一氧化氮在犬离体胰腺低温灌注与保存中的作用

原春辉；刘永锋；李桂臣；梁健；何三光

关键词：胰腺移植, 再灌注损伤, 一氧化氮

摘要：目的探讨一氧化氮(NO)对犬胰腺低温灌注及保存中缺血再灌注损伤的影响.方法在EC(Euro Collin)液中分别加用L-精氨酸(L-Arg,200 mg/kg体重)、N-硝基-L-精氨酸甲酯(L-NAME,10mg/kg体重)和生理盐水,分别对犬离体胰腺节段进行低温灌注保存(灌注量为30～50ml,温度为0～4℃,时间为24 h),应用犬胰节段移植模型,测定移植后犬血清中脂肪酶、淀粉酶含量,测定移植胰腺组织中髓过氧化酶(MPO)活性、一氧化氮(NO)含量、一氧化氮合酶(NOS)及诱导型一氧化氮合酶(iNOS)mRNA的表达情况.并进行组织学观察.结果血清脂肪酶,L-Arg处理组＜对照组＜L-NAME处理组,差异有统计学意义(P＜0.05).移植后12 h,胰腺组织中NO含量:L-Arg处理组(0.51±0.11)μmol/L＞对照组(0.31±0.06)μmol/L＞L-NAME处理组(0.17±0.04)μmol/L;NOS活性:L-Arg处理组(3.13±0.19)U/ml＞对照组(2.37±0.20)U/ml＞L-NAME处理组(1.68±0.20)U/ml;iNOS mRNA的表达:L-Arg处理组(0.89±0.22)μmol/L＞对照组(0.63±0.18)μmol/L＞L-NAME处理组(0.49±0.20)μmol/L,差异有统计学意义(P＜0.05);L-Arg处理组胰小叶间质水肿和胰小叶内中性粒细胞浸润较轻.结论NO对犬胰腺低温灌注及保存中缺血再灌注损伤具有保护作用.

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Matrix可脱弹簧圈对犬颈动脉瘤的栓塞作用

Matrix可脱弹簧圈(Matrix)是覆盖生物可吸收聚合物(BPM)并保留电解可脱弹簧圈(GDC)物理性质的具有生物活性的新型弹簧圈[1].本研究旨在评价Matrix栓塞犬颈动脉瘤的造影和组织学特征.

作者：李兴；石忠松；郭少雷；向欣；陈晓雷；齐铁伟；黄正松刊期： 2005年第10期
环氧合酶-2和p27kip1蛋白在幽门螺旋杆菌感染胃癌变过程中的表达及其机制

目的探讨幽门螺旋杆菌(Hp)感染胃癌变过程中不同病理组织类型的环氧合酶-2(COX-2)和p27kip1蛋白表达及其分子生物学机制.方法经胃镜和病理诊断明确的Hp感染患者的不同胃黏膜组织标本共200例.包括慢性浅表性胃炎(CSG)、肠上皮化生(IM)、不典型增生(AH)、胃癌(GCA)各50例,分别以ABC法和SP法测定COX-2和p27kip1蛋白表达情况.结果COX-2随癌变过程中阳性率和表达强度不断提高,分别为12%、42%、52%、74%,GCA组与其他组相比,差异有统计学意义(P＜0.05).而p27kip1随癌变过程,表达率逐步下降,分别为86%、46%、34%、26%.与其他组比较差异有统计学意义(P＜0.05).COX-2和p27kip1表达呈显著负相关(r=-0.87,P＜0.01).结论COX-2是Hp感染胃癌变过程的早期事件,并参与了胃癌变的全过程.COX-2抑制了p27kip1的蛋白表达,两者负性相关.

作者：刘登洋；陈百芳；曹华祥；孟东；狄长华刊期： 2005年第10期
散发性结直肠癌4号染色体等位基因杂合缺失的研究

目的通过在4号染色体寻找杂合缺失区域,为定位、筛选高频杂合缺失区存在的散发性结直肠癌相关肿瘤抑制基因提供依据.方法20个荧光标记的微卫星引物与83例结、直肠癌的肿瘤和正常组织进行聚合酶链反应.微卫星的平均遗传距离是10.4里摩(cmol).产物进行电泳、扫描及杂合缺失分析,并与临床、病理因素进行相关性检验.结果短臂(4p)、长臂(4q)的平均杂合缺失率为24.25%、28.56%,可见3个小的高频缺失区域(Region):R1:在D4S405和D4S3013(4p14-15.2)之间;R2:在D4S3000和D4S2915位点之间(4q12-21.1);R3:在D4S407和D4S2939位点之间(4q25-31.1).D4S1534位点与肝脏转移有关(P＜0.05),其余位点与临床病理因素均无显著相关(P＞0.05).结论4号染色体的3个高频杂合缺失区域4p14-15.2、4q12-21.1、4q25-31.1存在散发性结直肠癌发生、发展相关的肿瘤抑制基因.

作者：郑海涛；唐华美；彭志海；李大鹏；周崇治；裘国强；贺林刊期： 2005年第10期
伽玛刀照射不同形态猫视神经后视神经病理学的变化

我们应用不同的伽玛射线剂量分别对猫正常和压迫的视神经进行照射,照射后5个月进行光镜和电镜下观察其病理学的变化.

作者：刘如恩；赵洪洋；姜晓兵；朱贤立；赵沃华刊期： 2005年第10期
基质金属蛋白酶-9在腹主动脉瘤体组织中的表达及其临床意义

目的通过检测基质金属蛋白酶-9(MMP-9)在人腹主动脉瘤(AAAs)组织中的定位表达,探讨MMP-9在腹主动脉瘤发病机制中的作用及临床意义.方法应用免疫组织化学技术,检测了MMP-9在20例AAAs瘤体组织中的定位表达,并与15例动脉硬化闭塞性疾病(AODs)的病变管壁及10例正常动脉管壁组织中的MMP-9组织学表达进行对照研究.结果AAAs动脉壁中富含大量MMP-9颗粒,MMP-9阳性表达率达95.0%(19/20);正常动脉管壁组织未检测到MMP-9的表达;AODs病变血管壁内可见散在分布的MMP-9阳性颗粒,MMP-9阳性表达率为26.7%(4/15).与AODs和正常动脉管壁相比较,MMP-9在AAAs瘤体组织中的表达差异具有意义(P＜0.01).结论腹主动脉瘤体组织中MMP-9的高表达,促进主动脉中层细胞外基质崩解进而导致动脉弹性下降、动脉扩张及进一步的瘤体形成,在AAAs的发病机制中具有重要作用.

作者：马中；王岭；边杰芳；宁莫凡；Joerg.Heckenkamp 刊期： 2005年第10期
黏附分子T-cadherin表达诱导C6胶质母细胞瘤细胞G2期阻滞

目的研究T-cadherin分子表达抑制胶质母细胞瘤C6细胞增殖的机制.方法利用脂质体转染pcDNA3和pcDNA3.T-cadherin质粒后获得的表达和不表达T-cadherin的C6细胞克隆,以流式细胞仪检测两种克隆细胞的细胞周期的变化,同时分析其细胞周期与细胞分裂指数的关系.结果转染后表达T-cadherin的C6细胞在去血清培养48 h使细胞周期同步后,分别用血清刺激培养12h后行流式细胞仪检测,与转染空载体的1、2克隆相比,转染T-cadherin基因后表达T-cadherin的3、4克隆于G2/M期的细胞比例显著增加(3、4克隆为52.60%和51.84%,1、2克隆为16.17%和13.47%),而G1期的细胞比例显著下降(3、4克隆为0.66%和0.39%,1、2克隆为50.6%和57.9%).在血清刺激0、4、8、12、24和48 h时,空载体克隆1在各时间点的分裂指数与其G2/M期的细胞比例一致,而表达T-cadherin的克隆3在各时间点的分裂指数显著低于其G2/M期的细胞比例数.结论T-cadherin分子表达能诱导C6细胞G2期细胞阻滞,该机制可能是T-cadherin抑制C6细胞增殖的主要机制.

作者：黄志勇；陈孝平；吴在德刊期： 2005年第10期
RNA干扰对肾癌细胞端粒酶基因表达和活性的抑制作用及其增殖、凋亡的影响

目的探讨小干扰RNA(siRNA)对人肾癌细胞端粒酶基因表达、活性的抑制作用及对肾癌细胞增殖、凋亡的影响.方法将针对人端粒酶RNA(hTR)模板区的siRNA(100 nmol/L)转染肾癌786-0细胞,采用RT-PCR检测786-0细胞端粒酶mRNA表达,端粒重复序列扩增-酶联免疫吸附法检测端粒酶活性,MTT法检测细胞增殖,免疫细胞化学TUNEL法检测细胞凋亡.结果hTR-siRNA处理组786-0细胞端粒酶mRNA表达(40.7±1 5)%降低,端粒酶活性(32.7±2.3)%降低,细胞增殖抑制率(63.6±1.6)%增加,调亡细胞阳性率(39.4±0.6)%增加.分别与阴性siRNA对照组比较差异有统计学意义(P＜0.01).结论siRNA能抑制人肾癌细胞端粒酶mR-NA表达及活性,进而抑制其增殖、促进其凋亡,有望成为肾癌基因治疗的有效工具.

作者：李望；郑骏年；孙晓青；陈家存；曹敬毅；杨文发刊期： 2005年第10期
胃癌表型与5p15.33位点等位基因丢失相关性研究

目的探讨胃癌5p15.33区微卫星标记杂合性缺失(LOH)与临床病理学表型的相关性.方法抽提80例胃癌标本及其配对正常胃黏膜中基因组DNA,应用4个微卫星标记对5p15.33区进行LOH检测并与Lauren分型等临床病理学指标分析.结果有76例临床信息齐全病例纳入统计分析.5p15.33区4个微卫星标记平均信息性病例比例为71.05%.其中31.58%(24/76)病例至少一个位点检测到LOH,以D5S2849位点LOH频率高(37.25%).5p15.33位点LOH以肠型胃癌多见(P＜0.01),与年龄、性别、部位、肿瘤大小、TNM分期及有无淋巴结转移无明显关系.结论5p15.33区可能存在控制胃癌形态学表型的候选抑癌基因,但该基因可能不是决定其他临床表型的主要基因.

作者：于颖彦；计骏；陆云；步磊；刘炳亚；朱正纲；林言箴刊期： 2005年第10期
激光共聚焦显微镜技术在研究肠上皮细胞内钙超载中的应用

细胞内钙稳态的维持对生命活动至关重要.病理状态下细胞内钙超负荷将造成一系列代谢紊乱,致细胞坏死和凋亡[1,2].目前有关肠上皮细胞(IEC)缺血缺氧损伤导致IEC细胞内钙超载是否确切,钙离子阻断剂是否有防治作用,目前尚无这方面的研究报道.激光共聚焦扫描显微镜(LCSM)可定量分析活细胞内不同部位的[Ca2+]i及其动态变化,还可提供高分辨率的钙离子动态变化图像,是记录钙荧光信号的有效技术手段[3].我们采用LSCM技术,用钙敏荧光探针Fluo-3/AM标记培养的IEC,实时动态观察在缺血缺氧损伤及加用钙离子阻断剂后细胞内钙超载的影响.

作者：秦环龙；陈前；贾震易刊期： 2005年第10期
Stat5b信号通路调控bcl-2成员表达抑制结肠癌细胞凋亡的作用及其机制

目的探讨转录信号转导子与激活子5b(Stat5b)反义寡核苷酸诱导结肠癌细胞凋亡的作用及其机制.方法用阳离子脂质体介导Stat5b反义寡核苷酸(20 μmol/L)转染人结肠癌HCT116细胞,MTT法检测细胞增殖状态;流式细胞术检测细胞周期与凋亡;Western blot检测Stat5、p-Stat5及凋亡家族成员bcl-2、bcl-xL、Mcl-1、Caspase-3的表达.结果转染Stat5b反义寡核苷酸72 h后HCT116细胞增殖受抑制,G1期细胞比率由68.9%上升至85.6%,S期细胞比率由15.4%下降至7.6%,凋亡细胞比率由5.6%增加至27.5%,Stat5,p-Stat5与bcl-2家族成员表达水平下降.结论Stat5信号转导通路活性增高可能与结肠癌发生发展有关,阻断Stat5通路可以诱导结肠癌细胞凋亡.

作者：马向涛；余力伟；王杉；杜如昱；崔志荣刊期： 2005年第10期
肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体受体mRNA在肝癌中的表达及其意义

目的探讨肿瘤坏死因子相关诱导凋亡配体的4种受体DR4、DR5、DcR1、DcR2在肝细胞癌肝组织中的表达状况.方法应用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测40例人肝细胞癌组织、相应癌旁肝组织、23例正常人肝组织中DR4、DR5、DcR1、DcR2的mRNA表达率及表达水平.结果(1)40例肝癌组织、癌旁组织、23例正常肝组织DR4、DR5的mRNA的表达水平差异无统计学意义(P＞0.05);(2)40例癌旁组织、23例正常肝组织DcR1、DcR2表达水平明显高于40例肝癌组织(P＜0.05);(3)DR4和DR5 mRNA在肝细胞癌组织中表达水平与患者的年龄,肿瘤大小,有无包膜,分级程度,AFP水平,HBsAg,有无肝硬化有关系.结论肝癌组织中存在TRAIL受体的表达,与其在正常肝组织中的表达差异有统计学意义(P＜0.05);DR4、DR5表达水平与肝癌的病理状况有关系.

作者：蓝柳根；彭民浩刊期： 2005年第10期
Survivin在结直肠癌中的表达及其意义

目的探讨Survivin基因在结直肠癌中的表达及其意义.方法应用免疫组织化学(SP)法和TdT介导的dUTP缺口末端标记技术原位观察48例结直肠癌患者的癌组织、癌旁组织和正常组织中Survivin蛋白的表达和细胞凋亡.结果癌组织Survivin的阳性表达相对含量(PU)值(38.76±5.14)明显高于癌旁(25.17±7.26)和正常组织(0.57±0.03),差异有统计学意义(t=2.54,P＜0.05),正常大肠黏膜中极少见Survivin蛋白表达;癌旁和癌组织凋亡指数(AI)分别为(7.51±2.63)%和(4.65±1.76)%,两者差异有统计学意义(t=2.18,P＜0.05);Survivin蛋白的阳性表达与患者的性别、年龄、肿瘤大小无相关性(P＞0.05),与癌组织的分化程度、淋巴结转移和Dukes分期相关,低分化、有淋巴结转移和Dukes C/D期的Survivin蛋白表达显著高于相关组别(P＜0.05).结论Survivin在结直肠癌组织中表达上调,Survivin表达可抑制结直肠癌的细胞凋亡,这可能是结直肠癌发生、发展的有关因素;Survivin的表达与结直肠癌的恶性生物学行为有关.

作者：谭海燕；刘军；邬善敏刊期： 2005年第10期
陷阱受体3基因的表达与肝癌抵抗药物诱导的细胞凋亡研究

陷阱受体3(DcR3)是新近发现的肿瘤坏死因子受体家族的新成员,可竞争Fas与FasL的结合,从而阻断由Fas介导的细胞凋亡[1-6].本研究旨在探讨原发性肝癌的DcR3基因过度表达在Fas系统介导细胞凋亡中的作用以及肝癌细胞是否通过DcR3表达抑制Fas介导的细胞凋亡而起耐药作用.

作者：沈宏伟；吴育连；彭淑牖刊期： 2005年第10期
一步法联合冻存提高大鼠胰岛冻存质量的研究

目的探讨提高大鼠胰岛冻存质量的方法,以期为建立胰岛库奠定基础.方法将受体鼠分为实验组A组:即一步法联合冻存的胰岛移植组;对照组B组:新鲜的胰岛移植组;对照组C组:逐步法冻存的胰岛移植组.观察3组之间胰岛收获率,活性及移植后效果等方面的差异.结果纯化后收获大鼠胰岛每只(826.87±93.24)IEQ.A组平均胰岛收获率为(87±4)%,高于C组的胰岛收获率(81±4)%.A组和C组经过胰岛刺激素释放实验后均有较B组高的基础胰岛素释放量,但刺激指数则明显低于B组的637.3±39.5.胰岛移植入糖尿病鼠受体后,A组和B组在移植后1周即恢复血糖为正常值,并维持到观察结束.而C组中则需要较长时间纠正血糖到正常.移植(2 011.14±114.22)IEQ胰岛在A组和B组可达到100%纠正糖尿病.结论采用全新的细胞内低温保存液(HTS)结合细胞冻存液(DMSO)对大鼠胰岛进行一步法冻存取得了明显优于用DMSO逐步冻存的效果.

作者：周毅；许评；刘晓岭；李爱东；宋春芳刊期： 2005年第10期
姜黄素诱导雄激素非依赖性前列腺癌PC3细胞周期阻滞和凋亡研究

目的观察姜黄素对雄激素非依赖性前列腺癌细胞株PC3细胞的生长抑制作用.方法10～100μmol姜黄素作用PC3细胞5～24 h后,溴化二甲噻唑二苯四氮唑(MTT)比色法检测细胞生长活性,流式细胞仪检测细胞周期时相及细胞凋亡变化,透射电镜观察细胞超微结构变化,Western印迹法检测细胞内IκBα的表达.结果姜黄素能显著抑制雄激素非依赖性前列腺癌细胞株PC3细胞的体外生长(P＜0.05),呈时间与剂量依赖性;姜黄素将PC3细胞周期阻滞于G2/M期;不同浓度姜黄素诱导PC3细胞凋亡率分别为(6.33±0.88)%、(7.53±2.32)%、(12.74±3.02)%、(18.09±2.51)%与(27.54±2.63)%(P＜0.05);细胞内IκBα的表达随姜黄素剂量的增加而逐步升高(P＜0.05).结论姜黄素通过抑制PC3细胞增殖、诱导细胞凋亡等机制,显著抑制雄激素非依赖性前列腺癌细胞的体外生长.

作者：胡志全；郭辉；谌科；王志华；余建华；叶章群刊期： 2005年第10期
结直肠癌中Neu3基因的表达及产物活性的检测

目的探讨神经苷节脂特异性的唾液酸酶(Neu3)基因与人类结直肠癌的关系.方法用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法检测8例结直肠癌组织和正常黏膜之间Neu3 mRNA的表达差异;用硫巴比妥酸方法(TBA)检测32例结直肠癌组织和正常黏膜中唾液酸酶活性.结果在转录水平,8对结直肠癌组织和正常组织中,癌组织中Neu3 mRNA的表达明显高于正常组织中Neu3 mRNA的表达水平;在蛋白质翻译水平,32例结直肠癌组织中的唾液酸酶活性平均为10.60U/mg,32例正常黏膜组织中的唾液酸酶活性平均为5.51 U/mg(P＜0.05).结论Neu3基因的编码产物-神经苷节脂特异性的唾液酸酶与结直肠癌细胞的分化和生长密切相关.Neu3基因可能与人类结直肠癌有关.

作者：张波；陈剑英；陈道达；王国斌刊期： 2005年第10期
心脏直视手术患者胸骨正中切口细菌学研究

我们采用常规细菌检测法,探讨心脏直视手术患者术前、术中及术后皮肤表面、切口内及深部组织的污染情况,为术后外科伤口感染的预防提供依据.

作者：周嫣；叶文琴；徐志云；陈艳琳；余丽群刊期： 2005年第10期
胃肠道肿瘤分子生物学研究的发展方向

探索、了解各别肿瘤所特有的基因改变和表达异常已成为当前肿瘤分子生物研究的方向之一.大量临床和病理资料表明绝大多数结直肠癌起自原先存在的良性肿瘤(腺瘤)通过组织病理上好几个已明确的期,其间基因和环境因素对肿瘤发生形成过程同样地起作用.肿瘤原癌基因的激活和抑癌基因的丢失涉及这些肿瘤的发病机制.根据新的研究可以设想这是基因事件的纯累积,没有任何明确的程序.

作者：郁宝铭刊期： 2005年第10期
肺鳞癌/腺癌细胞浆和细胞膜PKC-α蛋白的表达及作用

目的检测肺鳞癌、肺腺癌细胞浆和细胞膜蛋白激酶C-α(PKC-α)蛋白的表达,探讨PKC-α在肺癌发生和发展中的作用.方法采用分别提取细胞浆和细胞膜蛋白,Western blot检测37例鳞癌(鳞癌组)、23例腺癌(腺癌组)和17例肺良性病变的正常肺组织(对照组)中细胞浆、细胞膜PKC-α蛋白表达含量,比较膜/浆PKC-α比率.结果三组胞浆PKC-α蛋白平均表达强度分别为0.083 2±0.015 2、0.184 5±0.008 9和0.179 5±0.015 0,三组间差异有统计学意义(P＜0.01);鳞癌和腺癌组胞浆PKC-α蛋白的平均强度显著高于对照组(P＜0.01).三组胞膜PKC-α蛋白的平均强度分别为0.033 1±0.009 6、0.091 8±0.014 8和0.100 9±0.021 3,三组间差异有统计学意义(P＜0.01);鳞癌和腺癌组织的胞膜PKC-α蛋白的平均强度显著高于对照组(P＜0.01).三组膜/浆PKC-α比值分别为0.319 0±0.017 2、0.500 4±0.095 0和0.558 9±0.086 5,三组间差异有统计学意义(P＜0.01);鳞癌和腺癌组的膜/浆PKC-α比值高于对照组(P＜0.05).结论肺鳞癌和腺癌细胞中无论是胞浆还是胞膜,PKC-α蛋白的表达都增加,尤其是胞膜PKC-α蛋白的表达增加幅度更大,提示PKC-α不仅通过表达量增加参与肺鳞癌、肺腺癌的发生和发展,还以膜转位的活化方式参与细胞的癌性病变.

作者：宋兴福；黄骥；王燕燕刊期： 2005年第10期
一种新的大鼠同种主动脉瓣异位移植模型

目的探讨建立一种主动脉瓣异位移植动物模型,用于研究同种心脏瓣膜的保存.方法受体供体均采用雌性Wisar大鼠,各40只.整块切取受体心脏.保留完整的主动脉瓣、少量心室肌和部分二尖瓣前叶,构建移植物.将移植物与受体腹主动脉端-侧吻合.结果术后28d,80%受体存活,无下肢瘫痪,移植物搏动良好,切开移植物肉眼观未见血栓,主动脉瓣位于正常位置且活动良好.受体死亡原因有血栓栓塞(12.5%)、术中出血(5.0%)和麻醉意外(2.5%).结论此模型可广泛应用于同种心脏瓣膜保存方法等研究,是较理想的模型.

作者：刘泉；臧旺福；田海刊期： 2005年第10期