韩保卫；王云帅；闫红杰
目的 研究人参皂苷Rg3对不同肝癌细胞增殖、迁移、黏附和调亡的影响及其作用机制.方法 以人肝癌细胞系HepG2、QGY细胞以及人成纤维细胞系HEL细胞为研究对象,运用MTT、细胞黏附、Transwell以及流式细胞仪观察Rg3对肝癌细胞的增殖、黏附、侵袭和转移以及细胞凋亡的影响;结合Western blot检测Rg3作用于HepG2和QGY细胞后CD44、VEGF蛋白的表达.结果 Rg3能特异性抑制HepG2和QGY肝癌细胞增殖、黏附、侵袭转移并显著诱导细胞凋亡(P ＜0.05);HepG2和QGY肝癌细胞暴露于Rg3后细胞中CD44和VEGF蛋白表达显著下调(P＜0.05).结论 Rg3能抑制人肝癌细胞增殖、黏附、侵袭转移并诱导细胞凋亡,其功能与CD44和VEGF蛋白表达密切相关.
作者：尹天翔；王燕燕 刊期： 2015年第03期
目的 构建RGD-重组葡激酶-人α微球蛋白融合蛋白的原核表达质粒,在大肠杆菌中表达融合蛋白,纯化并初步鉴定其生物学活性.方法 利用重叠延伸PCR获得目的融合基因片段RGD-rSAK-α1M,插入带有His-GST标签的原核高效可溶性表达载体PEGX-6P-1中.经酶切鉴定后,将重组表达质粒转化大肠杆菌BL21菌株,IPTG诱导目的蛋白表达,经Ni+亲和层析柱纯化后用3C蛋白酶切除重组蛋白的His-GST标签,再利用DEAE离子交换柱和分子筛纯化蛋白.后应用纤维蛋白平板溶圈法和血小板聚集抑制试验分别测定评价重组融合蛋白的溶栓活性和抗血小板聚集作用.结果 1)成功构建了RGD-重组葡激酶-人α微球蛋白融合蛋白.2)实现了目的融合蛋白在大肠杆菌上清液中的高效表达,并纯化了融合蛋白.3)体外实验表明纯化后的融合蛋白纤溶活性同尿激酶标准品无明显差异.4)融合蛋白抗血小板聚集作用较单纯重组葡激酶明显提高.结论 经文献检索确认为首次获得了纯化的RGD-重组葡激酶-人α微球蛋白融合蛋白,并验证了其纤溶活性和尿激酶标准品无明显差异,而抗血小板聚集作用较单纯重组葡激酶增强,为下一步进行融合蛋白免疫原性鉴定奠定了基础.
作者：苟冶然；龙小滨；白磊；何泉；陈检；张绍城；汪德强；周建中 刊期： 2015年第03期
研究发现低氧诱导因子(hypoxia inducible factors)HIF-1α和HIF-2α在高原土著动物藏羚羊、高原鼠兔的多种组织中均表达增高,表现出一定的组织差异性[1].高原根田鼠(plateau microtus oeconomus)也是一种栖居于青藏高原的土著小型哺乳动物,其不同组织HIF-1α及HIF-2α的表达情况如何,目前尚无研究.本研究通过检测高原根田鼠HIF-1α及HIF-2α mRNA的组织表达情况,揭示高原根田鼠在低氧环境下HIF-1α及HIF-2α基因的表达特征及其对该物种生存适应的生理意义.
作者：王海洁；范微；刘朋朋；王忠东；王亚平；格日力 刊期： 2015年第03期
目的 研究力达霉素(LDM)的抗骨髓瘤作用,并探讨抗骨髓瘤的作用机制.方法 处于对数增殖期人多发性骨髓瘤细胞RPMI 8226细胞随机分为空白对照组及0.1、0.5和1 nmol/L LDM组,用MTS法和流式细胞术检测细胞增殖率、细胞周期分布和凋亡情况,采用Western blot法检测凋亡相关蛋白和周期相关蛋白的表达量.结果 细胞培养48 h后,不同浓度LDM组细胞增殖数显著低于空白对照组数(P＜0.05),LDM组S期和G2/M期的细胞数显著高于对照组数(P＜0.05),细胞凋亡率显著高于空白对照组数(P＜0.05),LDM的增殖抑制作用和凋亡诱导作用呈剂量依赖性.不同浓度LDM组细胞caspase-3、caspase-7、caspase-9和poly ADP-ribose polymerase (PARP)的蛋白被切割明显高于对照组(P＜0.05),P21和P27蛋白的表达量明显高于对照组数(P＜0.05).结论 LDM能诱导人多发性骨髓瘤细胞RPMI 8226细胞凋亡并诱导S期和G2/M期阻滞,其诱导凋亡和周期阻滞的机制有待于进一步深入研究.
作者：李开济；魏静波；骆广玲；赵毓芳；闫丰；吕翠平；甄永占 刊期： 2015年第03期
目的 探究小鼠肝移植模型中移植肝内免疫排斥反应程度和调节性T细胞的数量及功能随时间变化的规律,为揭示机体免疫耐受的建立机制提供理论依据.方法 同基因或异基因肝移植术后3、7、14和28 d留取移植肝标本(每组每个时间点n=4),HE染色进行排斥活性指数评定(Banff评分标准),抗CD3、B220和Foxp3抗体免疫组化染色鉴定移植物内T、B淋巴细胞及调节性T细胞的浸润情况,实时荧光定量PCR检测Foxp3 mRNA表达,流式细胞术检测Treg细胞表面CLAT-4的表达.结果 异基因肝移植术后2周内发生免疫排斥反应,随后逐渐好转;移植物内浸润的炎性细胞主要为T淋巴细胞,其中Foxp3 mRNA及Foxp3阳性细胞数术后异基因组(15.0±1.3)显著高于同基因组(2.7±1.0).异基因移植肝内浸润的调节性T细胞表面CLAT-4表达(53％±3％)也显著高于同基因组(13％±2％)(P＜0.05).结论 异基因肝移植术后免疫排斥反应由调节性T细胞负向调节并达到免疫耐受.
作者：陈国锋；蔡国军；李国锋；王介川；郑树森 刊期： 2015年第03期
北京协和医学院根据国家有关规定,结合医学教育的特点设立了研究生奖、助学金制度.在相关工作的实施与开展中,结合医院奖、助学金管理实例,不断发现问题并积极完善和调整相应的制度,对该项工作的特点和难点进行了分析和总结,并对奖、助学金管理工作提出了改进建议.
作者：周欣；潘慧；常星；高玲央 刊期： 2015年第03期
白血病干细胞(LSCs)是慢性粒细胞白血病(CML)耐药、复发和预后不良的主要根源,特异性清除LSCs有望成为治愈CML的方法.在LSCs中,存在WNT/β-catenin、JAK/STAT、PI3 K/AKT等信号传导通路的异常.
作者：张小燕；张娟；史晋叔；万倩；房丽君；李剑 刊期： 2015年第03期
目的 研究对Tb舌癌细胞的整合素连接激酶(ILK)进行特异性siRNA沉默后,下游信号分子Akt、GSK3β磷酸化状态及对移植瘤生长和自发性转移的变化.方法 建立特异性siILK表达载体和无同源性的对照载体,通过Lipofectamine 2000介导稳定转染人舌鳞癌Tb细胞,然后将Tb、Tb vector和Tb silk 3组细胞分别注入裸鼠皮下构建移植瘤模型,5周后检测瘤大小和质量,对裸鼠肺及瘤组织行常规病理学检查,用免疫荧光技术检测癌细胞的p-Akt和p-GSK3β等的表达,并对瘤组织内血管生成情况进行观察.结果 Tb组、Tb vector组肺组织均发现自发性转移瘤,Tb siILK组肺组织未发现自发性转移瘤;Tb siILK组移植瘤细胞形态较其他二组体积减小,核分裂相较少,核质比例缩小;Tb siILK组在体内和体外实验中的p-Akt和p-GSK3β表达较其他二组均明显下降;Tb siILK组移植瘤质量(1.68± 1.35)g较Tb组(3.58±1.04)g与Tb vector组(3.64 ±0.65)g分别降低了53.0％和53.8％(P＜0.05);Tb siILK组移植瘤血管[(5.6±2.2)/视野]生成较Tb组[(15.3±2.3)/视野]和Tb vector组[(14.6±1.4)/视野]也明显减少(P＜0.05).结论 特异性ILK表达沉默抑制Tb舌癌移植瘤的血管生成和瘤细胞增殖,可能与其抑制下游信号传导分子Akt及GSK3β的磷酸化有关,提示ILK有望成为肿瘤治疗的靶基因.
作者：幸宇；邓世雄；齐进；姜容；陈俊霞 刊期： 2015年第03期
目的 研究表达突变型低氧诱导因子1α的内皮祖细胞(EPCs)对骨形态形成蛋白2(BMP2)转染的骨髓基质细胞(BMSCs)成骨及成血管的影响.方法 密度梯度离心法分离培养兔BMSCs和EPCs并鉴定,MTT法检测不同比例BMSCs/EPCs混合培养时增殖作用,以确定混合细胞比例.实验分为6组:A组(BMSCs);B组(Adv-BMP-2BMSCs);C组(BMSCs+ EPCs);D组(Adv-BMP-2 BMSCs+EPCs);E组(BMSCs+ Adv-HIF1αu-EPCs);F组(Adv-BMP-2 BMSCs+ Adv-HIF1αmu-EPCs).以Adv-HIF1αmu和Adv-BMP2的佳转染指数(MOI)分别转染EPCs和BMSCs.Western blot检测HIF-1α和BMP-2蛋白表达.行碱性磷酸酶活性检测;用qRT-PCR检测相关基因的表达,以评价共培养细胞成骨和成血管情况.结果 BMSCs与EPCs以1:1混合培养增殖能力优于1:2及2:1,故该实验混合细胞比例确定为1:1.Adv-BMP-2 BMSCs和BMSCs组可见BMP-2蛋白表达且表达量高于EPCs和Adv-HIF1αmu-EPCs组(P＜0.05).Adv-HIF1 αmu-EPCs组可见HIF1α蛋白表达且表达量明显高于Adv-BMP-2 BMSCs、BMSCs及EPCs组(P＜0.05).F组ALP活性以及成骨和成血管相关基因表达高于其他组(P＜0.05).结论 表达HIF1 αmu的EPCs能够增强Adv-BMP-2 BMSCs成骨和成血管潜能.
作者：於绍龙；刘丹平；赵辉；齐鑫；张解元；李谌 刊期： 2015年第03期
自噬对肿瘤的发生发展起抑制和促进双重作用,且能决定某些肿瘤的发展方向;通过激活或抑制自噬能达到肿瘤治疗效果.通过调控自噬,有可能成为肿瘤治疗的新靶点.
作者：程尼涛；马立峰；郭艾 刊期： 2015年第03期
目的 采用组蛋白去乙酰化抑制剂largazole作用于人脐带间充质干细胞(hUCMSCs),探讨largazole在防止hUCMSCs衰老作用和机制.方法 分离、纯化、鉴定人脐带间充质干细胞(hUCMSCs),筛选组蛋白去乙酰化抑制剂largazole扩增hUCMSCs合适的作用浓度.利用合适浓度进行hUCMSCs传代,通过real-time PCR法检测largazole 组P4、P8、P12和P16代hUCMSCs干性基因表达水平;通过CHIP检测组蛋白乙酰化抑制剂largazole对hUCMSCs 增殖、分化相关基因(OCT4、TERT、OPN)组蛋白H3K9、H3K14的乙酰化程度的影响.结果 hUCMSCs体外扩增随着传代数的增加,增殖能力逐渐下降,干性基因的表达水平也随之降低,并表现出来向成骨方向自主分化.低剂量的largazole可提高hUCMSCs增殖能力,延缓hUCMSCs的衰老.Largazole主要通过修饰OCT4、TERT、OPN基因启动子区域的组蛋白H3K9/K14ac,使hUCMSCs细胞增殖(OCT4)和端粒酶基因(TERT) mRNA表达增强,成骨分化基因(OPN)的表达减弱.结论 表明组蛋白去乙酰化抑制剂largazole可以通过修饰hUCMSCs组蛋白H3的乙酰化,在调控MSCs的生物学特性方面起到重要的作用.
作者：韩保卫；王云帅；闫红杰 刊期： 2015年第03期
睾丸中的胶质细胞源神经营养因子由支持细胞、管周细胞、精母细胞和球形精子合成和分泌,是调节精原干细胞自我更新和分化的关键因子;GDNF通过与SSCs膜上受体GFRα1结合形成GDNF-GFRα1复合物,再结合并活化RET,后激活MAPK、SFK和PI3K-AKT信号通路并达到调控SSCs自我更新和分化的目的.
作者：刘欢欢；陈曦；余树民；宋品；沈留红；曹随忠；左之才；马晓平 刊期： 2015年第03期
目的 研究肾透明细胞癌组织及癌旁正常肾组织中N-WASP表达特点及与临床病理的相关性.方法 对73例肾透明细胞癌组织及癌旁正常肾组织行N-WASP免疫组织化学染色,比较两组表达差异.对癌组织N-WASP表达水平与肿瘤病理分级,临床分期进行相关性分析.对总体生存率行单因素及多因素预后分析.结果 癌组织N-WASP表达低于癌旁组织表达(P ＜0.001).癌组织中N-WASP低、中表达的患者生存率高于高表达患者(P＜0.01).癌组织N-WASP表达水平(P＜0.01)与患者总体生存率相关.癌组织N-WASP表达水平可以作为判断肾透明细胞癌预后的独立预测因素(P＜0.05).结论 N-WASP在肾透明细胞癌中表达明显下降,并可以作为独立预测因素提示患者预后.
作者：陈健；纪志刚；刘广华；周立 刊期： 2015年第03期
SIRT5是沉默信息调节因子Sirtuin蛋白家族的亚型之一,位于线粒体内,具有去乙酰化、去琥珀酰化、去丙二酰化以及去戊二酰化等功能,参与包括能量代谢、物质代谢以及细胞氧化应激及凋亡等多个代谢过程的调控,阐明SIRT5对细胞内主要生理代谢过程的影响.
作者：王悦；刘率男；申竹芳 刊期： 2015年第03期
目的 探讨曲美他嗪和瑞舒伐他汀对心肌梗死(MI)的心脏保护作用.方法 结扎左冠状动脉前降支建立大鼠MI模型.大鼠分为假手术组、MI组、曲美他嗪+MI组、瑞舒伐他汀+MI组、联合用药+MI组.MI之后每天给予药物治疗14 d.测定血流动力学参数.TUNEL染色检测凋亡指数.Evans/TTC双染色测定心肌梗死面积.Western blot测定Bcl-2和Bax表达.结果 与假手术比较,MI大鼠LVSP、dP/dTmax及dP/dTmin均显著降低(P＜0.01),LVEDP显著性升高(P＜0.01).与MI组比较,曲美他嗪+MI组、瑞舒伐他汀+MI组和联合用药+MI组的LVSP、dP/dTmax及dP/dTmin均显著增加,LVEDP呈显著性下降(P＜0.05).假手术组心肌中未见明显心肌细胞凋亡.MI组心肌细胞凋亡指数显著上升,且Bcl-2和Bax表达也有显著增加,以Bax表达增加为主.药物干预后,与MI组相比,心肌细胞凋亡显著下降,Bcl-2与Bax表达均明显下降,以Bax下降为主(P＜0.05),上述变化以联合用药组+ MI明显.结论 心肌梗死后曲美他嗪和瑞舒伐他汀治疗可以改善心功能,可能与抑制心肌细胞凋亡、调节Bax和Bcl-2表达有关.两者联合给药疗效更佳.
作者：谭力力；刘丽敏；李潞；赵红丽 刊期： 2015年第03期
生理浓度的睾酮具有抗动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)作用[1],但其分子机制尚不清楚.巨噬细胞迁入内膜下吞噬脂质转变为泡沫细胞是AS早期的标志性事件.本文旨在观察睾酮对泡沫细胞形成的作用,以及对相关蛋白表达的影响,探讨睾酮抗AS的可能机制.1 材料与方法1.1 材料:小鼠巨噬细胞系RAW264.7(中科院上海细胞生物所);氧化型低密度脂蛋白(ox-LDL)(尚善生物);细胞胆固醇检测试剂盒(普利莱公司);蛋白浓度测定试剂盒(碧云天公司);睾酮、油红O(Sigma公司);抗线粒体融合素2(Mfn2)抗体(Abcam公司),抗CD36,ATP结合盒转运蛋白A1(ABCAl)及β-actin抗体,辣根过氧化物酶标记的IgG(CST).
作者：周炜；刘玮；廖华；陈曼华 刊期： 2015年第03期
目的 探讨宁夏回族动脉粥样硬化(As)患者外周血中卵磷脂胆固醇酰基转移酶(LCAT)基因启动子区甲基化水平及与血脂的关系.方法 选择经颈部多普勒超声确诊的AS患者35例及正常者42例作为对照组,采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测外周血LCAT mRNA的表达,巢式降落式甲基化特异性PCR (nt-MSP)检测外周血LCAT基因DNA启动子区甲基化程度,全自动生化分析仪检测血脂水平.结果 AS组血清TC、TG和LDL水平显著高于对照组(P ＜0.001,P＜0.001,P＜0.05);HDL水平低于对照组;与对照组相比,AS组外周血LCAT mRNA表达降低了61.2％ (P＜0.01),同时LCAT基因甲基化程度升高了1.3倍(P＜0.05).结论 回族AS患者外周血中LCAT DNA高甲基化与AS的发生发展和血脂变化相关.
作者：陈久凯；周龙霞；王艳华；马文斌；赵丽；刘现梅；杨晓玲；姜怡邓 刊期： 2015年第03期
目的 观察钙蛋白酶对表皮生长因子(EGF)诱导的雌激素受体(ER)阴性乳腺癌细胞增殖的影响.方法 体外培养人乳腺肿瘤系MDA-MB-231,经10 ng/mL EGF处理后,用蛋白印迹法检测FAK和CANP1蛋白表达.用CANP抑制剂Calpeptin (CALP)预处理对EGF上述效应的影响;通过集落形成实验检测乳腺癌细胞增殖能力.结果 EGF可诱导FAK蛋白表达上调及蛋白剪切反应(P＜0.01),也可诱导CANP1自身蛋白剪切(P＜0.05),上述效应可被CALP显著削弱或阻断(P＜0.05);EGF还可诱导MDA-MB-231细胞集落形成(P＜0.05),此效应也可被CALP预处理显著抑制(P＜0.05).结论 CANP可能成为抑制ER阴性乳腺癌细胞增殖的一个潜在药物作用靶点.
作者：安静；朱筑霞；王红梅；李铮；何艳；陈华妹；王旭东 刊期： 2015年第03期
成为一名完美的临床医师:实习医师、住院医师和高年资医师的应知应会随着现今医院医学的规模和复杂性的迅猛增长,医学生们的学习难度曲线也随之陡然上升,同时也需要经验丰富的医师作为导师引导和照顾他们更好的适应与成长.因此,有了《医院医学:目前的概念》这套系列丛书的出炉,其中本书《成为一名完美的临床医师》,介绍了医学生和临床医师如何在忙乱的实践中辩证有序的思考、解决问题,战胜在纷繁信息的评估、整合和表达中遇到的困难和挑战.
作者：蔺晨 刊期： 2015年第03期
目的 分析糖原合酶激酶-3(Glycogen Synthase Kinase-3β,GSK-3β)在胶质瘤细胞中的表达水平,探讨GSK-3β对胶质瘤细胞增殖、侵袭的影响及其作用机制.方法 RT-PCR及Western blot分析GSK-3β在人正常星形胶质细胞1800及A172、T98G、U87和U251 4种胶质瘤细胞中的表达水平;将构建的pcDNA3.1(+)-GSK-3β(rGSK-3β)重组表达载体及PAX3 siRNA转染人胶质瘤细U87,MTT法检细胞活力,Transwell小室检测细胞侵袭能力.结果 与1800细胞相比,4种胶质瘤细胞中GSK-3β的表达水平明显增高(P＜0.05).GSK-3β过表达促进了U87细胞的增殖,同时加强了侵袭细胞的数目(P＜0.05).分析表明,GSK-3β重组体转染显著加强细胞中PAX3的水平(P＜0.05);当用PAX3 siRNA转染沉默细胞中PAX3的水平后,GSK-3β过表达诱导的细胞的增殖及侵袭能力明显降低(P＜0.05).结论 GSK-3β在胶质瘤细胞中过表达,且有可能通过PAX3来调控胶质瘤细胞的增殖及侵袭.
作者：石歆 刊期： 2015年第03期
基础医学与临床杂志
主管:北京市科学技术协会
主办：北京生理科学会
