周洁；曾甫清；谢蜀生
目的探讨基因重组可溶性补体受体I型(sCR1)对大鼠急性脊髓损伤组织补体固有成分C9及补体调节因子Clusterin表达的影响.方法采用改良Allen重物打击法制成SD大鼠急性脊髓损伤模型,观察sCR1组与生理盐水(NS)组在伤后12 h、1、3、7、14 d时间点脊髓损伤组织中C9和Clusterin表达的部位及时程,并采用斜板实验评定两组大鼠的下肢运动功能,比较组间差异.结果 sCR1组及NS组在伤后各个时间点脊髓损伤组织中C9、Clusterin表达增强,并存在动态变化过程.sCR1组在伤后各个时间点C9表达均明显轻于NS组(P<0.01);sCR1组在伤后12 h、1、3 d时间点Clusterin表达明显轻于NS组(分别为P<0.01、P<0.01、P<0.05),伤后7、14 d两组间差异无统计学意义.sCR1组在伤后3、7、14 d时间点大鼠下肢运动功能明显优于NS组(分别为P<0.05、P<0.01、P<0.01).结论基因重组sCR1可显著抑制大鼠急性脊髓损伤组织C9和Clusterin的表达,可通过抑制补体系统激活机制减轻继发性脊髓损伤.
作者：李良满；朱悦；范广宇 刊期： 2005年第02期
目的研究抗凋亡基因bag-1和bcl-2在结肠癌组织中的表达及其意义,并探讨两者间的关系.方法应用免疫组织化学链霉亲合素-生物素-过氧化物酶复合物法(SABC法)对64例结肠癌组织及10例正常结肠组织中bag-1和bcl-2基因的表达进行检测.结果 bag-1和bcl-2在结肠癌中的表达与结肠癌病理类型、肿瘤直径、浸润深度及有无淋巴结转移无关,但bag-1与病理分级、远处转移、Dukes分期及预后密切相关(P<0.05),而bcl-2与这几项临床病理因素无明显相关性(P>0.05);bag-1和bcl-2在结肠癌的发生发展过程中呈正相关(r=0.475). 结论结肠癌组织中有不同水平bag-1和bcl-2蛋白的高表达,它们可作为结肠癌早期筛选的一项指标,并对疾病的预后有着重要意义.
作者：王国斌；孙念峰；黄庆先 刊期： 2005年第02期
目的研究DNA拓扑异构酶Ⅰ抑制剂喜树碱(CPT)诱导人膀胱癌细胞凋亡的作用.方法体外培养的膀胱癌RT4和MGH细胞用CPT处理,用FACScan流式细胞仪分析细胞凋亡的发生及变化,用Western blotting的方法检测了CPT处理不同时间段,bcl-2与bax表达的变化,以及天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)和多聚腺苷二磷酸核糖聚合物酶(PARP)的活性的改变.结果 CPT处理膀胱癌细胞24 h后,细胞凋亡率明显上升,且CPT诱导的凋亡呈时间依赖性和剂量依赖性.CPT诱导膀胱癌细胞RT4和MGH后均未见bcl-2和bax表达水平的改变,但是可以观察到凋亡执行蛋白Caspase-3和PARP的激活.结论 CPT能够诱导膀胱癌细胞RT4和MGH发生凋亡,其抑制膀胱癌细胞的作用可能与肿瘤细胞发生凋亡有关.
作者：叶章群；余虓；杨为民 刊期： 2005年第02期
目的制备单抗BDI-1导向的三氧化二砷免疫蛋白微球[As2O3-(BSA-NS)-BDI-1]并检测其特异性结合膀胱肿瘤细胞的活性.方法通过蛋白交联固化及N-羟基琥珀酰亚胺基-3-(2-吡基二硫)-丙酸脂(SPDP)交联的方法制备蛋白免疫微球.还原电泳、光镜和电镜的方法鉴定As2O3免疫微球的共价连接与活性.吖啶橙染色检测肿瘤细胞凋亡.结果还原电泳可见免疫微球被还原后在远端形成两条蛋白条带.光镜下可见蛋白微球在肿瘤细胞周围并随细胞移动.电镜下可见蛋白微球与肿瘤细胞紧密连接且形态完整.吖啶橙染色可见免疫微球处理的膀胱肿瘤细胞表现出凋亡特征.结论制备的As2O3-(BSA-NS)-BDI-1由共价键连接且能特异性的结合膀胱肿瘤细胞BIU-87而发挥诱导凋亡的作用.
作者：周洁；曾甫清；谢蜀生 刊期： 2005年第02期
目的探讨Smac基因的表达对于丝裂霉素(MMC)诱导膀胱癌细胞凋亡的影响.方法脂质体介导Smac基因转染膀胱癌T24细胞3 d后,用低剂量丝裂霉素诱导凋亡启动,噻唑蓝(MTT)比色分析检测癌细胞生长活性,吖啶橙-溴化乙锭荧光染色法及流式细胞术法检测细胞凋亡;免疫组织化学法和逆转录聚合酶链反应检测Smac基因的表达.结果 T24细胞在低剂量丝裂霉素的诱导下发生凋亡,两种方法检测细胞凋亡率,用0.05 g/L丝裂霉素处理的T24细胞凋亡率分别为20.50%和18.84%,而经过转染Smac后用0.05 g/L丝裂霉素处理的T24细胞凋亡率分别为36.40%和33.52%,差异有统计学意义(P<0.05).结论促凋亡基因Smac在膀胱癌细胞中的活化表达可以明显增强细胞在刺激信号下的凋亡.
作者：汪良；曾甫清；郑丽端；陈方敏；刘迎 刊期： 2005年第02期
目的以大鼠迟发性脑血管痉挛模型为基础研究诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)在迟发性血管痉挛发展中的作用.方法 32只雄性SD大鼠随机分为实验组和对照组,实验组枕大池二次注血诱导迟发性脑血管痉挛,对照组枕大池注射生理盐水.第8天行脑血管造影,枕大池抽取脑脊液测一氧化氮(NO)浓度.逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法和免疫组织化学法测定并评价iNOS mRNA和蛋白质在基底动脉、大脑中动脉和皮质中的表达.结果颅内动脉血管减影提示对照组颈内动脉颅内段、大脑中动脉(MCA)明显变细,大脑中动脉中段直径(MD)与镫骨动脉中段直径(SD)之比衡量大脑中动脉的管径显示实验组MCA管径较对照组MCA管径减少30%.对照组脑脊液中NO浓度为(11.70±2.62) μmol/L,实验组脑脊液中NO的浓度为(55.67±12.84) μmol/L.iNOS mRNA和蛋白质表达于基底动脉、大脑中动脉和皮质,其中基底动脉表达强.结论 iNOS作为迟发性脑血管痉挛发展中的关键因素参与血管壁的迟发性损伤.
作者：吴惺；陈彦克；马廉亭；袁先厚 刊期： 2005年第02期
目的建立临床成人骨髓基质干细胞(MSCs)体外培养、定向诱导分化为软骨细胞的途径.方法抽取成人骨髓,Percoll密度梯度离心法进行体外培养,贴壁细胞传代,取第3代细胞在培养基中添加软骨分化诱导剂地塞米松、维生素C和不同剂量转化生长因子-β(TGF-β),培养16 d后,在倒置显微镜观察细胞形态,甲苯胺蓝染色蛋白多糖,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫细胞化学(SABC法)检测Ⅱ型胶原表达,诱导后MSCs与新型材料聚乳酸和羟基乙醇共聚物(PLGA)复合.结果 Percoll密度梯度离心法培养可获得均一的MSCs;5、10 ng TGF-β诱导分化的MSCs生长迅速,呈典型的软骨细胞形态,甲苯胺蓝染色阳性,Ⅱ型胶原表达阳性,MSCs对材料PLGA黏附力强.结论可以从成人骨髓中培养出MSCs,并可定向诱导分化为软骨细胞,5～10 ng TGF-β为佳诱导剂量,成人MSCs可用作临床自体软骨组织工程种子细胞.
作者：滕勇；胡蕴玉；王臻；李旭升；白建萍；彭磊；王军；吕荣 刊期： 2005年第02期
目的将生长抑素受体2(SST2R)基因转染至胰腺癌细胞株PC-3细胞,探索奥曲肽对转染SST2R基因前后PC-3细胞凋亡抑制因子(Survivin)表达量的调节作用.方法采用脂质体将SST2R基因转染至PC-3细胞,免疫细胞化学检测其转染效果.逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法半定量检测不同浓度(0.10、0.20、0.40、0.80 mg/L)奥曲肽对PC-3细胞转染SST2R基因前后Survivin表达量的调节.结果转染SST2R基因PC-3细胞Survivin的表达量在不同浓度奥曲肽(0.20、0.40、0.80 mg/L)作用下分别为0.552±0.059、0.465±0.050、0.396±0.068,未转染SST2R基因PC-3细胞Survivin的表达量在不同浓度奥曲肽(0.20、0.40、0.80 mg/L)作用下分别为0.745±0.093、0.667±0.066、0.637±0.080,相同剂量奥曲肽对转染组PC-3细胞Survivin表达量的下调作用更为明显(P<0.05).结论生长抑素用于PC-3细胞其效果不佳可能与其SST2R下调有关,转染SST2R基因后可增加胰腺癌细胞SST2R的表达量,同时下调了Survivin表达量,它可增强生长抑素对胰腺癌细胞株杀伤力.
作者：刘正人；吴高松；秦仁义；邹声泉；裘法祖 刊期： 2005年第02期
我们采用光镜和电镜的方法对门静脉高压症患者的内脏血管进行观察,探讨门静脉高压症和内脏高动力循环以及内脏血管病变之间的相互关系,现将结果报道如下.
作者：李涛；杨镇 刊期： 2005年第02期
目的探讨四氢生物蝶呤(BH4)对缺血再灌注心肌的保护作用及对细胞间黏附分子-1(ICAM-1)表达的影响.方法建立Langendorff离体心脏灌注模型,60只Wistar大鼠随机分为实验组(BH4停搏液)和对照组(St.ThomasⅡ液),每组30只.分别于相应的时间点测定两组心脏功能恢复,心肌组织丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、一氧化氮(NO)和一氧化氮合酶(NOS)的含量变化及ICAM-1的表达.结果 BH4能显著提高心脏功能恢复,增强缺血再灌注后NOS的活性,增加NO的产量,抑制ICAM-1的表达并降低MDA的产生(P均<0.05).结论 BH4具有显著的抗心肌缺血再灌注损伤(MIRI)的作用.
作者：王文生；王占明；徐世安；潘丽丽；李强 刊期： 2005年第02期
目的评价转染血管内皮生长因子(VEGF)基因的神经干细胞脑内移植后在宿主缺血区的神经血管保护作用.方法建立大鼠暂时性大脑中动脉梗死模型(tMCAO)并将其随机分成:(1)对照组;(2)细胞悬液磷酸盐缓冲液(PBS)移植组;(3)神经干细胞移植组;(4)转基因神经干细胞移植组,每组10例.立体定向法将BrdU标记的转基因神经干细胞移植到tMCAO大鼠的纹状体缺血半暗区.移植后2～12周进行神经损害严重程度评分(NSS)并与其他3组比较.移植后12周,免疫荧光染色观察转基因神经干细胞在脑内的分化、迁徙情况;免疫组织化学染色观察各组移植区毛细血管结构,并计每例动物以移植点为中心的一个100倍视野下内皮细胞数.结果移植后2～12周(4)组NSS评分均数分别为5.8、5.0、4.6、4.0、4.0、3.8,均低于其他3组.其中第8周显著低于(1)、(2)组(P=0.008),第12周显著低于(1)、(2)、(3)组(P=0.000).移植后12周,转基因神经干细胞在宿主脑内存活、迁徙,部分分化成神经元.转基因神经干细胞移植组移植区毛细血管结构相对完整,血管内皮细胞数显著多于其他3组.结论转染VEGF基因的神经干细胞移植后对宿主局部血管和神经结构具有保护作用.
作者：朱巍；毛颖；周良辅；汪洋；江永；朱剑虹 刊期： 2005年第02期
目的探讨核因子-κB(NF-κB)和诱导性一氧化氮合成酶(iNOS)在大鼠肝脏小移植物缺血预处理中的作用.方法雄性SD大鼠随机分成5组:假手术组(A组);小移植物组(B组);应用二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)的小移植物组(C组);应用缺血预处理(IPC)的小移植物组(D组);应用PDTC+IPC的小移植物组(E组).电泳迁移率改变法(EMSA)检测小移植物植入后5个时间点肝脏组织中NF-κB活性,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测iNOS在肝组织中的表达,检测肝脏脂质过氧化产物丙二醛 (MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)的浓度.结果 A组肝组织中NF-κB的活性很弱.B、C、D、E 4组NF-κB变化趋势相仿,一般在恢复灌注后即活化,峰值出现在3 h(IPC);活化峰值强度B组＞C组＞D组＞E组.再灌注2 h后B、C、D、E组肝组织中iNOS表达水平开始升高,6 h达到峰值,其值B组＞D组＞C组＞E组(P＜0.05),随后逐渐下降;至12 h仍高于对照组的水平.MDA的结果变化和iNOS表达水平变化类似,SOD呈相反变化.结论 NF-κB在大鼠肝脏缺血预处理小移植物中起重要作用.抑制供肝组织中NF-κB的活性可显著降低再灌注早期供肝组织中iNOS表达和氧自由基水平,并有效改善供肝的再灌注损伤.针对NF-κB的靶向治疗可能是供肝保护的一条新途径.
作者：钱建民；张浩；吴晓峰 刊期： 2005年第02期
脊髓损伤以往被认为是不可能治愈的疾病,但是近年来有关脊髓损伤的病理生理的研究加深了对脊髓损伤修复相关因素的认识,细胞生物学和分子生物学的发展为脊髓损伤的治疗提供了新的手段,这些都为脊髓损伤的治疗带来了希望,其中细胞移植和基因治疗是两种有前途的方法,也是目前研究的热门课题和方向.
作者：郑启新；吴永超 刊期： 2005年第02期
目的改进鼠肌卫星细胞体外培养方法,得到更高纯度的肌卫星细胞.方法采用成年Wistar大鼠,将两步消化法加以改进,采用Ficoll分离和差速贴壁法两步纯化得到更高纯度的肌卫星细胞.所得细胞采用免疫组织化学方法加以鉴定.结果此方法肌卫星细胞纯化率可达到98%.细胞增殖快,生长良好.结论本实验成功建立了卫星细胞纯化方法,适用于心外科及相关科室开展细胞移植和基因治疗方面的研究.
作者：夏家红；谢艾妮；徐磊；张凯伦 刊期： 2005年第02期
目的探索从心室肌组织中纯化心肌细胞的方法.方法用胰蛋白酶消化大鼠乳鼠心室肌组织,获得细胞悬液经Percoll分离,通过光镜和免疫组织化学方法对获得的每层细胞进行分析,采用免疫组织化学和激光共聚焦方法鉴定心肌细胞.结果 Percoll分离后,细胞分为6层,每层细胞培养3 d时,通过光镜和免疫组织化学观察发现心肌细胞富集在第4、5两层.富集的心肌细胞第3天形成细胞簇或细胞单层,收缩明显而有力.心肌细胞可维持良好的形态和活力达2～3个月.结论使用Percoll分离法可以从大鼠乳鼠心室肌组织中纯化心肌细胞.
作者：鄂玲玲；陈新；王常勇；赵云山；郭希民；段翠密；董灵芝；江红；李晶 刊期： 2005年第02期
目的研究重组腺病毒表达的人内皮细胞抑制素-血管内皮细胞生长抑制因子151(hENDO-VEGI151)融合蛋白对胃癌的抑制作用.方法构建携带hENDO-VEGI151融合基因的重组腺病毒载体,脂质体介导法包装重组腺病毒Ad IL-3/hENDO-VEGI151.体外检测融合基因的表达及融合蛋白的生物学活性.应用鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)模型及荷人胃癌裸鼠模型,进一步观察融合蛋白对活体血管生成的影响和融合基因治疗活体胃癌的疗效.结果用TCID50法测定携带融合基因的重组腺病毒滴度为4.2×1011TCID50/ml;用聚合酶链反应(PCR)、逆转录(RT)-PCR和免疫组织化学方法证实融合基因可被转导入SGC-7901细胞内并稳定高效地转录和表达;Western blot显示融合蛋白可被分泌到胞外发挥作用;融合蛋白可强烈抑制ECV-304细胞生长及鸡胚绒毛尿囊膜新生血管形成.Ad IL-3/hENDO-VEGI151治疗可强烈抑制裸鼠体内种植瘤生长,明显下调肿瘤微血管密度,促进胃癌细胞凋亡.结论 hENDO-VEGI151是一条新型强效的肿瘤血管生成抑制基因,其表达产物可能通过作用于肿瘤新生血管形成的不同环节强烈抑制新血管生成和肿瘤生长,值得进一步研究.
作者：李喆；方国恩；闻兆章；华积德；曹贵松；毕建威；戚中田；潘卫 刊期： 2005年第02期
目的探讨L-精氨酸(L-Arg)对阻塞性黄疸大鼠肝细胞线粒体内Ca2+保护作用及其机制.方法将72只SD雄性大鼠随机分为对照组(SO组),胆总管结扎+生理盐水组(BDL+NS组),胆总管结扎+L-Arg(BDL+L-Arg组).分别于术后7、14和21 d检测肝细胞线粒体内MDA、SOD、Ca2+ 含量.结果 BDL+NS组各时间点肝细胞线粒体内Ca2+、MDA含量明显升高,而SOD含量却明显降低.胆总管结扎7、14 d时,肝细胞线粒体内Ca2+、MDA含量BDL+L-Arg组比BDL+NS组低,差异有统计学意义(P<0.01);21 d时,肝细胞线粒体内Ca2+、MDA含量BDL+NS组和BDL+L-Arg中都更进一步升高,但两组比较差异无统计学意义(P>0.05).胆总管结扎7 d时,肝细胞线粒体内SOD含量BDL+L-Arg组比BDL+NS组高(P<0.05);14、21 d时,两组肝细胞线粒体内SOD含量都进一步下降,但差异无统计学意义(P>0.05).结论 L-Arg在阻塞性黄疸早、中期有保护线粒体作用,减少Ca2+内流,不引起钙超载,减轻了阻黄时肝的损伤.
作者：林木生；宫晓光；包仕廷；缪辉来 刊期： 2005年第02期
目的探讨甲基丙烯酸缩水甘油酯右旋糖酐(dex-GMA)重组人骨形态发生蛋白(rhBMP -2)凝胶微球 (rhBMP2-dex-HM)对成骨细胞的生物学作用.方法将单纯rhBMP-2(A组)、空白dex-GMA凝胶微球dex-HM(B组)和rhBMP2-dex-HM(C组)加入成骨细胞培养液中,用细胞计数法、噻唑蓝比色法(MTT法)、流式细胞仪观察细胞增殖情况,并检测成骨细胞上清液中骨钙素(BGP)含量.结果培养1～2 d后,3组细胞计数、吸光度(A)值差异无统计学意义(P＞0.05);4～6 d时A、C组细胞计数和A值开始高于B组,但A、C组间差异无统计学意义(P＞0.05);培养6～8 d后,C组明显高于其他组,差异有统计学意义(P<0.01).14 d后,A、B、C 3组细胞数分别为(22.97±0.23)、(13.89±0.57)和(32.46±0.67)×104个细胞/ml,差异有统计学意义(P<0.01).流式细胞仪检测结果显示,培养2 d后,A组的G2/M+S期百分数高;6～8 d后,C组的G2/M+S期百分数高.成骨细胞上清液中BGP含量,C微球组高,其次为A组.结论 rhBMP-2-dex-HM可以较长时间持续释放活性rhBMP-2,作为rhBMP-2的缓释载体,可以明显促进成骨细胞增殖和分化.
作者：陈发明；吴织芬；金岩；杜岩；王国芳 刊期： 2005年第02期
我们以IHC方法检测肝外胆管癌(ECC)中多药耐药基因(MDR1)、多药耐药相关蛋白(MRP)、谷胱甘肽转移酶π(GST-π)、拓扑异构酶-IIa(Top-IIa)和肺癌耐药蛋白(LRP)表达情况,初步说明ECC的可能耐药机制及特点.
作者：陈筠；王银全；陈孝平 刊期： 2005年第02期
目的研究胰高血糖素样肽-2(GLP-2)对短肠大鼠残留小肠代偿的影响及机制.方法 75%小肠切除大鼠随机分成空白(SB)组、生长激素(GH)组和GLP-2组.术后6 d行残留回肠黏膜形态学检测、细胞增殖核心抗原(PCNA)测定及原位末端标记(INST法)染色.结果 GLP-2组回肠黏膜形态学指标显著高于SB组(P＜0.05),并且其黏膜厚度显著高于GH组(P＜0.05).GLP-2组PCNA指数显著高于SB组(0.51±0.09与0.40±0.06比较,P＜0.05),但和GH组比较差异无统计学意义(P>0.05).GLP-2组细胞凋亡显著低于SB组(67.7±10.1与81.7±12.9比较,P＜0.05),但和GH组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 GLP-2能刺激小肠黏膜上皮增生,抑制凋亡,显著促进短肠大鼠残留小肠黏膜的形态代偿.
作者：陈吉；李杭；吴国豪 刊期： 2005年第02期
中华实验外科杂志
主管:中国科学技术协会
主办：中华医学会
