段进东；练涛峰；黄华容；张育明；杨清绪
目的研究门静脉高压症时肠系膜血管热休克蛋白90(HSP90)的表达,并对其表达定位.方法 SD大鼠分为实验组和假手术组,用门静脉部分结扎法制作门静脉高压模型.4周后取肠系膜血管组织,采用免疫组织化学技术、免疫印迹(Western blot)、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法在蛋白及mRNA水平测定门静脉高压大鼠肠系膜血管HSP90的表达.结果门静脉高压大鼠肠系膜血管HSP90的表达增强,且保持在蛋白及mRNA水平上的一致.HSP90不仅在血管内膜而且还在血管平滑肌层有明显的表达.结论 HSP90可能参与了门静脉高压内脏血管病变的形成,从而为进一步揭示门静脉高压内脏血管病变的发病机制提供了新的思路.
作者：艾建华；杨镇 刊期： 2005年第02期
目的探讨基因重组可溶性补体受体I型(sCR1)对大鼠急性脊髓损伤组织补体固有成分C9及补体调节因子Clusterin表达的影响.方法采用改良Allen重物打击法制成SD大鼠急性脊髓损伤模型,观察sCR1组与生理盐水(NS)组在伤后12 h、1、3、7、14 d时间点脊髓损伤组织中C9和Clusterin表达的部位及时程,并采用斜板实验评定两组大鼠的下肢运动功能,比较组间差异.结果 sCR1组及NS组在伤后各个时间点脊髓损伤组织中C9、Clusterin表达增强,并存在动态变化过程.sCR1组在伤后各个时间点C9表达均明显轻于NS组(P<0.01);sCR1组在伤后12 h、1、3 d时间点Clusterin表达明显轻于NS组(分别为P<0.01、P<0.01、P<0.05),伤后7、14 d两组间差异无统计学意义.sCR1组在伤后3、7、14 d时间点大鼠下肢运动功能明显优于NS组(分别为P<0.05、P<0.01、P<0.01).结论基因重组sCR1可显著抑制大鼠急性脊髓损伤组织C9和Clusterin的表达,可通过抑制补体系统激活机制减轻继发性脊髓损伤.
作者：李良满；朱悦；范广宇 刊期： 2005年第02期
目的制备单抗BDI-1导向的三氧化二砷免疫蛋白微球[As2O3-(BSA-NS)-BDI-1]并检测其特异性结合膀胱肿瘤细胞的活性.方法通过蛋白交联固化及N-羟基琥珀酰亚胺基-3-(2-吡基二硫)-丙酸脂(SPDP)交联的方法制备蛋白免疫微球.还原电泳、光镜和电镜的方法鉴定As2O3免疫微球的共价连接与活性.吖啶橙染色检测肿瘤细胞凋亡.结果还原电泳可见免疫微球被还原后在远端形成两条蛋白条带.光镜下可见蛋白微球在肿瘤细胞周围并随细胞移动.电镜下可见蛋白微球与肿瘤细胞紧密连接且形态完整.吖啶橙染色可见免疫微球处理的膀胱肿瘤细胞表现出凋亡特征.结论制备的As2O3-(BSA-NS)-BDI-1由共价键连接且能特异性的结合膀胱肿瘤细胞BIU-87而发挥诱导凋亡的作用.
作者：周洁；曾甫清；谢蜀生 刊期： 2005年第02期
目的改进鼠肌卫星细胞体外培养方法,得到更高纯度的肌卫星细胞.方法采用成年Wistar大鼠,将两步消化法加以改进,采用Ficoll分离和差速贴壁法两步纯化得到更高纯度的肌卫星细胞.所得细胞采用免疫组织化学方法加以鉴定.结果此方法肌卫星细胞纯化率可达到98%.细胞增殖快,生长良好.结论本实验成功建立了卫星细胞纯化方法,适用于心外科及相关科室开展细胞移植和基因治疗方面的研究.
作者：夏家红；谢艾妮；徐磊；张凯伦 刊期： 2005年第02期
目的探讨L-精氨酸(L-Arg)对阻塞性黄疸大鼠肝细胞线粒体内Ca2+保护作用及其机制.方法将72只SD雄性大鼠随机分为对照组(SO组),胆总管结扎+生理盐水组(BDL+NS组),胆总管结扎+L-Arg(BDL+L-Arg组).分别于术后7、14和21 d检测肝细胞线粒体内MDA、SOD、Ca2+ 含量.结果 BDL+NS组各时间点肝细胞线粒体内Ca2+、MDA含量明显升高,而SOD含量却明显降低.胆总管结扎7、14 d时,肝细胞线粒体内Ca2+、MDA含量BDL+L-Arg组比BDL+NS组低,差异有统计学意义(P<0.01);21 d时,肝细胞线粒体内Ca2+、MDA含量BDL+NS组和BDL+L-Arg中都更进一步升高,但两组比较差异无统计学意义(P>0.05).胆总管结扎7 d时,肝细胞线粒体内SOD含量BDL+L-Arg组比BDL+NS组高(P<0.05);14、21 d时,两组肝细胞线粒体内SOD含量都进一步下降,但差异无统计学意义(P>0.05).结论 L-Arg在阻塞性黄疸早、中期有保护线粒体作用,减少Ca2+内流,不引起钙超载,减轻了阻黄时肝的损伤.
作者：林木生；宫晓光；包仕廷；缪辉来 刊期： 2005年第02期
目的探讨断流术与分流术对门静脉高压性胃病(PHG)的影响.方法实验分对照组9例、断流术组14例和分流术组12例,采用术前及术后3个月胃镜检查,原位末端标记(TUNEL)染色测凋亡指数(AI)和逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法测定Caspase-3 mRNA表达量.结果对照组AI值为(2.31±0.11)%,Caspase-3 mRNA表达量为0.51±0.03,其他组与对照组比较,AI值增加差异有统计学意义(P＜0.01),Caspase-3 mRNA表达量显著增加(P＜0.05).断流术后AI值由术前的(12.83±1.54)%增加到(16.24±1.68)%(P＜0.05),PHG患者2例由轻转重,PHG病变程度加重(P＜0.05);相反,分流术后AI值从术前的(12.18±1.32)%回降至(8.58±0.72)%(P＜0.05),术后PHG患者1例由重转轻,4例痊愈,PHG病变程度得到缓解(P＜0.05).Caspcse-3 mRNA表达量与AI值有类似改变两者间呈正相关(r=0.86,P＜0.05).结论 PHG胃黏膜细胞凋亡增加,断流术后凋亡加剧,PHG病变程度加重;分流术后凋亡改善,PHG病变程度缓解.
作者：段进东；练涛峰；黄华容；张育明；杨清绪 刊期： 2005年第02期
我们以IHC方法检测肝外胆管癌(ECC)中多药耐药基因(MDR1)、多药耐药相关蛋白(MRP)、谷胱甘肽转移酶π(GST-π)、拓扑异构酶-IIa(Top-IIa)和肺癌耐药蛋白(LRP)表达情况,初步说明ECC的可能耐药机制及特点.
作者：陈筠；王银全；陈孝平 刊期： 2005年第02期
目的研究非渗透性低温保护剂海藻糖联合应用二甲基亚砜(DMSO),用于人类皮肤的低温储存,并与皮库常规应用的二甲基亚砜(DMSO)、丙二醇(Propyleneglycol)、DMEM进行比较,以寻求更佳的皮肤冷冻保护剂.方法将新鲜成人皮肤分为5组,液氮冻存7、14 d后复温,采用病理形态学、酶组织化学、组织代谢等方法,分别对海藻糖/二甲基亚砜、二甲基亚砜/丙二醇、二甲基亚砜/无血清角质细胞培养基(KSFM)、DMEM作为冷冻保护剂保存后的皮肤活力进行比较.结果 0.5 mol/L海藻糖/二甲基亚砜作为保护剂所冷冻的皮肤,复温后其活性明显高于其他保护剂组.结论海藻糖与二甲基亚砜联合应用是较佳的冷冻保护剂,皮库在常规应用保护剂时可以在渗透性保护剂中加入海藻糖.
作者：蔡宏；贾晓明；吴志谷；姚咏明；杨毅；李绍然；陆江阳 刊期： 2005年第02期
关节软骨属于透明软骨,组织代谢活性较低,创伤和手术等所致的软骨损伤或缺损难以自我修复或以纤维软骨、纤维组织所填充替代[1].为了重建软骨表面,恢复关节功能,人们通常采用各种动物,模拟临床实际情况进行研究,并取得了一定的进展.但动物实验结果常常难以重复,或难以应用到临床.这些问题的产生是由于不同物种、不同部位间,关节软骨的厚度,细胞密度,基质成分以及力学特征不同[2].因此只有全面了解人和动物关节软骨的生物学和结构特征,才能制造出更为理想的实验模型[3].
作者：高刚；卫小春 刊期： 2005年第02期
目的探讨热缺血对移植体存活的影响,寻求获取供体气管的可靠时间.方法选用杂种犬进行同种异体气管移植.供犬处死后经过不同热缺血时间取出气管,TUNEL法检测软骨细胞凋亡.各移植体植入受犬的气管原位及腹腔大网膜内,4周后处死取材,行病理学检查,并比较各组移植体软骨细胞存活率.结果随着热缺血时间的延长,移植体软骨细胞凋亡数逐渐增加,移植后软骨结构破坏加重.并且相同热缺血期移植体,异位移植较原位移植结构保持好.结论气管移植体对热缺血有较好的耐受,但是长时间的热缺血仍会给气管移植体带来损害.
作者：李小飞；张涛；汪健；程庆书 刊期： 2005年第02期
我们采用光镜和电镜的方法对门静脉高压症患者的内脏血管进行观察,探讨门静脉高压症和内脏高动力循环以及内脏血管病变之间的相互关系,现将结果报道如下.
作者：李涛；杨镇 刊期： 2005年第02期
目的观察生长抑素(SST)对Bel7402肝癌细胞株增殖侵袭黏附能力和对裸鼠种植瘤生长的影响,并对SST抑瘤机制进行一定的探索.方法以噻唑蓝(MTT)法测量SST对Bel7402细胞增殖的影响,光镜下观察细胞形态的变化.以细胞迁移实验和黏附实验观察细胞侵袭和黏附能力的影响.以流式细胞仪检测细胞表面肝细胞生长因子受体Cmet和生长抑素受体2(SSTR2)的表达和细胞周期的影响.以裸鼠人肝癌转移模型为材料,观察SST对种植瘤生长的影响,以免疫组织化学观察SSTR2和Cmet的表达影响.结果 SST处理的7402细胞增殖能力和细胞形态无明显改变,细胞的侵袭和黏附能力明显下降,细胞生长静止期(G0/G1)的比例显著增加,但未见凋亡峰,细胞表面Cmet的表达明显受抑,但SSTR2的表达增加,裸鼠人肝癌种植瘤在SST治疗后生长受到明显抑制,免疫组织化学也可见种植瘤内SSTR2 表达增加,而Cmet的表达明显受抑制.结论 SST通过与SSTR起作用抑制肝癌的生长,减少Cmet的表达是SST起作用的重要方式.此外,长期的SST治疗可以上调SSTR2的表达,加大SST抑制肝癌的效果,但短期的处理反而诱导SSTR2的脱敏和抑瘤效果下降.
作者：梁力建；华赟鹏；赖佳明；梁惠珍；李绍强；黄洁夫 刊期： 2005年第02期
目的研究抗凋亡基因bag-1和bcl-2在结肠癌组织中的表达及其意义,并探讨两者间的关系.方法应用免疫组织化学链霉亲合素-生物素-过氧化物酶复合物法(SABC法)对64例结肠癌组织及10例正常结肠组织中bag-1和bcl-2基因的表达进行检测.结果 bag-1和bcl-2在结肠癌中的表达与结肠癌病理类型、肿瘤直径、浸润深度及有无淋巴结转移无关,但bag-1与病理分级、远处转移、Dukes分期及预后密切相关(P<0.05),而bcl-2与这几项临床病理因素无明显相关性(P>0.05);bag-1和bcl-2在结肠癌的发生发展过程中呈正相关(r=0.475). 结论结肠癌组织中有不同水平bag-1和bcl-2蛋白的高表达,它们可作为结肠癌早期筛选的一项指标,并对疾病的预后有着重要意义.
作者：王国斌；孙念峰；黄庆先 刊期： 2005年第02期
目的建立临床成人骨髓基质干细胞(MSCs)体外培养、定向诱导分化为软骨细胞的途径.方法抽取成人骨髓,Percoll密度梯度离心法进行体外培养,贴壁细胞传代,取第3代细胞在培养基中添加软骨分化诱导剂地塞米松、维生素C和不同剂量转化生长因子-β(TGF-β),培养16 d后,在倒置显微镜观察细胞形态,甲苯胺蓝染色蛋白多糖,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫细胞化学(SABC法)检测Ⅱ型胶原表达,诱导后MSCs与新型材料聚乳酸和羟基乙醇共聚物(PLGA)复合.结果 Percoll密度梯度离心法培养可获得均一的MSCs;5、10 ng TGF-β诱导分化的MSCs生长迅速,呈典型的软骨细胞形态,甲苯胺蓝染色阳性,Ⅱ型胶原表达阳性,MSCs对材料PLGA黏附力强.结论可以从成人骨髓中培养出MSCs,并可定向诱导分化为软骨细胞,5～10 ng TGF-β为佳诱导剂量,成人MSCs可用作临床自体软骨组织工程种子细胞.
作者：滕勇；胡蕴玉；王臻；李旭升；白建萍；彭磊；王军；吕荣 刊期： 2005年第02期
目的探讨提取人脾脏巨噬细胞总RNA的方法并测算其产率.方法收集5例门静脉高压症脾亢患者的手术切除脾脏,经贴壁培养法分离纯化出巨噬细胞(Mφ)后,采用TRIzol试剂一步法提取5例脾脏Mφ样本的总RNA.分光光度法和琼脂糖凝胶电泳检测总RNA的产量和质量.后计算出每108个Mφ总RNA的产率.结果 5例样本Mφ总RNA的A260 nm与A280 nm比值平均为1.83±0.13,提示总RNA纯度较高,电泳结果提示总RNA无降解.每108个Mφ平均可抽提(41.58±23.13) μg总RNA.结论采用TRIzol试剂一步法提取脾脏Mφ总RNA是可行的,收获的人脾脏Mφ总RNA纯度高、完整性好、量较多,可满足后续实验要求.
作者：闫峰；李宗芳；苏清华；马双余；曹罡；张澍 刊期： 2005年第02期
目的探讨核因子-κB(NF-κB)和诱导性一氧化氮合成酶(iNOS)在大鼠肝脏小移植物缺血预处理中的作用.方法雄性SD大鼠随机分成5组:假手术组(A组);小移植物组(B组);应用二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)的小移植物组(C组);应用缺血预处理(IPC)的小移植物组(D组);应用PDTC+IPC的小移植物组(E组).电泳迁移率改变法(EMSA)检测小移植物植入后5个时间点肝脏组织中NF-κB活性,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测iNOS在肝组织中的表达,检测肝脏脂质过氧化产物丙二醛 (MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)的浓度.结果 A组肝组织中NF-κB的活性很弱.B、C、D、E 4组NF-κB变化趋势相仿,一般在恢复灌注后即活化,峰值出现在3 h(IPC);活化峰值强度B组＞C组＞D组＞E组.再灌注2 h后B、C、D、E组肝组织中iNOS表达水平开始升高,6 h达到峰值,其值B组＞D组＞C组＞E组(P＜0.05),随后逐渐下降;至12 h仍高于对照组的水平.MDA的结果变化和iNOS表达水平变化类似,SOD呈相反变化.结论 NF-κB在大鼠肝脏缺血预处理小移植物中起重要作用.抑制供肝组织中NF-κB的活性可显著降低再灌注早期供肝组织中iNOS表达和氧自由基水平,并有效改善供肝的再灌注损伤.针对NF-κB的靶向治疗可能是供肝保护的一条新途径.
作者：钱建民；张浩；吴晓峰 刊期： 2005年第02期
目的将生长抑素受体2(SST2R)基因转染至胰腺癌细胞株PC-3细胞,探索奥曲肽对转染SST2R基因前后PC-3细胞凋亡抑制因子(Survivin)表达量的调节作用.方法采用脂质体将SST2R基因转染至PC-3细胞,免疫细胞化学检测其转染效果.逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法半定量检测不同浓度(0.10、0.20、0.40、0.80 mg/L)奥曲肽对PC-3细胞转染SST2R基因前后Survivin表达量的调节.结果转染SST2R基因PC-3细胞Survivin的表达量在不同浓度奥曲肽(0.20、0.40、0.80 mg/L)作用下分别为0.552±0.059、0.465±0.050、0.396±0.068,未转染SST2R基因PC-3细胞Survivin的表达量在不同浓度奥曲肽(0.20、0.40、0.80 mg/L)作用下分别为0.745±0.093、0.667±0.066、0.637±0.080,相同剂量奥曲肽对转染组PC-3细胞Survivin表达量的下调作用更为明显(P<0.05).结论生长抑素用于PC-3细胞其效果不佳可能与其SST2R下调有关,转染SST2R基因后可增加胰腺癌细胞SST2R的表达量,同时下调了Survivin表达量,它可增强生长抑素对胰腺癌细胞株杀伤力.
作者：刘正人；吴高松；秦仁义；邹声泉；裘法祖 刊期： 2005年第02期
目的探讨甲基丙烯酸缩水甘油酯右旋糖酐(dex-GMA)重组人骨形态发生蛋白(rhBMP -2)凝胶微球 (rhBMP2-dex-HM)对成骨细胞的生物学作用.方法将单纯rhBMP-2(A组)、空白dex-GMA凝胶微球dex-HM(B组)和rhBMP2-dex-HM(C组)加入成骨细胞培养液中,用细胞计数法、噻唑蓝比色法(MTT法)、流式细胞仪观察细胞增殖情况,并检测成骨细胞上清液中骨钙素(BGP)含量.结果培养1～2 d后,3组细胞计数、吸光度(A)值差异无统计学意义(P＞0.05);4～6 d时A、C组细胞计数和A值开始高于B组,但A、C组间差异无统计学意义(P＞0.05);培养6～8 d后,C组明显高于其他组,差异有统计学意义(P<0.01).14 d后,A、B、C 3组细胞数分别为(22.97±0.23)、(13.89±0.57)和(32.46±0.67)×104个细胞/ml,差异有统计学意义(P<0.01).流式细胞仪检测结果显示,培养2 d后,A组的G2/M+S期百分数高;6～8 d后,C组的G2/M+S期百分数高.成骨细胞上清液中BGP含量,C微球组高,其次为A组.结论 rhBMP-2-dex-HM可以较长时间持续释放活性rhBMP-2,作为rhBMP-2的缓释载体,可以明显促进成骨细胞增殖和分化.
作者：陈发明；吴织芬；金岩；杜岩；王国芳 刊期： 2005年第02期
目的建立高低不同转移特性人成骨肉瘤MG-63亚克隆细胞系,为研究成骨肉瘤转移机制提供较好的实验模型.方法通过体外培养和裸鼠体内移植,初步分离并建立了2个亚克隆细胞系A1和A2,并利用细胞电泳、细胞增殖、琼脂克隆形成、体外侵袭实验、裸鼠体内异位和原位移植对两者的生物学特性进行比较、分析和鉴定.结果 A1和A2的电泳率、琼脂克隆形成能力、体外侵袭能力、自发性肺转移率分别为(1.08±0.12) μm,(0.64±0.13)μm;21.0±2.3,9.5±2.9;186.0±16.7,84.0±12.6;100.00%,6.67%,A1均明显高于A2,两者的差异有统计学意义(P＜0.01).结论高低不同转移特性的人成骨肉瘤MG-63亚克隆细胞系的建立,能为成骨肉瘤转移机制的研究提供较理想的实验模型.
作者：石晓兵；陈安民；蔡贤华 刊期： 2005年第02期
目的观察自体微小颗粒骨复合骨髓基质细胞(MSC)或成骨细胞移植修复大鼠颅骨缺损的治疗效果.方法制作大鼠颅骨缺损动物模型,培养同种异体新生大鼠的骨髓基质细胞及成骨细胞,复合自体颗粒骨植入骨缺损区,X线摄片观察骨愈合情况;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测骨钙素、转化生长因子-β1(TGF-β1)表达水平.结果植入微小颗粒骨复合成骨细胞组颅骨缺损愈合快,骨钙素、TGF-β1表达出现早,与另两组差异有统计学意义(P<0.05).植入微小颗粒骨复合骨髓基质细胞组颅骨缺损愈合时间居中,骨钙素、TGF-β 1表达早于单纯微小颗粒骨组(P<0.05).结论微小颗粒骨复合细胞移植修复颅骨缺损,细胞因子表达早,缺损愈合明显加快,具有较好的治疗效果.
作者：麻松；阎景龙；王新涛；杨显生 刊期： 2005年第02期
中华实验外科杂志
主管:中国科学技术协会
主办：中华医学会
