陈庄洪；蔡贤华；黄继锋；徐峰；刘曦明；余伦红
目的探讨甲基丙烯酸缩水甘油酯右旋糖酐(dex-GMA)重组人骨形态发生蛋白(rhBMP -2)凝胶微球 (rhBMP2-dex-HM)对成骨细胞的生物学作用.方法将单纯rhBMP-2(A组)、空白dex-GMA凝胶微球dex-HM(B组)和rhBMP2-dex-HM(C组)加入成骨细胞培养液中,用细胞计数法、噻唑蓝比色法(MTT法)、流式细胞仪观察细胞增殖情况,并检测成骨细胞上清液中骨钙素(BGP)含量.结果培养1～2 d后,3组细胞计数、吸光度(A)值差异无统计学意义(P＞0.05);4～6 d时A、C组细胞计数和A值开始高于B组,但A、C组间差异无统计学意义(P＞0.05);培养6～8 d后,C组明显高于其他组,差异有统计学意义(P<0.01).14 d后,A、B、C 3组细胞数分别为(22.97±0.23)、(13.89±0.57)和(32.46±0.67)×104个细胞/ml,差异有统计学意义(P<0.01).流式细胞仪检测结果显示,培养2 d后,A组的G2/M+S期百分数高;6～8 d后,C组的G2/M+S期百分数高.成骨细胞上清液中BGP含量,C微球组高,其次为A组.结论 rhBMP-2-dex-HM可以较长时间持续释放活性rhBMP-2,作为rhBMP-2的缓释载体,可以明显促进成骨细胞增殖和分化.
作者：陈发明；吴织芬；金岩；杜岩；王国芳 刊期： 2005年第02期
目的研究非渗透性低温保护剂海藻糖联合应用二甲基亚砜(DMSO),用于人类皮肤的低温储存,并与皮库常规应用的二甲基亚砜(DMSO)、丙二醇(Propyleneglycol)、DMEM进行比较,以寻求更佳的皮肤冷冻保护剂.方法将新鲜成人皮肤分为5组,液氮冻存7、14 d后复温,采用病理形态学、酶组织化学、组织代谢等方法,分别对海藻糖/二甲基亚砜、二甲基亚砜/丙二醇、二甲基亚砜/无血清角质细胞培养基(KSFM)、DMEM作为冷冻保护剂保存后的皮肤活力进行比较.结果 0.5 mol/L海藻糖/二甲基亚砜作为保护剂所冷冻的皮肤,复温后其活性明显高于其他保护剂组.结论海藻糖与二甲基亚砜联合应用是较佳的冷冻保护剂,皮库在常规应用保护剂时可以在渗透性保护剂中加入海藻糖.
作者：蔡宏；贾晓明；吴志谷；姚咏明；杨毅；李绍然；陆江阳 刊期： 2005年第02期
目的探讨热缺血对移植体存活的影响,寻求获取供体气管的可靠时间.方法选用杂种犬进行同种异体气管移植.供犬处死后经过不同热缺血时间取出气管,TUNEL法检测软骨细胞凋亡.各移植体植入受犬的气管原位及腹腔大网膜内,4周后处死取材,行病理学检查,并比较各组移植体软骨细胞存活率.结果随着热缺血时间的延长,移植体软骨细胞凋亡数逐渐增加,移植后软骨结构破坏加重.并且相同热缺血期移植体,异位移植较原位移植结构保持好.结论气管移植体对热缺血有较好的耐受,但是长时间的热缺血仍会给气管移植体带来损害.
作者：李小飞；张涛；汪健；程庆书 刊期： 2005年第02期
目的研究门静脉高压症时肠系膜血管热休克蛋白90(HSP90)的表达,并对其表达定位.方法 SD大鼠分为实验组和假手术组,用门静脉部分结扎法制作门静脉高压模型.4周后取肠系膜血管组织,采用免疫组织化学技术、免疫印迹(Western blot)、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法在蛋白及mRNA水平测定门静脉高压大鼠肠系膜血管HSP90的表达.结果门静脉高压大鼠肠系膜血管HSP90的表达增强,且保持在蛋白及mRNA水平上的一致.HSP90不仅在血管内膜而且还在血管平滑肌层有明显的表达.结论 HSP90可能参与了门静脉高压内脏血管病变的形成,从而为进一步揭示门静脉高压内脏血管病变的发病机制提供了新的思路.
作者：艾建华；杨镇 刊期： 2005年第02期
我们采用光镜和电镜的方法对门静脉高压症患者的内脏血管进行观察,探讨门静脉高压症和内脏高动力循环以及内脏血管病变之间的相互关系,现将结果报道如下.
作者：李涛；杨镇 刊期： 2005年第02期
目的探讨单纯疱疹病毒胸苷激酶/丙氧鸟苷(HSV-TK/GCV)系统对膀胱癌细胞BIU87的杀伤作用及对凋亡基因的影响.方法脂质体将TK基因成功转入BIU87,噻唑蓝(MTT)法、TUNEL法、流式细胞仪(FCM)分别检测GCV对其生长影响及凋亡率和细胞周期变化;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测bcl-2、bax、bak、Caspase-3 mRNA表达变化,比色法测定Caspase-3活性变化.结果作用5 d 1 mg/L GCV能杀死67%的细胞,100 mg/L GCV达到大杀伤率杀死97%的细胞;GCV诱导细胞凋亡,细胞周期阻滞在S和G2期;bcl-2表达降低,bax表达升高,Caspase-3表达及活性升高.结论 HSV-TK/GCV系统可有效杀伤膀胱癌细胞并引起细胞凋亡,细胞周期阻滞、bcl-2和bax表达变化、Caspase-3活化是引起凋亡发生的重要因素.
作者：毛晓鹏；丘少鹏；曹开源；袁广卿；陈显景；徐林 刊期： 2005年第02期
目的观察大鼠局灶性脑缺血/再灌注后脑梗死体积的变化和葡萄糖转运体1(GLUT1)在缺血半影区的表达情况以及人参皂甙Rb1对其的影响.方法雄性成年SD大鼠42只,随机分成3组:假手术组、对照组和人参皂甙Rb1干预组.用线栓法复制大脑中动脉阻塞(MACO)模型,在脑缺血1 h再灌注5 h时取材,用氯化三苯基四唑氮(TTC)染色后,全自动图像分析系统进行图像分析脑梗死体积比;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)测定GLUT1 mRNA水平的变化;用免疫组织化学半定量测定GLUT1蛋白水平的变化.结果假手术组、对照组和人参皂甙Rb1干预组的梗死体积百分比分别为0、(0.04±0.01)%和(0.02±0.01)%;3组半影区的GLUT1 mRNA水平分别是(0.23±0.14)、(0.55±0.04)和(0.79±0.19);蛋白表达的PU值分别为(5.1±1.2)、(13.1±1.7)和(19.0±1.9).结论人参皂甙Rb1明显缩小缺血再灌注损伤后脑梗死的体积,Rb1通过上调半影区GLUT1表达以维持脑组织的能量供给可能是其发挥脑保护作用的机制之一.
作者：李方成；陶宗玉；刘安民；李军亮；吴中华；林吉惠 刊期： 2005年第02期
目的用邻苯二甲酸二丁酯(DBP)诱导建立尿道下裂大鼠模型并在分子水平研究其导致尿道下裂的作用机制.方法将孕鼠在怀孕第12～19天用DBP(500 mg/kg体重)连续每天灌胃建立仔代雄鼠尿道下裂模型,并将孕鼠在第19天行破宫产取仔代雄鼠的睾丸组织,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)的方法检测睾酮合成过程中限速酶细胞色素P450胆固醇侧链裂解酶(P450scc)、3β羟基类固醇脱氢酶(3β-HSD)和细胞色素P450 17α-羟化酶(P450c17)的mRNA含量水平,与正常对照组进行比较.结果 DBP诱导的尿道下裂组胎鼠睾丸组织中P450scc、3β-HSD和P450c17的基因表达水平较正常对照组均有不同程度的下降,两组间差异比较均有统计学意义(P<0.05).结论 DBP通过在性发育期干扰仔代雄鼠睾丸组织中睾酮的生物合成途径,降低了睾酮水平,导致大鼠出生后尿道下裂的出现.
作者：张炜；袁琳；吴婷；贺厚光；龚永光；王心如 刊期： 2005年第02期
我们利用激光共聚焦显微镜动态观察δ氨基酮戊酸-光动疗法(ALA-PDT)作用后SW480细胞内 Ca2+浓度的变化,以期对ALA-PDT介导的信号传导机制进行探讨.
作者：郑江华；时德；陈祖林 刊期： 2005年第02期
目的改进鼠肌卫星细胞体外培养方法,得到更高纯度的肌卫星细胞.方法采用成年Wistar大鼠,将两步消化法加以改进,采用Ficoll分离和差速贴壁法两步纯化得到更高纯度的肌卫星细胞.所得细胞采用免疫组织化学方法加以鉴定.结果此方法肌卫星细胞纯化率可达到98%.细胞增殖快,生长良好.结论本实验成功建立了卫星细胞纯化方法,适用于心外科及相关科室开展细胞移植和基因治疗方面的研究.
作者：夏家红；谢艾妮；徐磊；张凯伦 刊期： 2005年第02期
目的选择和克隆人前列腺癌(PCa)和前列腺增生(BPH)的相关基因.方法根据当前前列腺癌与前列腺增生临床常规使用的肿瘤标记物和国内外基因表达谱的研究成果,选定了7个PCa上调表达,2个PCa下调表达基因和1个内参基因,采用聚合酶链反应 (PCR)从正常人外周血DNA中扩增出上述10个基因的探针片段,并克隆至pGEM-T质粒中.重组质粒经PCR鉴定、EcoR I单酶切或PSt I和Nco I双酶切鉴定,产物电泳检测.结果检测结果表明已经成功地将10个基因的探针序列克隆入pGEM-T质粒载体中.结论前列腺癌和前列腺增生相关基因质粒构建与探针制备为临床前列腺癌的血清学诊断及与前列腺增生症的鉴别提供了实验基础.
作者：钟惟德；何慧婵；刘文华；江福能；戴奇山；李俊玲；彭志强；谢克基；魏鸿蔼；刘良式 刊期： 2005年第02期
目的探讨核因子-κB(NF-κB)和诱导性一氧化氮合成酶(iNOS)在大鼠肝脏小移植物缺血预处理中的作用.方法雄性SD大鼠随机分成5组:假手术组(A组);小移植物组(B组);应用二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)的小移植物组(C组);应用缺血预处理(IPC)的小移植物组(D组);应用PDTC+IPC的小移植物组(E组).电泳迁移率改变法(EMSA)检测小移植物植入后5个时间点肝脏组织中NF-κB活性,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测iNOS在肝组织中的表达,检测肝脏脂质过氧化产物丙二醛 (MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)的浓度.结果 A组肝组织中NF-κB的活性很弱.B、C、D、E 4组NF-κB变化趋势相仿,一般在恢复灌注后即活化,峰值出现在3 h(IPC);活化峰值强度B组＞C组＞D组＞E组.再灌注2 h后B、C、D、E组肝组织中iNOS表达水平开始升高,6 h达到峰值,其值B组＞D组＞C组＞E组(P＜0.05),随后逐渐下降;至12 h仍高于对照组的水平.MDA的结果变化和iNOS表达水平变化类似,SOD呈相反变化.结论 NF-κB在大鼠肝脏缺血预处理小移植物中起重要作用.抑制供肝组织中NF-κB的活性可显著降低再灌注早期供肝组织中iNOS表达和氧自由基水平,并有效改善供肝的再灌注损伤.针对NF-κB的靶向治疗可能是供肝保护的一条新途径.
作者：钱建民；张浩；吴晓峰 刊期： 2005年第02期
甲状腺癌与身体其他部位癌肿相比较,其发病率并不高,约占全身恶性肿瘤的0.2%(男性)～1.0%(女性).随着普遍开展癌瘤普查以及检测手段的改善,其发现率有明显增加的趋势.在国内一些肿瘤医院中,甲状腺癌占头颈部肿瘤的首位.随着分子生物学技术及免疫学技术的迅猛发展和人类对甲状腺癌发病机制认识的不断深入,基因治疗逐渐成为肿瘤生物学治疗中的重要组成部分,在甲状腺癌的治疗中显示出良好的应用价值,并且取得了一定的效果,将日渐成为一项有前景的治疗选择.
作者：张东伟；杨维良 刊期： 2005年第02期
目的评价转染血管内皮生长因子(VEGF)基因的神经干细胞脑内移植后在宿主缺血区的神经血管保护作用.方法建立大鼠暂时性大脑中动脉梗死模型(tMCAO)并将其随机分成:(1)对照组;(2)细胞悬液磷酸盐缓冲液(PBS)移植组;(3)神经干细胞移植组;(4)转基因神经干细胞移植组,每组10例.立体定向法将BrdU标记的转基因神经干细胞移植到tMCAO大鼠的纹状体缺血半暗区.移植后2～12周进行神经损害严重程度评分(NSS)并与其他3组比较.移植后12周,免疫荧光染色观察转基因神经干细胞在脑内的分化、迁徙情况;免疫组织化学染色观察各组移植区毛细血管结构,并计每例动物以移植点为中心的一个100倍视野下内皮细胞数.结果移植后2～12周(4)组NSS评分均数分别为5.8、5.0、4.6、4.0、4.0、3.8,均低于其他3组.其中第8周显著低于(1)、(2)组(P=0.008),第12周显著低于(1)、(2)、(3)组(P=0.000).移植后12周,转基因神经干细胞在宿主脑内存活、迁徙,部分分化成神经元.转基因神经干细胞移植组移植区毛细血管结构相对完整,血管内皮细胞数显著多于其他3组.结论转染VEGF基因的神经干细胞移植后对宿主局部血管和神经结构具有保护作用.
作者：朱巍；毛颖；周良辅；汪洋；江永；朱剑虹 刊期： 2005年第02期
本实验旨在观察超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素A(SEA)对骨肉瘤荷瘤鼠免疫功能的影响及抑瘤效应,并分析其作用机制,以期为成骨肉瘤的免疫治疗寻求一种新方法.
作者：刘明；陈庄洪；范清宇；郝新保 刊期： 2005年第02期
目的观察大鼠心肌梗死后基质金属蛋白酶-2,9(MMP-2,9)和组织金属蛋白酶抑制剂-1(TIMP-1)的变化规律.方法结扎SD大鼠冠状动脉前降支建立心肌梗死模型.分为对照组(n=20)、心肌梗死组(I组,n=48),酶谱法测定心肌梗死后MMP-2,9活性蛋白的表达规律,Western blotting进一步确定所消化条带酶的属性.结果正常心肌中无活性MMP-9的存在.MMP-2蛋白水平在心肌梗死后第1、2周活性增强、表达增加,MMP-9第1、2、4周活性增强、表达增加,TIMP-1蛋白含量减少.结论心肌梗死后心肌组织内MMP-2,9的活性增高和蛋白含量增加,TIMP-1蛋白含量减少,是心室重塑机制重要组成部分.MMP-9在心肌梗死后心室重塑过程中可能具有特殊的地位.
作者：郭建中；高长青 刊期： 2005年第02期
目的探讨四氢生物蝶呤(BH4)对缺血再灌注心肌的保护作用及对细胞间黏附分子-1(ICAM-1)表达的影响.方法建立Langendorff离体心脏灌注模型,60只Wistar大鼠随机分为实验组(BH4停搏液)和对照组(St.ThomasⅡ液),每组30只.分别于相应的时间点测定两组心脏功能恢复,心肌组织丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、一氧化氮(NO)和一氧化氮合酶(NOS)的含量变化及ICAM-1的表达.结果 BH4能显著提高心脏功能恢复,增强缺血再灌注后NOS的活性,增加NO的产量,抑制ICAM-1的表达并降低MDA的产生(P均<0.05).结论 BH4具有显著的抗心肌缺血再灌注损伤(MIRI)的作用.
作者：王文生；王占明；徐世安；潘丽丽；李强 刊期： 2005年第02期
关节软骨属于透明软骨,组织代谢活性较低,创伤和手术等所致的软骨损伤或缺损难以自我修复或以纤维软骨、纤维组织所填充替代[1].为了重建软骨表面,恢复关节功能,人们通常采用各种动物,模拟临床实际情况进行研究,并取得了一定的进展.但动物实验结果常常难以重复,或难以应用到临床.这些问题的产生是由于不同物种、不同部位间,关节软骨的厚度,细胞密度,基质成分以及力学特征不同[2].因此只有全面了解人和动物关节软骨的生物学和结构特征,才能制造出更为理想的实验模型[3].
作者：高刚；卫小春 刊期： 2005年第02期
近年来,我们在肛肠科门诊及住院患者的治疗中选择性的应用龙珠软膏外敷及换药,临床收到满意效果,现报道如下[1,2].一、资料与方法1.研究对象:本组病例300人,年龄16～69岁,平均43.56岁;门诊治疗245人,肛肠术后住院治疗55人;其中混合痔68例、炎性外痔47例、血栓性外痔36例、静脉曲张性外痔29例、肛裂42例、肛周脓肿23例、术后换药用药5例.患者症状表现为肛门肿痛、便血、坠胀:体征为肛门局部有肿物、炎性水肿、血栓,肛管部有裂损、出血,以及术后肛缘、肛管不同大小的创面等.
作者：王立柱；梅笑呤；陈甡 刊期： 2005年第02期
目的建立临床成人骨髓基质干细胞(MSCs)体外培养、定向诱导分化为软骨细胞的途径.方法抽取成人骨髓,Percoll密度梯度离心法进行体外培养,贴壁细胞传代,取第3代细胞在培养基中添加软骨分化诱导剂地塞米松、维生素C和不同剂量转化生长因子-β(TGF-β),培养16 d后,在倒置显微镜观察细胞形态,甲苯胺蓝染色蛋白多糖,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫细胞化学(SABC法)检测Ⅱ型胶原表达,诱导后MSCs与新型材料聚乳酸和羟基乙醇共聚物(PLGA)复合.结果 Percoll密度梯度离心法培养可获得均一的MSCs;5、10 ng TGF-β诱导分化的MSCs生长迅速,呈典型的软骨细胞形态,甲苯胺蓝染色阳性,Ⅱ型胶原表达阳性,MSCs对材料PLGA黏附力强.结论可以从成人骨髓中培养出MSCs,并可定向诱导分化为软骨细胞,5～10 ng TGF-β为佳诱导剂量,成人MSCs可用作临床自体软骨组织工程种子细胞.
作者：滕勇；胡蕴玉；王臻；李旭升；白建萍；彭磊；王军；吕荣 刊期： 2005年第02期
中华实验外科杂志
主管:中国科学技术协会
主办：中华医学会
