罗文娟；林静；王传富
背景:基因治疗是目前脊髓损伤治疗的方向,目的基因和载体是基因治疗的关键.目的:构建携带增强型绿色荧光蛋白基因(Enhanced green fluorescence protein,EGFP)标志人脑源性神经营养因子(human brai-denved neurotrophic factor,hBDNF)基因重组腺病毒载体.设计、时间及地点:单.一样本观察,实验于2007-09/2008-06在福建医科大学附属第一医院完成.材料:感受态大肠杆菌DH-5 α购自美国Stratagene公司;pDC316-hBDNF、载体质粒pDC316-mCMV-EGFP、腺病毒骨架质粒pBHGlox_E1,3Cre 、腺病毒包装系统AdMax 和包装细胞株293购自加拿大Mixcrobixg- Biosysrerms公司.方法:以pDC316-hBDNF为模板,聚合酶链反应扩增酶切获得hBDNF基因片段,连接到带有EGFP标记基因的载体质粒pDC316-mCMV-EGFP上,构建穿梭质粒pDC316-hBDNF-mCMV-EGFP.利用AdMax包装系统.穿梭质粒与骨架质粒pBHGlox_E1,3Cre共转染293包装细胞,同源重组产生复制缺陷型重组腺病毒载体Ad5-hBDNF-EGFP,反复感染293细胞扩增病毒后,离子交换法纯化病毒,并测定病毒颗粒数及滴度.主要观察指标:①hBDNF基因原始质粒聚合酶链反应鉴定.②穿梭质粒pDC316-hBDNF-mCMV-EGFP的构建及鉴定.③重组腺病毒Ad5-hBDNF-EGFP的包装、扩增及纯化.④毒种目的基因的聚合酶链反应鉴定.⑤纯化病毒的滴度测定结果.结果:经聚合酶链反应鉴定、限制性酶切分析及序列测定,证明已正确构建重组穿梭质粒pDC316-hBDNF-mCMV-EGFP和重组腺病毒载体Ad5-hBDNF-EGFP;扩增纯化后,测得重组腺病毒颗粒数为2.4×1011VP/mL,A260/A280值约为2.0,滴度为0.8×1010 CCID50/mL.结论:已成功构建重组腺病毒载体Ad5-hBDNF-EGFP,为hBDNF基因功能及基因治疗的进一步研究奠定实验基础.
作者：王长昇；林建华；吴朝阳 刊期： 2009年第20期
背景:目前研究证实,Rac1蛋白能够调控甘油醛-3-磷酸脱氢酶氧化酶的表达,刺激内源性活性氧产生,引起内皮细胞毒性改变.目的:探讨Rac1蛋白在缺氧诱导的人血管内皮细胞凋亡中的作用及其调控机制.设计、时间及地点:单一样本观察,于2007-01/2008-05在解放军沈阳军区总医院医学实验科完成.材料:自备人脐静脉内皮细胞、Phoenix amphotropic 293包装细胞、持续活化型pLNCX-L61Rac1和主导抑制的pLNCX-N17Rac1反转录病毒真核表达载体.方法:体外培养人脐静脉内皮细胞,将细胞以体积分数为1%O2、5%CO2及94%N2缺氧条件下培养72 h.用持续活化型pLNCX-L61Rac1(L61Rac1感染组)和主导抑制型pLNCX-N17Rac1(N17Rac1感染组)反转录病毒真核表达载体转染人脐静脉内皮细胞,并筛选稳定表达的细胞克隆.主要观察指标:①感染后稳定表达阳性克隆筛选.②采用pull-down和Western blot分析感染前后细胞内Rac1的活化.③采用持续缺氧的方法诱导内皮细胞凋亡,用TUNEL染色和Western blot检测缺氧72 h后各实验组细胞中cleave-caspase3表达.④应用免疫荧光和Western blot分析血清反应因子的表达和定位.结果:筛选出稳定表达持续活化型pLNCX-L61Rac1和主导抑制型的pLNCX-N17Rac1的人脐静脉内皮细胞克隆:应用putl down和Western blot证实各组细胞内Rac1的活化改变:与人脐静脉内皮细胞和N17Rac1感染细胞比较.缺氧72 h后L61Rac1细胞发生明显凋亡.进一步应用Western blot分析证实3组细胞中血清反应因子表达无明显改变,但人脐静脉内皮细胞和N17Rac1-HUVECs中血清反应因子为入核表达,而L61Rac1-HUVECs中血清反应因子蛋白在细胞核周大量表达,血清反应因子发生出核转位.结论:Rac1参与了内皮细胞凋亡的调控,机制可能与其调控血清反应因子蛋白核转位有关.
作者：韩秀敏；孙英慧；朱鲜阳；盛晓棠；张端珍；崔春生 刊期： 2009年第20期
背景:脂肪细胞因子在2型糖尿病发病中的作用尚未明确;针灸治疗2型糖尿病早中期具有良好的疗效,那么针刺对脂肪细胞因子是甭也有影响呢?目的:验证脂防细胞因子与2型糖尿病的关系以及针刺对2型精尿病机体脂肪细胞因子的影响.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2006-08/2007-01在南京中医药大学动物实验中心完成.材料:刚断乳的SD雄性大鼠100只,平均体质量50 g左右,随机分为普通饲料组20只,高脂饲料组80只,高脂饲料组大鼠体质量高于普通饲料组平均体质量20%为食源性肥胖大鼠.方法:给40只食源性肥胖大鼠腹腔注射小剂量链脲霉素,成功造成2型糖尿病模型27只,随机分为模型组、针刺组(针刺后二里、内庭和胰俞.1次/d)及优降糖组[格列本脲片1.6 mg/kg给药,1次/d],每组各9只,处理4周,与随机抽取的9只正常饲料大鼠做对照.主要观察指标:以快速血糖仪检测空腹血糖,放免法检测空腹胰岛素、ELISA法检测血清脂联素、抵抗素和肿瘤坏死因子α质量浓度.结果:模型组空腹血糖、空腹胰岛素、肿瘤坏死因子α明显高于正常组(P<0.05或0.01):针刺组与模型组比较,空腹血糖、空腹咦岛素、肿瘤坏死因子α明显下降(P<0.05或0.01),接近正常组水平:优降糖组与模型组比较,空腹血糖明显下降(P<0.001),接近正常组水平,空腹胰岛素和肿瘤坏死因子α有所下降,和正常组仍有差异;模型组、正常组、针刺组、优降糖组血清脂联素和抵抗素水平差异无显著性意义(P>0.05).结论:血清脂联素和抵抗素水平与2型糖尿病的发病无明显关系,血清肿瘤坏死因子α可能参与了2型糖尿病的发病机制;针刺和优降糖均具有明显的降血糖、改善胰岛素抵抗、抑制血清肿瘤坏死因子α作用,针刺作用优于优降糖.
作者：袁爱红；刘志诚；魏群利；蔡辉 刊期： 2009年第20期
营养不良性大疱性表皮松解症是一种由于人体Ⅶ型胶原基因突变或缺失所引起的遗传性疾病,临床特征为创伤诱发的水疱和瘢痕,并发症以恶性鳞状细胞痛多见,是导致患者死亡的主要因素,目前仍无有效的治疗方法.近年来随着对该病分子发病机制及Ⅶ型胶原的结构、功能等方面的深入研究,许多学者提出了组织工程化皮肤替代物治疗、细胞治疗以及基因治疗和重组人类Ⅶ型胶原蛋白治疗等方法,已成为营养不良性大疱性表皮松解症治疗研究的热点.
作者：侯英萍 刊期： 2009年第20期
背景:甘草酸苷对缺血再灌注损伤保护作用的研究主要集中于心、肾、肠等器官,对骨骼肌的研究甚少.目的:验证复方甘草酸苷对兔骨髂肌缺血再灌注损伤的保护作用.设计、时间及地点:血清学及组织形态学水平的随机对照动物实验,于2008-02/09在重庆医科大学临床检验诊断学教育部重点实验室完成.材料:选用24只新两兰大白兔,按随机数字表法分为3组,即假手术组、模型组及复方甘草酸苷组,每组8只.方法:模型组动物制备右后肢骨骼肌缺血损伤模型,缺血4 h后再灌注24 h;复方甘草酸苷组动物缺血4 h后给予复方甘草酸苷20 mg/kg,再灌沣24 h:假手术组动物仅游离山股动脉不进行缺血,4 h后缝合切口并给予等量生理盐水.主要观察指标:观察肌肉损伤后甘草酸苷对血浆乳酸脱氢酶、肌酸激酶活性及丙二醛浓度,肌组织髓过氧化物酶活性、湿质量/干质量比值及P-选择索mRNA表达水平的影响;光镜下观察骨骼肌的组织形态学改变.结果:假手术组的血浆肌酸激酶、乳酸脱氢酶活性和丙二醛浓度显著低于缺血再灌注组及复方甘草睃苷组(P<0.05),复方甘草酸苷组显著低于缺血再灌注组(P< 0.01).假手术组的骨骼肌组织髓过氧化物酶活性和湿质量/干质量比值显著低于缺血再灌沣组及复方甘草酸苷组(P<0.01),复方甘草酸苷组显著低于缺血再灌注组(P<0.01).10倍镜下坏死肌纤维数缺血再灌注损伤组显著大于复方甘草酸苷组(P<0.05).骨骼肌组织中P-选择素mRNA表达水平假手术组显著低于缺血再灌注组(P<0.01),复方甘草酸苷组显著低于缺血再灌注组(P<0.05).结论:复方甘草酸苷对骨骼肌缺血再灌注损伤有明显的保护作用.
作者：肖瑞法；邓忠良；卢卫忠；陈富 刊期： 2009年第20期
人体血液循环系统是一个非常复杂的有机体,仍有许多问题无法解决,但是借助于现代的科学技术将会逐渐揭开心血管循环系统的神秘面纱.心血管循环系统是人体生理系统的核心,建立其数学模型,模拟其血液循环,可为心脏病医疗设备的设计提供辅助工具,对研究心脏疾病的成因和治疗具有指导意义.文章描述了心血管循环系统建模的历史、种类及其各种建模方法,并以Harvard-MIT(哈佛-麻省理工)建立的心血管仿真模型-RCVSIM模型为例,阐述了模型建立的思路.
作者：徐林；吴效明；陈丽琳 刊期： 2009年第20期
背景:在细胞水平,胰岛素样生长因子结合蛋白3竞争性地与胰岛素样生长因子结合阻止了胰岛素样生长因子与其受体结合,从而抑制了胰岛素样生长因子的活性.目的:观察衰老细胞中调节性蛋白质胰岛素样生长因子结合蛋白3的生物学特征.设计、时间及地点:单一样本观察,于2006-09/2007-09在西安交通大学生物医学信息工程教育部重点实验室完成.材料:人胚肿二倍体成纤维细胞(2BS)购于中国生物制品研究所.方法:用Northern的方法显示胰岛素样生长因子结合蛋白3基因的表达在年轻和衰老的2BS细胞中存在差异:聚合酶链反应扩增出人类胰岛素样生长因子结合蛋白3上游包括5'-UTR区的2kb的序列,并用酶切得到4组不同长短的胰岛素样生长因子结合蛋白3启动子片段并确定可调控转录活性的区域;通过重叠寡核苷酸凝胶阻滞实验确定在该活性区域中的增强子元件-IEE(IGFBP-3 enhancerelement)及其与蛋白结合的碱基序列等;用DNase I Footprinting法确定了IEE中与蛋白结合的核心序列.主要观察指标:①胰岛素样生长因子结合蛋白3基因在年轻和衰老细胞中的表达差异.②通过重叠寡核苷酸确定增强子元件.③通过凝胶阻滞试验证实该复合物结合活性与衰老相关的.④通过凝胶阻滞试验确定IEE与蛋白结合的碱基序列.⑤用DNase I Footprinting法确定IEE中与蛋白结合的核心序列.⑥判断与IEE结合蛋白的相对分子质量.结果:与年轻的2BS细胞相比,衰老的2BS细胞中胰岛素样生长因子结合蛋白3基因的表达升高:5'-ccagcctgccaa gca gcg tgcCCCggttgc-3'是胰岛素样生长因子结合蛋白3的增强子元件;该元件与蛋白结合的核心序列是CTG CCA和GCGTGC CCC G,而且这种结合是与衰老相关的:结合蛋白的相对分子质量大约在27 000.结论:在2BS细胞中发现了一个新的转录增强子,它与蛋白结合的核心序列是CTGCCA和GCG TGC CCC G,可与一个大约27 000的蛋白结合:在衰老细胞中可选择性地促进胰岛素样生长因子结合蛋白3的表达.
作者：任文君；王群义；吕小凤；毛泽斌；蒋晓刚 刊期： 2009年第20期
背景:利用牙周膜干细胞的多向分化潜能修复牙周缺损是近来研究的热点课题.目的:探讨利用可吸收生物材料冻干胶原膜和犬牙周膜干细胞在体外构建组织工程牙周膜的可行性.设计、时间及地点:单一样本观察,于2003-11/2004 10在解放军第四军医大学口腔医院组织工程实验中心完成.材料:生物膜为冻干胶原膜由解放军第四军医大学口腔医院组织工程实验中心提供.从4只1周岁犬的下颌前牙中分离培养牙周膜干细胞.方法:取第3代犬牙周膜下细胞扩增至1×107数量级,种植在冻干胶原膜的表面,形成细胞-生物材料复合物,每日更换培养液,倒置相差显微镜动态观察细胞形态和黏附生长状况,体外培养1周左右,组织做扫描电镜、透射电镜和苏木精-伊红染色,观察细胞在冻干胶原膜材料中的生长、增殖以及基质分泌情况.主要观察指标:①光镜观察细胞接种后乍长状况.②电镜和组织学观察细胞支架复合结果.结果:培养6 d后,犬牙周膜干细胞分泌的基质与支架材料形成网状结构.复合物体外培养1周,细胞黏附在生物支架上,细胞增殖和生长良好,分泌大量基质并形成纤维状结构,细胞复层生长,伸入膜的内部,增殖的细胞和分泌的基质与膜交接成一整体,复合物成为纤维网状组织,基本具备牙周膜的纤维状结构.结论:利用冻干胶原膜为支架,犬牙周膜干细胞为种子细胞,可在体外成功构建组织工程化牙周膜.
作者：常秀梅；刘宏伟；金岩；陈坤；刘源；王新文 刊期： 2009年第20期
背景:前交叉韧带切断后可引起膝关节透明软骨的退变,导致骨关节炎的发生,但对外侧半月板的影响目前尚未见文献报道.目的:观察兔前交叉韧带切断后外侧半月板组织学变化.设计、时间及地点:同体对照观察,于2007 09/12在中南大学湘雅医学院动物学部完成.材料:6月龄雄性新西兰大白兔48只,实验初始体质量(2.5±0.3)kg.方法:48只大白兔双后侧膝关节按简单随机法配对分为实验侧和对照侧造模.实验侧行前交叉韧带切断手术.对照侧显露前交叉韧带但不行切断,行止血及体积分数为3%双氧水、生理盐水交替冲洗后缝合切口.选取造模后第1,3,6,8周为观测时间点,每个时间点随机处死12只.主要观察指标:对外侧半月板进行大体观察和组织学检查.结果:前交叉韧带切断组外侧半月板第1周即可见退变,随时间延长退变逐渐加重,对照组未见明显退变.半月板纤维软骨退变组织学评分:实验组(第1,3,6,8周)均高于对照组(P<0.05):实验组第6,8周均高于第1,3周,差异有显著性意义(P<0.05):实验组第1,3周差异无显著性意义(P>0.05).结论:前交义韧带断裂可引起外侧半月板退变.
作者：李国军；李康华；朱勇；李思鸿；张俊 刊期： 2009年第20期
背景:关节镜下重建前交叉韧带的移植物的选择存在很多争论.目前两个以上移植物之间的比较研究还比较少见.目的:比较分析膝关节镜下自体、异体骨-髌腱-骨与半腱肌腱3种重建前交叉韧带的疗效.设计、时间及地点:回顾分析,对比观察,于1998-06/2005-06在解放军广州军区广州总医院骨科完成.对象:选择同期收治的前交叉韧带损伤患者142例,其中异体髌腱移植87例,自体髌腱移植34例,自体双股半腱肌21例.方法:回顾分析34例膝关节镜下自体骨-髌腱-骨移植、21例自体半腱肌腱移植和87例异体骨-髌腱-骨移植蕈建前交叉韧带的情况,随访31～84个月.采用Lysholm膝关节评分、国际膝关节文献编制委员会分级评估标准(IKDC)和KT2000评价疗效,并检测术后住院期间体温.主要观察指标:①各组患者Lysholm评分、IKDC分级.②不良事件及副反应.结果:3组间患者满意度、关节稳定性及功能差异均无显著性意义.自体骨-髌腱-骨重建组膝前痛发生率较异体骨-髌腱-骨、半腱肌腱组高.异体骨-髌腱-骨术后发热时间平均10.1 d,自体骨-髌腱-骨和自体半腱肌组分别为4.9 d和5.1 d,与异体组相比差异有显著性意义.11例异体骨-髌腱-骨出现排斥反应,表现为胫骨隧道外口持续果酱样液体流出.经换药、激素或消炎痛治疗后痊愈.结论:关节镜下自体、异体骨-髌腱-骨与半腱肌腱移植重建前交叉韧带的疗效相同,但各组间供区并发症、排斥反应等并发症之间的差异将影响人们对移植物的选择.
作者：郑小飞；黄华扬；张余；李凭跃；尹庆水 刊期： 2009年第20期
背景:X射线电离辐射对睾丸的损伤,直观的是通过对组织切片进行染色,近而进行形态学观察,可以直观地观察到组织学的损伤.目的:观察X射线电离辐射后成年小鼠睾丸组织损伤的形态学变化.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2008-01/10在延安大学医学院实验室完成.材料:BALB/c健康雄性的成年小鼠(6-8周龄)18只,均购自解放军第四军医大学,体质量(20.0±2.5)g,实验前2周饲养于室温(20±3)℃,空气湿度50%以上,饲料垫料均干燥消毒,标准饲料饮水无限制.方法:采用辐射剂量1.0 Gy和2.0 Gy的X射线对成年小鼠进行全身照射,于照射后2周取小鼠睾丸组织,称质量,制备标本,苏木精一伊红染色,示睾丸组织变化:对照组不进行照射.主要观察指标:正常小鼠睾丸质量与照射后睾丸的质量之比:正常睾丸组织生精小管与照射后睾丸生精小管结构的变化的对比.结果:正常小鼠体质量与辐射组体质量无明显差异,但睾丸质量/体质量之比随照射剂量不同出现明显差异.苏木精-伊红染色显示睾丸组织在正常对照组小鼠睾丸组织生精小管管腔形状规则,管壁摹膜完整,管腔内生精细胞层数多,排列规则紧密,管腔内充满成熟的精子在照射后出现病理性变化:睾丸组织内各级生精细胞排列混乱,生精细胞剥离脱落,空洞形成,管腔内精子数晕明显减少;随照射剂量增加,生精小管结构明显紊乱,管腔皱缩、塌陷,生精上皮明显变薄,排列松散,管腔内已无成熟精子.结论:X射线辐射后小鼠睾丸质量明显减少,且随照射剂量的不同有明显差异,损伤程度随剂量的增加而加重.
作者：王艳梅 刊期： 2009年第20期
背景:目前对8岁以下儿童电除颤的有效剂量及安全范围尚无统一的规定.目的:使用自动体外除颤器及人工除颤器与儿童用电极对幼猪室颤模型除颤,进行有效性及安全性评价.设计、时间及地点:实验猪电除颤体外实验,于2006-10/2007-05在苏州大学实验动物中心动物手术室完成.材料:2月龄太湖猪30只,体质量7.0～25.0 kg,由常熟畜禽良种有限公司提供.方法:30只幼年太湖猪,按体质量随机分为自动体外除颤器组和人工除颤组,每组15只.诱发审颤2 min后分别以自动体外除颤器及人工除颤器50 J除颤,一次电击后立即进行心肺复苏,不复律的动物以70 J电击后联用心肺复苏.除颤后不同时间做血气分析、电解质及心肌晦谱检查、超声波心功能测定和神经学打分,72 h后处死作大体解剖.主要观察指标:动态监测整个实验过程动物心电图、血压、呼吸、体温等,检查除颤前后动物的超声心动图、血气、电解质、神经行为学打分以及大体解剖.结果:两组动物50 J一次电击后立即给与心肺复苏,复苏成功率达86.7%:部分猪放电除颤后心电图ST段压低或抬高,并在几分钟内回到基线;两组动物除颤成功后心脏射血分数、左心审面积变化分数3.0～4.0 h内均显著降低(P<0.05),72 h恢复正常;血液分析各项指标与试验前差别无统计学意义(P>0.05);复苏后神经行为和大体解剖未见片常.结论:应用成人双相波自动体外除颤器联用具备能量衰减配件的儿童专用电极,对7～25 kg的幼猪室颤模型取得了较满意的复苏效果.
作者：周正宇；王禹斌；周慧英；黄猛；谢承泰；薛智谋 刊期： 2009年第20期
背景:胶原酶消化方法是胰岛细胞分离技术中关键的第1步,其成败关系到胰岛细胞移植的存活与功能.目的:针对不同质量浓度和同一质量浓度条件下不同时间点胶原酶分离纯化所获得胰岛细胞的效果进行对比,以确定理想的胶原酶分离胰岛细胞的标准化方案.设计、时间及地点:单一样本观察,细胞学体外观察,于2006-09/2007-05在解放车总医院第二附属医院全军器官移植实验室完成.材料:胰岛细胞供体为SD大鼠.将32只大鼠按随机数字表法分为4组,即胶原酶0.5 g/L,1.0 g/L,1.5 g/L及2.0 g/L组,每组8只.方法:每组前4只动物.采用0.5,1.0,1.5,2.0 9/L 4种质量浓度的胶原酶对胰腺进行分离,消化过程中每隔10 min为1个时间点,双硫腙染色观察分离情况,分析结果并确定适合获取胰岛量多的时间点.随后每组另外4只动物按照确定时间点停止消化,应用间断密度梯度离心法纯化胰岛,双硫腙和丫啶橙-碘丙啶荧光染色分析移植物形态和存活率,确定分离所需胶原酶的佳浓度.主要观察指标:调整胶原酶的质量浓度与消化时间,荧光显微镜下胰岛细胞计数,评估胶原酶佳质量浓度及消化时间.结果:分忻后确定各组胰岛细胞佳获取时间,胶原酶0.5 g/L组50 min,胶原酶1.0 g/L组40 min,胶原酶1.5 g/L及2.0 g/L组均为30minm.胶原酶0.5 g/L组分离并纯化后胰岛细胞收获量显著低于其他3组(P<0.01),胶原酶1.0 g/L.1.5 g/L及2.0 g/L组两两比较差异无显著性意义(P>0.05).胶原酶2.0g/L组胰岛细胞平均存活率显著低于其他3组(P<0.01),胶原酶0.5 g/L,1.0 g/L及1.5 g/L组两两比较差异无显著性意义(P>0.05).结论:在胰腺灌注良好情况下,胶原酶消化条件控制在质量浓度1.5g/L,时间30min进行水浴振荡可获得很好的分离效果.
作者：范宇；石炳毅；钱叶勇；杜源 刊期： 2009年第20期
背景:已有研究证实,周围神经损伤后大脑皮质会出现功能可塑性变化;神经生长相关蛋白43在发育中神经系统的表达特征提示,它与神经发育中突起延伸和突触形成有关,参与突触重建过程.目的:实时定量RT-PCR方法检测实验动物健侧颈7神经根移位前后,不同阶段相应大脑皮质组织神经生长相关蛋白mRNA的相对表达量及动态变化,探讨周围神经修复与中枢神绎可塑性的关系.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2007-09/2008 12在上海市周围神经重点实验室和复旦大学实验动物科学部完成.材料:成年SD火鼠108只,分为臂从损伤未修复组(n=48)、臂丛损伤修复组(n=8)及对照组(n=12).方法:大鼠左侧为实验侧,臂丛损伤未修复组在大鼠左侧取锁骨下横形切口,找到臂从各神经根并造成全臂丛根性撕脱伤.臂丛损伤修复组同法将大鼠全臂从神经根性撕脱后,取右侧锁骨下切口,显露健侧颈C7神经根备用:取左侧前臂尺神经通过皮下隧道桥接健侧颈7神经根与正中神经端端吻合.对照组为成年雌性正常大鼠,不进行任何处理.主要观察指标:于术后1 d.3d,1周,2周.1个月,3个月,6个月,10个月共8个时段及对照组取材,采用SYBRGreen Ⅰ实时定量RT-PCR法检测健侧颈7神经根移位术前后对侧(右侧)大脑前肢投射区域皮质组织生长相关蛋白43 mRNA相对表达量及动态变化.结果:臂丛损伤未修复组对侧(右侧)大脑前肢投射区域皮质组织生长相关蛋白43 mRNA的相对表达量变化规律为术后第1天开始升高,第3天达到高峰,然后逐渐降低.术后1 d,3 d和1周与对照组比较差片具有显著性意义(P<0.05,P<0.01).臂丛损伤修复组对侧(右侧)大脑前肢投射区域皮质组织生长相关蛋白43 mRNA的相对表达量变化规律为术后第1天开始升高.第3人达到高峰,然后逐渐降低.至术后3个月再次升高,6个月达到高峰,然后逐渐降低.术后1 d,3 d,1周和6个月与对照组比较差异具有显著性意义(P<0.05.P<0.01).结论:臂丛损伤健侧颈7移位术前后相应大脑皮质生长相关蛋白表达变化与临床现象一致,提示生长相关蛋白在大脑皮质及突触可塑性方面发挥作用.
作者：廖晓辉；史其林；孙贵新；王新红；李继峰 刊期： 2009年第20期
背景:有实验报道,碱性成纤维细胞生长因子能改变角膜内皮细胞形状、促进其分裂和趋化,刺激活体和体外角膜内皮细胞的损伤修复.目的:观察碱件成纤维细胞生长因子对猫角膜内皮细胞增殖的影响.设计、时间及地点:细胞肜态学观察实验,2005-01/2006-12在青岛大学医学院附属医院中心实验室完成.材料:家猫购买自青岛大学医学院附属医院动物实验中心.方法:猫角膜内皮细胞原代培养,行NSE免疫组织化学染色鉴定细胞的类型、纯度及生理特性.传1代后,分别在培养液中加1,10,100 μ L的碱性成纤维细胞生长因子,继续卵化1～5 d.主要观察指标:加药后第1,3,5天分别利用MTT法测定在490 nm处的吸光度值来判断角膜内皮细胞增殖情况;同时应用倒置相筹显微镜观察细胞形态及透射电镜检测细胞超微结构.结果:碱性成纤维细胞生长因子作用组加药后1,3,5 d,MTT法测定猫角膜内皮细胞在490 nm处的吸光度值明显高于对照组,其中10 μ g/L作用组差别显著.结论:碱性成纤维细胞生长因子作用能促进猫角膜内皮细胞的增殖,相对有效浓度为10 μ g/L.
作者：罗文娟；林静；王传富 刊期： 2009年第20期
背景:研究表明,诱导型一氧化氮合酶及一氧化氮在急性软组织损伤及其修复过程中起到重要的作用,但目前有关其在慢性软组织损伤修复过程中的作用,及氨基胍对其作用的影响尚不明确.目的:探讨慢性软组织损伤模型--第三腰椎横突综合征模型大鼠损伤局部软组织诱导型一氧化氮合酶活性及一氧化氮含量与炎症反应及软组织损伤程度的关系,并观察氨基胍干预后对以上关系的影响.设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2007-09/2008-09在解放军海军总医院海战伤研究中心二级实验室完成.材料:将96只SD大鼠抽签法随机分为正常组、模型组及氨基胍组共3组,每组32只.方法:模型组将0.3 cm×0.3 cm大小的明胶海绵胃入第三腰椎横突后半段深筋膜中层下制备第三腰椎横突综合征动物模型;氨基胍组从造模14 d开始,按50 mg/kg剂量经腹膜内给药,2次,d,直至处死前1 d为止;正常组为不做任何干预.主要观察指标:于首次氨基胍干预后1,3,7,14 d检测各组第三腰椎横突周围骨骼肌及其他软组织诱导型一氧化氮合酶免疫组织化学灰度值、一氧化氮含及观察组织形态学变化.结果:模型组损伤局部软组织诱导型一氧化氮合酶活性及一氧化氮含量比正常组明显升高(P<0.01),且与损伤局部炎症反应及组织损伤程度相一致.氨基胍组诱导型一氧化氮合酶活性及一氧化氮含量比模型组明显降低,(P<0.01),损伤局部炎症反应及组织损伤程度明显减轻.结论:第三腰椎横突综合征动物模型中由炎性因子诱导诱导犁一氧化氮合酶大量表达生成的高浓度的一氧化氮是造成慢性软组织损伤的重要因素.而这种作用可以被氨基胍所抑制,为慢性软组织损伤的修复创造了有利条件.
作者：乔晋琳；李金牛；汲广成；马广昊；付本升；向东东；路平；刘灿坤 刊期： 2009年第20期
背景:诱导骨髓基质干细胞成骨条件的优化与探讨是再生医学研究的热点.前期实验发现Wnt7b在骨发育中的作用,此次实验是前期工作的延续.目的:构建Wnt7b重组反转录病毒载体,观察其在C3H10T1/2中的表达.设计、时间及地点:细胞学体外观察,于2005-01/2008-08在华盛顿大学医学院和同济大学附属第十人民医院中心实验室完成.材料:pXy-Wnt7b购于ATCC公司,载体pCIG-IRES-EGFP,pLef-Luciferase.pCMV-Rennilla.反转录病毒载体pSFG和包装细胞GP293由华盛顿大学医学院提供.方法:用多步亚克降技术构建目的基因Wnt7b和标记基因加强型绿色荧光蛋白(enhanced greenfluorescentprotein,EGFP)双表达重组反转录病毒载体pSFG-Wnt7b-IRES-EGFP,在条件培养液中经GP293包装,并任常规培养液中释放出假病毒并将其转染C3H10T1/2细胞,检测成骨活性诱导中的作用和荧光素酶报告基因检测信号转导通路.主要观察指标:①Wnt7b重组反转录病毒转染C3H 10T1/2细胞的表达.②wnt7b诱导C3H 10T1/2碱性磷酸酶生成分析.③Wnt7b信号转导分析.结果:构建日的基因的Wnt7b和标记基因EGFP双表达重组反转录病毒载体能够高效地表达,转染C3H10T1/2细胞后能诱导碱性磷酸晦的生成.Wnt7b信号转导分析可见Wnt7b成骨作用通过Noncanonical途径.结论:Wnt7b在C3H10T1/2中能高效表达,能显著诱导骨发育的重要标志--碱性磷酸酶的生成,Noncanonical途径在其中起重要作用.
作者：陈婷婷；徐选福；李晶华；李小艳；曹谊林；胡洪亮 刊期： 2009年第20期
背景:前期研究表明广西18～22岁少数民族学生体质偏轻.目的:拟进一步了解广西2645名少数民族学生体型及体质健康状况,寻找影响的关联因子.设计、时间及地点:追踪调查,于2004-12/2007-12在广西民族大学完成.对象:广西民族大学200312005三次体质健康测试的全体学生2645人.男1337人,女1308人,年龄为18～20岁,共15个民族.方法:根据2003年教育部、体育总局<学生体质健康标准(试行方案)>和实施方法分为形态指标、技能指标和身体素质指标3大类.对2645名少数民族身体机能与体质量指数变化的跟踪调查.主要观察指标:身高、体质量、肺活量、立定跳远、坐位体前屈、体质量指数.结果:①广西民族大学2003级学生大学3年期间男生身高、体质量增长率比全国同期多2.45%,身体形态发育正处于高峰期,女生成偏瘦型体型,身体形态发育情况总体欠佳.②男女学生在刚入校时肺活量机能较差,远远低于同期全国平均水平.3年后男生肺活量增长率为11.55%、女生肺活量增长率为27.72%,分别高于全国同期肺活量增长率.③坐位体前屈机能高于同期全国平均水平,男生呈逐年上升趋势,同期全国男性呈下降趋势:同期全国乡村女生均呈逐年上升趋势.④立定跳远机能提高较大,3年后增长率为18.15%.明显高于全国同期立定跳远增长率水平的2.61%.女生立定跳远机能总体不如全国同期水平.⑤体质罩指数总体与同期全固乡村男女学生体质量指数比较稍低一些(P<0.01).结论:2645名少数民族学生发育正处于高峰期:肺活耸机能不及全国同期平均水平.男女体质量指数分布有所不同,体质量偏轻者女生多于男生,表明学生营养状况总体欠佳.
作者：覃明路；何江川；杨放 刊期： 2009年第20期
背景:成骨生长肽是新近发现的一种具有促进成骨作用的生长因子,其对骨髓基质细胞增殖分化作用受到越来越多的关注.目的:验证成骨生长肽在体外对骨髓基质细胞增殖和成骨向分化的影响.设计、时间及地点:随机对照实验,于2006-02/06在教育部口腔生物医学工程重点实验室完成.材料:6周龄雄性SD大鼠用于骨髓基质细胞提取:成骨生长肽为Sigma公司产品.方法:体外培养骨髓基质细胞,加入含不同浓度(10-11,10-10,10-910-8,10-7mol/L)成骨生长肽及小牛血清的α-MEM培养基培养,以单纯含小牛血清的α-MEM培养基培养作对照.主要观察指标:①骨髓基质细胞的鉴定.②用四甲基偶氮唑盐法检测细胞增殖情况.③酶联免疫法检测细胞内碱性磷酸酶的表达.④反转录-聚合酶链反应法检测细胞内核心结合因子1mRNA的表达.结果:成骨生长肽对骨髓基质细胞增殖有促进作用(P<0.05),大效应浓度为10-9mol/L;能增加细胞内碱性磷酸酶活性(P<0.05),大效应浓度为10-8mol/L:可诱导核心结合因子1mRNA的表达(P<0.05).结论:成骨生长肽可促进骨髓基质细胞的增殖,并通过诱导其内核心结合因子1mRNA的表达促进其成骨向的分化.
作者：黄姣；徐凌；王璐 刊期： 2009年第20期
背景:目前报道的重组腺病毒构建方法较复杂,构建周期长,导致重组腺病毒构建的成功率较低.GatewayTM技术是基于λ噬菌体的位点特异性高效重组系统,其构建重组病毒载体具有快捷高效的特点.目的:构建含人骨形态发生蛋白2基因的重组腺病毒载体,为应用骨形态发生蛋白2基因治疗的研究奠定基础.设计、时间及地点:单一样本规察,实验于2008-02/06在深圳市第二人民医院中心实验室完成.材料:pOTB7-BMP-2质粒、HEK293为ATTC产品;BLOCK-iTTMAdenovirus Expression System为Invitrogen产品;大肠杆菌DH5 α为Biontex产品.方法:用聚合酶链反应方法扩增骨形态发生蛋白2目的基因,并插入载体pMD19-T Simple Vector中进行测序分析.将骨形态发生蛋白2基因亚克降到穿梭载体pEC3.1(+)中,构建pEC3.1-BMP-2穿梭质粒,再将其中的表达盒通过重组克隆到pAd/BLOCK-iTTM-DEST腺病毒载体中,线性化后转293细胞进行包装获得重组腺病毒rAd-BMP2.主要观察指标:①目的基因骨形态发生蛋白2的聚合酶链反应扩增.②重组质粒TS-BMP2的构建.⑨重组pEC3.1-BMP2的构建.④重组pAd-BMP2的构建.⑤重组腺病毒的制备与鉴定.结果:正确扩增长约1.2 kb的骨形态发生蛋白2 cDNA,并成功地构建其腺病毒载体,经线性化的pAd-BMP2 DNA转染HEK293细胞,包装、扩增后得到入骨形态发生蛋白2重组腺病毒(rAd-BMP2),其滴度约为1×1010PFU/mL,该滴度可满足进一步的骨形态发生蛋白2成骨作用的研究.结论:成功地构建重组人骨形态发生蛋白2腺病毒载体.
作者：彭亮权；王大平；周可；黄俊锋；任凯；徐小平；陆伟；熊建义；欧阳侃；朱伟民 刊期： 2009年第20期
中国组织工程研究杂志
主管:中华人民共和国卫生部
主办：中国康复医学会,《中国组织工程研究与临床康复》杂志社
