鲁瑞芳；郭明；李为民；梁小波；彭学贤
鳜鱼(Si n ipterca chuats i)是我国名优淡水养殖品种.自1994年以来,广东地区养殖的鳜鱼发生传染性脾肾坏死病毒(infectious spleen and kidneynecrosis virus,ISKNV)流行,导致养殖鳜鱼大批死亡,造成了严重的经济损失[1,2 ].该病毒感染鳜鱼脾、肾、肝脏、鳃、脑、性腺、心脏和消化道等组织器官,脾和肾是其主要感染器官,而肝脏、鳃、脑、性腺、心庄和消化道不是其主要感染器官,在光镜下偶见受感染细胞[3].ISKNV致病性强,浸泡感染和注射感染ISKNV,在25℃～34℃范围内,受感染鳜鱼在7～12天内死亡率为100%.
作者：邓敏；何建国；翁少萍；曾征；龙綮新 刊期： 2001年第03期
病毒能否引致植物发病,取决于病毒侵入植物后能否运转到植物的其它部分.一般认为病毒是通过由生物介体或机械磨擦造成的机械损伤而侵入植物细胞的.从初始侵染的细胞开始,大多数病毒在植物体内有两种运转方式:在薄壁细胞间进行的缓慢的短距离运转;在输导组织间进行的快速的长距离运转.80年代中期认识到病毒的体内运转需要其基因产物(运动蛋白,movement protem,MP)的参与,证实了烟草花叶病毒(TMV)的30kD蛋白即为TMV的MP[1,2].之后有关病毒MP及对病毒如何在植物体内进行运转的研究取得很大的进展.有关这方面的综述文章有Hull R、Atabekov等、Lucas等和Carrington等[3-6]的.本文主要综述近五年来的研究进展,但为了其完整性,也包含了一些上述综述的主要有关内容.
作者：肖火根；周国辉；范怀忠 刊期： 2001年第03期
初次系统介绍两栖类、爬行类和鱼类病毒学的专著<低等脊椎动物病毒学>于1989年问世[1],是目前尚处在萌芽期的水生低等脊椎动物病毒生态学的基础文献之一.可将生态学分为以个体和群体为中心同其环境关系的宏观生态学、以(单)细胞为中心同其环境关系的微生态学、及以细胞内的生物活性分子为中心同其分子环境关系的分子生态学[2]等3个层次.水生低等脊椎动物病毒生态学旨在阐明病毒与宿主及水环境之间的各种作用及其机理,探讨病毒与宿主在水体环境中相互作用而产生的生理平衡态与病理失调的机制,以因势利导,寻求维持宿主生理平衡、防止病理失调及保护水体环境的措施.
作者：张奇亚 刊期： 2001年第03期
以马传贫驴白细胞弱毒和驴强毒分别接种培养细胞和试验动物,分别在体外和体内条件下,对病毒的各种转录产物进行克隆和序列分析.通过与病毒基因组的序列进行比较,用实验的方法绘制出了两株病毒在相应试验条件下的转录图谱,确定了各拼接产物的外显子构成以及拼接供体和拼接受体位点的具体位置.发现两种病毒在外显子-3的上游拼接受体位点(SA2)的位置与已报道的EIAV毒株均不相同,且二者的拼接信号不一致.
作者：刘相冬；张宝山；孔宪刚；王滨有；孙成群；刘永刚；周家喜；王凯波；刘建华 刊期： 2001年第03期
研究中期永生化食管上皮细胞的表型、细胞遗传学和部份基因J的改变,以阐明癌前病变的特征.SHEE是该院用人乳头状瘤病毒HPV18E6E7诱导的永生化上皮,传至61代已开始有少量细胞恶性转化.对永生化中期31代培养细胞用相差显微镜检查细胞形态改变和细胞生长状态(细胞接触抑制和锚定生长);流式细胞仪检测细胞周期;做染色体众数分析;多重PCR检查c myc、p53、bcl 2和ras等基因.免疫组化检查细胞角蛋白和鬼臼毒素荧光标记检查肌动蛋白F(F actm).软琼脂培养的集落细胞接种SCID小鼠检查成瘤性.Western blot方法检测细胞内HPVE6表达蛋白.结果:培养细胞有两种不同分化形态,分化差的基底细胞和分化好的鳞状上皮;前者角蛋白和F-actin极少,后者含量丰富;细胞接触抑制和锚锭生长特性减弱.分析100个细胞染色体众数分二干系,56条(占30%)和61条(占24%)染色体,核型分析属于超二倍体,亚三倍体.多重PCR检查:c-myc、p53基因上调,6cl 2和rad基因阳性.用优选生长在软琼脂上的克隆细胞接种SCID小鼠,未成瘤;HPV18E6表达蛋白阳性.以HPV18E6E7诱导的食管永生化上皮31代细胞形态出现了双向分化,根据其形态表型,双染色体众数的细胞遗传学改变和某些癌基因上调等特性,可以认为SHEE31细胞是处于癌前改变.
作者：沈忠英；许丽艳；陈铭华；蔡维佳；陈炯玉；洪超群；沈健；曾毅 刊期： 2001年第03期
构建了马铃薯Y病毒中国株系(PVY-C)蚜传辅助成分(HC-Pro)基因的正义、反义和缺失三种植物表达载体,通过农杆菌介导法转化烟草品种NCg9.Southern blot分析表明,HC-Pro基因及其突变体已经整合到烟草染色体中,Western blot分析证明,正义HC-Pro基因及其缺失突变体在转基因烟草中有表达产物.攻毒试验结果证明,转正义HC-Pro基因及其缺失突变体不仅能够提高T1转基因烟草中PVY-C的病毒积累和致病性,而且对异源病毒PVX具有同样的作用,而转反义HC-Pro基因烟草对PVY-C和PVX的致病性无影响.因此PVY-C HC-Pro基因介导PVX/PVY的协生作用.
作者：鲁瑞芳；郭明；李为民；梁小波；彭学贤 刊期： 2001年第03期
在用噬菌体表面呈现系统获得人源抗甲型肝炎(甲肝)病毒中和性基因工程Fab抗体的基础上,对所获得的4株中和性Fab抗体轻重链可变区基因进行了序列分析、可溶性表达及生物学特性鉴定.4株Fab抗体重链可变区拥有99%同源的核苷酸序列和相同的CDR区氨基酸序列,属于VHⅢ基因家族.而轻链可变区核苷酸序列同源性为95%和相似的CDR区氨基酸序列,属于VL5基因家族.这些重组抗体都能与人甲肝恢复期血清及具有中和活性的鼠抗甲肝单克隆抗体产生竞争抑制反应,表明其针对甲肝病毒结构蛋白上的主要抗原决定簇.
作者：曹经瑗；梁米芳；郭可謇；孟庆玲；纪燕；詹美云 刊期： 2001年第03期
将来源于噬菌体抗体库的人源狂犬病毒糖蛋白特异性单抗G10 Fab的基因,克隆入杆状病毒入源IgG抗体表达载体,通过转染将重组质粒导入昆虫细胞,以全抗体的形式表达了一株人源抗狂犬病毒基因工程抗体G10.用亲和层析的方法纯化了表达产物,经与一株鼠源糖蛋白特异性单抗竞争证实,该单克隆抗体特异性识别狂犬病毒糖蛋白,亲和力约为10-9M.体外中和实验证明,该单抗对狂犬病毒aG株具有体外中和活性.
作者：张世珍；梁米芳；郑海发；李维；董关木；侯云德 刊期： 2001年第03期
香蕉束顶病毒(banana bunchy top virus,BBTV)基因组中至少含有6个DNA组分,我们实验室已经对BBTV广东两个株系(NS和NSP)基因组中的DNA组分1、3、6进行了测序和报道.现又对NS和NSP的DNA组分4分别进行了克隆和序列分析.
作者：徐春香；李华平；肖火根；范怀忠 刊期： 2001年第03期
利用非复制型痘苗病毒表达载体pNEOCK11β75IL5和重组病毒RVJ123,通过两步重组构建了能同时表达IL-5和乙型肝炎病毒HBsAg的非复制型重组痘苗病毒RVJ123A11β75IL5.Southern-blot证实,痘苗病毒C-K片段间基因缺失的同时伴有IL-5基因的插入.鼻腔吸入分别免疫Balb/c小鼠和新西兰白兔,ELISPOT实验证实,免疫后两周小鼠肺淋巴细胞的抗HBsAgIgA抗体分泌细胞(ASC)数比对照组(RVJ123A11β75)增加约2倍,而同时小鼠肺淋巴细胞的抗HBsAg IgG抗体分泌细胞(ASC)数与对照组无差别.可在小鼠血液、肺浸出液以及新西兰白兔血液、肺浸出液、其它分泌液样品中检测到抗乙型肝炎病毒HBsAg的特异性的IgA、IgG抗体,与对照组相比,IgA抗体阳转率及抗体滴度提高,而IgG则无差异.本实验说明:IL-5可在体内选择性地增强机体的粘膜IgA反应.提示非复制载体疫苗中,表达的该细胞因子可有效的增强疫苗的粘膜免疫反应,为粘膜疫苗的发展策略提供了新的途径.
作者：郭斐；陆柔剑；孙朝晖；马海伦；张颖妹；马大龙；阮力 刊期： 2001年第03期
构建了表达GM-CSF的非复制型重组痘苗病毒RVA11β75GMCSF.Southern blot证实重组病毒C-K片段间基因缺失,同时插入GM-CSF基因,GM-CSF可以分泌形式良好表达.Wistar大鼠Walkers瘤内注射重组病毒RVA11β75GMCSF后,可以延长荷瘤鼠的生存时间;重组病毒RVA11p65GMCSF修饰的肿瘤细胞裂解物(WRC256)的肿瘤免疫治疗,可以抑制荷瘤大鼠的肿瘤生长,瘤重较对照组减轻.此结果提示:非复制重组痘苗病毒表达的GM-CSF可作为有效的肿瘤免疫治疗佐剂.
作者：郭斐；陆柔剑；许洪林；李军；张颖妹；马大龙；阮力 刊期： 2001年第03期
研究证实,人乳头瘤病毒(human papillo-mayirus,HPV)6型(HPV6)和11型(HPV11)的增殖是尖锐湿疣发生和复发的主要病因,其分子机制是HPV6型和HPV11型基因组DNA的复制和表达,其中HPV11早期基因组(E1、E2、E4、E5、E6和E7)的转录则是HPV11在宿主细胞中增殖的关键步骤[1].基因组转录的主要调节系统位于上游调控区(upstream regulatory regio,URR)或长控制区(long control region,LCR)中,关键性的调节蛋白是E2蛋白,大小常为45kD～48kD,以三聚体形式结合于DNA.由3个功能性结构域组成,全长E2蛋白是一个典型的反式激活蛋白,以二聚体活性形式特异性结合于上游调控区的E2结合位点AC-CGNNNNCGGT(ACCN6GCT),使HPV1 1早期基因组的转录水平提高20～100倍.
作者：侯化；杨光彩；黄杨中；王曙 刊期： 2001年第03期
应用RT PCR扩增了皖南山区分离株AH09的M和S片段全基因,克隆于T载体,纯化后测定序列.结果AH09株M片段的全基因序列共3 625个核苷酸,编码1 135个氨基酸;S片段的全基因序列共1 724个核苷酸,编码430个氨基酸.M和S片段全基因核苷酸和氨基酸与汉坦病毒各型毒株的代表株和HTN型毒株的同源性比较表明,AH09株分枝与HTN型接近,与其它各型病毒则相距较远,故确定为HTN型毒株.但AH09株与HTN型毒株的M和S片段全基因序列有差异,其差异分别高达23.6%和20.4%.经种系发生分析,AH09株是迄今为止所发现的HTN型病毒中差异大的新基因亚型病毒株.AH09株病毒M片段的氨基酸与HTN型相差13.5%至14.8%,而S片段仅相差7%～8.1%,说明AH09毒株的变异主要发生在M片段.而ORF和3′端的NCR区核苷酸序列分析比较说明,病毒的变异更主要集中在该片段的3′端的NCR区.
作者：姚智慧；罗兆庄；俞永新；赵月萍；董关木；王以银；刘文雪；任次早 刊期： 2001年第03期
通过狂犬病病毒灭活和纯化试验,试制精制Vero细胞狂犬病疫苗.疫苗经检测残余小牛血清白蛋白含量、Vero细胞残余DNA含量、疫苗效价、安全试验均能达到WHO规程要求.初步建立了适合大规模生产精制Vero细胞王犬病疫苗的灭活和纯化工艺.
作者：吕宏亮；宋继萍；段招军；邹勇；沈心亮；王玉琳；周书全 刊期： 2001年第03期
为了研究人乙型肝炎病毒(HBV)和黄曲霉素(AFB1)在肝癌发生过程中的作用,我们用HBV感染的人肝胎肝细胞移植至裸鼠背部皮下,以后每周皮下注射AFB1,在裸鼠体内成功地诱发了人肝细胞癌.选3只裸鼠所形成的种瘤组织,分别再接种裸鼠传代.在裸鼠体内传至5代后,将瘤组织在体外培养、传代,建立了3个肝癌细胞株,分别为CBH-1a、CBH-1b和CBH-2.对3个细胞株进行生物学持性分析发现,细胞生长迅速,接触抑制消失,细胞增殖核计数Ki67阳性细胞占38.2%.用EMA单抗检测证实为人来源细胞.核酸原位杂交显示,细胞中HBV-X和HBV-s基因阳性,PCR可扩增出X基因,证明HBV基因已到瘤细胞中.3个细胞株细胞再接种裸鼠皮下,可再生成肿瘤.此实验证明了HBV协同AFB1在人肝细胞癌发生过程中的病因作用.同时,为进步研究HBV和AFB1在肝癌发生过程中的分子机制提供了细胞水平的模型.
作者：郭秀婵；蓝祥英；周玲；滕智平；张永利；陈炯玉；沈忠英；曾毅 刊期： 2001年第03期
以流行性乙型脑炎病毒减弱毒株SA14-14-2的基因组RNA为模板,采用RT-PCR技术扩增其NS 1基因的cDNA,将其克隆到pMD18-T载体中,得到克隆质粒pMD18-T-NS1.pMD18-T-NS1经EcoRI和SalI酶切后,回收NS 1片段克隆到原核表达载体pET-28a(+)EcoRI/SalI位点,构建了重组原核表达质粒pET-28a(+)-NS1.转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导获得高效表达,产物经SDS-PAGE电泳结果显示,表达产物分子量约为45kD.Western blottmg分析表明表达产物具有抗原活性.
作者：王祥；陈焕春；何启盖；吴斌；贾杏林；吴美洲 刊期： 2001年第03期
人类杯状病毒分为诺瓦克样病毒(Norwalk-likevirus,NLV)和札幌样病毒(Sapporo-like virus,SLV),主要导致成人和儿童的急性腹泻,是除轮状病毒外造成腹泻的主要的病毒病原.它与食物、水源等的污染造成的急性胃肠炎暴发密切相关[1].NLV呈球形,直径26nm～35nm,不具有杯状病毒的典型结构,是有结构的小圆病毒(small round-structured viruses,SRSV),主要导致成人和学龄儿童的非细菌性腹泻的散发或暴发流行.SLV是典型的杯状病毒,电镜下可见杯状病毒的典型形态,它主要引起婴儿、小龄儿童(3个月到5岁)和老人的急性胃肠炎.
作者：陈冬梅；张又；钱渊 刊期： 2001年第03期
为了研究乙型肝炎(乙肝)病毒(HBV)和黄曲霉素(AFB1)在肝癌发生过程中的作用,用HBV感染的人胚胎肝细胞移植至裸鼠背部皮下,以后每周注射AFB1,能诱发裸鼠成瘤.实验分为4组:A组为HBV+AFB1组,即用HBV感染的人胚胎肝细胞移植于裸鼠,同时注射ABF1;B组为HBV+组,用HBV感染的人胚胎肝细胞移植于裸鼠,不注射AFB1;C组为AFB1+组,用不感染HBV的人胚胎肝细胞移植于裸鼠,注射AFB1;D组为对照组,用H不感染HBV的人胚胎肝细胞移植于裸鼠,也不注射AFB1.结果:A组成瘤率为27.3%(6/22),B组0%,C组13.3%(2/15),D组0%,所有肿瘤病理诊断均为肝细胞癌.用EMA单抗检测,证实为人来源细胞.PCR和DNA狭缝印迹显示:HBVX和u HBV S基因阳性,证明HBV基因已到瘤细胞中.实验首次用人乙肝病毒协同AFB1在裸鼠体内诱发成功人肝细胞癌,证明了 HBV协同AFB1在人肝细胞癌发生过程中的病因作用.同时,为进一步研究肝癌的发生及防治提供了良好的动物模型.
作者：蓝祥英；郭秀婵；周玲；张永利；沈忠英；曾毅 刊期： 2001年第03期
乙型肝炎病毒(Hepatitis B Virus,HBV)P基因编码产物从功能上分为末端蛋白(1～178aa)、间隔区(179～336aa)、逆转录酶区(337～682aa)和RNA酶H区(683～816aa),各区有相应的生物学功能;逆转录酶区包含S基因主蛋白编码区.近年来的研究提出HBV感染者体内存在有准种[1,2]的假说.我们以逆转录酶区序列为研究靶区域,应用聚合酶链反应(PCR)技术扩增慢性乙型肝炎患者血清中的靶基因序列,随机选择克隆测序,比较其结果,证明了HBV准种特点的存在,并发现多种基因突变形式.
作者：董菁；成军；王勤环；施双双；洪源；皇甫竞坤；王刚；李莉；斯崇文 刊期： 2001年第03期
病毒学报杂志
主管:中国科学技术协会
主办：中国微生物学会
