钱建民；张浩；吴晓峰
目的探讨在不同发育阶段胎儿皮肤中成纤维细胞生长因子-10(FGF-10)及其受体Bek基因表达特征及其与皮肤附件形成的关系.方法用病理学技术检测不同发育阶段胎儿皮肤的结构特征,并提取不同胎龄(12～32周)胎儿皮肤的总RNA,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测FGF-10、Bek基因在不同胎龄标本中的表达变化.结果在早期发育的胎儿皮肤中,FGF-10和Bek基因表达较弱,随着胎龄的增长和发育的进展,特别在皮肤附件诱导形成阶段,两种基因表达逐渐增强,在胎儿发育后期,两种基因表达开始减弱.结论 FGF-10与其受体Bek基因的特异表达方式及两者结合后引起的信号激活对皮肤附件的诱导形成和形态发生及皮肤生理功能的维持具有重要意义.
作者：周岗；付小兵；陈伟；李海红；白晓东；雷永红；孙同柱 刊期： 2005年第02期
目的探讨基因重组可溶性补体受体I型(sCR1)对大鼠急性脊髓损伤组织补体固有成分C9及补体调节因子Clusterin表达的影响.方法采用改良Allen重物打击法制成SD大鼠急性脊髓损伤模型,观察sCR1组与生理盐水(NS)组在伤后12 h、1、3、7、14 d时间点脊髓损伤组织中C9和Clusterin表达的部位及时程,并采用斜板实验评定两组大鼠的下肢运动功能,比较组间差异.结果 sCR1组及NS组在伤后各个时间点脊髓损伤组织中C9、Clusterin表达增强,并存在动态变化过程.sCR1组在伤后各个时间点C9表达均明显轻于NS组(P<0.01);sCR1组在伤后12 h、1、3 d时间点Clusterin表达明显轻于NS组(分别为P<0.01、P<0.01、P<0.05),伤后7、14 d两组间差异无统计学意义.sCR1组在伤后3、7、14 d时间点大鼠下肢运动功能明显优于NS组(分别为P<0.05、P<0.01、P<0.01).结论基因重组sCR1可显著抑制大鼠急性脊髓损伤组织C9和Clusterin的表达,可通过抑制补体系统激活机制减轻继发性脊髓损伤.
作者：李良满；朱悦；范广宇 刊期： 2005年第02期
目的探讨LRIG1基因抑制恶性胶质瘤细胞侵袭、浸润的分子机制.方法应用脂质体介导的基因转染技术将p3XFLAG-CMV9-LRIG1质粒转染入人神经胶质瘤H4细胞系,通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot方法检测转染前、后LRIG1和表皮生长因子受体(EGFR)基因mRNA和蛋白表达水平,用Boyden小室体外侵袭试验观察H4细胞通过人工重组基底膜能力的变化.结果转染p3XFLAG-CMV9-LRIG1质粒后,H4神经胶质瘤细胞的LRIG1 mRNA和蛋白表达均较对照组明显增强(P<0.01);而EGFR mRNA和蛋白表达均较对照组明显减弱(P<0.01).LRIG1质粒转染的H4细胞穿过人工重组基底膜的相对百分率为(13.3±1.8)%,明显低于未处理组和转染空载体组的穿膜细胞百分率(24.7±1.8)%,(24.0±1.5)%(P=0.008和P=0.010).结论 EGFR的过表达促进了胶质瘤的侵袭、浸润;LRIG1通过抑制EGFR逆转了恶性胶质瘤侵袭、浸润.
作者：叶飞；郭东升；易伟；牛洪泉；舒凯；万锋；卢运萍；雷霆 刊期： 2005年第02期
目的建立高低不同转移特性人成骨肉瘤MG-63亚克隆细胞系,为研究成骨肉瘤转移机制提供较好的实验模型.方法通过体外培养和裸鼠体内移植,初步分离并建立了2个亚克隆细胞系A1和A2,并利用细胞电泳、细胞增殖、琼脂克隆形成、体外侵袭实验、裸鼠体内异位和原位移植对两者的生物学特性进行比较、分析和鉴定.结果 A1和A2的电泳率、琼脂克隆形成能力、体外侵袭能力、自发性肺转移率分别为(1.08±0.12) μm,(0.64±0.13)μm;21.0±2.3,9.5±2.9;186.0±16.7,84.0±12.6;100.00%,6.67%,A1均明显高于A2,两者的差异有统计学意义(P＜0.01).结论高低不同转移特性的人成骨肉瘤MG-63亚克隆细胞系的建立,能为成骨肉瘤转移机制的研究提供较理想的实验模型.
作者：石晓兵；陈安民；蔡贤华 刊期： 2005年第02期
目的观察神经生长因子(NGF)对6-羟基多巴胺(6-OHDA)引起的大鼠去交感神经保护作用.方法经腹腔为大鼠注射6-OHDA(80 mg/kg体重),制作化学性交感神经末梢损伤模型后,立即肌肉注射NGF 200～1 600 BU/kg体重×10 d,每天1次.采用高效液相色谱-电化学检测器(HPLC-ECD)法测定两侧颌下腺中去甲肾上腺素(NE)的含量.结果 6-OHDA可使大鼠颌下腺中的NE的含量下降36.6%(P<0.05),NGF可防止神经损伤大鼠颌下腺NE的含量下降,并有较好的剂量-效应关系,400 BU/kg体重即可使NE维持至正常水平.结论 NGF肌肉注射对6-OHDA引起的大鼠化学性交感神经末梢损伤有良好的保护作用.
作者：刘振旗；孙辉生；高成杰；贾锐；杨静 刊期： 2005年第02期
目的探讨断流术与分流术对门静脉高压性胃病(PHG)的影响.方法实验分对照组9例、断流术组14例和分流术组12例,采用术前及术后3个月胃镜检查,原位末端标记(TUNEL)染色测凋亡指数(AI)和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法测定Caspase-3 mRNA表达量.结果对照组AI值为(2.31±0.11)%,Caspase-3 mRNA表达量为0.51±0.03,其他组与对照组比较,AI值增加差异有统计学意义(P＜0.01),Caspase-3 mRNA表达量显著增加(P＜0.05).断流术后AI值由术前的(12.83±1.54)%增加到(16.24±1.68)%(P＜0.05),PHG患者2例由轻转重,PHG病变程度加重(P＜0.05);相反,分流术后AI值从术前的(12.18±1.32)%回降至(8.58±0.72)%(P＜0.05),术后PHG患者1例由重转轻,4例痊愈,PHG病变程度得到缓解(P＜0.05).Caspcse-3 mRNA表达量与AI值有类似改变两者间呈正相关(r=0.86,P＜0.05).结论 PHG胃黏膜细胞凋亡增加,断流术后凋亡加剧,PHG病变程度加重;分流术后凋亡改善,PHG病变程度缓解.
作者：段进东；练涛峰；黄华容；张育明；杨清绪 刊期： 2005年第02期
目的探讨甲基丙烯酸缩水甘油酯右旋糖酐(dex-GMA)重组人骨形态发生蛋白(rhBMP -2)凝胶微球 (rhBMP2-dex-HM)对成骨细胞的生物学作用.方法将单纯rhBMP-2(A组)、空白dex-GMA凝胶微球dex-HM(B组)和rhBMP2-dex-HM(C组)加入成骨细胞培养液中,用细胞计数法、噻唑蓝比色法(MTT法)、流式细胞仪观察细胞增殖情况,并检测成骨细胞上清液中骨钙素(BGP)含量.结果培养1～2 d后,3组细胞计数、吸光度(A)值差异无统计学意义(P＞0.05);4～6 d时A、C组细胞计数和A值开始高于B组,但A、C组间差异无统计学意义(P＞0.05);培养6～8 d后,C组明显高于其他组,差异有统计学意义(P<0.01).14 d后,A、B、C 3组细胞数分别为(22.97±0.23)、(13.89±0.57)和(32.46±0.67)×104个细胞/ml,差异有统计学意义(P<0.01).流式细胞仪检测结果显示,培养2 d后,A组的G2/M+S期百分数高;6～8 d后,C组的G2/M+S期百分数高.成骨细胞上清液中BGP含量,C微球组高,其次为A组.结论 rhBMP-2-dex-HM可以较长时间持续释放活性rhBMP-2,作为rhBMP-2的缓释载体,可以明显促进成骨细胞增殖和分化.
作者：陈发明；吴织芬；金岩；杜岩；王国芳 刊期： 2005年第02期
目的观察生长抑素(SST)对Bel7402肝癌细胞株增殖侵袭黏附能力和对裸鼠种植瘤生长的影响,并对SST抑瘤机制进行一定的探索.方法以噻唑蓝(MTT)法测量SST对Bel7402细胞增殖的影响,光镜下观察细胞形态的变化.以细胞迁移实验和黏附实验观察细胞侵袭和黏附能力的影响.以流式细胞仪检测细胞表面肝细胞生长因子受体Cmet和生长抑素受体2(SSTR2)的表达和细胞周期的影响.以裸鼠人肝癌转移模型为材料,观察SST对种植瘤生长的影响,以免疫组织化学观察SSTR2和Cmet的表达影响.结果 SST处理的7402细胞增殖能力和细胞形态无明显改变,细胞的侵袭和黏附能力明显下降,细胞生长静止期(G0/G1)的比例显著增加,但未见凋亡峰,细胞表面Cmet的表达明显受抑,但SSTR2的表达增加,裸鼠人肝癌种植瘤在SST治疗后生长受到明显抑制,免疫组织化学也可见种植瘤内SSTR2 表达增加,而Cmet的表达明显受抑制.结论 SST通过与SSTR起作用抑制肝癌的生长,减少Cmet的表达是SST起作用的重要方式.此外,长期的SST治疗可以上调SSTR2的表达,加大SST抑制肝癌的效果,但短期的处理反而诱导SSTR2的脱敏和抑瘤效果下降.
作者：梁力建；华赟鹏；赖佳明；梁惠珍；李绍强；黄洁夫 刊期： 2005年第02期
目的以大鼠迟发性脑血管痉挛模型为基础研究诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)在迟发性血管痉挛发展中的作用.方法 32只雄性SD大鼠随机分为实验组和对照组,实验组枕大池二次注血诱导迟发性脑血管痉挛,对照组枕大池注射生理盐水.第8天行脑血管造影,枕大池抽取脑脊液测一氧化氮(NO)浓度.逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法和免疫组织化学法测定并评价iNOS mRNA和蛋白质在基底动脉、大脑中动脉和皮质中的表达.结果颅内动脉血管减影提示对照组颈内动脉颅内段、大脑中动脉(MCA)明显变细,大脑中动脉中段直径(MD)与镫骨动脉中段直径(SD)之比衡量大脑中动脉的管径显示实验组MCA管径较对照组MCA管径减少30%.对照组脑脊液中NO浓度为(11.70±2.62) μmol/L,实验组脑脊液中NO的浓度为(55.67±12.84) μmol/L.iNOS mRNA和蛋白质表达于基底动脉、大脑中动脉和皮质,其中基底动脉表达强.结论 iNOS作为迟发性脑血管痉挛发展中的关键因素参与血管壁的迟发性损伤.
作者：吴惺；陈彦克；马廉亭；袁先厚 刊期： 2005年第02期
目的探讨热缺血对移植体存活的影响,寻求获取供体气管的可靠时间.方法选用杂种犬进行同种异体气管移植.供犬处死后经过不同热缺血时间取出气管,TUNEL法检测软骨细胞凋亡.各移植体植入受犬的气管原位及腹腔大网膜内,4周后处死取材,行病理学检查,并比较各组移植体软骨细胞存活率.结果随着热缺血时间的延长,移植体软骨细胞凋亡数逐渐增加,移植后软骨结构破坏加重.并且相同热缺血期移植体,异位移植较原位移植结构保持好.结论气管移植体对热缺血有较好的耐受,但是长时间的热缺血仍会给气管移植体带来损害.
作者：李小飞；张涛；汪健；程庆书 刊期： 2005年第02期
目的研究大鼠骨髓间充质干细胞(BMSC)表达脑源性神经营养因子(BDNF)和神经生长因子(NGF)以及BMSC移植对脊髓损伤的治疗作用.方法取大鼠骨髓培养BMSC并传代,进行CD44、CD45和CD71免疫细胞化学染色鉴定.逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测BMSC中BDNF和NGF mRNA的表达.用NYU方法建立大鼠脊髓损伤模型,将15 000个BMSC注射到损伤脊髓中.1～5周后进行BBB运动功能评分,观察BMSC在脊髓中的迁移,进行NF、GFAP和Gal-C免疫荧光检测.结果 BMSC贴壁生长,免疫细胞染色CD44(+)、CD45(-)和CD71(+),表达BDNF和NGF mRNA.移植BMSC后脊髓损伤的大鼠运动功能改善,5周后BBB评分从对照组的(11.6±1.7)分提高到(15.4±2.2)分.BMSC在脊髓内向头、尾两侧迁移约5 mm,未检测出向神经细胞诱导转化.结论 BMSC表达神经营养因子BDNF和NGF,移植后能促进大鼠脊髓损伤的运动功能恢复.
作者：吴永超；郑启新；谢宗平；王运涛；郝杰；刘晓帆 刊期： 2005年第02期
目的探讨单纯疱疹病毒胸苷激酶/丙氧鸟苷(HSV-TK/GCV)系统对膀胱癌细胞BIU87的杀伤作用及对凋亡基因的影响.方法脂质体将TK基因成功转入BIU87,噻唑蓝(MTT)法、TUNEL法、流式细胞仪(FCM)分别检测GCV对其生长影响及凋亡率和细胞周期变化;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测bcl-2、bax、bak、Caspase-3 mRNA表达变化,比色法测定Caspase-3活性变化.结果作用5 d 1 mg/L GCV能杀死67%的细胞,100 mg/L GCV达到大杀伤率杀死97%的细胞;GCV诱导细胞凋亡,细胞周期阻滞在S和G2期;bcl-2表达降低,bax表达升高,Caspase-3表达及活性升高.结论 HSV-TK/GCV系统可有效杀伤膀胱癌细胞并引起细胞凋亡,细胞周期阻滞、bcl-2和bax表达变化、Caspase-3活化是引起凋亡发生的重要因素.
作者：毛晓鹏；丘少鹏；曹开源；袁广卿；陈显景；徐林 刊期： 2005年第02期
目的探讨凋亡相关基因bcl-2、bax、p53和c-myc在不同形成时期的增生性瘢痕中的基因转录变化.方法提取16例不同发生时期的增生性瘢痕和8例正常皮肤的总RNA后,分离mRNA,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测bcl-2、bax、p53和c-myc基因在不同组织中的表达.结果在增殖期的瘢痕中,凋亡促进基因bax、c-myc和p53的表达量分别是正常皮肤的(62.8±14.7)%、(78.0±17.0)%和(49.8±4.3)%,基因表达明显降低(P<0.05),而在成熟期的瘢痕中,这3种基因的表达量都明显高于增殖期的瘢痕,恢复到正常皮肤水平.在正常皮肤中,bcl-2基因表达水平较低,而在增殖期和成熟期的增生性瘢痕中表达量都显著升高(P<0.05).结论 bax、c-myc和p53基因表达降低,bcl-2基因表达增强可能是瘢痕中细胞凋亡减少,形成增生性瘢痕的机制之一,而bax、c-myc和p53基因表达增强可能与瘢痕达到成熟状态有关.
作者：陈伟；付小兵；王海滨；周岗；韩冰；李海红；孙同柱；盛志勇 刊期： 2005年第02期
目的研究DNA拓扑异构酶Ⅰ抑制剂喜树碱(CPT)诱导人膀胱癌细胞凋亡的作用.方法体外培养的膀胱癌RT4和MGH细胞用CPT处理,用FACScan流式细胞仪分析细胞凋亡的发生及变化,用Western blotting的方法检测了CPT处理不同时间段,bcl-2与bax表达的变化,以及天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶-3(Caspase-3)和多聚腺苷二磷酸核糖聚合物酶(PARP)的活性的改变.结果 CPT处理膀胱癌细胞24 h后,细胞凋亡率明显上升,且CPT诱导的凋亡呈时间依赖性和剂量依赖性.CPT诱导膀胱癌细胞RT4和MGH后均未见bcl-2和bax表达水平的改变,但是可以观察到凋亡执行蛋白Caspase-3和PARP的激活.结论 CPT能够诱导膀胱癌细胞RT4和MGH发生凋亡,其抑制膀胱癌细胞的作用可能与肿瘤细胞发生凋亡有关.
作者：叶章群；余虓；杨为民 刊期： 2005年第02期
甲状腺癌与身体其他部位癌肿相比较,其发病率并不高,约占全身恶性肿瘤的0.2%(男性)～1.0%(女性).随着普遍开展癌瘤普查以及检测手段的改善,其发现率有明显增加的趋势.在国内一些肿瘤医院中,甲状腺癌占头颈部肿瘤的首位.随着分子生物学技术及免疫学技术的迅猛发展和人类对甲状腺癌发病机制认识的不断深入,基因治疗逐渐成为肿瘤生物学治疗中的重要组成部分,在甲状腺癌的治疗中显示出良好的应用价值,并且取得了一定的效果,将日渐成为一项有前景的治疗选择.
作者：张东伟；杨维良 刊期： 2005年第02期
目的研究抗凋亡基因bag-1和bcl-2在结肠癌组织中的表达及其意义,并探讨两者间的关系.方法应用免疫组织化学链霉亲合素-生物素-过氧化物酶复合物法(SABC法)对64例结肠癌组织及10例正常结肠组织中bag-1和bcl-2基因的表达进行检测.结果 bag-1和bcl-2在结肠癌中的表达与结肠癌病理类型、肿瘤直径、浸润深度及有无淋巴结转移无关,但bag-1与病理分级、远处转移、Dukes分期及预后密切相关(P<0.05),而bcl-2与这几项临床病理因素无明显相关性(P>0.05);bag-1和bcl-2在结肠癌的发生发展过程中呈正相关(r=0.475). 结论结肠癌组织中有不同水平bag-1和bcl-2蛋白的高表达,它们可作为结肠癌早期筛选的一项指标,并对疾病的预后有着重要意义.
作者：王国斌；孙念峰；黄庆先 刊期： 2005年第02期
目的改进鼠肌卫星细胞体外培养方法,得到更高纯度的肌卫星细胞.方法采用成年Wistar大鼠,将两步消化法加以改进,采用Ficoll分离和差速贴壁法两步纯化得到更高纯度的肌卫星细胞.所得细胞采用免疫组织化学方法加以鉴定.结果此方法肌卫星细胞纯化率可达到98%.细胞增殖快,生长良好.结论本实验成功建立了卫星细胞纯化方法,适用于心外科及相关科室开展细胞移植和基因治疗方面的研究.
作者：夏家红；谢艾妮；徐磊；张凯伦 刊期： 2005年第02期
目的将生长抑素受体2(SST2R)基因转染至胰腺癌细胞株PC-3细胞,探索奥曲肽对转染SST2R基因前后PC-3细胞凋亡抑制因子(Survivin)表达量的调节作用.方法采用脂质体将SST2R基因转染至PC-3细胞,免疫细胞化学检测其转染效果.逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法半定量检测不同浓度(0.10、0.20、0.40、0.80 mg/L)奥曲肽对PC-3细胞转染SST2R基因前后Survivin表达量的调节.结果转染SST2R基因PC-3细胞Survivin的表达量在不同浓度奥曲肽(0.20、0.40、0.80 mg/L)作用下分别为0.552±0.059、0.465±0.050、0.396±0.068,未转染SST2R基因PC-3细胞Survivin的表达量在不同浓度奥曲肽(0.20、0.40、0.80 mg/L)作用下分别为0.745±0.093、0.667±0.066、0.637±0.080,相同剂量奥曲肽对转染组PC-3细胞Survivin表达量的下调作用更为明显(P<0.05).结论生长抑素用于PC-3细胞其效果不佳可能与其SST2R下调有关,转染SST2R基因后可增加胰腺癌细胞SST2R的表达量,同时下调了Survivin表达量,它可增强生长抑素对胰腺癌细胞株杀伤力.
作者：刘正人；吴高松；秦仁义；邹声泉；裘法祖 刊期： 2005年第02期
脊髓损伤以往被认为是不可能治愈的疾病,但是近年来有关脊髓损伤的病理生理的研究加深了对脊髓损伤修复相关因素的认识,细胞生物学和分子生物学的发展为脊髓损伤的治疗提供了新的手段,这些都为脊髓损伤的治疗带来了希望,其中细胞移植和基因治疗是两种有前途的方法,也是目前研究的热门课题和方向.
作者：郑启新；吴永超 刊期： 2005年第02期
目的评价转染血管内皮生长因子(VEGF)基因的神经干细胞脑内移植后在宿主缺血区的神经血管保护作用.方法建立大鼠暂时性大脑中动脉梗死模型(tMCAO)并将其随机分成:(1)对照组;(2)细胞悬液磷酸盐缓冲液(PBS)移植组;(3)神经干细胞移植组;(4)转基因神经干细胞移植组,每组10例.立体定向法将BrdU标记的转基因神经干细胞移植到tMCAO大鼠的纹状体缺血半暗区.移植后2～12周进行神经损害严重程度评分(NSS)并与其他3组比较.移植后12周,免疫荧光染色观察转基因神经干细胞在脑内的分化、迁徙情况;免疫组织化学染色观察各组移植区毛细血管结构,并计每例动物以移植点为中心的一个100倍视野下内皮细胞数.结果移植后2～12周(4)组NSS评分均数分别为5.8、5.0、4.6、4.0、4.0、3.8,均低于其他3组.其中第8周显著低于(1)、(2)组(P=0.008),第12周显著低于(1)、(2)、(3)组(P=0.000).移植后12周,转基因神经干细胞在宿主脑内存活、迁徙,部分分化成神经元.转基因神经干细胞移植组移植区毛细血管结构相对完整,血管内皮细胞数显著多于其他3组.结论转染VEGF基因的神经干细胞移植后对宿主局部血管和神经结构具有保护作用.
作者：朱巍；毛颖；周良辅；汪洋；江永；朱剑虹 刊期： 2005年第02期
中华实验外科杂志
主管:中国科学技术协会
主办：中华医学会
