陈伟；付小兵；王海滨；周岗；韩冰；李海红；孙同柱；盛志勇
目的研究门静脉高压症时肠系膜血管热休克蛋白90(HSP90)的表达,并对其表达定位.方法 SD大鼠分为实验组和假手术组,用门静脉部分结扎法制作门静脉高压模型.4周后取肠系膜血管组织,采用免疫组织化学技术、免疫印迹(Western blot)、逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法在蛋白及mRNA水平测定门静脉高压大鼠肠系膜血管HSP90的表达.结果门静脉高压大鼠肠系膜血管HSP90的表达增强,且保持在蛋白及mRNA水平上的一致.HSP90不仅在血管内膜而且还在血管平滑肌层有明显的表达.结论 HSP90可能参与了门静脉高压内脏血管病变的形成,从而为进一步揭示门静脉高压内脏血管病变的发病机制提供了新的思路.
作者：艾建华；杨镇 刊期： 2005年第02期
目的探讨甲基丙烯酸缩水甘油酯右旋糖酐(dex-GMA)重组人骨形态发生蛋白(rhBMP -2)凝胶微球 (rhBMP2-dex-HM)对成骨细胞的生物学作用.方法将单纯rhBMP-2(A组)、空白dex-GMA凝胶微球dex-HM(B组)和rhBMP2-dex-HM(C组)加入成骨细胞培养液中,用细胞计数法、噻唑蓝比色法(MTT法)、流式细胞仪观察细胞增殖情况,并检测成骨细胞上清液中骨钙素(BGP)含量.结果培养1～2 d后,3组细胞计数、吸光度(A)值差异无统计学意义(P＞0.05);4～6 d时A、C组细胞计数和A值开始高于B组,但A、C组间差异无统计学意义(P＞0.05);培养6～8 d后,C组明显高于其他组,差异有统计学意义(P<0.01).14 d后,A、B、C 3组细胞数分别为(22.97±0.23)、(13.89±0.57)和(32.46±0.67)×104个细胞/ml,差异有统计学意义(P<0.01).流式细胞仪检测结果显示,培养2 d后,A组的G2/M+S期百分数高;6～8 d后,C组的G2/M+S期百分数高.成骨细胞上清液中BGP含量,C微球组高,其次为A组.结论 rhBMP-2-dex-HM可以较长时间持续释放活性rhBMP-2,作为rhBMP-2的缓释载体,可以明显促进成骨细胞增殖和分化.
作者：陈发明；吴织芬；金岩；杜岩；王国芳 刊期： 2005年第02期
目的探讨基因重组可溶性补体受体I型(sCR1)对大鼠急性脊髓损伤组织补体固有成分C9及补体调节因子Clusterin表达的影响.方法采用改良Allen重物打击法制成SD大鼠急性脊髓损伤模型,观察sCR1组与生理盐水(NS)组在伤后12 h、1、3、7、14 d时间点脊髓损伤组织中C9和Clusterin表达的部位及时程,并采用斜板实验评定两组大鼠的下肢运动功能,比较组间差异.结果 sCR1组及NS组在伤后各个时间点脊髓损伤组织中C9、Clusterin表达增强,并存在动态变化过程.sCR1组在伤后各个时间点C9表达均明显轻于NS组(P<0.01);sCR1组在伤后12 h、1、3 d时间点Clusterin表达明显轻于NS组(分别为P<0.01、P<0.01、P<0.05),伤后7、14 d两组间差异无统计学意义.sCR1组在伤后3、7、14 d时间点大鼠下肢运动功能明显优于NS组(分别为P<0.05、P<0.01、P<0.01).结论基因重组sCR1可显著抑制大鼠急性脊髓损伤组织C9和Clusterin的表达,可通过抑制补体系统激活机制减轻继发性脊髓损伤.
作者：李良满；朱悦；范广宇 刊期： 2005年第02期
目的研究化疗药物阿霉素(ADM)对肿瘤细胞Fas凋亡基因的调控,并探讨其致凋亡机制.方法逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)比较经ADM处理前后肿瘤细胞胃癌ADM细胞系SGC-7901、MGC-803和肺癌细胞系A-549的Fas mRNA的表达水平,同时观察其对抗Fas抗体的敏感性,并用流式细胞术检测肿瘤细胞凋亡率.结果所有3种肿瘤细胞在ADM作用下Fas表达水平显著增强,差异有统计学意义(P<0.05),同时肿瘤细胞凋亡率明显增加(凋亡率分别为40.3%、43.6%、54.4%).ADM能增加肿瘤细胞对Fas抗体的敏感性.结论 ADM上调肿瘤细胞Fas的表达,ADM与Fas抗体联合应用将增强肿瘤细胞的凋亡率,有一定的抗肿瘤临床应用前景.
作者：郑世营；张晓膺；赵军；葛锦峰；王志刚 刊期： 2005年第02期
目的研究重组腺病毒表达的人内皮细胞抑制素-血管内皮细胞生长抑制因子151(hENDO-VEGI151)融合蛋白对胃癌的抑制作用.方法构建携带hENDO-VEGI151融合基因的重组腺病毒载体,脂质体介导法包装重组腺病毒Ad IL-3/hENDO-VEGI151.体外检测融合基因的表达及融合蛋白的生物学活性.应用鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)模型及荷人胃癌裸鼠模型,进一步观察融合蛋白对活体血管生成的影响和融合基因治疗活体胃癌的疗效.结果用TCID50法测定携带融合基因的重组腺病毒滴度为4.2×1011TCID50/ml;用聚合酶链反应(PCR)、逆转录(RT)-PCR和免疫组织化学方法证实融合基因可被转导入SGC-7901细胞内并稳定高效地转录和表达;Western blot显示融合蛋白可被分泌到胞外发挥作用;融合蛋白可强烈抑制ECV-304细胞生长及鸡胚绒毛尿囊膜新生血管形成.Ad IL-3/hENDO-VEGI151治疗可强烈抑制裸鼠体内种植瘤生长,明显下调肿瘤微血管密度,促进胃癌细胞凋亡.结论 hENDO-VEGI151是一条新型强效的肿瘤血管生成抑制基因,其表达产物可能通过作用于肿瘤新生血管形成的不同环节强烈抑制新血管生成和肿瘤生长,值得进一步研究.
作者：李喆；方国恩；闻兆章；华积德；曹贵松；毕建威；戚中田；潘卫 刊期： 2005年第02期
目的研究非渗透性低温保护剂海藻糖联合应用二甲基亚砜(DMSO),用于人类皮肤的低温储存,并与皮库常规应用的二甲基亚砜(DMSO)、丙二醇(Propyleneglycol)、DMEM进行比较,以寻求更佳的皮肤冷冻保护剂.方法将新鲜成人皮肤分为5组,液氮冻存7、14 d后复温,采用病理形态学、酶组织化学、组织代谢等方法,分别对海藻糖/二甲基亚砜、二甲基亚砜/丙二醇、二甲基亚砜/无血清角质细胞培养基(KSFM)、DMEM作为冷冻保护剂保存后的皮肤活力进行比较.结果 0.5 mol/L海藻糖/二甲基亚砜作为保护剂所冷冻的皮肤,复温后其活性明显高于其他保护剂组.结论海藻糖与二甲基亚砜联合应用是较佳的冷冻保护剂,皮库在常规应用保护剂时可以在渗透性保护剂中加入海藻糖.
作者：蔡宏；贾晓明；吴志谷；姚咏明；杨毅；李绍然；陆江阳 刊期： 2005年第02期
目的探讨LRIG1基因抑制恶性胶质瘤细胞侵袭、浸润的分子机制.方法应用脂质体介导的基因转染技术将p3XFLAG-CMV9-LRIG1质粒转染入人神经胶质瘤H4细胞系,通过逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)和Western blot方法检测转染前、后LRIG1和表皮生长因子受体(EGFR)基因mRNA和蛋白表达水平,用Boyden小室体外侵袭试验观察H4细胞通过人工重组基底膜能力的变化.结果转染p3XFLAG-CMV9-LRIG1质粒后,H4神经胶质瘤细胞的LRIG1 mRNA和蛋白表达均较对照组明显增强(P<0.01);而EGFR mRNA和蛋白表达均较对照组明显减弱(P<0.01).LRIG1质粒转染的H4细胞穿过人工重组基底膜的相对百分率为(13.3±1.8)%,明显低于未处理组和转染空载体组的穿膜细胞百分率(24.7±1.8)%,(24.0±1.5)%(P=0.008和P=0.010).结论 EGFR的过表达促进了胶质瘤的侵袭、浸润;LRIG1通过抑制EGFR逆转了恶性胶质瘤侵袭、浸润.
作者：叶飞；郭东升；易伟；牛洪泉；舒凯；万锋；卢运萍；雷霆 刊期： 2005年第02期
目的观察神经生长因子(NGF)对6-羟基多巴胺(6-OHDA)引起的大鼠去交感神经保护作用.方法经腹腔为大鼠注射6-OHDA(80 mg/kg体重),制作化学性交感神经末梢损伤模型后,立即肌肉注射NGF 200～1 600 BU/kg体重×10 d,每天1次.采用高效液相色谱-电化学检测器(HPLC-ECD)法测定两侧颌下腺中去甲肾上腺素(NE)的含量.结果 6-OHDA可使大鼠颌下腺中的NE的含量下降36.6%(P<0.05),NGF可防止神经损伤大鼠颌下腺NE的含量下降,并有较好的剂量-效应关系,400 BU/kg体重即可使NE维持至正常水平.结论 NGF肌肉注射对6-OHDA引起的大鼠化学性交感神经末梢损伤有良好的保护作用.
作者：刘振旗；孙辉生；高成杰；贾锐；杨静 刊期： 2005年第02期
甲状腺癌与身体其他部位癌肿相比较,其发病率并不高,约占全身恶性肿瘤的0.2%(男性)～1.0%(女性).随着普遍开展癌瘤普查以及检测手段的改善,其发现率有明显增加的趋势.在国内一些肿瘤医院中,甲状腺癌占头颈部肿瘤的首位.随着分子生物学技术及免疫学技术的迅猛发展和人类对甲状腺癌发病机制认识的不断深入,基因治疗逐渐成为肿瘤生物学治疗中的重要组成部分,在甲状腺癌的治疗中显示出良好的应用价值,并且取得了一定的效果,将日渐成为一项有前景的治疗选择.
作者：张东伟；杨维良 刊期： 2005年第02期
关节软骨属于透明软骨,组织代谢活性较低,创伤和手术等所致的软骨损伤或缺损难以自我修复或以纤维软骨、纤维组织所填充替代[1].为了重建软骨表面,恢复关节功能,人们通常采用各种动物,模拟临床实际情况进行研究,并取得了一定的进展.但动物实验结果常常难以重复,或难以应用到临床.这些问题的产生是由于不同物种、不同部位间,关节软骨的厚度,细胞密度,基质成分以及力学特征不同[2].因此只有全面了解人和动物关节软骨的生物学和结构特征,才能制造出更为理想的实验模型[3].
作者：高刚；卫小春 刊期： 2005年第02期
目的探讨核因子-κB(NF-κB)和诱导性一氧化氮合成酶(iNOS)在大鼠肝脏小移植物缺血预处理中的作用.方法雄性SD大鼠随机分成5组:假手术组(A组);小移植物组(B组);应用二硫代氨基甲酸吡咯烷(PDTC)的小移植物组(C组);应用缺血预处理(IPC)的小移植物组(D组);应用PDTC+IPC的小移植物组(E组).电泳迁移率改变法(EMSA)检测小移植物植入后5个时间点肝脏组织中NF-κB活性,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测iNOS在肝组织中的表达,检测肝脏脂质过氧化产物丙二醛 (MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)的浓度.结果 A组肝组织中NF-κB的活性很弱.B、C、D、E 4组NF-κB变化趋势相仿,一般在恢复灌注后即活化,峰值出现在3 h(IPC);活化峰值强度B组＞C组＞D组＞E组.再灌注2 h后B、C、D、E组肝组织中iNOS表达水平开始升高,6 h达到峰值,其值B组＞D组＞C组＞E组(P＜0.05),随后逐渐下降;至12 h仍高于对照组的水平.MDA的结果变化和iNOS表达水平变化类似,SOD呈相反变化.结论 NF-κB在大鼠肝脏缺血预处理小移植物中起重要作用.抑制供肝组织中NF-κB的活性可显著降低再灌注早期供肝组织中iNOS表达和氧自由基水平,并有效改善供肝的再灌注损伤.针对NF-κB的靶向治疗可能是供肝保护的一条新途径.
作者：钱建民；张浩；吴晓峰 刊期： 2005年第02期
目的探讨Smac基因的表达对于丝裂霉素(MMC)诱导膀胱癌细胞凋亡的影响.方法脂质体介导Smac基因转染膀胱癌T24细胞3 d后,用低剂量丝裂霉素诱导凋亡启动,噻唑蓝(MTT)比色分析检测癌细胞生长活性,吖啶橙-溴化乙锭荧光染色法及流式细胞术法检测细胞凋亡;免疫组织化学法和逆转录聚合酶链反应检测Smac基因的表达.结果 T24细胞在低剂量丝裂霉素的诱导下发生凋亡,两种方法检测细胞凋亡率,用0.05 g/L丝裂霉素处理的T24细胞凋亡率分别为20.50%和18.84%,而经过转染Smac后用0.05 g/L丝裂霉素处理的T24细胞凋亡率分别为36.40%和33.52%,差异有统计学意义(P<0.05).结论促凋亡基因Smac在膀胱癌细胞中的活化表达可以明显增强细胞在刺激信号下的凋亡.
作者：汪良；曾甫清；郑丽端；陈方敏；刘迎 刊期： 2005年第02期
目的建立临床成人骨髓基质干细胞(MSCs)体外培养、定向诱导分化为软骨细胞的途径.方法抽取成人骨髓,Percoll密度梯度离心法进行体外培养,贴壁细胞传代,取第3代细胞在培养基中添加软骨分化诱导剂地塞米松、维生素C和不同剂量转化生长因子-β(TGF-β),培养16 d后,在倒置显微镜观察细胞形态,甲苯胺蓝染色蛋白多糖,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫细胞化学(SABC法)检测Ⅱ型胶原表达,诱导后MSCs与新型材料聚乳酸和羟基乙醇共聚物(PLGA)复合.结果 Percoll密度梯度离心法培养可获得均一的MSCs;5、10 ng TGF-β诱导分化的MSCs生长迅速,呈典型的软骨细胞形态,甲苯胺蓝染色阳性,Ⅱ型胶原表达阳性,MSCs对材料PLGA黏附力强.结论可以从成人骨髓中培养出MSCs,并可定向诱导分化为软骨细胞,5～10 ng TGF-β为佳诱导剂量,成人MSCs可用作临床自体软骨组织工程种子细胞.
作者：滕勇；胡蕴玉；王臻；李旭升；白建萍；彭磊；王军；吕荣 刊期： 2005年第02期
目的制备单抗BDI-1导向的三氧化二砷免疫蛋白微球[As2O3-(BSA-NS)-BDI-1]并检测其特异性结合膀胱肿瘤细胞的活性.方法通过蛋白交联固化及N-羟基琥珀酰亚胺基-3-(2-吡基二硫)-丙酸脂(SPDP)交联的方法制备蛋白免疫微球.还原电泳、光镜和电镜的方法鉴定As2O3免疫微球的共价连接与活性.吖啶橙染色检测肿瘤细胞凋亡.结果还原电泳可见免疫微球被还原后在远端形成两条蛋白条带.光镜下可见蛋白微球在肿瘤细胞周围并随细胞移动.电镜下可见蛋白微球与肿瘤细胞紧密连接且形态完整.吖啶橙染色可见免疫微球处理的膀胱肿瘤细胞表现出凋亡特征.结论制备的As2O3-(BSA-NS)-BDI-1由共价键连接且能特异性的结合膀胱肿瘤细胞BIU-87而发挥诱导凋亡的作用.
作者：周洁；曾甫清；谢蜀生 刊期： 2005年第02期
目的建立高低不同转移特性人成骨肉瘤MG-63亚克隆细胞系,为研究成骨肉瘤转移机制提供较好的实验模型.方法通过体外培养和裸鼠体内移植,初步分离并建立了2个亚克隆细胞系A1和A2,并利用细胞电泳、细胞增殖、琼脂克隆形成、体外侵袭实验、裸鼠体内异位和原位移植对两者的生物学特性进行比较、分析和鉴定.结果 A1和A2的电泳率、琼脂克隆形成能力、体外侵袭能力、自发性肺转移率分别为(1.08±0.12) μm,(0.64±0.13)μm;21.0±2.3,9.5±2.9;186.0±16.7,84.0±12.6;100.00%,6.67%,A1均明显高于A2,两者的差异有统计学意义(P＜0.01).结论高低不同转移特性的人成骨肉瘤MG-63亚克隆细胞系的建立,能为成骨肉瘤转移机制的研究提供较理想的实验模型.
作者：石晓兵；陈安民；蔡贤华 刊期： 2005年第02期
目的探讨三氧化二砷(As2O3)对大鼠肝癌肝移植后肿瘤复发的预防作用.方法选用雄性Wistar大鼠以质量分数为0.05% 2-乙酰氨基芴的颗粒饲料饲喂12周,第21周剖腹取肝脏结节进行组织学检查确认建立大鼠原发性肝癌模型,按不同的组别进行原位肝移植.结果 A组大鼠术后平均生存(19.83±2.89) d.B组大鼠术后平均生存(75.40±5.76) d.C组大鼠术后平均生存(88.00±5.60) d.B组大鼠术后生存时间和A组大鼠术后生存时间比较,差异有统计学意义(P＜0.001),C组大鼠术后生存时间和实验B组大鼠术后生存时间比较,差异有统计学意义(P＜0.001).结论大鼠原位肝移植对大鼠原发性肝癌具有治疗作用.As2O3对大鼠肝癌肝移植后减少肿瘤复发具有一定的预防作用.
作者：曾兆林；韩德恩；韩丽姝；汪鹰扬；王志东；张新宇 刊期： 2005年第02期
目的研究胰高血糖素样肽-2(GLP-2)对短肠大鼠残留小肠代偿的影响及机制.方法 75%小肠切除大鼠随机分成空白(SB)组、生长激素(GH)组和GLP-2组.术后6 d行残留回肠黏膜形态学检测、细胞增殖核心抗原(PCNA)测定及原位末端标记(INST法)染色.结果 GLP-2组回肠黏膜形态学指标显著高于SB组(P＜0.05),并且其黏膜厚度显著高于GH组(P＜0.05).GLP-2组PCNA指数显著高于SB组(0.51±0.09与0.40±0.06比较,P＜0.05),但和GH组比较差异无统计学意义(P>0.05).GLP-2组细胞凋亡显著低于SB组(67.7±10.1与81.7±12.9比较,P＜0.05),但和GH组比较差异无统计学意义(P＞0.05).结论 GLP-2能刺激小肠黏膜上皮增生,抑制凋亡,显著促进短肠大鼠残留小肠黏膜的形态代偿.
作者：陈吉；李杭；吴国豪 刊期： 2005年第02期
目的以大鼠迟发性脑血管痉挛模型为基础研究诱导型一氧化氮合成酶(iNOS)在迟发性血管痉挛发展中的作用.方法 32只雄性SD大鼠随机分为实验组和对照组,实验组枕大池二次注血诱导迟发性脑血管痉挛,对照组枕大池注射生理盐水.第8天行脑血管造影,枕大池抽取脑脊液测一氧化氮(NO)浓度.逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法和免疫组织化学法测定并评价iNOS mRNA和蛋白质在基底动脉、大脑中动脉和皮质中的表达.结果颅内动脉血管减影提示对照组颈内动脉颅内段、大脑中动脉(MCA)明显变细,大脑中动脉中段直径(MD)与镫骨动脉中段直径(SD)之比衡量大脑中动脉的管径显示实验组MCA管径较对照组MCA管径减少30%.对照组脑脊液中NO浓度为(11.70±2.62) μmol/L,实验组脑脊液中NO的浓度为(55.67±12.84) μmol/L.iNOS mRNA和蛋白质表达于基底动脉、大脑中动脉和皮质,其中基底动脉表达强.结论 iNOS作为迟发性脑血管痉挛发展中的关键因素参与血管壁的迟发性损伤.
作者：吴惺；陈彦克；马廉亭；袁先厚 刊期： 2005年第02期
肝衰模型的制作有很多种方法,包括手术和药物诱导等方法.我们建立了一种生存期合适,制作周期不长的模型.
作者：王宁；陈洋；郭仁宣；郭克建 刊期： 2005年第02期
目的用邻苯二甲酸二丁酯(DBP)诱导建立尿道下裂大鼠模型并在分子水平研究其导致尿道下裂的作用机制.方法将孕鼠在怀孕第12～19天用DBP(500 mg/kg体重)连续每天灌胃建立仔代雄鼠尿道下裂模型,并将孕鼠在第19天行破宫产取仔代雄鼠的睾丸组织,用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)的方法检测睾酮合成过程中限速酶细胞色素P450胆固醇侧链裂解酶(P450scc)、3β羟基类固醇脱氢酶(3β-HSD)和细胞色素P450 17α-羟化酶(P450c17)的mRNA含量水平,与正常对照组进行比较.结果 DBP诱导的尿道下裂组胎鼠睾丸组织中P450scc、3β-HSD和P450c17的基因表达水平较正常对照组均有不同程度的下降,两组间差异比较均有统计学意义(P<0.05).结论 DBP通过在性发育期干扰仔代雄鼠睾丸组织中睾酮的生物合成途径,降低了睾酮水平,导致大鼠出生后尿道下裂的出现.
作者：张炜；袁琳；吴婷；贺厚光；龚永光；王心如 刊期： 2005年第02期
中华实验外科杂志
主管:中国科学技术协会
主办：中华医学会
