学术投稿

中药五谷虫抗菌物质的分离纯化及抗菌机制的实验研究

王寿宇;张振;李旭东;吕德成

关键词:五谷虫, 二次免疫, 抗菌肽, 分离, 纯化, 抗菌机制
摘要:目的:分离纯化五谷虫的有效抗菌物质,同时研究五谷虫抗菌物质对大肠杆菌的杀伤作用,初步探讨其可能的抗菌机制.方法:将五谷虫与大肠杆菌共培养使五谷虫获得二次免疫.用DEAE-Sepharose Fast Flow 离子交换层析柱和sephacryls-200HR凝胶过滤层析柱分离纯化,浊度法检测,获得五谷虫抗菌物质.用荧光探针、琼脂糖凝胶电泳技术分析五谷虫的抗菌机制.结果:五谷虫粗提物浓度> 1.0 mg/mL时对大肠杆菌的抗菌效果较强,分子量在10KD左右.荧光探针技术示20 mg/mL的抗生素变化率为35.4%,50 mg/mL的抗生素变化率为40.0%,100 mg/mL的抗生素变化率为42.3%,2 mg/mL的粗提物变化率为1223.1%,80 mg/mL的粗提物变化率为1300.0%.琼脂糖凝胶电泳图示含2 mg/mL和80 mg/mL粗提物的泳道无质粒DNA条带.结论:用DE-AE-Sepharose Fast Flow离子交换层析柱和sephacryls-200HR凝胶过滤层析柱可以纯化得到有效的五谷虫抗菌成分,呈单一蛋白条带.其抗菌机制可能是破坏了大肠杆菌的细胞膜以及影响了质粒DNA的复制.
中华中医药学刊杂志相关文献
  • 组织芯片宫颈癌中EGFR的表达及意义

    目的:探讨宫颈癌中表皮生长因子受体(EGFR)的表达特点及其对宫颈癌分子靶向治疗的潜在意义.方法:构建含有80例宫颈癌标本的组织芯片,EnVision免疫组化法检测宫颈癌及癌旁组织中EGFR的表达,并分析EGFR的表达与各种宫颈癌临床病理学特征的关系.结果:EGFR在宫颈癌旁组织中呈少量表达或不表达,在宫颈癌中的表达率为94.8%,明显高于癌旁组织(P<0.01).在宫颈癌的组织中EGFR的过表达,与不同年龄无统计学差异,而与不同肿瘤的大小、组织类型、病理分级、侵袭深度、淋巴结转移、临床分期之间的差异有统计学意义(P<0.05;P<0.01;P<0.05;P<0.01;P <0.05;P <0.05).结论:EGFR的表达参与宫颈癌的生长,侵袭和转移过程,检测宫颈癌中的EGFR,可作为宫颈癌预后,筛选高危转移患者的有效指标,并且值得进一步以它作为宫颈癌靶向治疗新的作用靶点.

    作者:周素英;张品南;潘丹;夏作利;陈艳梅;冯国飞;郭群 刊期: 2013年第09期

  • 中蒙医温病学王氏连朴饮加滑石、黄芩与茵达日-4味汤体外抗轮状病毒、抗腹泻实验

    目的:明确王氏连朴饮加滑石、黄芩与茵达日-4味汤体外抗轮状病毒的机制及观察其抗番泻叶所致腹泻动物模型的效果,为临床应用提供科学依据.方法:实验一蒙药和中药对MA-104细胞(恒河猴胚胎肾细胞)的毒性作用,根据Takeuchi建立MTT(4,5二甲基噻唑-2,5-二苯基四唑溴化物)法检测药物的细胞毒性作用;药物对病毒感染的预防作用,用不同浓度的药物预先处理单层细胞2h后将100TCID50/0.1 mL(Tissue culture infective dose,半数组织培养感染剂量)的病毒每孔加入0.1 mL,吸附2h,弃病毒液,PBS(Phosphate Buffer Saline,磷酸盐缓冲液)洗涤2次,加细胞维持液培养,每天于倒置显微镜下观察细胞变化;药物对病毒的直接杀伤作用,将不同浓度的药物与100TCID50/0.1 mL的病毒液等量混合作用2h,再将其感染单层细胞,吸附2h后,弃上清,加入细胞维持液继续培养,每天于倒置显微镜下观察细胞变化;药物对病毒穿入细胞后的抑制作用,先用100TCID50/0.1 mL的病毒每孔0.1 mL感染细胞,吸附2h后,吸去病毒,加入不同浓度的含药维持液,每天于倒置显微镜下观察细胞变化.实验二复制番泻叶所致泄泻的小鼠模型,比较蒙药、中药与阿托品对腹泻的影响,通过计数湿粪,观察药物对腹泻的抑制程度.结果:蒙药的TC50(半数细胞毒性浓度)为2.76 mg/mL,中药的TC50为24.35 mg/mL,蒙药对MA-104细胞毒性明显大于中药;中药抗轮状病毒的主要作用方式为抑制病毒生物合成,但在阻断病毒吸附以及直接杀伤方面效果较差;蒙药能明显抑制轮状病毒复制,表现在阻断病毒吸附、直接杀伤以及抑制病毒增殖方面都有较好的效果,但细胞毒性较大;中药低剂量组和蒙药高剂量组抗腹泻效果优于其他组.

    作者:闫腾飞;韩雪梅;金星 刊期: 2013年第09期

  • 从脾胃论治肺胀

    肺胀是多种慢性肺系疾患反复发作,迁延不愈,导致肺气胀满,不能敛降的一种病证.临床表现为胸部膨满、胀闷如塞、喘咳上气、痰多、烦躁等.其病程缠绵,症状时轻时重,日久可见面色晦黯,唇甲青紫,心悸,脘腹胀满,肢体浮肿,甚或喘脱等危重症状.是常见病、多发病、危重病.通过学习四大经典并结合临床实践,认为肺胀临床表现每多虚实互见,寒热夹杂,主脏在肺,并与脾、肾、心密切相关,脾虚贯穿肺胀整个病程.临床常见外寒内饮、外寒内热、肺脾气虚、肺肾气阴两虚、肺心气阴两虚、阳虚水泛、痰蒙神窍7个证型.治疗主张祛邪顾脾胃、固本健脾胃、健脾以安肺、脾、肾、心.即从脾胃论治肺胀.

    作者:马丽佳;徐洪洁;曲妮妮 刊期: 2013年第09期

  • 不同职称中医师评判肾阳虚证的一致性

    目的:评价不同职称中医师对肾阳虚证诊断的一致性.方法:选择职称分别为主任医师、主治医师、医师的3名中医师,运用自编的肾阳虚证调查表对受试者作调查;采用Kappa统计方法分析3位医生的总体辨证结果及各项辨证因子的诊断一致性.结果:医师1和2、1和3、2和3对肾阳虚证诊断的一致性kappa值分别为0.66、0.42及0.57.3名医师诊断一致性较好的症状主要为腰痛酸软、四肢发冷、面目水肿、下肢水肿、五更泄泻、久病咳喘和夜尿频多.结论:不同职称中医师对肾阳虚证诊断的一致性较好,职称层次越接近,诊断一致性越好.

    作者:谭从娥;王米渠;冯文哲 刊期: 2013年第09期

  • 肺癌患者生存影响因素及预测分析

    肺癌是一种与生理、心理、社会因素密切相关的疾病.生存质量的评估在临床癌症患者研究中己逐渐地被视为评估治疗效果的重要组成部份,提高肺癌病人的生存质量已成为临床治疗的主要目的之一.

    作者:曹胜;陆华 刊期: 2013年第09期

  • 俞尚德以内痈论治消化性溃疡的理论与临床实践

    俞尚德主任医师擅长消化系统疾病的诊治,从消化性溃疡的概念、病因、病机、影像学、方药等方面与“内痈”进行比较论述,提出消化性溃疡以“内痈”论治的理论,并运用于临床实践,创建俞氏补中生肌汤,取得很好的临床疗效.

    作者:叶蔚;王小奇;刘苏娅;刘彬彬 刊期: 2013年第09期

  • 舒脑欣滴丸对急性缺血性中风患者血清补体C3、C4及炎症指标的影响

    目的:观察中药舒脑欣滴丸对急性缺血性中风患者血清补体C3、C4水平及炎症反应的影响.方法:急性缺血性中风患者随机分为对照组(神经内科基础治疗)和试验组(基础治疗+舒脑欣滴丸),观察两组患者治疗前及治疗14 d后NIHSS评分、血清补体C3、补体C4、高敏C反应蛋白(hs-CRP)、基质金属蛋白酶-9(MMP-9)水平.结果试验组患者NIHSS评分的下降值显著高于对照组,差别有统计学意义(P<0.01);试验组在降低血清补体C3水平和MMP-9水平方面均显著优于对照组,差别有统计学意义(均为P<0.01),但在降低血清补体C4和hs-CRP水平方面与对照组比较差别无统计学意义(P>0.05).结论:中药舒脑欣滴丸辅助治疗急性缺血性中风有利于改善患者神经功能缺损症状,在干预补体激活途径和炎症反应方面具有一定优势.

    作者:徐士欣;张军平;朱亚萍;徐媛媛;吕仕超;仲爱芹;郝雅文;翟昂帅 刊期: 2013年第09期

  • 运动区久留针对局灶性脑缺血大鼠VEGF的影响

    目的:观察运动区久留针对局灶性脑缺血模型(MCAO)大鼠脑组织中血管内皮生长因子(VEGF)的影响.方法:随机选取66只Wistar雄性大鼠采用改良线栓法建立局灶性脑缺血大鼠模型,43只大鼠复制成功模型后随机分为模型组(14只)、久留针组(14只)、短留针组(15只),并设假手术组(14只)进行对照研究,选取大鼠运动区进行针刺治疗,久留针组留针10h,短留针组留针30 min,每天1次,治疗2周,模型组及假手术组不作针刺治疗.利用免疫组化法检测VEGF的原位表达,荧光定量RT-PCR法检测VEGF mRNA的含量.结果:与模型组比较,久留针组脑组织中VEGF mRNA的含量升高,同时VEGF蛋白原位表达增高(P<0.05).结论:运动区久留针能促进梗塞区VEGF mRNA的含量及其蛋白的表达.

    作者:包烨华;曾友华;王延武;王翀敏;楚佳梅 刊期: 2013年第09期

  • 尿酸盐转运蛋白在原发性痛风及高尿酸血症中的研究进展

    原发性痛风及高尿酸血症是临床常见病、多发病,主要病因是尿酸盐转运蛋白异常致尿酸排泄减少.近年来,尿酸转运蛋白成为进行抗高尿酸血症和痛风药物的研究和开发新靶点,是目前防治痛风的新思路和新方法.简要概述尿酸盐转运蛋白在原发性痛风及高尿酸血症中的研究现状,以供原发性痛风及高尿酸血症的进一步临床诊治研究及特异性靶点药物研发参考.

    作者:杨会军;李兆福;万春平;彭江云 刊期: 2013年第09期

  • 眼针配合舌针治疗中风失语的疗效观察

    目的:观察眼针配合舌针治疗中风失语的临床疗效.方法:将62例中风失语患者随机分为治疗组30例和对照组32例.治疗组采用眼针配合舌针及语言康复训练治疗,对照组采用舌针配合康复训练治疗.3个疗程后观察两组语言功能恢复情况.结果:两组治疗后,治疗组语言恢复情况优于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05).结论:眼针配合舌针治疗中风失语的临床疗效显著,且优于舌针治疗.

    作者:黄春元 刊期: 2013年第09期

  • 隔药饼灸对动脉粥样硬化兔总胆固醇和甘油三酯含量的影响

    目的:观察隔药饼灸对动脉粥样硬化(AS)兔血脂总胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)含量的变化,探讨隔药饼灸对动脉粥样硬化兔血脂的调节作用.方法:将75只新西兰大耳白兔随机分为空白组、模型组、直接灸组、隔药饼灸组、西药组,每组15只,通过高脂饲料喂养及免疫损伤法建立兔AS模型.运用酶法测定干预后TC、TG含量的变化.结果:隔药饼灸、直接灸和西药均能降低兔AS血清中TC、TG的含量(P<0.01或P<0.05);隔药饼灸组和西药组TC、TG含量明显低于直接灸组(P<0.01或P<0.05).结论:隔药饼灸对血脂的代谢具有良好的调节作用;隔药饼灸与西药对动脉粥样硬化兔血脂的作用基本相似,且二者的作用均优于直接灸.

    作者:艾坤;艾潇;刘密;常小荣;张亮;符凌;李江山;谢辉 刊期: 2013年第09期

  • 金保方教授射精功能障碍辨治验案举隅

    事实上,就所有男性射精功能障碍而言,大多数疾病症状明显,但病因不明,病理不清,疗效不肯定,甚至有些疾病至今无统一定义,也无一种FDA认可的治疗方法.因此,中医的整体观及辨证论治仍然是治疗射精功能障碍的重要选择!节选诊治射精功能障碍的5则患者病例,通过分析治疗早泄、射精延迟、不射精、逆行射精和射精痛共5则射精功能障碍的验案,从而系统阐述治疗射精功能障碍的一些经验,其中中央型腰椎间盘突出症与早泄的相关性研究为国内首创,因其无创、价廉、良好的临床疗效,深得广大患者好评.金保方教授临床处理射精功能障碍,不拘泥于古法,更大胆探索新的治法治则,将中西医之长处有机结合,处方灵活化裁,故而能获得良效.金教授将辨病与辨证相结合,将男性生殖系统的解剖、病理生理、病位、病性融入到日常的实际临床病例当中去,故能创造性地分析得出符合患者实际病情的治疗方法,取得了满意的临床疗效.

    作者:刘建国;魏文娟;金保方 刊期: 2013年第09期

  • 左金分散片质量标准的初步研究

    目的:建立左金分散片质量标准.方法:采用HPLC测定小檗碱的含量,Diamonsil C18 (5 μm,250 mm×4.6 mm)柱,流动相:乙腈-0.01 mol/L磷酸(40∶60),检测波长346 nm,柱温35℃,流速1.0 mL/min,理化、薄层色谱法鉴别黄连和吴茱萸,结果:理化鉴别显阳性,薄层色谱中在与标准对照相应的位置显相同颜色的斑点.盐酸小檗碱HPLC峰面积与进样量关系为:y=57601X-54636,R2 =0.9996,在0.121~ 1.452 μg呈良好线性关系.精密度、稳定性、重现性良好,平均回收率99.07%.结论:所采用的鉴别及含量测定方法灵敏可靠,结果可用于控制该制剂的质量.

    作者:张华 刊期: 2013年第09期

  • 基于数据挖掘方法研究中医证候与二次中风的关系

    中医证候对二次中风有预警作用,历代中医文献多有论述,但多为医者个人的理论阐述和临床经验总结,带有片面性和主观性,不能客观揭示两者之间的真正关系,得不到医学界的公认.而基于智能算法的数据挖掘方法却能很好从无明显逻辑关系的大量数据中全面、客观的发掘出两个事物之间的潜藏关系,为中医证候与二次中风之间的关系提供先进的研究方法.

    作者:于海波;王玲;刘永锋;李志峰;何玉海;黄杏贤 刊期: 2013年第09期

  • 中药五谷虫抗菌物质的分离纯化及抗菌机制的实验研究

    目的:分离纯化五谷虫的有效抗菌物质,同时研究五谷虫抗菌物质对大肠杆菌的杀伤作用,初步探讨其可能的抗菌机制.方法:将五谷虫与大肠杆菌共培养使五谷虫获得二次免疫.用DEAE-Sepharose Fast Flow 离子交换层析柱和sephacryls-200HR凝胶过滤层析柱分离纯化,浊度法检测,获得五谷虫抗菌物质.用荧光探针、琼脂糖凝胶电泳技术分析五谷虫的抗菌机制.结果:五谷虫粗提物浓度> 1.0 mg/mL时对大肠杆菌的抗菌效果较强,分子量在10KD左右.荧光探针技术示20 mg/mL的抗生素变化率为35.4%,50 mg/mL的抗生素变化率为40.0%,100 mg/mL的抗生素变化率为42.3%,2 mg/mL的粗提物变化率为1223.1%,80 mg/mL的粗提物变化率为1300.0%.琼脂糖凝胶电泳图示含2 mg/mL和80 mg/mL粗提物的泳道无质粒DNA条带.结论:用DE-AE-Sepharose Fast Flow离子交换层析柱和sephacryls-200HR凝胶过滤层析柱可以纯化得到有效的五谷虫抗菌成分,呈单一蛋白条带.其抗菌机制可能是破坏了大肠杆菌的细胞膜以及影响了质粒DNA的复制.

    作者:王寿宇;张振;李旭东;吕德成 刊期: 2013年第09期

  • 山药超微粉和饮片量效关系研究

    目的:通过对山药超微粉体外溶出度和药效学研究确定其量效关系.方法:采用浆法测定山药超微粉体外溶出度,以尿囊素为指标用HPLC测定药物累积溶出率;结合体外溶出度及药效学实验确定山药超微粉的量效关系.结果:溶出度实验显示山药超微粉体外累积溶出率相与普通粉相当,显著高于临床煎煮也.药效学实验表明山药超微粉各剂量在提高环磷酰胺所致的免疫低下均有显著疗效,各剂量间呈现出量效关系,且超微粉1/6剂量与临床煎煮剂量疗效相当.结论:饮片经超微粉碎后体外溶出度较临床煎煮浸膏其有效成分溶出得到显著提高,同时增强药效,提示临床可减少用药剂量.

    作者:闾红燕;黄绳武;张志荣;高全平 刊期: 2013年第09期

  • 柴胡注射液诱导HepG2细胞凋亡的实验研究

    目的:探讨柴胡注射液诱导体外人肝癌细胞株HepG2凋亡的机制.方法:空白对照组(含10%小牛血清的1640培养液)、氟尿嘧啶阳性对照组(血峰浓度10 μg/mL),柴胡注射液6.25 mg/mL、12.5 mg/mL、25 mg/mL、50 mg/mL不同浓度实验组、柴胡注射液与氟尿嘧啶两药联合对照组比较.应用倒置显微镜、荧光显微镜观察细胞凋亡形态的改变;应用流式细胞仪检测细胞凋亡率;一步法TUNEL检测细胞凋亡率.结果:加入柴胡注射液12h后,与空白对照组相比,HepG2细胞形态发生显著变化,倒置显微镜下观察发现细胞体积缩小、变圆,胞浆量减少,并随着药物浓度增加,贴壁细胞逐渐减少,悬浮细胞增多,柴胡注射液联合氟尿嘧啶注射液组明显优于单药组;经柴胡注射液作用后的HepG2细胞,流式细胞直方图上均可见亚二倍体峰,且凋亡率随用药浓度的增大而增大;一步法TUNEL检测时,柴胡注射液作用12h后,细胞凋亡率均明显高于空白对照组.结论:柴胡注射液联合氟尿嘧啶可明显诱导HepG2细胞的凋亡,柴胡注射液中的有效成分可能是治疗肝癌的潜在药物.

    作者:唐婷婷;施贝德 刊期: 2013年第09期

  • 抑郁模型大鼠中医证候、HPA轴变化及助阳舒心方干预作用的研究

    目的:探讨慢性轻度不可预见刺激(CUMS)抑郁模型大鼠的中医证候、HPA轴变化及助阳舒心方的干预作用.方法:采用CUMS结合孤养建立大鼠抑郁模型,将60只雄性SD大鼠随机分为空白对照组、模型组、盐酸氟西汀组及助阳舒心方高、中、低剂量组;观察大鼠一般情况、四诊计量化指标,综合分析得出各组大鼠的中医证候特征;给药21 d后采血,测定血中促肾上腺皮质激素(ACTH)、皮质醇(CORT)含量.结果:模型组大鼠绝大多数表现为阳虚证和气虚证,助阳舒心方各剂量组和盐酸氟西汀组阳虚证和气虚证大鼠较模型组明显减少;与空白对照组比较,模型组大鼠血ACTH及CORT含量明显升高;与模型组比较,助阳舒心方各剂量组血CORT含量明显降低,高剂量组血ACTH含量明显降低.结论:抑郁模型大鼠表现出的证候特征属中医“阳虚证”,下丘脑-垂体-肾上腺(HPA)轴功能亢进可能是抑郁症“阳虚证”的微观表现,助阳舒心方对抑郁模型大鼠的“阳虚证”和亢进的HPA轴具有改善作用.

    作者:包祖晓;何贵平;陈世勇;周威;孙伟;张丽;陈宝君 刊期: 2013年第09期

  • 五倍子配伍中药无机元素分析研究

    目的:考察五倍子配伍厚朴、黄芪、黄芩、黄连、大黄五种中药后,其中无机元素含量和无机元素变化情况,为合理利用五倍子提供一定的实验依据.方法:利用电感耦合等离子体质谱法测定无机元素.结果:五倍子配伍中药,选取B、Mg、K、Ca、Mn、Ni、Fe、Cu、Zn、Ga、Rb、Sr、Cs、Ba、Br为指标元素.五倍子按一定比例配伍5种中药后,对人体有益的元素如Mg、K、Ca、Mn、Ni、Fe、Zn含量增加较多,对人体有害的重金属元素如Cu含量减少较多.结论:五倍子:厚朴(1∶2),五倍子:黄芪(1∶0.5),五倍子:黄芩(1∶2),五倍子:大黄(1∶2),五倍子:黄连(1∶0.5)的比例来配伍中药后,有益元素会增加,有害元素可能会减少,为临床应用提供依据.

    作者:张玉珠 刊期: 2013年第09期

  • 多倍体与八倍体半夏中草酸钙晶体含量的测定

    目的:测定多倍体(十六倍体)半夏和八倍体半夏原球茎以及块茎中草酸钙晶体的含量.方法:采用高效液相色谱法,以0.5%磷酸水溶液为流动相,以草酸为对照品,测定多倍体半夏和八倍体半夏中草酸钙晶体的含量.结果:多倍体半夏原球茎和块茎中草酸钙晶体的含量分别为(2.799±0.017)%和(1.375±0.037)%,八倍体半夏原球茎和块茎中草酸钙晶体含量分为为(1.136 ±0.028)%和(1.924±0.05)%.结论:半夏原球茎和块茎中均含有较高含量的草酸钙晶体,与八倍体半夏相比,多倍体半夏块茎中的草酸钙晶体明显比八倍体半夏低.

    作者:潘平;李伟平;鲁光耀;吕迪;蒋福升;丁志山 刊期: 2013年第09期

中华中医药学刊杂志

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主管:中华人民共和国国家中医药管理局

主办:中华中医药学会 ,辽宁中医药大学