中.重组质粒经PCR鉴定、EcoR I单酶切或PSt I和Nco I双酶切鉴定,产物电泳检测.结果检测结果表明已经成功地将10个基因的探针序列克隆入pGEM-T质粒载体中.结论前列腺癌和前列腺增生相关基因质粒构建与探针制备为临床前列腺癌的血清学诊断及与前列腺增生症的鉴别提供了实验基础.
作者：钟惟德；何慧婵；刘文华；江福能；戴奇山；李俊玲；彭志强；谢克基；魏鸿蔼；刘良式 刊期： 2005年第02期
目的探讨热缺血对移植体存活的影响,寻求获取供体气管的可靠时间.方法选用杂种犬进行同种异体气管移植.供犬处死后经过不同热缺血时间取出气管,TUNEL法检测软骨细胞凋亡.各移植体植入受犬的气管原位及腹腔大网膜内,4周后处死取材,行病理学检查,并比较各组移植体软骨细胞存活率.结果随着热缺血时间的延长,移植体软骨细胞凋亡数逐渐增加,移植后软骨结构破坏加重.并且相同热缺血期移植体,异位移植较原位移植结构保持好.结论气管移植体对热缺血有较好的耐受,但是长时间的热缺血仍会给气管移植体带来损害.
作者：李小飞；张涛；汪健；程庆书 刊期： 2005年第02期
目的观察大鼠局灶性脑缺血/再灌注后脑梗死体积的变化和葡萄糖转运体1(GLUT1)在缺血半影区的表达情况以及人参皂甙Rb1对其的影响.方法雄性成年SD大鼠42只,随机分成3组:假手术组、对照组和人参皂甙Rb1干预组.用线栓法复制大脑中动脉阻塞(MACO)模型,在脑缺血1 h再灌注5 h时取材,用氯化三苯基四唑氮(TTC)染色后,全自动图像分析系统进行图像分析脑梗死体积比;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定GLUT1 mRNA水平的变化;用免疫组织化学半定量测定GLUT1蛋白水平的变化.结果假手术组、对照组和人参皂甙Rb1干预组的梗死体积百分比分别为0、(0.04±0.01)%和(0.02±0.01)%;3组半影区的GLUT1 mRNA水平分别是(0.23±0.14)、(0.55±0.04)和(0.79±0.19);蛋白表达的PU值分别为(5.1±1.2)、(13.1±1.7)和(19.0±1.9).结论人参皂甙Rb1明显缩小缺血再灌注损伤后脑梗死的体积,Rb1通过上调半影区GLUT1表达以维持脑组织的能量供给可能是其发挥脑保护作用的机制之一.
作者：李方成；陶宗玉；刘安民；李军亮；吴中华；林吉惠 刊期： 2005年第02期
目的探讨L-精氨酸(L-Arg)对阻塞性黄疸大鼠肝细胞线粒体内Ca2+保护作用及其机制.方法将72只SD雄性大鼠随机分为对照组(SO组),胆总管结扎+生理盐水组(BDL+NS组),胆总管结扎+L-Arg(BDL+L-Arg组).分别于术后7、14和21 d检测肝细胞线粒体内MDA、SOD、Ca2+ 含量.结果 BDL+NS组各时间点肝细胞线粒体内Ca2+、MDA含量明显升高,而SOD含量却明显降低.胆总管结扎7、14 d时,肝细胞线粒体内Ca2+、MDA含量BDL+L-Arg组比BDL+NS组低,差异有统计学意义(P<0.01);21 d时,肝细胞线粒体内Ca2+、MDA含量BDL+NS组和BDL+L-Arg中都更进一步升高,但两组比较差异无统计学意义(P>0.05).胆总管结扎7 d时,肝细胞线粒体内SOD含量BDL+L-Arg组比BDL+NS组高(P<0.05);14、21 d时,两组肝细胞线粒体内SOD含量都进一步下降,但差异无统计学意义(P>0.05).结论 L-Arg在阻塞性黄疸早、中期有保护线粒体作用,减少Ca2+内流,不引起钙超载,减轻了阻黄时肝的损伤.
作者：林木生；宫晓光；包仕廷；缪辉来 刊期： 2005年第02期
中华实验外科杂志
主管:中国科学技术协会
主办：中华医学会
